奶牛群口蹄疫疫苗接种与抗体检测
口蹄疫病毒抗体检测
2019年第7期 吉林畜牧兽医·经验交流·JingYan JiaoLiu口蹄疫病毒抗体检测白 翠，王 楠，王 晶，马晓媛，于钦磊吉林省动物疫病预防控制中心，吉林长春 130062摘 要：口蹄疫是一种急性、高度接触性、烈性的传染病，是由口蹄疫病毒引起的，常常发生在偶蹄动物，偶尔也见于人和其它动物。
世界动物卫生组织已经将该病列为法定申报传染病，我国将其列为一类动物疫病。
我国主要通过实施强制免疫来预防控制该病，疫苗免疫之后所产生的抗体水平是评价免疫效果的重要手段，也可以根据免疫后的 效果来制定合理免疫程序。
本实验室主要通过口蹄疫液相阻断和3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒来进行抗体检测。
关键词：口蹄疫；ELISA；抗体检测我国口蹄疫病毒流行毒株主要为A型、亚洲I型和O型，其中O型口蹄疫病毒基因型众多，流行广泛，严重危害畜牧养殖业发展[1]。
1 液相阻断ELISA方法进行抗体检测液相阻断是应用双抗体夹心法，其试验过程是抗原吸附在载体上，也就是我们常说的包被，包被后加入待测抗体，反应后加相应酶标记抗体，生成抗原抗体复合物，再与底物发生显色反应。
最后通过酶标仪的光谱吸收，测量OD值，计算抗体的量。
本实验室的试剂盒主要是使用兰州兽医研究所（兰兽研）研制开发的，该试剂盒与其它同类型试剂盒相比，许多项指标都已达到了世界口蹄疫参考实验室的同类产品水平，符合率极高。
液相阻断的难点重点在于被检血清的稀释倍数，这个在试剂盒说明书上有具体操作步骤，实验室操作人员可根据说明书进行10份或20份样品的操作。
2 3ABC非结构蛋白抗体检测经抗原纯化过的口蹄疫疫苗，去除了绝大部分3ABC非结构蛋白[2]，因此，用灭活疫苗免疫的健康动物体内正常不会有3ABC非结构蛋白抗体产生，而自然感染的动物体内由于免疫频率的增加和免疫剂量的加大，不仅产生了结构蛋白而且也产生3ABC非结构蛋白抗体。
所以，用该方法可以区分自然感染和免疫抗体。
牛口蹄疫疫苗用法(最新)
【百科大全】养殖场按免疫程序进行免疫，对于同一批次疫苗有条件的可以首先进行小规模注射实验，确定使用安全后，再进行大范围的免疫注射。
生产实践中现行的免疫程序为，犊牛断奶后注射牛口蹄疫联苗；初免后，间隔1个月左右再用这两种疫苗进行一次强化免疫，以后根据免疫抗体检测结果，每隔4~6个月免疫一次。
犊牛每头注射口蹄疫疫苗0.5头份。
经产母牛在配种前1个月和配种后第5~6个月时各注射一次；每次每头注射1头份。
怀孕母牛必须进行免疫时，为减轻免疫副反应，可将疫苗多点多次进行免疫，并避免动物剧烈活动。
注意事项1、注射口蹄疫疫苗时应注意严格按照疫苗要求的操作规程和剂量进行，对患病牛、瘦弱牛、临产前二个月怀孕牛、吃奶的犊牛、不足月龄的早产牛以及经过长途运输的牛不予注射，待病牛康复，母牛产后或犊牛断奶以及恢复正常后再按规程补注。
2、疫苗注射前要充分摇匀，瓶口消毒后再启封。
启封后的疫苗应于2小时内用完。
注射口蹄疫疫苗的人员要随身携带肾上腺素等药品，以防发生过敏反应。
3、免疫接种后，要注意观察畜体的变化，由于个体的差异，有的牲畜可能出现短时间精神不振、减食，呕吐，轻度体温反应，这为正常现象，一般2~3天便可自愈；出现注射部位肿块、皮肤丘疹、瘙痒等症状属局部严重反应，采用消炎、消肿、止痒等药物治疗；出现震颤、抽搐、休克等神经症状属过敏反应，应立即注射0.1%盐酸肾上腺素1毫升等脱敏药物救治，治愈后补注疫苗。
4、注射疫苗要保证注到肌肉内，不要过浅。
若注射剂量大，最好分点注射，要一畜一个针头。
需要注意的是注射口蹄疫疫苗同时，不能注射其他疫苗。
另外，我国专门制定了《口蹄疫防治技术规范》，养殖户需要根据该规范进行口蹄疫防治。
小贴士泽牧久远专利技术肉牛“两料三方四步育肥法”，实现将肉牛专用核心料、日粮配方、育肥方法完全融为一体，促进了肉牛养殖向精细化、科学化发展，该技术科学、省料、速肥、低成本，肉牛平均月增重可达45-65kg（90-130市斤）阶段最大增重量达150-160市斤。
牛口蹄疫的综合防控方法及免疫不良反应的应对措施
摘要：肉牛养殖行业作为我国畜牧业发展中较为重要的支柱性产业，与农牧民的经济收入有着密不可分的关系。
在肉牛养殖过程中，疾病的发生不仅会影响牛只正常的生长发育，还会增加治疗成本，影响经济效益。
口蹄疫作为肉牛养殖环节中较为常发的疾病之一，具有较强的传染力，传播途径广泛，严重威胁牛群健康，阻碍了畜牧业的发展。
本文综述了牛口蹄疫的病原学、流行病学、症状、诊断、综合防控方法以及免疫不良反应的应对措施，以期帮助从业人员正确认识牛口蹄疫病，强化对该病的综合防控，促进养殖业的可持续发展。
关键词：牛，口蹄疫，防控方法，免疫不良反应，应对措施牛口蹄疫的综合防控方法及免疫不良反应的应对措施张召议1，包雨鑫2*，王慧玲3（1.通辽市动物疫病预防控制中心内蒙古通辽028000；2.通辽市农牧科学研究所内蒙古通辽028000；3.通辽市示范性综合实践基地暨通辽市少年军校内蒙古通辽028000）收稿日期：2023-03-24作者简介：张召议（1994—），女，蒙古族，内蒙古宁城人，硕士，兽医师，研究方向为基础兽医学。
通辽地区立足肉牛黄金产业带，致力于建设绿色高质量农畜产品基地，以“种青贮、养黄牛”为发展思路，带领当地的农牧民致富增收。
全市共有76万农牧户，其中发展肉牛产业的农牧户占24%，形成了全域发展的势头。
在肉牛种源建设上，种源基础和黄牛改良两手抓，实现养殖效益的最大化。
养殖规模和质量的提升离不开肉牛疫病的防控，牛口蹄疫作为我国一类动物疫病，在全世界范围内流行，发病率高，传播速度快，且有报道称口蹄疫病毒可感染儿童造成心肌炎，严重时可危及生命。
因此，应当在充分认识牛口蹄疫病的基础上做好综合防控，减少口蹄疫病的发生与传播。
1病原学口蹄疫病毒是微RNA 朊病毒，可分为7种血清型，分别是O型、A 型、C 型、南非Ⅰ型、南非Ⅱ型、南非Ⅲ型和亚洲Ⅰ型，其中以O 型的感染范围最广。
每一种血清型又可以分为多种亚型，已知有60余种，各个血清型间不存在交叉免疫反应，因此同一头牛可同时感染多种血清型的病毒，这给防治工作带来了较大的难度。
降低注射口蹄疫疫苗导致奶牛产奶量下降的研究
程 度 不 同 的 出现 精 神 沉 郁 、 食 欲 下
降 、 体 温 升 高 症 状 ； 体 温 升 高 幅 度
所 用 疫 苗 为 牛 Ｏ 型 口 蹄 疫 灭 活 苗 （ ／ ９株 ）（ ，兰 州生 物药 厂 ０Ｓ ９ Ⅱ） 生产 ，批 号为 ２ ０ ０ ２ ，注射 剂量 为 ０ ４４ ６
试 验组 按 ９ ８ ％降低 产奶量 计算 ．８ ５天 内 降低 ４ ７ ３ ｋ ，添加 豆饼 、玉 ２ ．６ ｇ 米减 少下降数 为 ３ ７ ３ ｋ ，按 收购奶 ０ ．８ ｇ 价 １８ ．６元 ／ ｇ计算 ， 值 ５ １ ７ ｋ 价 ７ ． ３元。 按 当时 豆 饼 价 格 １ ８ ．０元 ／ ｇ，玉 米 ｋ
正常 。
２ ／头 ，均为颈 部肌 肉注射 。 ｍｌ
（ ） 方 法 将 ８ 二 ０头 成 母 牛 随 机
组 共 减 少 损 失 ３ １３ ４ ． ３元 ， 平 均 减
少 ８５ ．３元 ／头 。
分 成两组 ，每组 ４ ０头 。其 中一组 （ 第
一
组 ）防疫 前 两天 、防 疫后 两 天 ，共
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降 低 注 射 口蹄 疫 疫 苗 导 致 奶 牛 产 奶 量 下 降 的 研 究
田亚群 ’ 贾洪生 ，刘乃强 。 。 张绍军 １ 河北省唐 山市芦 台开发 区动检 站 ３ １ Ｏ ；２ 河北 省唐 山市 兽医工作站 ０ Ｂ Ｂ ０ ３ ０－ ８０￣
四 天 ， 日粮 中添 加 蛋 白饲 料 （ 饼 ） 豆
０５ｇ ．ｋ ／头 ， 添 加 能 量 饲 料 （ 米 ） 玉 ０５ｇ ．ｋ ／头 ； 另 一 组 （ 二 组 ） 日粮 第 结 构 不 变 。注 射 前 ３天 测得 ２组 日产
牲畜口蹄疫实施方案
牲畜口蹄疫实施方案
口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性的传染病，主要影
响牛、猪、羊、山羊等偶蹄类动物，严重危害畜牧业生产。
为了有效预防和控制口蹄疫的传播，制定和实施科学合理的口蹄疫实施方案显得尤为重要。
一、加强疫情监测。
1.建立健全口蹄疫疫情监测网络，加强对口蹄疫病毒的监测和病原学研究，及
时发现疫情变化趋势。
2.加强对口蹄疫流行地区的监测，及时掌握疫情动态，采取有效措施进行防控。
二、加强动物检疫。
1.加强对口蹄疫高发地区动物及动物产品的检疫，对进出口动物和动物产品进
行全程监管，严格防止疫情的传播。
2.加强对口蹄疫疫苗的质量监管，确保疫苗的有效性和安全性。
三、加强防控措施。
1.建立健全口蹄疫防控体系，加强对畜牧业生产全过程的监管，提高畜禽养殖
场的防疫能力。
2.开展口蹄疫疫苗接种工作，对易感动物进行定期疫苗接种，提高动物的免疫力。
3.加强对口蹄疫疫情的应急处置能力，一旦发现疫情，立即启动应急预案，采
取有效措施进行隔离和消毒。
四、加强宣传教育。
1.加强口蹄疫防控知识的宣传，提高畜牧从业人员的防疫意识和技能。
2.加强口蹄疫防控政策法规的宣传，引导畜牧业生产者依法依规开展生产经营活动。
以上就是牲畜口蹄疫实施方案的相关内容，希望各地相关部门和畜牧业生产者能够认真贯彻执行，共同做好口蹄疫的预防和控制工作，确保畜牧业生产的安全和稳定。
养殖场防疫检疫消毒流程标准
xx牧业防疫检疫消毒流程标准1目的预防疫情，净化牛群。
2 适用范围中鼎牧业各牧场3.工作标准3.1口蹄疫防疫免疫标准口蹄疫防疫免疫使用口蹄疫三联苗颈部肌肉注射1毫升/头进行免疫。
0.1毫升的消耗量，实际注射1.1毫升。
3.1.1犊牛初免方案（1）有疫情情况下7日龄初免、一个月后加强免疫一次，之后每4个月免疫一次。
（2）无疫情情况，3月龄初免，一个月后加强免疫，以后每4个月免疫一次。
（3）生产中初免犊牛可以根据加强免疫日期与正常牛群免疫日期距离时间的长短决定是否再次免疫，如相差两个月以上，初免犊牛需要再次免疫；如相差两个月以内，初免犊牛就不需要再次免疫。
3.1.2全群牛只免疫每年1月、5月、9月免疫三次。
新接管牛场25天内全群注射完成接种疫苗工作。
（1）全群注射时间以最后一头接受免疫时间为准，全群注射必须在4天内完成。
（2）免疫后第21天采血测定抗体滴度，95%的受测样品达到1：64为合格标准。
（3）抗体不合格的进行二免，免疫后21天采血测定抗体滴度。
3.1.3注意事项（1）从冷藏箱取出疫苗后放在15到30度室温环境1小时，自然回温，使其接近动物体温，易于疫苗吸收。
疫苗摇匀后使用。
（2）肌肉注射，严禁打飞针。
（3）一头牛换一个针头，防止交叉感染。
（4）提前准备2盒肾上腺素，大牛4毫升，犊牛青年牛1-2毫升。
注射疫苗后5个小时内全群观察，如果出现应激反应，马上注射肾上腺素。
3.1.4疫苗保存（1）2-8度低温保存，切记不要冷冻。
（2）不要放在紧贴冰箱后壁位置，放在冰箱门等温度较高位置效果比较好。
（3）各牧场适当保存少量口蹄疫疫苗，方便哺乳犊牛免疫。
3.2 流行热疫苗免疫流程标准南方牧场每年4月注射流行热疫苗，6月龄以上牛只皮下注射4ml,6月以下牛只皮下注射2ml，21天后加强免疫一次。
3.3 布病检疫流程标准3.3.1 阴性未免疫布鲁氏杆菌病疫苗检测方法（1）每年3月、9月对6月龄以上的牛群做两次检测。
奶牛口蹄疫疫苗免疫与抗体监测的联合应用
取 注射 ，药瓶 开 启后 要 当班 用完 ，不 能 留 到下 一 免疫 后 跟踪 免 疫 牛抗 体 水平 的消 长 情 况 ，牛 群 经
班使 用 。
应会 受 到抑 制 。
合格 ，计算各牛群免疫抗体 的群体合格率。
通 过检 测 动 物体 液 （ 主 要 是血 清 ） 中的特 异
１ ． ３ ． ５ 过 敏 反 应 ：免 疫 接 种 后 ，少 数 动 物 因 品 ３ 疫 苗免 疫与 抗体 检测 的联 合应 用 种 、个 体 状 况 ．可 能 出 现 过 敏 反 应 。应 加 强 观 察 ，及 时用 肾上 腺 素或 其 他 办 法 治疗 ，以减 少 损 性抗 体 ，可 对 Ｆ ＭＤ Ｖ感 染 与 免 疫 状 况 作 出诊 断 。 失。 抗体 的检测 方 法包 括补 体 结合 试 验 （ Ｃ Ｆ Ｔ ） 、病 毒
层 或皮 下 ，注射 前 要对 注射 部位 进 行 消 毒 ．一 牛 室进 行抗 体水 平检 测 。
一
个 针 头 ，药 液 要 经过 解 冻恢 复室 温 、摇 匀 后 抽 ２ ＿ ３ 抗 体 滴 度 ：免 疫 前 进行 一 次抗 体 水 平 检 测 ， 过 疫 苗 免疫 后 ，隔 ２ ８天 开 始 进 行 抗 体 跟 踪 ，每 １ ． ３ ． ４ 减少 应 激 ：应 激 状 态 下 牛 只 的正 常免 疫 反 月进 行 一 次抗 体 检测 ，牛 只 的抗 体 滴 度 ≥２ ５ ６ ￣ 为
链运输。确保其 ２ — ８ ℃的保存 条件 ，不能有分层 、 抗 体水 平变 化规 律 ，提 高免 疫 的效 果 。 结冰等现象。 ２ ． １ 检 测方 法 ：正 向间接 血凝试 验 （ Ｉ Ｈ Ａ） １ ． ３ ． ２ 使用剂量 ：在产 品说 明书要求的基础上适 ２ ． ２ 监测群体 ：牛群分别 以犊 牛 、中牛 、泌乳 当增 加 剂量 。 牛 、干奶 牛 为 群 体 分群 ，各 牛 群按 ５ ％左 右 的 比 １ ． ３ ． ３ 使用 方 法 ：采 用 肌 肉注射 ，不 可 注入 脂 肪 例进行采血抽查 ，抽取血液后分离血清通过实验
异地引进奶牛的简易检疫程序参考
异地引进奶牛的简易检疫程序参考当前，由于我省奶牛业的大力发展，各地都在不同规模上从省外引进奶牛，从而增加了疫病传播的机会。
这就要求我们必须建立健全引进申报制度，引进单位或个人引进奶牛时必须到行政主管部门进行申报，经批准后动物防疫监督机构派员随行到引进地进行监测检疫。
笔者通过近几年来对奶牛的检疫和各地引进奶牛后出现的问题，总结出几点引进奶牛的简易检疫办法，仅供参考。
1产地选择调查了解产地奶牛场近6个月内的疫情情况，不到有炭疽、结核病、布鲁氏杆菌病、口蹄疫等传染病的地区调运奶牛；另外，可查看奶牛场的档案和预防接种记录，以备参考。
引进奶牛检疫时，必须在产地饲养场进行，不能在牲畜批发.市场等交易场所采购和实施检疫。
2奶牛的检疫程序2.1奶牛的临床检查首先必须对奶牛进行临床检查，看其体温、采食是否正常，精神状况是否良好，口腔粘膜、舌面、牙龈、鼻镜有无溃疡、流涎，行走有无跛行等。
只有在临床检查健康后方可进行下一步的检疫。
2.2结核病的检疫众所周之，奶牛结核病是人畜共患病，一经感染，会给畜牧业和人类的健康带来严重的危害，为了保障引进奶牛的健康发展，减少经济损失，使人民喝上放心奶，必须采取检疫监测的方法对引进奶牛进行严格的监测。
具体方法是：奶牛颈中部上1/3处剪毛，用卡尺量其原皮厚并作好记录，在测定皮厚处每头奶牛注射牛型提纯结核菌素0.1ml，于72小时、96小时、120小时进行观察，看注射部位有无红、肿、热、痛等炎性反应。
如局部出现明显炎性反应，且皮厚差大于等于4mm为阳性；局部炎性反应不明显，2mm小于等于皮厚差小于4mm为可疑；无炎性反应，皮厚差小于2mm为阴性。
2.3布鲁氏杆菌病的检疫方法是虎红平板凝集试验：在奶牛的颈静脉采血5ml于洗净消毒的试管内-，自然分离血清，用微量移液器吸取待检血清（血清不能污染，另可用于口蹄疫的免疫抗体监测）30微升于洁净的玻片上，然后再加入抗原（诊断液）30微升，并用牙签将其混匀，在5～10分钟内观察结果，以出现可见的凝集反应判为阳性。
奶牛口蹄疫Asia I-O型双价灭活疫苗免疫效果试验
月 ）０ 型 免疫 抗 体 合 格 率 有 两 组 在 ７％ 以 上 ， ｓ ， ０ Ａｉ ａ Ｉ型免疫 抗体 合格 率均 在 ７ ％以上 ，结合 生 产实 际 ０
分 析认 为 ，在新疆 地 区成年 牛一 年 ２次接 种 双价 疫 苗是 可行 的 。
型 免疫 抗 体合 格 率 有两 组 在 ７ ％以上 ， ｓ Ｉ型免 ０ Ａｉ ａ 疫 抗体合 格率 均 在 ７ ％以上 。 ０ 监测 结果见 表 】 表 ２ 、 。
２试 验 方 法 ．
表 ２ 成 年奶牛 Ａｓ Ｉ型免 疫抗体 检 测结果 ｉ ａ
试 验奶 牛 在相 同的饲 养管 理条件 下 ， 随机分 为 ３
组， 分别 接 种 ３个不 同 厂家 生产 的 Ａ ｉ Ｉ一 ｓ ０型 灭 活 ａ 高效 二 价疫 苗 ，接 种途径 和 免疫剂 量按 照疫苗 说 明 书操 作 。免疫前 、 种疫 苗后 ２ 、２ ９ 、２ 、６ 接 ２ ５ 、４ １ ６ １９天 ，
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Ｎ ｏ ｎ ｇ Ｃ Ｍ Ｒ Ｋ ｅ Ｊ ｉ
… 一 ～ ， 一 ， 一
●
．
：５牛 口 蹄 疫 Ｏ
Ａｓａ —ｏ 型 双 ＂ｔ ｉ Ｉ ｉ ｆ＂
灭 活 疫 苗 免 疫 效 果 试 验
口蹄疫 是 由 口蹄 疫病 毒 引起 的一种 急性 、 热性 、 高度 传 染性 动物 疫病 ，可 造成 巨 大 的经济 损失 和社
会影 响 。目前 ， 国主要采 取 以免疫预 防为 主的综合 我 性 防控 措施 来 预 防和控 制牲 畜 口蹄 疫 。 口蹄疫 疫 苗 的免 疫 接 种效 果 直 接 关 系到 口蹄 疫 的预 防 和 控制 ，
表 １ 成年 奶牛 。 型 免疫抗 体检 测结 果
因此 ， 现行 使 用的 疫苗对 易 感牲 畜的 免疫 效果 如何 ，
对泌乳牛免疫口蹄疫灭活疫苗后的效果评价试验
对泌乳牛免疫口蹄疫灭活疫苗后的效果评价试验摘要：将口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗（OHM/02株+AKT-III株）免疫一定数量的泌乳牛后，对泌乳牛的应激比例，抗体效价，产奶量进行监测并对比分析，依据监测结果评估疫苗免疫对泌乳牛的影响，结果表明免疫疫苗后泌乳牛安全无应激，抗体效价合格，产奶量影响小，同时也反应出疫苗的良好品质。
关键词：口蹄疫；口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗；应激；抗体效价；产奶量；口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus）引起的偶蹄动物烈性传染病，是世界卫生组织（OIE）规定必报的烈性传染病，我国将其排在一类传染病之首。
口蹄疫病毒共有七个血清型，分别为O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3型。
近几年我国流行的口蹄疫主要是O型和A型，预防口蹄疫我国主要采取免疫疫苗与扑杀相结合的综合防治措施，在生产实践中以免疫疫苗为主并取得了良好效果，但同时由于疫苗质量不稳定等因素，经常在注射疫苗后发生动物应激反应甚至死亡，动物抗体保护率低、生产效率下降（如奶牛的产能量下降）等问题。
本文研究的内容就是通过对泌乳牛免疫口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗，对比免疫前后的抗体效价、产奶量、以及应激反应来评估金海生物口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗在牧场的免疫程序和效果，同时设立对照疫苗进行比较。
1材料与方法1.1.疫苗及试剂盒试验疫苗为杨凌金海生物技术有限公司生产的口蹄疫O型A型二价灭活疫苗（OHM/02株+AKT-III株），对照疫苗为市场销售的某一品牌疫苗。
口蹄疫抗体检测试剂盒为兰州兽医研究所生产的口蹄疫疫液相阻断ELISA抗体检测试剂盒。
1.1.试验动物泌乳奶牛，在某个集团牧场内。
2试验方法2.1试验动物分组及免疫按牧场现有口蹄疫免疫程序，在计划免疫时随机选取健康泌乳牛100头（试验组50头，对照组50头），按单双号进行分组免疫。
牛羊O型口蹄疫ELISA试验的抗体检测
622023.8牛羊O型口蹄疫ELISA试验的抗体检测高 波（瓦房店市动物疫病预防控制中心，辽宁 瓦房店 116300）口蹄疫是由口蹄疫病毒引发的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。
口蹄疫是人畜共患传染病，被国际兽医组织确定为一类传染病，主要侵害偶蹄兽，它的临诊特征为体温升高、精神不振、流涎，在唇部内面、齿龈、舌面、蹄部、乳房处皮肤出现水疱，水疱逐渐破裂后，体温达到正常。
口腔内出现水疱期间，趾间、蹄冠的较软皮肤也出现水疱，破裂的水疱短时间形成烂斑，随后逐渐康复，若护理不当，激发感染化脓菌，形成溃疡坏死，甚至会出现蹄甲脱落。
有的病牛在康复过程中，病情由好转变为加重，全身衰竭，心脏停搏而死亡。
此病传染性极强。
感染后传播速度快，对人畜危害严重，因此，做好此疫病的预防、控制、消灭措施显得格外重要。
口蹄疫病预防主要是通过疫苗的免疫使牛羊体内产生抗体，来保护牛羊不再发病，免疫质量好坏决定抗体的保护程度。
通常采用酶联免疫液相阻断法检测牛、羊血清中的口蹄疫O型抗体。
检测出抗体的OD值，通过OD值来判断牛羊抗体的保护率。
如果抗体的OD值下降，已经不在保护范围内，就应该立即进行牛羊的疫苗免疫接种。
不及时免疫，有可能造成牛羊发病，直接造成养殖户的经济损失。
现接到检测任务，需要将20份牛血清做O型口蹄疫抗体检测，介绍如下。
1 检验原理采用酶联免疫液相阻断法。
牛羊待检样品中O型抗体的含量与显色OD值呈负相关，通过与病毒抗原对比来判断抗体效价。
试剂盒在22℃的实验室回温1小时。
利用回温时间准备试验用的器材。
100微升单道移液器、12道移液器、枪尖、量杯、量筒、加样槽、拍板用的吸水纸等。
2 试剂配制2.1 洗涤液配制今天检测牛血清样品20份，洗板时所需要的洗涤液的体积为300微升×100孔×5次×2=300毫升。
使用前拿出一包固体洗液加500毫升纯化水，摇晃直至溶解，在无菌条件下配制试验用洗涤液，可以在2～8℃条件下保存7天。
4种ELISA检测奶牛O型口蹄疫免疫抗体的比较试验
测奶 牛 Ｏ 型 口蹄疫 免疫抗 体 的检测 能力 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ ＥＬ Ｓ 方 法 ． ＩＡ
１０份血清 样本 。牛 场 Ｂ 每 年免 疫 ３次 ， ２ ， 间隔 时 间
为 ４个 月 ， 检 １ ０份 血 清 样 本 。牛 场 Ｃ， 年 免 疫 抽 ８ 每 ４次 ， 次 间 隔 ３个 月 ， 检 ８ 每 抽 Ｏ份 血 清 样 本 。血 清
中 图分 类 号 ： ８ ５ ３ ￥ ５ ． ５ ． ￥ ５ ． ； ８ ２ ６ ９ ６
文献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ： ５ ９ ６ ０ （ ０ ０ ０ —０ ３ ０ ０ ２ —０ ５ ２ １ ） ９０ ２ — ２
口蹄疫 （ ＭＤ） 由 口蹄 疫 病 毒 引起 的 以 感 染 Ｆ 是 偶蹄动 物为 主 的急 性 、 热性 、 度传 染 性 疫 病 ， 界 高 世
得 很 重 要 ， 清 学 检 测 在 口蹄 疫 诊 断 检 疫 及 动 物 群 血
（ 阳性对 照 （ 均值 一阴性 对 照 ＯＤ ） Ｄ 均值 ） 。
１ １ ３ Ｏ 型 口蹄 疫 抗 体 液 相 阻 断 ． ． Ｅ ｌＡ 检 测 试 ＬＳ 剂 盒 （ Ｐ Ｅ 购 自 中 国 农 业 科 学 院 兰 州 兽 医 研 究 ｏＬ Ｂ ） 所 （ 号 ２ ０ ０ ２ ０ ） 判 定 标 准 ， 阴 阳 性 对 照 和 批 ０ ８２０ １ 。 在 病 毒 抗 原 对 照 成 立 情 况 下 ， 病 毒 抗 原 对 照 平 均 以
１ １ １ 牛 、 口蹄 疫 病 毒 ＶＰ ． ． 羊 １结 构 蛋 白抗 体 酶
联 免 疫 吸 附 试 验 诊 断 试 剂 盒 购 自上 海 优 耐 特 生 物 医 药 有 限 公 司 （ １Ｅ ＩＡ） 批 号 ２ ０ ０ ２ ） 被 检 ＶＰ 一 Ｌ Ｓ （ ０７ ６３ 。
口蹄疫免疫实施方案
口蹄疫免疫实施方案一、规定对全部猪进行O 型口蹄疫强制免疫；对全部牛、羊、骆驼、鹿进行O 型和亚洲 I 型口蹄疫强制免疫；对全部奶牛和种公牛进行 A 型口蹄疫强制免疫。
二、免疫程序规模养殖场按推荐免疫程序进行免疫，散养家畜在春、秋两季各实施一次集中免疫，对新补栏的家畜要及时补免。
1.规模养殖家畜和种畜免疫仔猪、羔羊：28～35 日龄时进行初免。
犊牛：90 日龄左右进行初免。
全部新生家畜初免后，间隔 1 个月后进行一次加强免疫，后来每隔4～6 个月免疫一次。
2.散养家畜免疫春、秋两季对全部易感家畜进行一次集中免疫，每月定时补免。
三、紧急免疫发生疫情时，对疫区、受威胁区域的全部易感家畜进行一次加强免疫。
边境地区受到境外疫情威胁时，要对距边境线 30 公里以内的全部易感家畜进行一次加强免疫。
近来 1 个月内已免疫的家畜能够不进行加强免疫。
四、使用疫苗种类牛、羊、骆驼和鹿：口蹄疫O 型-亚洲 I 型二价灭活疫苗、口蹄疫O 型-A 型二价灭活疫苗和口蹄疫 A 型灭活疫苗。
猪：口蹄疫O 型灭活类疫苗或口蹄疫O 型合成肽疫苗（双抗原）。
空衣壳复合型疫苗在同意范畴内使用。
五、免疫办法多个疫苗免疫接种办法及剂量按有关产品阐明书规定操作。
六、免疫效果监测1．检测办法亚洲 I 型口蹄疫：液相阻断 ELISA；O 型口蹄疫：灭活类疫苗采用正向间接血凝实验、液相阻断 ELISA，合成肽疫苗采用 VP1 构造蛋白 ELISA。
A 型口蹄疫：液相阻断 ELISA。
2．免疫效果鉴定猪免疫 28 天后，其它畜 21 天后，进行免疫效果监测。
亚洲 I 型口蹄疫：液相阻断 ELISA 的抗体效价≥26 鉴定为合格。
O 型口蹄疫：灭活类疫苗抗体正向间接血凝实验的抗体效价≥25 鉴定为合格，液相阻断 ELISA 的抗体效价≥26 鉴定为合格，合成肽疫苗 VP1构造蛋白抗体 ELISA 的抗体效价≥25 鉴定为合格。
A 型口蹄疫：液相阻断 ELISA 的抗体效价≥26 鉴定为合格。
奶牛场O型口蹄疫免疫抗体水平的检测与分析
由表 １对 １蹄 疫 抗 体 （ ３ Ｏ型 ） 向间接 血凝 试 验检 测 结 正 果 统计 来 看 ， 次试 验共 采 取 了 ９个奶 牛 场 ２ ０头 奶 牛 ， 该 ０ 第
１号 奶 牛 场 为 一 个 上 规 模 的 青 年 奶 牛 群 ， 采 取 ４ 共 ０头 ， 检 经
口蹄 疫 （ｏｔａ ｄ ｍ ｕｈｄｓａｅ Ｆ ｆｏ— ｎ — ｏ ｔ ｉ ｓ ， ＭＤ） 由 口蹄疫 病 毒 ｅ 是
（ ｏ— ｎ — ｕｈｄｓａｅｖｒｓＦ Ｖ） 起 的 偶 蹄 动 物 共 患 ｆ ｔａ ｄ ｍｏ ｔ ｉ ｓ ｉ ．ＭＤ 引 ｏ ｅ ｕ
１ ． 方法 ４
抗体 检 测按 照 中国农业 科 学 院兰州 兽 医研 究所
的一种急 性 、 热性 、 高度传 染 性疫 病 。该病 可快 速 和远 距 离 传 播 ， 感 动物 主 要包 括 猪 、 、 易 牛 羊等 主 要 畜种 及 其 他家 养
和 野生偶 蹄 动物 ［３ １］ 特征 是 在 口 、 、 、 、 、 － 。其 舌 唇 鼻 蹄 乳房 等 部 位 发 生 水 泡 、溃 疡并 形 成 烂 斑 ［５ ＭＤ的 发 病 率 为 ４ －。Ｆ ３ １０ 病 死率 因毒 株而 异 ， ０ ％， 严重 时可 达 １０ ０ ％。鉴 于 Ｆ ＭＤ可 造成 巨大 的经 济损 失 和社会 影响 ， 界动 物卫 生组 织 （ Ｉ 世 Ｏ Ｅ） 将该 病 列 为 １ ５个 Ａ 类动 物 疫 病 之首 ［７ ６］ － ，我 国政 府 也 将 Ｆ ＭＤ列 为 １ 动物 传染 病之 首 ］在 我 国 ， ６个 。 口蹄疫 有效 控 制 的关键 在于 防疫 ，疫苗 接种 与抗 体检 测是 预 防控 制 口蹄 疫 的重要 环节 。该试 验 采用 正 向间接 血凝 试验对 奶 牛 ０型
规模化奶牛场主要传染病的防控要点
规模化奶牛场主要传染病的防控要点作者：陈华林来源：《兽医导刊》 2016年第1期陈华林/ 北京三元集团畜牧兽医总站自2000 年以来，我国奶业发展很快，到2014 年底奶牛存栏达到1 460 万头，总产奶量达到3 840 万吨，奶产量居全世界第三。
在发展过程中，由于对防疫管理认识不足，抓的不到位，致使一些疫病，特别是奶牛布病、结核等人畜共患病在一些地区流行，严重影响了人民健康，制约了奶业发展。
加强奶牛场防疫设施建设，完善重大动物疫病免疫、人畜共患病的检疫净化，建立健全重大动物疫病监测、预警机制，是奶牛场当前一项重要工作。
一、奶牛口蹄疫口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物急性、热性传染病。
该病毒有7 个血清型，我国奶牛流行的主要为0 型、A 型和亚洲Ⅰ性。
奶牛发生口蹄疫后，主要表现为：体温升高；口腔、牙龈及舌出现水泡和溃疡；乳头和乳房出现水泡，发生严重乳房炎；蹄部出现水泡，发生跛行；犊牛死于心力衰竭。
1. 疫苗的筛选。
口蹄疫灭活疫苗在我国使用最为普遍。
口蹄疫不同血清型间没有交叉保护，同一血清型又存在不同亚型，亚型之间的交叉保护差异巨大，抗原漂移不断发生。
因此，疫苗毒株必须与流行毒株尽可能匹配是成功免疫的先决条件。
疫情发生时，应尽可能确定流行毒株VP1 基因序列，选择相匹配的毒株疫苗。
另一方面，良好的口蹄疫灭活疫苗，其目标抗原应该足够，而杂蛋白含量越少越好。
采购疫苗时，不同批号的疫苗应该进行SDS-PAGE蛋白电泳，测定疫苗目标抗原蛋白146s 的含量及杂蛋白的含量。
合格者方可用于牛场免疫，从而提高免疫成功率，降低过敏反应的发生率。
目前市面上供应的口蹄疫疫苗有O 型- 亚洲1 型二价灭活苗、A型灭活苗、0 型- 亚洲1 型-A 型三价灭活苗。
为减少疫苗注射对奶牛产生的应激，首农集团下辖牛场选用悬浮工艺生产的O 型- 亚洲1型-A 型三价灭活苗。
2. 抗体水平的监测。
免疫21 ～ 30 天后，按存栏量的5% 采集血清样本，用液相阻断ELISA 方法分别测定0 型、A 型和亚洲1 型的抗体效价。
奶牛口蹄疫免疫时注意事项
奶牛口蹄疫免疫时注意事项作者：陈东新来源：《农民致富之友》2015年第08期[中图分类号] S858 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2015）04-0225-011 ; 疫苗的选用根据口蹄疫病原流行特点的综合分析，冬季是奶牛的口蹄疫防控的关键时期。
根据农业部《口蹄疫防治技术规范》规定。
要求对所有牛实施O型和亚洲I型口蹄强制免疫;另外对所有奶牛和种公牛进行A型口蹄疫强制免疫。
目前奶牛使用的疫苗主要有口蹄疫O型—亚洲I型二价灭活疫苗、口蹄疫O型—A型二价灭活疫苗和口蹄疫A型灭活疫苗。
所用疫苗必须采用农业部批准使用的产品，并由动物防疫查处监督机构统一组织、逐级供应。
2 ; 疫苗的使用2.1 ; 疫苗的检查使用前仔细检查的疫苗的名称、厂家、批号、有效期、物理性状、贮存条件等是否与说明书、瓶签内容相符要明确剂量、使用方法及有关注意事项。
坚决不用过期、无批号、油乳剂破乳、颜色异常、有深沉、有异味、瓶盖松动及瓶身破裂或不明来源的疫苗2.2 ; 疫苗预温及摇匀疫苗使用时应置于室温（15℃～25℃）预温2天。
若育苗过冷则会导致奶牛注射疫苗后出现较大的反应，疫苗不利吸收，注射部位出现脓包，甚至溃烂。
疫苗在使用前应充分摇匀，但不可剧烈振摇，防止振摇后产生大量气泡，使用过程中应保持匀质。
充分发挥疫苗性能。
2.3 ; 消毒疫苗启封前要先进行瓶盖消毒，注射前要对注射部位消毒，启封后疫苗于2小时内用完，吸出疫苗液不可再回注于瓶内，以免污染瓶中疫苗降低疫苗的效果，没有及时使用完的疫苗和空瓶要进行无害化处理，不得随意丢弃，以免污染环境或者引起疫苗散毒。
2.4 ; 疫苗在使用前应先进行小规模实验，确定本批次疫苗是安全后，再进行大范围的免疫注射，从而降低疫苗在使用情况下的风险，减少奶牛对疫苗的不良应激性的反应。
2.5 ; 注射口蹄疫疫苗时应注意严格按照疫苗要求的操作规程和剂量进行。
对患病牛、瘦弱牛、临产前二个月怀孕牛、吃奶的犊牛、不足月龄的早产牛以及经过长途运输的牛不予注射，待病牛康复后，母牛产后或犊牛断奶及恢复正常后再按规程补注。
奶牛接种口蹄疫疫苗
在每年的春秋两季进行加强免疫，每头牛每次接种2毫升。
接种操作流程及注意事项
准备工作
确保接种人员经过专业培训，熟悉 操作流程和注意事项，准备好防护 用品和接种器材。
接种部位
选择在牛的颈部或臀部进行接种， 避开血管和神经密集区域。
接种剂量
按照疫苗说明书和规定剂量进行接 种，不得随意增减剂量。
观察与记录
05
相关法规与政策
动物防疫相关法律法规
《中华人民共和国 动物防疫法》
《畜禽标识和养殖 档案管理办法》
《动物防疫条件审 查办法》
国家有关奶牛饲养和管理的政策
奶牛标准化规模养殖支持政策
奶牛良种补贴政策
推广全株青贮玉米政策
建设优质奶源基地政策
地方政府有关畜牧业发展的政策措施
地方畜牧业发展总体规划
地方财政对畜牧业的扶持政策
对人类健康的影响
口蹄疫是人畜共患病，可 能对人类健康造成威胁。
疫苗接种的必要性
预防和控制疾病
通过接种口蹄疫疫苗，可 以预防和控制口蹄疫的爆 发，降低疾病传播的风险 。
提高动物健康
接种疫苗可以增强奶牛的 免疫力，提高动物健康水 平，降低疾病对生产性能 的影响。
保障公共卫生安全
接种疫苗可以降低口蹄疫 在人群中的传播风险，保 障公共卫生安全。
疫苗接种后应无不良反应，否则会影响免疫 效果的评价。
免疫效果的监测与检测方法
血清学检测
采集接种后不同时间点的奶牛血清样 本，通过血清学检测方法如ELISA、
CIE等检测抗体水平。
临床观察
接种后对奶牛进行临床观察，记录 任何异常反应和疾病发生情况。
攻毒试验
在实验室条件下，对接种疫苗的奶 牛进行攻毒试验，观察其保护效果 。
口蹄疫疫苗诱发奶牛瘫痪的诊疗分析案例
口蹄疫疫苗诱发奶牛瘫痪的诊疗分析案例王少利江苏省灌云县图河镇动物防疫检疫站，江苏连云港 222200摘 要：奶牛瘫痪是由多种因素导致的奶牛常见疾病之一，如钙磷比例不均衡、妊娠后血钙负平衡、风湿性关节炎等。
注射口蹄疫疫苗导致奶牛瘫痪，属于疫苗接种后的不良反应或过敏反应，奶牛采食量下降、卧地不起。
本文对江苏连云港某奶牛养殖户一例口蹄疫疫苗诱发奶牛瘫痪的病例进行现场调查、临床检查，分析发病原因，提出治疗方案并总结切实可行的预防措施，为养殖户对该病防治提供参考。
关键词：口蹄疫疫苗；奶牛瘫痪；诊疗；预防文章编号：1671-4393（2024）01-0051-05 DOI:10.12377/1671-4393.24.01.100 引言口蹄疫是由口蹄疫病毒引发的一种急性、接触性传染病，又称为“口疮”，发病率有逐年升高趋势。
奶牛患病后，不仅食欲不振、体温升高、流涎等，而且生产性能下降、奶品质降低，严重时危及奶牛生命。
接种口蹄疫疫苗是预防奶牛场发生口蹄疫的有效措施，大规模奶牛场普遍推广和应用。
奶牛瘫痪是与养殖场饲养管理、母牛分娩、母牛体况、营养供给等多因素相关的常见疾病。
生产中一些奶牛接种口蹄疫疫苗后会出现瘫痪，丧失正常运动机能，危害健康[1]。
本文对接种口蹄疫疫苗后诱发奶牛瘫痪的病例进行分析，提出防控措施，以期为未来疫苗接种工作中降低该病的发生率作参考。
1 发病过程2022年江苏连云港某奶牛养殖场进行奶牛口蹄疫疫苗接种后，部分奶牛出现过敏反应，养殖场工作人员当即对病牛肌肉注射肾上腺素进行救治缓解。
第2 天，奶牛出现过敏反应，体温升高、采食量下降的症状，兽医人员使用生理盐水、抗生素等药物治疗后未见好转；病牛还出现走路摇晃、不爱运动、后肢无力等症状，又使用钙剂、葡萄糖酸钙溶液等药物进行治疗，但仍出现奶牛完全瘫痪情况。
作者简介：王少利（1975-），男，江苏连云港人，本科，中级兽医师，研究方向为兽医。
Disease Prevention2 现场调查2.1 养殖场基本情况该奶牛养殖场属家庭自建模式，规模较小，圈舍较简易，舍饲饲养，白天奶牛在运动场随意走动，傍晚将其圈入舍内，清晨、傍晚在放出圈舍前挤奶。
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Ｏｌ ｖ ｒ Ｐ． ｔ ａ ．Ｐｉ ｌｍ ｙ ｉ ｔ ｒ ｐ ｏｒ Ｓｔ ｅ ｔ ｏｃ ｕｓ ｉ ｅ ，Ｓ ，ｅ １ ｒｉ ｃ ｎ ｈｅ ａ ｙ ｆ ｒ ｐ ｏｃ ｃ
物 时 ，对５ ｍｇ ￣ 区 的治疗 ，弃奶期 为６ Ｏ ／Ｌ ０～７ ｈ ２ ；对
７ ｍｇ￣ 区 的治疗 ，弃奶 期 为７ ｈ ５ ／Ｌ ２。
参 考 文 献
［］ Ｇｌ ｓｉ Ｅ， ｏ ｒｈ ａ Ｌ ｎ ， ｔ １Ｅ ｆ ａｙｏ ｘｅ ｄｄ １ ｉｅ ｅＢ Ｍ ｏｅ ｅｄＨ， ｕ ｎＰ ｅ ． ｆｃｃ ｆ ｔｎ ｅ ｌｐ ａ ｉ ｅ
关键词 ：奶牛 ；口蹄 疫 ；抗体 ；隐性感染 ；隐性带 毒
收 稿 日期 ： ０ １ １ — ８ ２ １— ２ ２
通 讯作 者 ： 天齐 （ ９ ８ ，高级 兽 医 师。 王 １６ 一）
经 牛 奶 抗 生 素残 留 检 测 ， 本 研 究 建 议 使 用 国 产 药
Ｓｒｐｏ ｏ ｃ ｓｓｐ ａ ｄｓａ ｌ ｌｃ ｃｕ ｕｅ ｓｉｔａ ｍｍａｙ ｔｅ ｔｃ ｃｕ ｐ ｎ ｔｐ１ ｏ ０ ｃ ｓａ ｒｕ ｎｒｍａ ｙ ｒ
摘
要 ：为 了解贵 阳某公 司Ａ、Ｂ、Ｃ． 个规模奶 牛场牛群 口蹄 疫病毒 隐性感 染状 况 ，制定科 学有效 的免疫计 Ｅ －
划 ，在２ １年 １ 月 ～２ １ ＃ １ 月期 间 ，对上 述奶牛场 约１７ ０ ００ ０ ０ １－１ ０ 头奶 牛进 行 了３ 口蹄 疫。型 、亚洲Ｉ 价灭活 次 型二 疫苗的免 疫接 种试验 ，对其抗 体水平 、隐性感 染及 带毒状 况进 行 了跟踪监 测 。结果表 明 ，抗体有 效持 续时 间 为１ ０ ３ ｄ ２ ～１ ０ ，即现行使 用的 口蹄 疫灭 活疫苗免 疫保护期 大约 为４ 月；Ｃ场奶 牛血清 中未检 出 口蹄 疫病毒 的 个
ｐ ｒｉ ｙ ｉ ｙｄ ｏ ｈ ｏ ｉ ｅ ｔ ｅ ａ ｙ ｆ ｒ ｔｅ ｔ ｎ ｆｅ ｉｏ ｍ ｅ ｔ ｌ ｉｌ ｍ ｃｎ ｈ ｒ ｃ ｌ ｒｄ ｈ ｒ ｐ ｏ ｒ ａ ｍｅ ｔ ｏ ｎｖ ｒ ｎ ｎ ａ
ｕ ｅｉ ｉｔ ｍａ ｂ ｒ ｎｒ ｍｍａｙ ｉｆｃｉｎ ｎｌｃａｉｇｄｉ ａｔ ［ ． ｔ ｓ ａ ｒ ｎｅｔ ｓ ａｔｔ ａｒ ｃｔ ｅ ］ Ｖｅ ｏ ｉ ｎ ｙ ｌＪ
圜 Ｙ７ Ｄ２ 卞 Ｉ ＡＨ 、 圈０ 奶１ Ｈ Ｉ２ ＲＥ 斗‘ Ａ
奶牛群 口蹄疫 疫 苗接种与抗体检 测
王 承杰 ，王天齐 ，王黔 生 ，余启茂 ，胡 国兵 ，ｔｉ 瑜 ｌ ｌ Ｓ ，
（ 阳三联乳业有 限公 司，贵 阳 ５０ １ ） 贵 ５０ ８
中 图分 类 号 ：Ｓ ５ ．３ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ — ２ ２ （ ０ ０ － ０ ０ ０ ８ ８２ ４４６ ２ １ ０ ２） ７ ０ ３ — ４
隐性感 染抗体 ，ＯＰ 中未检 测 出口蹄 疫病毒核 酸 ，属 于 口蹄 疫 比较 洁净 的奶牛场 。Ａ、Ｂ场奶牛不 同程度 地 液
检 测 出 口蹄疫病毒 的 隐性感 染抗体 ，在部分 隐性 感染抗体 阳性奶 牛的ＯＰ 中检测 出 口蹄 疫病毒核 酸 ，属于 受 液
口蹄 疫威胁 的潜在 污染场 。上述数 据为后续 的 口蹄 疫防控 计划奠 定 了基 础。
Ｓ ｒｐ ｏ ｏ ｃ ｓａ ｄ Ｓ ａ ｈ ｌ ｃ ｃ ｕｓｗａ ｖ ｌａｅ Ｏ Ｓ Ｅｆ ｃ ｃ ｆ ｒｉ ｔｅ ｔ ｃ ｃ ｕ ｎ ｔｐ ｙ ｏ ｏ ｃ ｓｅ ａｕ ｔｄ ｉ Ｃ Ｗ ． ｆ ａ ｙ ｏ ｌ ｎ ｉ ｐｉ ｍｙｃｎ ｔ ｅ ａ ｙ ａ ａｎｓ ｕ ｃｉ ｉａ ａ ｔｔ ａ ｉ ｈ ｒ ｐ ｇ ｉ ｔｓ ｂ ｌ ｃ ｌ ｎ ｍ ｓｉ ｓｗ ｓ ｉ
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Ａｂｓｒ ｃ ：Ｔｈ ｆ ｃ ｃ ｆｄ ｍ ｅ ｔｃｅ ｔｎｄ ｄ ｐｒｉ ｙ ｉ ｈ ｒｐ ｅ ｉ ｅ ｏ ｅ ｔ ｅ ｔｏ ｒ ｍ ａ ｔａ ｔ ｅｅ ａ ｙ ｏ ｏ ｓｉ ｘｅ ｅ ｉｌ ｉ ｍ ｃｎ ｔｅ ａ ｙ ｒ ｇｍ ｎｓｆ ｒｔ ａｍ ｎ ｆｉ ａ ｍｍ ａｙ ｉｆ ｃｉｎ ｙ ｒ ｎｔ ｒ ｒ ｅ ｔ ｓｂ ｉ ｏ