质粒DNA 小提中量试剂盒
质粒小量提取试剂盒能提取多大的质粒
大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA 提取出来。
区别：
1.大提用于大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2.一般试剂盒中大提比小提多了溶菌酶、异丙醇（回收沉淀核酸）、含一定量PEG的氯化物（回收质粒DNA）及乙酸铵等，其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化，所以大提的产物比小提的量多很多，而且纯度很高。
3.小提一般用于质粒鉴定和对纯度要求不是很高的实验，大提用于质粒的大量提取和转染等纯度要求很高的实验。
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒 Mini Plasmid Kit(目录号：HS0101)产品包装（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。
通过漂洗液PW 的清洗可去除杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA 。
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug 的高纯度质粒DNA ，在30 min 之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR 、测序等各种常规分子生物学操作。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液不需要另加乙醇，即开即用。
3. 高质：OD260/280在1.7 ~ 1.9之间。
4. 稳定：正确保存条件下一年内提取效果不发生变化。
操作步骤1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
（注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。
TaKaRa 质粒DNA小量纯化试剂盒说明书
● 使用例
使用本试剂盒纯化1.5 ml 的 TB 培养基的菌液（菌体 JM109），得到约16 μg 的质粒 DNA（OD260/OD280 ≥1.8），此质粒为 pUC119，用 Hind Ⅲ酶切1 小时（电泳结果见图2）。
会影响吸光度值的测定，此时建议使用琼脂糖凝胶电泳法进行定量。 ② 质粒 DNA 纯度不好。请严格遵守实验操作要求，使用新鲜菌体培养液提取质粒。 ③ 进行 DNA 洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。 ④ DNA 插入片段本身立体结构复杂。有些 DNA 立体结构复杂（如 GC rich、重复序列等）时难以测
序，应改进测序方法。 Q6. 质粒 DNA 的最小洗脱体积是多少？ A6. 我们建议的洗脱体积为 30-100 μl，此种洗脱体积下收率最佳（但要注意洗脱液需直接加至膜中心），
● 制品说明
本试剂盒是用于质粒（Plasmid）DNA 小量纯化的试剂盒。试剂盒采用了传统的 SDS 碱裂解法，结合硅 胶膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需 1 小时便可完成。使用本试剂盒可从 1～4 ml LB 培养基过夜培养的菌液中纯化得到 1～20 μg 的高纯度质粒 DNA（OD260/OD280 = 1.8～2.0），制备过 程无需苯酚抽提、乙醇沉淀等步骤，所得质粒 DNA 溶解于 Tris Buffer 或水中，纯度较高，可直接用于 转化、DNA 序列分析、体外转录、限制酶切以及其他各种酶促反应。
2. 加入 Solution Ⅱ和 Solution Ⅲ后，不要剧烈混合（Vortex 等），剧烈混合会导致基因组 DNA 的污染。 3. 加入 Solution Ⅲ后，应充分混合使蛋白质、基因组 DNA 等形成白色沉淀，离心后沉降于离心管底部。
硅胶膜型质粒DNA小量提取试剂盒
硅胶膜型™质粒DNA小量提取试剂盒操作方法1.将3~5ml菌液13,000rpm离心30秒收集沉淀（菌体）。
如果用1.5ml或2ml离心管则需反复离心2~3次。
2.倒掉上清，将沉淀（菌体）完全悬浮于100µl悬浮液（溶液I）中。
上清要尽可能去除干净，可用滤纸吸干。
沉淀要用混旋器完全悬浮，否则将直接导致下一步的裂解不彻底，进而影响质粒DNA的产量和纯度。
3.加入150µl裂解液（溶液II），轻柔地颠倒混匀10次左右，溶液逐渐变得粘稠、清亮。
不可用混旋器剧烈振荡，否则会使质粒DNA断裂；裂解时间不宜超过5分钟，否则会造成染色体DNA的污染。
4. 加入150µl中和液（溶液III），轻柔地颠倒混匀10次左右。
此时可见到白色絮状的染色体DNA及细菌碎片。
5.13,000rpm离心8~10分钟，将上清液小心转移入一个新的1.5ml离心管中，加入等体积（约400µl）的结合液，颠倒混匀。
6.将混和液吸入离心纯化柱中，静置至少3分钟，13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。
此步使处于高盐状态下的质粒DNA与硅胶膜结合后，离心去除杂质。
7.将离心纯化柱重新套入废液收集管中，加入600µl 80%异丙醇（或80%乙醇），13,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
如果离心纯化柱底部残留有异丙醇（或乙醇），可用滤纸吸干，否则将影响以后的酶促反应。
此步是洗涤质粒DNA中混有的杂质及盐类。
8.重复第7步一次，尽可能将杂质及残留的乙醇去除。
9.取出离心纯化柱，将其套入一个干净的1.5ml离心管，开盖放置2~3分钟，使乙醇充分挥发干净。
加入50µl TE缓冲液（若用于测序，则加50µl超纯水）于硅胶膜上，不能粘在管壁上。
室温下放置5分钟后，13,000rpm离心1分钟。
离心柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系，可开盖离心。
TE缓冲液或无菌超纯水的用量视用户对浓度的要求而定。
质粒DNA小量提取试剂盒说明书
质粒DNA 小量提取试剂盒一、产品简介采用SDS碱裂解法，结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法，适合1-4ml细菌培养物中提取多至20 μg质粒DNA。
纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。
二、试剂盒组成和储存组成内容DK301-01 (50次) DK301-02 (200次)RNase A1＊30 μl 120 μlBuffer BL 15 ml 60 mlBuffer P1 15 ml 60 mlBuffer P2 15 ml 60 mlBuffer P3 20 ml 90 mlBuffer WA§19 ml 75 mlBuffer WB§16 ml 65 mlDNA吸附柱-B 50套200套1.5 ml离心管50个200个TE※15 ml 30 ml说明书1份1份＊RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存；第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中，于4℃保存。
§Buffer WA和Buffer WB，使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。
※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。
除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外，其他组成成分于室温储存。
三、注意事项1.Buffer P3和Buffer WA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛，立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。
2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。
3. 操作步骤A2和B2，充分悬浮细菌，无可见的块状菌团，不然会影响裂解效果。
4. 操作步骤A3和B3，缓慢翻转离心管，以免机械力打断基因组DNA而导致最后纯化的质粒DNA中有基因组DNA污染，同时避免打断质粒DNA，保持其完整性。
AxyPrep 质粒DNA 小量试剂盒
AxyPrep质粒DNA小量试剂盒本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。
适合于从1-4 ml细菌培养物中提取多至20 μg高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性说明书，耗材：DNA制备管，2 ml 离心管，1.5 ml 离心管。
RNase A：50 mg/ml，室温保存。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加入RNase A后，4°C贮存。
Buffer S2：细菌裂解液，室温密闭贮存。
(若出现沉淀，应于37°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。
）Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。
可用100%乙醇或95%乙醇。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
二、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三、实验准备1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1 中，4°C贮存。
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
四、操作步骤第一次使用时，将试剂盒携带的RNase A全部加入到Buffer S1 中，混合均匀，4°C保存。
1. 取1-4 ml 在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12,000×g离心1 min，弃尽上清。
质粒小提步骤
质粒小提（AxyPrep质粒DNA小量试剂盒）本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。
适合从1-4ml细菌培养物中提取多至20ug高纯度的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性Rnase A:50mg/ml,室温可贮存6个月，长期贮存于-20℃。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加入Rnase A后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。
混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗涤液，室温密闭贮存。
二、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三、实验准备1、第一次使用前，Rnase A全部加入Buffer S1中，4℃贮存。
2、准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3、第一次使用前，Buffer W2 concentrate 中加入指定体积的无水乙醇。
4、使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。
四、操作步骤1、取1-4ml在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12000*g离心1min，弃尽上清。
2、加250ul Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
*确认Buffer S1中已加入Rnase A3、加250ul Buffer S2，温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。
高纯度质粒小提中量试剂盒说明书天根
1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL,12000rpm（~13400g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2.取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm(~13400g）离心1min，尽量吸除上清。
注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500μL溶液Pl（请先检查是否已加入RNaseA)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
质粒4.向离心管中加入500μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。
此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。
如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5.向离心管中加入700μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm(~13400g）离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs（过滤柱放入收集管中）,12000rpm（~13400g）离心2min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）,（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。
7.12000rpm(~13400g）离心lmin，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
8.向吸附柱CP4中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm（~13400g）离心lmin，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒I 简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备 II. 注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A 瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A 置于4o C 保存。
质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C 甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL (PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer 。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C 左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C ）进行所有离心操作。
III. 操作步骤1. 接种新鲜的单个菌落到1-5 mL 的LB 培养基（含适量抗生素），37o C 震荡培养14-16小时。
室温下10,000 x g 离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani ）培养基培养12-16 小时后，OD 600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。
若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD 600不超过3.0。
2. 加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A ），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
无内毒素质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EndoFree Plasmid Midi Kit无内毒素质粒小提中量快速提取试剂盒目录号：PL10试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(PL1001)平衡液室温5mlRNaseA（10mg/ml）-20℃250µl溶液P1 4℃25 ml溶液P2 室温25 ml溶液N3 室温25 ml内毒素清除剂-20℃10 ml漂洗液WB 室温15 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15ml吸附柱AC 室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂常温运输，4度可以保存一个月，长期保存放-20℃。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（<0.1 EU/μg DNA），细胞转染效果极佳。
也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。
Axygenmini-prepare质粒提取试剂盒说明书
Axygenmini-prepare质粒提取试剂盒说明书AxyPrep质粒DNA⼩量试剂盒本试剂盒采⽤改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的⽅法达到快速纯化质粒DNA的⽬的。
适合于从1-4 ml细菌培养物中提取多⾄20 µg⾼纯的质粒DNA，⽤于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分⼦⽣物学实验。
⼀、试剂盒组成、贮存、稳定性Cat. No. AP-MN-P-4 AP-MN-P-50 AP-MN-P-250制备次数 4 preps 50 preps 250 preps250 制备管 4 502502 ml离⼼管 4 502501.5 ml离⼼管 4 50RNase A 10µl30µl150µlBuffer S1 2 ml 15 ml 75 mlBuffer S2 2 ml 15 ml 75 mlBuffer S3 2.5 ml 21 ml 105 mlBuffer W1 2.8 ml 28 ml 135 mlBuffer W2 concentrate 2.4 ml 24 ml 2×72 mlEluent 1 ml 5 ml 25 ml说明书 1 1 1 RNase A：50 mg/ml，室温可贮存6个⽉，长期贮存于-20°C。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加⼊RNase A后，混合均匀，4°C贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使⽤前，按试剂瓶上指定的体积加⼊⽆⽔⼄醇（可⽤100%⼄醇或95%⼄醇）。
混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
⼆、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶⼿套和眼镜，避免沾染⽪肤、眼睛和⾐服，谨防吸⼊⼝⿐。
试剂盒使用说明
*质粒小量提取试剂盒产品说明：■本产品采用经典的硅胶膜及碱裂法技术，硅胶膜柱可以在高盐、低pH值情况下高效可逆的结合DNA, 而蛋白及其它杂质不被结合而被除去,被结合的核酸在低盐、高pH值情况下可被洗脱出来.该试剂盒具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需半个小时便可完成。
使用本试剂盒可从1～5 ml的过夜培养的菌液中纯化得到1～40μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8～2.0)，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。
试剂盒组成：产品编号GS001-1 GS001-2 GS001-3试剂盒组成纯化次数50次100次200次RNaseA（10mg/ml）150μl 300μl 600μl溶液Ⅰ15ml 30ml 60ml溶液Ⅱ15ml 30ml 60ml溶液Ⅲ20ml 40ml 80ml溶液PB 30ml 50ml 100ml溶液W 30ml 2×30ml3×40ml溶液Eluent 5ml 10ml 20mlDNA纯化柱50个100个200个溶液W初次使用前用无水乙醇按1：1.5稀释，即含60%乙醇。
用途：提取用于酶切、转化、测序、PCR等试验用质粒。
保存：初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入到溶液Ⅰ中，均匀混合后4℃保存。
溶液Ⅱ：室温保存，若出现沉淀，请于37℃保温溶解，待恢复至室温后使用。
其他试剂：室温保存。
操作步骤：1.用1.5 ml离心管收集1.5-5ml菌液，12000rpm离心60秒，弃上清。
(应根据所培养的菌液的浓度确定收集的菌液量)2. 加入250µl溶液Ⅰ/RNase A混合液，漩涡振荡使菌液完全重新悬浮。
(菌液重新悬浮对于获得高产量是非常重要的,为使RNA被RNase A充分降解,让悬浮菌液静置1-2分钟3. 250µl溶液Ⅱ，温和反复颠倒混匀4-10次,室温放置1-2分钟,以获得澄清的裂解液。
质粒小提步骤
质粒小提（AxyPrep质粒DNA小量试剂盒）本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。
适合从1-4ml细菌培养物中提取多至20ug高纯度的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性Rnase A:50mg/ml,室温可贮存6个月，长期贮存于-20℃。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加入Rnase A后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。
混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗涤液，室温密闭贮存。
二、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三、实验准备1、第一次使用前，Rnase A全部加入Buffer S1中，4℃贮存。
2、准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3、第一次使用前，Buffer W2 concentrate 中加入指定体积的无水乙醇。
4、使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。
四、操作步骤1、取1-4ml在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12000*g离心1min，弃尽上清。
2、加250ul Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
*确认Buffer S1中已加入Rnase A3、加250ul Buffer S2，温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。
质粒提取试剂盒说明书
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2．加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备：可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程：(提取过程在室温下进行)：1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min，去上清3. 加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
（用移液枪吹打进行重悬浮）4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min，紧凑的白色沉淀就会形成，迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min，弃过滤液。
质粒 DNA 提取及纯化试剂盒 说明书
质粒DNA提取及纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展，它有效结合了细胞裂解，杂质去除，及质粒纯化等功能。
无需过柱，不用酚氯仿抽提，确保所提质粒DNA高产量、高质量。
并且可按用户需求灵活制定容量大小。
产品特色●简单:添加GBpure Plasmid试剂使细胞裂解，释放DNA，及杂质去除有效结合起来。
●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行：Miniprep, Midiprep或Maxiprep;无需购买额外的试剂盒。
●方便:无需过柱，无需过滤，无需高效液相色谱法，无需超速离心机，无需特殊设备。
●无毒性:无酚、氯仿，无饱和正丁醇，无溴化乙锭，无氯化铯。
●快速:一分钟完成菌体沉淀，五分钟完成颗粒细菌碎片，10分钟完成沉淀质粒DNA，整个过程只需30分钟。
●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂，可应用于所有分子生物学的操作。
●高产量: 从1 ml (mini), 10 ml (midi), 100 ml (maxi) 的过夜培养基中获得大约5 μg,50 μg, 500 μg的DNA质粒。
●质优价廉订购信息与储存条件室温保存。
有效期12个月。
使用限制：本产品属科研专用。
不用于人类或动物的诊断、治疗。
GBpure Plasmid MiniPrep Protocol从1-2 ml过夜细菌培养中提取5-10 μg质粒DNA操作方法1.取1- 2 ml过夜培养菌液，装入2 ml离心管中，室温最大速度（14,000 × g）离心1 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2.加入300 μl Buffer P1 重悬液，充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3.加入300 μl Buffer P2 裂解液，轻轻颠倒离心管3-5次，室温放置1 min，使细菌完全裂解，此时溶液应呈透明。
小量、中量、大量提取质粒DNA
大量提取质粒 DNA
1. 准备以下材料： 2 L 锥型瓶（灭菌处理） ，15 ml 及 50 ml 离心管（无菌包装） ，12＃针头、1 ml 及 5 ml 注射器（无菌包装） 。超纯水清洗 800 ml 离心瓶及 50 ml 离心管（高 速离心机配套管） ， 烘干。 溶液配制： 25％sucrose in 50 mM Tris-HCl （pH 8.0） ， lysozyme(10 mg/ml), 0.5M EDTA（pH7.6）, RNase A(10 mg/ml), Triton-lysis, 30% PEG8000, 1× TE（pH8.0）, EB(10 mg/ml), 水饱和正丁醇。 2. 从培养好的平板上挑取单克隆菌落接种到盛有 800 ml LB 培养液的烧瓶中， 置于 37 ℃摇床 （180 rpm） 培养 18 h。 将菌液倒入 800 ml 离心瓶中， 4200 rpm （Beckman J6-MI 离心机）离心 13 min。 3. 4. 5. 6. 弃上清，以 12 ml 25％ sucrose （in 50 mM Tris-HCl，pH8.0）重悬。 加入 3 ml 新配制的 lysozyme(10 mg/ml)，混匀，室温静置 10 min。 加入 2 ml 0.5 M EDTA（pH7.6） ，混匀。 加入 100 μ l RNase A(10 mg/ml)，混匀。
加超纯水调 pH 至 7.5，定容至 500 ml，湿热灭菌，加 500 ml 无水乙醇。 10. 25％ 蔗糖: 蔗糖 1 M Tris-HCl(pH 8.0) 25 g 5 ml
加超纯水定容至 100 ml，置于 4 ℃保存。 11. 0.5 M EDTA: EDTANa2H2O NaOH 186.1 g 约 20 g
Plasmid Mini Kit 质粒小提试剂盒 说明书
Version 02152011 Plasmid Mini Kit质粒小提试剂盒Cat. No. CW0511保存： 室温组分说明Cat. No. CW0511C CW0511AKit Size 100 200Buffer P1 30 ml 60 mlBuffer P2 30 ml 60 mlBuffer N3 40 ml 80 mlBuffer PS 30 ml 60 mlBuffer PW（concentrate） 25 ml 50 mlBuffer EB 10 ml 30 mlRNase A（10 mg/ml） 300 μl 600 μlSpin Column CM 100 200Collection Tube（2 ml） 100 200产品简介本试剂盒提供一种简单快捷提取质粒的方法，快速获得大量的质粒DNA。
采用碱裂解法裂解细胞，新型硅基质膜高效专一性结合质粒DNA，独特的缓冲液系统洗去杂质，无需酚抽提和乙醇沉淀。
本试剂盒在保证提取量和纯度的前提下，大大简化提取步骤，可从1-5 ml菌液中纯化多达30 μg的高拷贝质粒DNA。
得到的DNA可直接用于PCR、酶切、测序、转化等生物学实验。
注意事项1.Buffer P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2–8℃保存。
2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
3.使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
4.注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。
5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
6.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心。
自备：无水乙醇，离心管操作步骤1.取1-5 ml过夜培养的菌液，加入离心管（自备）中，12,000 rpm（~13,400×g）离心1分钟，尽量吸弃上清。
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书质粒是能够自主复制的小型环状DNA分子，多存在于细菌及酵母菌等生物中，是基因工程中最常用的运载体，担负着将目的基因转移到宿主细胞中的重要使命。
基因表达载体的构建（也就是目的基因与运载体结合）是基因工程的核心步骤，用作运载体的质粒更是掌上明珠。
我们需要从细菌中分离出质粒以备后用。
如果分离不好的嘛......提取出的目的基因就只能眼巴巴地望着彼岸的受体细胞吹凉风。
知道厉害了吧如何提取质粒呢？视频献上，头脑风暴一下热身之后，看一看质粒提取的具体操作。
分离质粒的方法有很多，但都离不开三个主要步骤。
摇菌培养即培养细菌使质粒扩增1.将鉴定测序正确的克隆菌液涂在LB固体平板（一种培养基，使质粒扩增）。
2.置于37℃恒温培养箱，培养12-17h，待长出菌落。
3.灭菌15ml离心管内加入5ml含抗生素的LB液体培养基，编号标记。
4. 挑取单克隆菌团放置液体培养基，每个培养基放置1个菌落。
5. 37℃，180rpm，振荡培养过夜。
现在，一团团质粒丰富细菌准备就绪任人宰割啦。
分割线收获细菌并裂解21.离心扩增好的菌液，按说明书将菌液重悬，转入1.5ml离心管中。
2.用质粒小量抽提试剂盒，按说明书要求提取质粒。
3.细菌高速离心1min,彻底去除上清。
4.加入250ulRB溶液，振荡器充分悬浮细菌。
5.加入250ulLB溶液。
立即上下颠倒10次，使细菌裂解，室温，放置2min。
6.加入250ulNB溶液。
立即上下颠倒10次，使之充分中和，室温，放置2min。
7.室温，1500rpm，高速离心15min。
8、将吸附柱放入收集管内，离心得到的上清转移至吸附柱，室温，15000rpm，高速离心30s。
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质粒DNA 小提中量试剂盒
一、产品简介
采用SDS碱裂解法，结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法，适合4-16 ml细菌培养物中提取多至80 μg质粒DNA。
纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。
二、试剂盒组成和储存
组成内容DK302-01 (50次)
RNase A1＊120 μl
Buffer BL 30 ml
Buffer P1 30 ml
Buffer P2 30 ml
Buffer P3 40 ml
Buffer WA§19 ml
Buffer WB§16 ml
DNA吸附柱-MD 50套
1.5 ml离心管50个
TE※15 ml
说明书1份
＊RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存；第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中，于4℃保存。
§Buffer WA和Buffer WB，使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。
※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。
除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外，其他组成成分于室温储存。
三、注意事项
1.Buffer P3和Buffer WA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛，
立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。
2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。
3. 操作步骤2，充分悬浮细菌，无可见的块状菌团，不然会影响裂解效果。
4. 操作步骤3，缓慢翻转离心管，以免机械力打断基因组DNA而导致最后纯化的质粒DNA中有基因组DNA污
染，同时避免打断质粒DNA，保持其完整性。
5. 操作步骤3，溶液呈透亮后，需立即加入Buffer P3，避免质粒DNA长时间暴露于Buffer P2（含NaOH，强
碱性环境）中完全变性为单链DNA后无法复性恢复为超螺旋状态。
6. 操作步骤4，形成紧实的大团状凝集物前需缓慢摇晃离心管，避免机械力打断基因组DNA和质粒DNA；之后
快速剧烈摇晃3次将凝集物打散，有助于充分释放质粒DNA，从而提高产量。
7. 操作步骤10，室温放置1-2 min，有助于提高DNA洗脱效率，从而提高产量。
四、操作步骤
平衡DNA吸附柱(此步骤可提高硅胶介质吸附DNA效率，可在使用本试剂盒当天任何时间操作) 在DNA吸附柱-MD（置于2 ml离心管中）中加500 μl Buffer BL，室温12,000×g离心1 min，弃废液，将DNA吸附柱-MD放回2 ml离心管中。
细菌收集、裂解和中和
实验准备：第一次使用前，将试剂盒携带的RNase A1全部加入Buffer P1中。
检查Buffer P2是否析出白色沉淀，如有沉淀在37℃放置数分钟，沉淀溶解后恢复至室温使用。
1. 用干净的2 ml离心管，室温12,000×g离心1 min，收集4-16 ml细菌(可以离心后弃上清，加入菌液再离心；
如此重复，直至收集所有菌液)；弃尽上清。
2. 加入500 μl Buffer P1（含RNase A1），Vortex震荡或者用Tips充分悬浮细菌。
3. 加入500 μl Buffer P2，缓慢翻转离心管混合均匀，直至溶液呈浅黄色透亮状。
4. 立即加入700 μl Buffer P3，缓慢翻转离心管混合均匀，形成紧实的大团状凝集物后（约摇晃15次），快速剧
烈摇晃3次使凝集物呈松散状；室温12,000×g离心5 min。
▲如果离心上清为浑浊状或者有细小的悬浮颗粒，将离心管放入冰水浴中静置5min，12,000×g离心5 min。
DNA结合
5. 吸取≤650 μl步骤4中的离心上清，转入DNA吸附柱-MD中；室温12,000×g离心1 min，弃废液，将DNA
吸附柱-MD放回2 ml离心管中。
6. 重复步骤5，直至处理完步骤4中的离心上清。
洗涤
实验准备：第一次使用前，按试剂瓶所示体积在Buffer WA和Buffer WB中加入无水乙醇或者95%乙醇。
7. 在DNA吸附柱-MD中加入500 μl Buffer WA，室温12,000×g离心1 min，弃废液，将DNA吸附柱-MD放
回2 ml离心管中。
8. 在DNA吸附柱-MD中加入500 μl Buffer WB，室温12,000×g离心1 min，弃废液，将DNA吸附柱-MD放
回2 ml离心管中。
重复此步骤。
9. 室温12,000×g离心2 min。
洗脱
实验准备（可选）：65℃预热TE或者去离子水。
10. 将DNA吸附柱-MD转入试剂盒携带的1.5 ml离心管中，向DNA吸附膜的中央加100-300 μl TE或者去离子
水，室温放置1-2min，室温12,000×g离心1 min。
▲65℃预热TE或者去离子水，可以提高洗脱效率。
▲离心结束后将1.5 ml
离心管中的洗脱液加到吸附膜的中央，重复此步骤，可以提高洗脱效率。