结晶紫分光光度法测定肝素
肝素的提取及鉴定
肝素的提取及鉴定
肝素是一种多糖类化合物，通常从猪或牛的肺部、心脏或肠道等组织中提取分离。
其提取步骤主要包括杀菌、切碎、低温浸提、离心、沉淀和精制等过程。
其中，离心和沉淀是最关键的步骤，能够有效地分离肝素和其它蛋白质、碎片等杂质。
肝素的鉴定一般采用生物学或化学方法。
生物学方法主要包括凝血时间测定、活化部分凝血活酶时间等，可以评价肝素的抗凝血功能。
化学方法主要包括红外光谱、高效液相色谱等，可以分析和鉴定肝素的化学结构和物理性质。
提取和鉴定肝素需要一定专业技能和设备，普通实验室难以完成。
因此，一般需要专业的药厂或生物公司进行生产和检测，以确保肝素的质量和安全性。
肝素的提取与鉴定设计实验报告
实验报告：肝素的提取与鉴定1. 背景肝素是一种重要的抗凝血剂，被广泛用于临床治疗中。
然而，肝素的纯度和活性对其抗凝血效果具有重要影响。
因此，本实验旨在提取肝素并对其进行鉴定，以确保其纯度和活性。
2. 分析2.1 材料与试剂•材料：动物组织样品（如豚鼠肺组织）•试剂：无水乙醇、丙酮、乙腈、氢氧化钠、醋酸铅、硫酸铵、磷钼酸铵、氢氧化钠溶液、甲苯、丁酮、硫酸铵溶液、二硫酸铵溶液、醋酸锰2.2 方法1.组织样品制备：将豚鼠肺组织样品取出，切碎并冷冻存储。
取适量组织样品，加入适量生理盐水，使用超声波溶解仪处理，离心分离出液体部分。
2.肝素提取：将液体部分去除沉淀，加入等体积的无水乙醇，搅拌离心，收集上清液。
继续重复此步骤多次，直至上清液基本无沉淀。
3.沉淀处理：将上清液加入丙酮进行沉淀处理，离心并收集沉淀。
沉淀在干燥条件下得到肝素提取物。
4.考察活性：将得到的肝素提取物与已知肝素标准品进行比较。
使用凝血试验或活化部分凝血酶时间（APTT）测定肝素的抗凝血效果，并与标准品进行对比。
5.纯度鉴定：使用紫外-可见光谱仪测量肝素提取物的吸收光谱，与肝素标准品进行比较。
使用高效液相色谱（HPLC）测定肝素的含量，并与标准品进行对比。
2.3 结果在上述实验中，成功提取了肝素并进行了鉴定。
经过比较，发现提取物具有与标准品相似的活性和纯度。
1.活性检测：肝素提取物显示出与标准品相似的抗凝血效果，验证了提取物的活性。
2.纯度鉴定：UV-Vis结果显示肝素提取物的吸收光谱与标准品吻合，表明提取物的纯度较高。
HPLC测定结果显示提取物的肝素含量与标准品接近，进一步验证了其纯度。
3. 建议本实验成功提取并鉴定出了肝素提取物，并与标准品进行了比较。
基于实验结果，提出以下建议：1.进一步优化提取方法：通过调整溶剂比例和提取次数，进一步提高肝素的提取效率。
2.纯度验证的进一步研究：在现有鉴定方法的基础上，使用更多的分析技术（如质谱法）对提取物进行分析，以进一步确认其纯度。
结晶紫分光光度法测定肝素
应 条件 ；研 究 了表 面活 性 剂及 共存 物 质 的影 响 ．用 于肝 素钠 注 射液 效 价 的测 定 ，结 果满 意 ．
１ 实验 部 分
１ １ 仪 器 和 试 剂 ．
Ｕ ．５ ０紫外 一 Ｖ８０ 可见 分 光光 度计 （ 天美 公 司 ） ２ ；７ ２光 栅 分 光 光 度 计 （ 四川 仪 表 九 厂 ） Ｈ ．Ｃ酸度 计 （ ；Ｐ Ｓ３ 上 海 大 中分 析 仪 器厂 ） ． 结晶紫（ 上海 崇 明县 裕 西试 剂 厂 ） ． １ ：０ ０ ％水 溶 液 ，干 法 过 滤 ，保 留滤 液 ，备 用 ．肝 素 钠 （ 效价 为 １０ ６ Ｉ／ ｇ Ｕ ｍ ，中国 医药 集 团上海 化 学 试 剂公 司 ）标 准溶 液 ：配 制 １ ／ Ｌ的贮备 液 ，冰 箱保 存 ，用 时稀 释 为 １ ｍ ｍｇ ０
ｍ Ｌ混 和 ，然 后 在 酸 度 计 上 调 整 至 ｐ Ｈ＝６ ０ ． ．９
所 用 试剂 均 为分 析 纯 ，实验 用 水 为二 次蒸 馏 水 ．
１ ２ 实 验 方 法 ．
取 一定 量 肝 素于 ２ Ｌ比色 管 中 ，依 次 加 入 ｐ ５ｍ Ｈ＝６ ０ ．９缓 冲 溶 液 １０ｍＬ ０ ０ ％结 晶 紫 溶 液 ３ ０ｍ ， ． ， ．１ ． Ｌ 二 次水 稀释 至 刻度 ，摇 匀 静置 １ ｉ ５ｍ ｎ．然 后 用 １ｃ 比 色皿 于 ５ １ｎ ｍ ９ ｍ处 ， 以试 剂 空 白 为参 比 ，测 定 吸光
中 图分 类 号 ：０ ５ ． ６７３ 文 献 标 识 码 ：Ａ
肝 素（ ｅ ａ ｎ Ｈ ｐｒ ，简 称 为 Ｈ ｐ 为葡 糖胺 聚糖 ，是 蛋 白多糖 的一种 ．在人 体 内 由肥 大 细胞 分 泌 而 自然 存 在 ｉ ｅ）
肝素制备实验报告结论(3篇)
第1篇一、实验背景肝素是一种具有抗凝血、抗炎、抗血栓等生理活性的生物大分子，广泛应用于心血管疾病、抗凝血治疗等领域。
肝素主要由肝脏合成，但人工合成肝素在质量、活性等方面与天然肝素存在一定差距。
因此，从动物肝脏中提取肝素成为研究热点。
本实验旨在通过实验方法从动物肝脏中提取肝素，并对提取过程进行分析。
二、实验目的1. 掌握肝素提取的基本原理和方法；2. 优化肝素提取工艺，提高肝素纯度和活性；3. 分析肝素提取过程中的影响因素。
三、实验方法1. 原料：新鲜动物肝脏；2. 仪器：超声波清洗机、离心机、超滤装置、高效液相色谱仪等；3. 方法：（1）预处理：将新鲜动物肝脏进行清洗、破碎、匀浆；（2）提取：采用超声波辅助提取法，将匀浆液与一定浓度的硫酸铵溶液混合，搅拌、离心分离；（3）纯化：采用超滤装置对提取液进行浓缩，然后用高效液相色谱仪对浓缩液进行检测，确定肝素含量；（4）纯化：将肝素浓缩液与一定浓度的盐酸溶液混合，静置、离心分离，得到肝素沉淀；（5）干燥：将肝素沉淀进行干燥，得到肝素粉末。
四、实验结果与分析1. 肝素提取率：通过实验，肝素提取率为（±X%）；2. 肝素纯度：通过高效液相色谱仪检测，肝素纯度为（±Y%）；3. 肝素活性：通过抗凝血活性实验，肝素活性为（±Z%）；4. 影响因素分析：（1）超声波功率：在实验过程中，超声波功率对肝素提取率、纯度和活性均有显著影响。
当超声波功率为（±A%）时，肝素提取率、纯度和活性均达到最佳；（2）硫酸铵浓度：硫酸铵浓度对肝素提取率、纯度和活性也有显著影响。
当硫酸铵浓度为（±B%）时，肝素提取率、纯度和活性均达到最佳；（3）pH值：pH值对肝素提取率、纯度和活性也有一定影响。
当pH值为（±C%）时，肝素提取率、纯度和活性均达到最佳。
五、结论1. 本实验采用超声波辅助提取法从动物肝脏中提取肝素，具有操作简便、提取率高等优点；2. 通过优化实验工艺，成功提高肝素纯度和活性；3. 实验结果表明，超声波功率、硫酸铵浓度和pH值是影响肝素提取的关键因素；4. 本实验为肝素提取、纯化和活性研究提供了理论依据和实践经验。
肝素提取方法的研究
１６ ０、 ．５ 。 ．０ １６ ５
根据 回归方程 Ｙ＝． ３ ｘ ０ １９得到肝素 ０４ ４＋． ３ ０ ０ 提取率的计算公式为 ： 提 取 率 ％：（ － ．１９ ｘ ５ １ｘ ｘ ０ ％］ 『ＡＡ ０ ３ ）２ ｘ ０ Ｖ １０ ／ ０ （． ３ ｘ０ ０ ０ ｘ ０ ０ ０ ４ ｌ０ ０ ０ ５ ） ４ ｖ： 浸提液的体积。 根据 以上公式求得提取率分别为 ０ ４ ％、 ．１ ０
００ ７ 、．２ ％ 、．４ ％ 、． ９ 、 ．３１ 、．３８ 、 ．５ ％ ００ ７ ００ ３ ００ ％ ００ ％ ００ ％ ４
ｌｍ 比色皿于 ５ １ｍ处以没加结晶紫的溶液为 ｃ ９ｎ 对照液 ， 测定吸光度为 １ ７ ， ５ ８ △Ａ为 ０ ８ 。带入 ．４ ２ 公式： 提取率％爿（ ０ ．１９ ｘ５ １ ｘ １０ ／ ＡＡ－ ０ ３ ）２ ｘ０ Ｖｘ０ ％］ （． ３ｘ ０ （ ００ ０ ０ ０ ４ １００ （５ ） ４ ）
爿（． ４－ ．１９ ２ ｌ １６ｘ ０ ％ 】 ０ ８ ０ ３ ）ｘ ５ ｘ ０￣ ７ １０ ， ２ ０ （． ３ ｘ￣ ０ ０４１ ４ ％、．３％。提取率 、 ．ｌ ０ ５ ０ ０ 浸提液体积与吸光度的 对 应关 系如 下表 ：
表 １
１材 料和 方法 １ 材 料 ． Ｌ １ ．盐酸 ； ．１ １ 氯化钠 ；５ ９％的 乙醇 ； 乙醚 ； 氯磺
实号浸 积吸度吸 值气 验
１ ２ ３ １２ ７ １７ ５ １４ ９ １ ６４ ６ １ ７１ ．５ １ ６４ ８ ０． ６ ２１ ０ ２９ １ ０． ４ ２１ ０ ４３ ０ ０． ５４ ０ ０． ３７ ０
酸； 树脂 Ｄ ０ ； ２ ４氢氧化钠 ； 晶紫（．１ ； 结 ０ ％）肝素钠 ０ ４ １６ ３ １ ６ｌ ． ５ ０． ４７ ２ ０． ４７ ０ 标 准（０ Ｉ ／ｇ ２ ４Ｕｍ ） ５ １ ４１ １ ７ ．５ ６ ０ ２８ ６ ０． ５０ ０ １ ．猪肝 ： ．２ １ 市售 ６ １６ ９ １ ６６ ． ７ ０． ９５ １ ０． ３８ ０ ７ １５ ８ １ ６１ ． ８ ０ ４４ ２ ０ ４５ ．０ １ 设 备 ． ２ ８ １ ６６ １ ５９ ． ５ ０ ２ ６７ ０ ５ ．０ ２ ７－ ９２双向磁力搅拌器 ； 数显 ｐ Ｈ计 ； 电子分 ９ １５ ４ １ ６３ ９ ０ ２３ ．２ ０ ００ ４ 析天平 ；塔式电热蒸馏水器 ；冷藏冷冻箱 ；０ — ２２ ３ Ｂ型电热恒温干燥箱 ；离心沉淀机 ；Ｈ — Ａ Ｓ Ｚ Ｄ型 根据所测结果分析最佳提取方案 ， 如下表 ： 循环水式真空泵； 旋转蒸发器； 紫外分光光度计 表２ １ 工艺 流 程 ． ３ 实验号 浸 间 ｐ Ｈ 猪肝 一绞碎一 盐水 浸提一 酶解液一 离心 １ １ ８ ４ ５ ６ ０ ０ ３ ． ４ 液 —浓 缩液 一沉 淀—畸 是 ２ １ ９ ５ ０ ８ ０ ０４ ．５ 取 物一 肝素 ３ ｌ １ ０ ５ ５ １ ０ ０ ０ ． ５７ １ ４操作要点 ４ ２ ８ ５ ０ １ ０ ００ ． ４７ ５ ２ ９ ５ ５ ６ ０ ００ ．５ １ ．正交实验及结果 ．１ ４ ６ ２ １ ０ ４ ５ ８ ０ ３ ０ ８ 在提取肝素之前， 为了从猪肝里提取尽量多 ７ ３ ８ ５ ５ ８ ０． ４ ０ ５ 的肝素 ， 做了正交实验。从肝素的结构和性质出 ８ ３ ９ ４ ５ １ ０ ０． ５ ０ ２ ９ ３ １ ０ ５ ０ ６ ０ ０ ０ ． ４ 发， 影响肝素提取率的因素是多方面的， 其中四个 １ ０１４ ． ３ ０ ３ ．１ ５ ０ １３ ．３ ０ ３ １ ３ 主要的因素 ： 浸提时间，Ｈ值 ， ｐ 酶解温度 ， 酶解时 Ｉ １ ０ １５ ．３ ０ １ ６ ． ５ ０ １１ ．４ ０ １ ７ ． ３ 间。分别对四个因素进行设汁。 Ｉ１ Ｉ ０１ ０１５ ． ３７ ． １ ０ １２ ．３ ０１６ ３ 肝素提取的正交实验需做九组平行实验 ： Ｉ３ ／ ｏ ０ ４ ０ ０ ５ ０ ０４ ．４７ ． ４ ． ４３ ００ ４ ．４ ３ 取猪肝 ５ Ｏ克， 加水 ２ Ｏ克搅拌 ， 再加 ２ ％Ｎａ Ｉ ／ ０ — Ｉ３ ００ ５ ．４ ０ ０２ ５ ０ ０ ７ ． ４ ００ ５ ．４ ６ Ｉ／ ｏ ０ ５７ ０ ０ ８ ．４ ．３ ０ ０ ４ ． ４ ０． ４ ３ ０ ５ ｃ 溶液 ２ ｍ 搅拌均匀 ， ｌ ０ｌ 浸提 ｌ ， ｈ浸提之后将浸提 Ｉ Ｉ ３ ： ：！ ： ： ！ 液用 ２ ％Ｎ Ｏ ０ ａ Ｈ溶液调 ｐ ．， Ｈ８ 加热至 ４ ℃， ０ ５ 加入 塑薹 曼 ０ ． ２克胰蛋 白酶， 同时不断搅拌并保持温度 ６ 。 ｈ 由表得知 ， 影响肝素提取率 的因素依次为 酶解后的猪肝溶液经巴氏灭菌后离心 ， 所得 ｐ 酶解温度＞ Ｈ＞ 酶解时间＞ 浸提时间。最佳提取方 渣滓再用 ５ ａ １ ％Ｎ Ｃ 溶液洗涤 ， 再离心 ， 最后弃渣 。 案为：浸提时间为 ３ ，Ｈ为 ９ ，酶解温度为 ５ ｈｐ ． ０ ０ 合并二次离心液， 经抽滤， 再过滤便得到肝素的浸 度 ， 解时 间为 ８ 。 酶 ｈ 提液 。 １． ．２验证性实验 ４ 以同样的方法按设计 的要求操作其它 的八 取猪肝 ５ ０克 ，加水 ２ Ｏ克搅 拌均匀 ，再加 组， 得到九组浸提液。 ２ ％Ｎ ｃ 溶液 ２ ｍ 搅拌均匀 ， Ｏ ａｌ ０ｌ 浸提 ３ ， ｈ 浸提之后 每次得 到的浸提液都用结晶紫分光光度法 将浸提 液用 ２％Ｎ ０ Ｏ ａＨ溶液 调 ｐ ９ ，加热 至 Ｈ． ０ 来测定吸光度。 首先取 ０１ 浸提液于 ２ｍｌ ． ｍｌ ５ 比色 ５ ℃， ０ 加人 ０ ． ２克胰蛋 白酶， 同时不断搅拌并保持 管中， 依次加人 ｐ ＝ ． Ｈ ６ ９的缓冲溶液 １ ｍｌ ．１ ０ ． ，０ ％ 温度 ８ 。 ０ ０ ｈ 结晶紫溶液 ３ ｍｈ ． 用蒸馏水稀释到刻度 ， 匀静 ０ 摇 将制得的肝素浸提液测定 吸光度 ，首先取 置１ ５分钟。然后用 Ｉｍ比色皿于 ５ １ｍ处以没 Ｏ ｍ 浸提液 于 ２ ｍ ’ ｃ ９ｎ ． ｌ １ ５ｌ 比色管 中，依次加人 ｐ ＝ Ｈ 加结晶紫的溶液为对照液 ， 测定吸光度。分别为 ６ ９缓 冲溶液 １ ｍｌ ．１ 晶紫溶液 ３ ｍｌ用 ． ｏ ． ， ０ ％结 ０ ０ ． ， ０ １６ ６ １５ ５ １ ０ １ ３ １ ６ １ ０ １６ ４、 ．５ 、 ．５ 、 ． ２、 ． ５、 ． ８、 ． ０、 ．５ ７ ６ ５ ７ 蒸馏水稀释到刻度 ，摇匀静置 １ ５分钟。然后用
结晶紫的吸光度值
结晶紫的吸光度值
结晶紫是一种广泛应用于分子生物学和细胞生物学领域的染色剂。
它可以与蛋白质和DNA等生物分子结合，从而起到染色作用。
在实验中，我们通常需要测量结晶紫的吸光度值，以评估样品中蛋白质或DNA的浓度。
测量结晶紫的吸光度值需要使用分光光度计。
在进行测量之前，我们需要制备一定浓度的结晶紫溶液。
常规使用的结晶紫浓度为0.1%。
使用分光光度计时，我们需要将样品放入光路中，设置波长为595纳米，然后记录吸光度值。
需要注意的是，不同浓度的结晶紫在595纳米处的吸光度值不同。
因此，在进行实验时，我们需要事先建立一个标准曲线，以将吸光度值转换为相应的结晶紫浓度。
通常，我们会制备一系列不同浓度的结晶紫标准溶液，并测量它们在595纳米处的吸光度值。
然后，我们可以通过绘制吸光度与浓度之间的曲线来建立标准曲线，以后再测量时就可以使用这个标准曲线来计算样品中结晶紫的浓度。
总的来说，测量结晶紫的吸光度值是分子生物学和细胞生物学实验中一个重要的步骤，可以帮助我们评估样品中蛋白质或DNA的浓度，有助于实验的准确性和可靠性。
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结晶紫的吸光度值
结晶紫的吸光度值
结晶紫是一种常见的有机化学试剂，常用于生物、医学等领域。
它的吸光度值是生物化学实验中常常需要测定的参数之一。
下面，本文将详细讲述如何测定结晶紫的吸光度值。
第一步，准备实验材料。
需要准备的实验材料有：结晶紫、1%的三氯醋酸（TCA）溶液、96孔板、多道光学吸收仪、移液器等。
第二步，将1%的TCA溶液应用于样品。
将待测的样品溶于1%的TCA溶液中，并混合均匀。
这一步是为了去除蛋白质等其他物质，以减少实验误差。
第三步，将样品加入到孔板中。
使用移液器等工具，向孔板中分别加入待测样品和空白对照样品。
第四步，使用多道光学吸收仪测定吸光度。
将孔板放入多道光学吸收仪中并测定样品和空白对照的吸光度值。
这里需要注意的是，应该测定多个波长的吸光度值，以获得更加准确的数据。
第五步，计算吸光度值。
将样品吸光度值减去空白对照吸光度值，即可得到净吸光度值。
第六步，绘制标准曲线。
在取得净吸光度值后，可以使用已知浓度的结晶紫制作标准曲线。
用已知浓度的样品制作一系列稀释溶液，并测定每个溶液的吸光度值，随后绘制吸光度与浓度的曲线。
第七步，计算待测样品的浓度。
将待测样品的净吸光度代入标准曲线中，通过插值法计算出待测样品的浓度。
综上所述，测定结晶紫的吸光度值是一个较为简单的实验步骤。
但是我们必须对每一个步骤进行正确的操作，以保证实验结果的准确性。
在测定过程中，还需要注意实验区域的清洁与卫生，确保实验结果不受干扰，从而更好地开展实验工作。
肝素钠标准品的鉴别检查
肝素钠（标准品）的鉴别检查
本品为白色或类白色的粉末；有引湿性。
本品在水中易溶。
比旋度取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中含2.5mg的溶液，照琼脂糖凝胶电泳法试验，供试品和标准品所显斑点的迁移距离之比为0.9～1.1。
鉴别检查
1、取本品与肝素标准品，分别加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照电泳法试验，供试品和标准品所显斑点的迁移距离之比应为0.9 ～1.1 。
2、本品的水溶液显钠盐的鉴别反应。
酸碱度取本品0.10g ，加水10ml 溶解后，依法测定，pH 值应为5.0 ～7.5 。
溶液的澄清度与颜色取本品0.50g ，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，照分光光度法（附，在640nm 的波长处测定，吸收度不得大于0.018；如显色，与黄色1 号标准比色液比较，不得更深。
吸收度取本品，加水制成每1ml 中含4mg 的溶液，照分光光度法测定，在260nm 的波长处，其吸收度不得大于0.20；在280nm 的波长处，其吸收度不得大于0.15。
结晶紫测定沙丁胺醇的原理
结晶紫测定沙丁胺醇的原理
结晶紫是一种用于氨基酸及其衍生物测定的指示剂。
其原理是结晶紫能与沙丁胺醇发生酸碱中和反应，在酸性条件下，结晶紫呈蓝色；而在碱性条件下，结晶紫呈紫色。
根据沙丁胺醇溶液的pH值，可以通过结晶紫的颜色变化来确定沙丁胺醇的含量。
具体操作步骤如下：
1. 取一定量的沙丁胺醇溶液。
2. 加入适量的酸性试剂，使试液呈酸性。
3. 加入适量的结晶紫指示剂。
4. 根据试液的颜色变化，观察结晶紫由蓝色转变为紫色的时刻，记录下pH值。
5. 根据已知的结晶紫与沙丁胺醇的反应关系，可以通过pH值计算出沙丁胺醇的含量。
一种低分子肝素中醋酸根含量的检测方法
一种低分子肝素中醋酸根含量的检测方法本发明涉及一种低分子肝素中醋酸根含量的检测方法，具体步骤如下：
1. 将待检样品中的低分子肝素与醋酸钠反应生成醋酸低分子肝素。
2. 将反应产物经过固相萃取纯化，去除杂质。
3. 将纯化后的产物与氯化铵反应生成醋酸根离子，同时放出低分子肝素。
4. 将反应溶液经过离子交换色谱分离，得到纯净的醋酸根离子。
5. 采用紫外分光光度计测定醋酸根离子的吸光度，进而计算出低分子肝素中醋酸根含量的浓度。
该方法具有操作简单、检测灵敏、准确性高等优点，可用于低分子肝素生产过程中的质量控制及治疗过程中的药物监测。
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紫外分光光度法测定肝素含量的研究
紫外分光光度法测定肝素含量的研究
张云;黄敏菊;袁秦;李继彦
【期刊名称】《中国医疗器械信息》
【年(卷),期】2017(023)014
【摘要】亚甲蓝与肝素发生络合反应,在664nm处出现特征峰,肝素含量与吸光度值呈良好的线性关系,用紫外分光光度法制作标准曲线,计算肝素钠的含量.并且测得的肝素含量具有良好的重复性,是快捷简便的定量分析方法.
【总页数】3页(P19-21)
【作者】张云;黄敏菊;袁秦;李继彦
【作者单位】国家食品药品监督管理局广州医疗器械质量监督检验中心广东广州510663;国家食品药品监督管理局广州医疗器械质量监督检验中心广东广州510663;国家食品药品监督管理局广州医疗器械质量监督检验中心广东广州510663;国家食品药品监督管理局广州医疗器械质量监督检验中心广东广州510663
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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鱼中结晶紫的检测方案
计算
以标准工作液峰面积和浓度作工作曲线，根据 样品提取液的峰面积，从工作曲 线计算样品提取液中结晶紫的残留量，按式⑴计算样品中 结晶紫残留量。计算 结果需扣除空白值。
X=(CxVx2)/m
式中：X—试样中的结晶紫的残留量，µg/kg； C—样品提取液中结晶紫的残留量，ng/mL； V—最终定容体积，mL； m—样品质量，g。
实验结果
结晶紫标准色谱图 本实验选定色谱条件下、结晶紫的保留时间分别为为 7.9 min、8.5 min 左右，图 1 为标 准溶液浓度为 30 ng/ mL 的标准色谱图
标准曲线
以 HPLC 测得的峰面积 y为纵坐标，相应的浓 度 x为横坐标绘制标准曲线，其线性关系 和相关系数见表 1。结果表明，结晶紫在 1.0 ng/mL～500 ng/mL 范围内线性良好，可以满足 定量分析的需要。 关系数表 1 线性回归方程、相、线性范围
样品测定
在临用前准确吸取一定量的混合标准中间溶 液，加入 0.4 mL 硼氢化钾溶液 ，用乙腈准确稀释至 2.0mL，配制适当浓度的混合标准工作液。在上述 色谱 条件下，分别测定结晶紫混合标准工作溶液及样品提取溶液中的结晶紫， 外 标法定量。
准确度和精பைடு நூலகம்度实验
以本底无结晶紫、 隐性结晶紫的鲈鱼为样品，平行称取3份样品， 按5 µg/kg、10 µg/kg、20 µg/kg三个加标浓度进行加 标，按上述步骤进行前 处理和色谱测定，分别测定 各次的峰面积，计算样品中结晶紫的含量，计 算回收率。 另取 6 个平行样品，采用添加法分别添加等量结晶紫混合标准 溶液，按上述步骤进行 前处理和色谱测定，分别测定各次的峰面积,计算样 品中结晶紫的含量，计算相对标准偏差。
仪器与色谱条件
肝素检测细则
肝素盐检测细则一．效价F：（标准≥150IU/mg），环境温度要求20~30℃。
F=标品微升数*预估效价/样品微升数1.1试剂：1羊血浆（冷冻保存，使用时室温解冻，过滤）28IU/mg肝素钠标准品30.9%生理羊水：9g氯化钠（精确至0.01g）溶解于100ml去离子水中，并定容至1000ml，待用。
40.25%氯化钙溶液：用0.9%生理盐水配制，取1.25gCaCl2（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至500ml，待用。
58%柠檬酸钠溶液：用0.9%生理盐水配制，取20g柠檬酸钠（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至250ml，待用。
1.2测定8%柠檬酸钠溶液用量：取3支试管分1、2、3，分别加入标准品溶液110ul，再依次加入8%柠檬酸钠溶液10ul、20ul、30ul，→分别加入0.25%氯化钙溶液0.8ml，加入过滤好的羊血浆1ml，摇匀，置于37℃水浴中10min，观察凝固情况，取半凝固管的柠檬酸钠量xul作为后续的加量标准。
2.1待测品配制：M=20/样品预估效价（g）称取Mg待测样品（精确至0.0001g），溶解于生理盐水中，并定容至100ml，取溶液2ml溶液溶解定容至50ml，取5ml样品溶液于试管中剩余样液冷藏保存。
2.2测定：标准管：取10支试管分别加标品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
待测管：取10支试管分别加样品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
二．PH值精确称取0.4g样品（精确至0.01g）溶于40ml去离子水中，测定其PH值，记录室温，湿度。
分散液液微萃取-分光光度法测定水中结晶紫
分散液液微萃取-分光光度法测定水中结晶紫吕瑞;罗帆;龙宣羽;景艳琼【摘要】建立了分散液液微萃取-分光光度法测定环境水样中的结晶紫的分析方法,考察了萃取剂的种类、体积,分散剂的种类、体积,萃取时间,离心时间等因素对萃取效率的影响,并得到了最优萃取条件.在该条件下对环境水样中的结晶紫进行了分离测定,结果表明方法的检出限为6.78 μg/L,富集倍数是20.5,平均回收率为99.47%,RSD为2.02%.该方法可运用于测定环境水样中的痕量结晶紫.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2017(045)015【总页数】3页(P135-137)【关键词】分散液液微萃取;环境水样;结晶紫【作者】吕瑞;罗帆;龙宣羽;景艳琼【作者单位】绵阳师范学院化学与化学工程学院,四川绵阳 621000;绵阳师范学院化学与化学工程学院,四川绵阳 621000;绵阳师范学院化学与化学工程学院,四川绵阳 621000;绵阳师范学院化学与化学工程学院,四川绵阳 621000【正文语种】中文【中图分类】O657.32结晶紫，又名甲紫、龙胆紫，俗名紫药水，属于人工合成的三苯甲烷类碱性工业染料，由于其价格低廉，且对鱼类的水霉病、寄生虫病等有较好的疗效，曾被广泛用作水产养殖中的杀菌消毒剂[1]。
但已有研究表明，它是一种致癌物质，可能导致啮齿类动物出现某种肉瘤和腺瘤，还可能出现肝癌，此外，结晶紫还可能导致突变和染色体断裂[2-3]。
目前，包括中国在内的许多国家都将结晶紫列为水产养殖中的禁用药物。
因此，检测环境水中的结晶紫对于水产养殖的环境监控有着重要意义。
由于水中结晶紫含量低，须借助富集技术进行分离检测。
液液萃取法作为一种有效的分离富集技术，已广泛用于工业分析、中药提取以及环境监测等方面，但常规的液液萃取技术中有机溶剂用量较大，易对环境造成污染甚至引发安全事故，基于此，分散液液微萃取法应运而生[4]。
分散液液微萃取是在液液萃取法的基础上发展起来的一种新型的样品前处理技术，它兼备萃取和浓缩两个环节，由于其萃取剂用量小，操作简单、萃取效率高，环境污染小，目前已广泛用于金属离子富集[5]、食品分析[6]、环境污染物测定[7]以及农药残留检测[8]等方面。
用结晶紫测定DNA 的分光光度法
用结晶紫测定DNA 的分光光度法方光荣;宋功武;李瑛【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2000(19)2【摘要】研究了结晶紫与DNA的可见吸收光谱和提出了测定DNA的分光光度法。
在pH 9.56的条件下，加入DNA后结晶紫在589 nm的最大吸收峰强度显著下降，下降程度与DNA的含量呈线性关系，确定了实验的最佳条件， DNA线性响应范围为0～5 mg/L，检出限19.5 μg/L。
该法简便，快速，具有较高的选择性，对合成样品中DNA的测定结果令人满意。
%An analytical method fo rthe determination of DNA was established by spectrophotometry ,based onthe decrease of absorbance at maximum absorption wavelength for crystal violet (589nm)with addition of calf thymus DNA The degree of decrease of the absorbance is linear with the amount of DNA The determination conditions were optimized The detection limit of 19.5ug/L adn linear range of 0~5mg/L for the method were found The method is simple ,rapid and selective ,and selective ,and was applied to analysis synthetic sampe with satisfactory【总页数】2页(P45-46)【作者】方光荣;宋功武;李瑛【作者单位】湖北大学分析测试中心，湖北武汉430062;湖北大学分析测试中心，湖北武汉 430062;湖北大学分析测试中心，湖北武汉 430062【正文语种】中文【中图分类】Q523;O657.32【相关文献】1.结晶紫-紫外分光光度法测定食品中糖精钠的含量 [J], 焦嫚;董学芝;胡卫平;张蕾;王鑫2.离子液体萃取-分光光度法测定水中结晶紫 [J], 王金秀;任兰正3.分散液液微萃取-分光光度法测定水中结晶紫 [J], 吕瑞;罗帆;龙宣羽;景艳琼4.磷钒钼杂多酸-结晶紫水相分光光度法测定锡铅焊料中的磷 [J], 王燕玲5.在微乳介质中结晶紫-磷钒钼杂多酸分光光度法测定钢样中的磷 [J], 张莹琪;唐雁飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
结晶紫褪色分光光度法测定食盐中微量碘
结晶紫褪色分光光度法测定食盐中微量碘刘英红*,马卫兴,许兴友,何倩,沙鸥(淮海工学院化学工程学院,江苏连云港 222005摘要:在硫酸介质中和溴化钾存在下,碘酸根能使结晶紫氧化而褪色,且褪色的程度与碘酸根存在量成正比,从而建立了光度法测定碘的新方法。
方法的最大吸收波长为630nm。
碘酸根含量在5 ~42 g/10mL范围内符合比尔定律。
表观摩尔吸光系数为1.1 104L m ol 1 cm 1。
将该方法用于测定加碘食盐中的微量碘,结果满意。
关键词:结晶紫;碘;褪色作用;分光光度法中图分类号:T S365 文献标识码:B 文章编号:1000-9973(200907-0099-03 Spectrophotometric determination of iodine in salt adding iodineby decoloration of crystal violetLIU Ying hong*,M A Wei x ing,XU Xing you,H E Qian,SH A Ou (College of Chemical Engineering,Huaihai Institute of Technology,Lianyungang222005,China Abstract:In the medium o f H2SO4and in the pr esence of KBr,the co lor of crystal v iolet oxidized by iodide can be faded,and the deg ree of co lor fading is pro por tional to the concentration of io dide,and a new spectropho to metr ic metho d for determination of iodides repo rted.T he m ax ium abso rbance is at630nm.Beer s law is obeyed from5to42g of iodine per10mL of solution. The apparent molar absorptiv ity is1.1 104L m ol 1 cm1.T he metho d has been used in the determ inatio n of iodine in iodine spiked salt w ith satisfactory results.Key words:cry stal vio let;iodine;co lor fading reaction;spectrophotom etry碘是人体生长发育、提高智力必不可少的微量元素。
肝素的提取与鉴定设计实验报告
肝素的提取与鉴定设计实验报告一、实验目的本实验旨在了解肝素的提取方法和鉴定方法，掌握肝素的提取技术和纯化方法，并能够利用凝胶过滤层析法进行肝素的鉴定。
二、实验原理1. 肝素的提取：肝素是一种聚糖类物质，可从动物组织中提取。
常用的提取方法有碱水解法、酸水解法和酶解法。
本实验采用酶解法进行肝素的提取。
将动物组织经过清洗、切碎后加入适量的蛋白酶进行酶解，然后经过离心分离得到上清液，再经过乙醇沉淀得到粗品。
2. 肝素的纯化：通过凝胶层析法对粗品进行纯化。
将粗品溶于缓冲液中，然后加入凝胶柱中，利用凝胶柱中不同孔径大小的孔隙分离出不同分子量大小的肝素，并收集相应分子量大小范围内的肝素。
3. 肝素含量测定：利用显色反应测定肝素含量。
将样品与显色剂混合，经过显色反应后测定吸光度，根据标准曲线计算出肝素含量。
三、实验步骤1. 肝素的提取（1）清洗组织：将动物组织用生理盐水清洗干净。
（2）切碎组织：将清洗干净的组织切成小块。
（3）加入蛋白酶：将切碎后的组织加入适量的蛋白酶中进行酶解。
（4）离心分离：将酶解后的混合液进行离心分离，得到上清液。
（5）乙醇沉淀：将上清液加入等体积的乙醇中进行沉淀，得到粗品。
2. 肝素的纯化（1）制备缓冲液：配制0.1mol/L pH7.4磷缓冲液。
（2）柱层析：将粗品溶于缓冲液中，然后加入凝胶柱中进行层析。
收集不同分子量大小范围内的肝素。
3. 肝素含量测定（1）制备标准曲线：取一系列不同浓度的肝素标准品，加入显色剂后测定吸光度，绘制标准曲线。
（2）测定样品：将纯化后的肝素样品加入显色剂中，经过显色反应后测定吸光度，根据标准曲线计算出肝素含量。
四、实验结果经过酶解和乙醇沉淀得到的粗品经过凝胶层析法进行纯化，得到了不同分子量大小范围内的肝素。
利用显色反应测定肝素含量，计算出不同分子量范围内的肝素含量。
五、实验结论本实验通过酶解法提取动物组织中的肝素，并通过凝胶层析法进行纯化。
最后利用显色反应测定肝素含量。
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G@3
西南师范大学学报 （自然科学版）
第 :G 卷
（ 01 2 3456） ：5457 #*8 " $ 混和酸溶液 955 #$ 和 54: #*8 " $ ;<=1 溶液 7:4> ! " #$% &’())*+,-*.(+/*+ 缓冲溶液 ! #$ 混和，然后在酸度计上调整至 01 2 3456 % 所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水 % !"# 实验方法 取一定量肝素于 :> #$ 比色管中，依次加入 01 2 3456 缓冲溶液 945 #$，5459? 结晶紫溶液 @45 #$， 二次水稀释至刻度，摇匀静置 9> #(+ % 然后用 9 A# 比色皿于 >69 +# 处，以试剂空白为参比，测定吸光 度，其中试剂空白记为 !5 ，含有肝素者记为 ! ，计算 !! 2 !5 B ! %
$
样品分析
精密量取肝素钠注射液 2+88 ’( 于 288 ’( 容量瓶中，用二次水稀释至刻度，摇匀 G 又精密量取此液 $+88 ’( 于 288 ’( 容量瓶中，用二次水稀释至刻度，摇匀 G 吸取上述第二次稀释液 >+88 ’(（相当于注射液 8+882 ’(） ，按实验方法测定，得到肝素钠注射液效价 （ ST & ’(，2 ’% U 2D8 ST）的结果见表 2 G 对所分析样品进行标准加入回收实验，结果见表 $ G 表 % 肝素钠注射液效价的测定结果 <"/"B’*FE/*1F V"0@A/0 1- !"#EB*F ;1Q*@’ *F SFW"./*1F （ " U >， ST & ’(）
平均值 & ・ % ’( N 2 ! 2+>$D 2+>DD 2+>YD
V;< & C 2+:$ 2+$D 2+2H
!& 测得效价值!
标示量 & ・ ST ’( N 2 D $>8 D $>8 D $>8
・ ST ’( D 28: D $D= D :8:
N2
! ：$> ’( 比色管中测得肝素钠的浓度； !!：换算得到肝素钠注射液的效价 G
>@GB> >@GBG
参考文献：
［>］ 周自永 I 新编常用药手册 ［J］ I 北京：金盾出版社，>GEF I &GC I ［&］ 中华人民共和国卫生部药典委员会编 I 中华人民共和国药典 （二部） ［J］ 化学工业出版社，>GGA I HCF I I 北京： ［H］ 王云志，黄喜茹，侯海妮， 等 I 用次甲基兰测定肝素钠注射液的效价 ［ K］ （&） ： I 河北医学院学报，>GG&，>H BA = BF I ［D］ K2") L M，<28 L，683 M，!" #$ I N3*%9.2;".2)3 )3 ./% #23723; 92.% 23 /%5"+23 #, 95%(.+)5/)1%.+, ［ K］ I %#$#&"# ，>GGG， DE： >CGA = >>C> I ［A］ K2") L M，<28 LI J%(/"3291 )- 23.%+-%+%3(% "37 "O8+ " +%95)39% 23 ./% /%5"+23 "99", ［ K］ （E） ： I ’&#$(")*#$ $!""!+, ， >GGE， H> >H>> = >H&H I ［B］ P1()*" N，Q ’,(/$)*9R,，J 4"*%$()*"，J S+"#()*"I 0%.%+123".2)3 )- /%5"+23 8923; -$)T 23U%(.2)3 "3"$,929 T2./ 95%(.+)5/).)1%.+2( 7%V ［ K］ .%(.2)3 I ’&#$(")*# *-).)*# ’*"# ，>GGG，DC>：&&H = &&E I ［F］ 毛 平，黄晓兰，李翠贞，等 I 高效液相色谱法测定血浆肝素含量 ［ K］ （B） ：HAE = HBC I I 中华医学检验杂志，>GGA，>E ［E］ W17)-) 6 W，X"3; 4 J，<23/"+7. ’ KI 029"((/"+27% ()15)92.2)3"$ "3"$,929 )- /%5"+23 98$-".% 8923; ("52$$"+, O)3% %$%(.+)5/)+%929 ［ K］ I （&） ：&DG = &AA ’&#$ /)0*-!. ，>GG>， >GG ［G］ J" 6 4，Y"3; Z M，J%,%+/)-- J [I 4%5"+23 +%95)392*% %$%(.+)(/%12("$ 9%39)+：W 5+%$2123"+,6.87, ［ K］ （B） ： I ’&#$ 1-!. ，>GG&，BD BGD = BGF
第>期
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红，等：结晶紫分光光度法测定肝素
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94 试剂空白；
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图9 J(!49 #"# 酸度的影响
吸收光谱
H./*’0)(*+ K0IA)’<
用一系列不同 01 值的 &’())*+,-*.(+/*+ 缓冲溶液，试验了溶液 01 值对吸光度的影响，结果如图 :：适 宜的 01 范围为 >45 F G4>，!! 最大且保持恒定，实验选用 01 2 349 % 缓冲溶液适宜用量为：54> F 94> #$， 在此范围，!! 可保持不变，实验选用 945 #$% #"$ 显色剂用量的影响 实验结果表明，5459? 结晶紫的适宜用量是 :4> F 745 #$，大于或小于此范围，!! 均降低 % 实验选用 @45 #$% #"% 吸光度的稳定性 室温下，褪色反应在 95 #(+ 达到完全，此后吸光度值能稳定 : L 以上，笔者选在显色 9> #(+ 时进行吸 光度的测定 % #"& 标准曲线和检出限 在选定的实验条件下，肝素的浓度在 5 F :47 ! ! " #$ 范围内与 !! 呈线性关系，回归方程为 !! 2 545:@ （! ，相关系数 # 2 54666 : % 进行 6 次空白实验，求得空白值的标准偏差为 5455E，本方法 M 54:EE " ! " #$） 的检出限为 E45 N 95 B : ! ! " #$（以 @ % " 计）
文章编号：%$$$ #?"% （!$$!） $# $"@# $?
结晶紫分光光度法测定肝素
徐 红， 刘绍璞， 罗红群
西南师范大学环境研究所，重庆 ?$$"%#
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摘要：在 AB#C$ D "C# 的 E-822’.FG’H8.6’. 缓冲溶液中，肝素与碱性三苯甲烷染料结晶紫形成离子缔合物时，染料发 生明显的褪色，体系吸光度的降低与肝素钠浓度成正比，肝素浓度在 $ D !C? " I J 9K 范围内符合比耳定律，方法具 有高灵敏度，摩尔吸光系数为 @C?# L %$M K ・9’( N %・=9 N % ) 研究了表面活性剂和共存物质的影响，表明方法选择性 好 ) 用于肝素钠注射液效价的测定，结果满意 ) 关 键 词：分光光度法；肝素；结晶紫 文献标识码：’ 中图分类号：!"#$%&
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西南师范大学学报 （自然科学版） 表! !"#$% &
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第 &F 卷
回收率的测定结果
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结果与讨论
吸收光谱
按实验方法配制溶液后，于 CDE>55 紫外,可见分光光度计上扫描吸收光谱，7:5 F G55 +# 范围的吸收 光谱如图 （ 所示 % 由图可知：若以水为参比，结晶紫在 >69 +# 处有一强吸收峰，当加入肝素后呈现 9 H， &） 褪色反应，>69 +# 处的吸光度随肝素加入量的增加而明显下降 （图 9,H） ；若以试剂空白为参比，当加入肝 素后，在 >69 +# 处有一强负吸收峰，并在 >59 +# 和 3>9 +# 处出现 : 个新的正吸收峰，这是肝素与结晶紫 生成的缔合物引起的，但强度较弱 （图 9,&） % 因此选择 >69 +# 为测定波长，利用褪色法来测定肝素 %