填料和层析柱使用规范

层析柱和填料使用规范

原理凝胶层析是生物化学中一种常用的分离手段，广泛用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的分离纯化、分子量的测定、脱盐、浓缩等。本实验室主要有排阻层析和离子交换层析两种。排阻层析利用生物大分子的相对分子质量差异进行层析分离。层析介质内部具有立体网状结构，形成孔穴，较大的分子完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动，流程短，首先流出；较小的分子则完全渗透进入凝胶颗粒内部，流程长，所以最后流出。离子交换层析将具有交换能力的离子基团在固定相球形介质表面，这些离子基团可以与流动相中的离子发生可逆性离子交换反应而进行分离。

操作规程层析柱和凝胶填料是我们实验室的宝贵财富，为了方便大家使用和规范实验室操作，现将使用规范规定如下，请各位老师和同学务必严格按照操作规程。

1 使用前首先明确自己的分离目的，即要做哪一方面的分离，从而选择合适的凝胶填料，请大家务必查阅文献或者询问老师，同时根据自己的分离要求，选择合适长度和直径的层析柱；

2 征得老师或者负责同学同意后方可进行操作（外室人员务必征求老师同意）；

3 选择好层析柱和填料以后，严格按照填料的要求来操作，包括填料的溶胀、脱气、装柱，期间务必严格按照说明书操作；

4 适当控制上样量,上样以前务必要过0.22µm滤膜；

5 选择合适的流动相，根据胶的性质决定能否用泵加压；

6 使用完毕后，请将层析柱做好处理（离子交换柱请用高浓度氯化钠溶液冲洗，最后用水冲洗），最后将层析柱堵好，以防干胶或者进气泡，同时请做好试验纪录，以便下一位同学用时方便查询使用情况；

7 试验过程中所有用水或者溶液必须经过抽滤和脱气，严防气泡；

8 若在使用过程中发生意外情况，请及时向负责同学反应，及时解决。

本规范解释权归本实验室，疑难问题请咨询老师或负责同学。

负责人：杨波刘斌

2004-12-15