《生物技术一》实验教案

蚌埠医学院

《生物技术一》实验教案2010/2011学年第二学期

选用教材医用生物化学实验（自编，3版）

生物化学实验（上海交通大学出版社）授课教师夏俊

职称教授

授课专业2009级生物科学本科

教研室检验系生物化学与分子生物学

蚌埠医学院教案

2010-2011年度第二学期

教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

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教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

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教师姓名：职称：系（部）：生物科学系教研室：实验中心

授课对象：08生物本科专业生物班级授课时间：2011 年 3 月4 日

复习旧课：

新课导言：细胞培养概念和意义

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。分为原代培养和传代培养两种。

体获取组织或器官的一部分进行培养。

刚刚从活体组织分离出来，

状态。这一方法可为研究生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。举例：细胞各种生理活动如增殖的研究

讲授新课：

实验九：胎鼠细胞原代培养

织

块培养法和消化培养法；

械

细

胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验提供材料。

二、主要器材与试剂

培养箱（调整至

手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（

（一）细胞培养的分类启发式提问

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。可

分为原代培养和传代培养两种。

（二）细胞原代培养的原理

原代培养：是直接从生物体获取的细胞、组织或器官的

一部分进行培养；由于刚从活体组织分离出来，故更接

近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细

胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传

代培养创造条件。

（三）胰酶消化法原理

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常

用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，

分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生

存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。

25分钟四、内容与操作

（一）组织块直接培养法

1、将孕鼠拉颈椎致死，取胎鼠带入超净台内。

2、超净台内，将孕鼠子宫剪开取胚胎。

3、用小镊子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗涤3次。

4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术剪将

其

剪成小块（1mm3），再用PBS液洗三次。

5、将组织块转移到培养瓶，贴附瓶壁。翻转此壁朝上，

将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。

6、37℃静置3-5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培

养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。

（二）、酶消化分离细胞培养法

原理：在组织块培养法基础上，经各种酶（常用胰蛋白

酶与胶原酶）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中

培养。

1、将孕鼠拉颈椎致死，取胎鼠带入超净台内。

2、超净台内，将孕鼠子宫剪开取胚胎。

3、用小镊子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗涤3次。

4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术剪将

其

剪成小块（1mm3），再用PBS液洗三次。

5、视组织块量加入5-6倍0.25%胰酶液，37℃中消化

20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，使细胞分离。

6、加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用。

7、静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加

入

到离心管中。

8、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。

9、加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。

10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞

培

养瓶中，37℃下培养。

80分钟（三）操作演示学生分组，进入无菌操作室具体操作。

教师巡视指导

五注意事项

1、操作前，提前将操作间和超净工作台内紫外灯打开，

消毒杀菌30 分钟。

2、进操作间前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精

或

0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。

3、点燃酒精灯，操作在火焰附近进行。

4、手不能在开盖的消毒物品上方活动。

5、凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮

塞，

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