微生物检测法测定多抗菌素发酵液生物效价
抗生素微生物检定方法学验证中的常见问题分析
发布日20070423期栏目化药药物评价>>化药质量控制标题抗生素微生物检定方法学验证中的常见问题分析作者审评三部部门正文容审评三部审评五室英摘要：本文对抗生素微生物检定法中的管碟法在方法学验证中的常见问题如线性与围中溶液浓度与直径的关系、精密度的测定方法等进行了分析，归纳其错误的问题，给出了正确的操作方法。
关键词：抗生素微生物检定法多组分抗生素方法学验证抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素测定方法。
自20世纪40年代建立至今，在各国药典中被普遍采用。
虽然伴随着HPLC等化学分析技术的发展，一些抗生素品种的效价已被化学分析法所取代，但由于①微生物检定法可直观、特异地反映出抗生素品种的抗菌活性；②多组分抗生素由于结构与不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、含量和生物活性间的关系；③许多抗生素品种由于各种原因如无特征紫外吸收等，目前没有适当的化学分析方法表征其活性，故抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要的地位，且短期化学分析法不可能完全取代微生物检定法。
中国药典2005年版仍采用抗生素微生物检定法中的管碟法测定其效价，目前申报已有国家标准的该类制剂较多，在质量研究中存在诸多问题，现就常见的问题加以分析，希望对注册申请人有所帮助。
一、方法的建立1、供试品与标准品的同质性抗生素微生物检定法的原理以供试品与标准品同质为前提，方法建立前，首先应确定供试品与标准品是否同质，包括化学结构、所含组分及组分比例的一致性，对于制剂还要考虑辅料的影响是否造成供试品与标准品不同质。
2、培养基、试验菌、缓冲液和培养条件的选择可参照中国药典建立，在此不再赘述。
3、检定方法的确定可采用一剂量法（标准曲线法）、二剂量法及三剂量法等。
一般确定线性与围采用一剂量法（标准曲线法），常规含量测定采用二剂量法，标准品标定采用三剂量法。
4、抗生素溶液的稳定性选定的品种可参照中国药典现行版附录抗生素微生物检定法的品种，若溶剂和缓冲液与其不同，应考察抗生素储备溶液和测定溶液在室温、40℃和不同pH值缓冲液中，以及放置不同时间的稳定性，以确定抗生素储备溶液和测定溶液的存放时间和条件。
微生物学实验七 链霉素发酵及管碟法测定生物效价微生物发酵
实验七 链霉素发酵及管碟法测定生物效价微生物发酵（一）目的要求了解抗生素发酵的基本过程。
了解管碟法测定抗生素生物效价的基本原理。
学会管碟法测定抗生素效价方法，并学习抗生素发酵过程一些重要生理生化指标分析。
（二）基本原理链霉素是由灰色链霉菌(放线菌的一种)产生的一种氨基糖苷类抗生素，它既含有氨基糖苷，也含有氨基环醇的结构，属抗革兰氏阴性菌的抗生素。
抗生素液体发酵共分三大工序：菌种、发酵、提炼。
配合三个工序还有分析化验和有关产物测定。
菌种种子质量指标：无杂菌，全部形成孢子，摇瓶发酵效价达35000U/ml 以上(30℃，48 h 培养)，方可用于生产。
发酵抗生素发酵过程除需经常镜检排除杂菌污染外，接种12h 后，每2h 进行一次pH 、生物量、总糖、还原糖、氨基氮及抗生素效价测定。
一级种子质量指标：无杂菌，全部放线菌，菌丝粗壮整齐，无断裂；pH7.0~7.2。
二级发酵质量指标：菌丝粗壮整齐，无断裂，菌丝成网状；pH7.2；链霉素效价10000～35000U/ml 。
提炼砂子孢子 (4℃±1℃冰箱保存) 第一代孢子(28℃高氏1号培养基，培养5d) 第二代孢子 (28℃高氏1号培养基，培养5d) 种子罐发酵(一级，种子培养基) 30℃±2℃培养12~16h 发酵罐发酵(二级，发酵培养基) 28~30℃，培养48h 放罐 中和、氧化、过滤 发酵液 草酸酸化 板框压滤 滤液 加NaOH 中和 板框压滤 中和滤液 上离子交换柱 板框压滤 饱和树脂 1 mol/L H 2SO 4 解 吸 解吸液 中和氧化滤液 加氨水沉淀 离心甩干，洗去氨 链霉素游离碱 (白色沉淀) 加6 mol/L H 2SO 4调pH 6.0~6.5，溶解 加NaOH 及KMnO 4 链霉素硫酸盐喷雾干燥 白色粉末(成品)衡量抗生素发酵液中抗菌物质的含量称效价。
抗生素效价测定可采用化学法或生物效价测定法。
生物效价测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。
实验三 微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价
实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价一、概述由于抗生素多为结构复杂的多组分物质，异构体多，且不稳定，容易产生降解杂质，故各国药典均以微生物检定法为主要含量测定法，因为抗生素药品的医疗作用主要是它的抗菌活力，而微生物检定法正是以抗生素的抗菌活力为指标来衡量抗生素效价的一种方法，其测定原理与临床要求相一致，能直接反映抗生素医疗价值，因此一直为各国药典所采用的主要测定方法。
微生物检定法测定抗生素效价，一般可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法三类。
以琼脂扩散法应用最广泛，为目前国际上测定抗生素效价的通用方法。
琼脂扩散法，亦称管碟法。
系采用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
二、基本设备、用具和试验材料1. 基本设备(1) 抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。
该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。
(2) 超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。
(3) 抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。
2.用具（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16-17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。
新购的双碟应按上述要求进行检查。
检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140-160℃干热灭菌2小时后备用。
(2) 陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。
(3) 不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。
(4) 小钢管放置器：四孔，一台。
抗生素微生物效价测定法中一剂量法及二剂量法计算公式的推导_百.
所得计算公式。
一二 , 音。
』一 , 。
斜率一 , 抑菌圈直径之差、一斜率一吕抑菌圈直径之差。
‘ “ , 百示叶・ ,。
不亩翁 , 一 , 行渝一留斜率抑菌圈直径平方之差 , 兀公式 , 主要是斜率部分不同 , , 斜率 , 恰是斜测定法中一剂量法和二剂量法的计算公式率的倒数体现于座标图上由于将抗生素轴上所得的标准曲线与习轴上所得的曲线 , , 并与以往的一些推导相比较绍了斜率导最小二平方法。
, 加以讨论 , 介浓度的对数置于 , 的计算公式及其简化公式的推惯上使抗生素浓度置于用直线方程十其斜率必然不同前者的值将是后者的倒数。
本文承卫生部药品生物制品所郑昌亮同志审阅特此 , 来推导所得的一 , 感谢。
剂量法计算公式与上海药检所用回归直线方程一。
推导所得完全相同但推张绪敏参考资料抗菌素微生物效价测定法 , , 导过程明显简化二剂量法的推导方式与以往用氏扩散动力学方程来推导的相同由于二 , 人民卫生剂量法可以消去斜率与截距的影响得的计算公式与以往的完全相同。
, 因而所按本文的推导方式推导过程 , 可将一剂量法和二剂量法的推导 , 统一于同一直线方程下来进行。
简化了整个抗菌素效价的生物检定抗菌素讲演集人民卫生出版社上海化工学院等抗菌素的生物效价测定法抗菌素生产工艺学上海市药品检验所药理组抗菌素微生物检定标准曲线法计算方法的参考资料江苏省药品检验所抗菌素检验与药品生物检 , , 出版社郑昌亮 , , , , , 小结定法杨纪坷数理统计方法在医学科学中的应用上海科技出版社 , , , 本文用一元线性回归法推导抗生素效价废水处理技术在抗生素工业中的应用顾其详邵沈霖垦上海医药设计院林上海制药三厂 , 本文概述抗生素工业废水的特性废水生化处理的基本原理的进展 , 、介绍抗生素研究参考。
、生产及环境保护工作的同志们操作条件和装置以及简要回顾国 , 同时 , 列举国外抗生素废水处理设 , 施的部分实例或试验结果一、抗生素工业废水的内容和特性、外抗生素废水净化技术的研究情况供从事抗生素生产由发酵和提取精制等过程。
抗生素类药物的分析详细解释各类抗生素特点
方法：管碟法和浊度法
优点 1、与临床效果一致 2、灵敏度高 3、干扰物质少
缺点 1、操作繁琐 2、培养时间长 3、测定误差大
.
6
3.化学及物理化学方法
优点：1. 准确度高 2. 简单、快速
缺点 1.易受杂质干扰 2.不一定代表生物效价
只有当用物理化学法测定的结果与用
生物学法测定的效价相一致时，才能
巴龙胺
巴龙二糖胺
R1、R2：-CH2NH. 2
62
庆大霉素
绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺
糖
苷元
糖
.
63
R2 R1HN C R3
O O
OH NHCH3
OH
OH O
O
CH3
2 NH2
绛红糖胺 NH2 H2N
紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
复合物 碱性
水溶性 旋光性.
性质稳定 无紫外吸64收
二、鉴别 （一）茚三酮反应
• 取本品10mg，加水2ml与盐酸羟胺 溶液3ml ，振摇溶解后，放置5分钟， 加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显 红棕色。
.
31
2. 茚三酮反应
CH2 COHN
NH2
O
S CH3
N
CH3
COOH
氨基 茚 三 酮 蓝紫色 △
.
32
CO C= O
CO
茚三酮
R H2N CH COOH
CO
C NCH2 R
新霉素 巴龙霉素
乙酰丙酮 OH-
吡咯衍生物
对二甲氨基苯甲醛 H+
樱桃红色
.
71
HO
H2N C NH NH
制药设备基础期末作业《红霉素及其生产工艺》
放。
可持续发展战略在红霉素生产中的应用
绿色生产工艺
采用先进的生产工艺和设备，提高原料利用率和产品质量， 减少生产过程中的能源消耗和废弃物排放，实现绿色生产。
资源循环利用
对红霉素生产过程中产生的废弃物进行回收利用，如废菌 丝体可用于生产有机肥料或饲料，废滤料可用于生产建筑 材料等，实现资源的循环利用。
05 红霉素生产的环保与可持 续发展
环保法规与标准
环保法规
国家出台了一系列环保法规，如《环境保护法》、《大气污染防治法》等，对制 药企业的生产活动进行严格监管，确保企业遵守环保法规，降低对环境的污染。
环保标准
针对制药行业，国家制定了相应的环保标准，如《制药工业水污染物排放标准》 、《制药工业大气污染物排放标准》等，规范制药企业的污染物排放，保障环境 质量。
检测方法
红霉素的检测方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、微生物效价测定法和分 光光度法等。这些方法能够准确、快速地测定红霉素的含量和杂质，保证产品 质量。
生产过程中的质量控制
原料控制
对原料进行严格的质量控制，包括来 源、纯度、微生物污染等方面的检测， 确保原料符合生产要求。
工艺控制
对生产工艺进行严格控制，包括反应 条件、反应时间、溶剂选择等，确保 生产过程的稳定性和可重复性。
培养基配制
发酵条件控制
根据菌种需求，配制适宜 的培养基，提供菌体生长 和红霉素合成的营养。
控制温度、pH值、溶氧 等发酵参数，优化红霉
素产量。
发酵过程监控
实时监测发酵液中的红霉素 含量、菌体生长情况等，确
抗生素生物效价测定详细参考
---一参照秘斗一一页眉页脚可删除一一实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2.掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于乂集（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）（式 2.10-1）V=（UH+UL）-（SH+SL）（式2.10-2）式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出① 0=D-antilog（IV/W）（式 2.10-3）式中：。
微生物管蝶法测定硫酸新霉素效价试验方案(2)
微生物管蝶法测定硫酸新霉素效价试验方案一、实验目的对硫酸新霉素效价含量进行抗生素微生物管蝶法测定。
二、实验材料实验材料：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003或CVCC1882]、新霉素标准品(130309-200811，效价645 U /mg)，由中国药品生物制品检定所提供、双碟、钢管、毛细滴管、吸管、容量瓶、定量吸管。
仪器：培养箱、pH计、十万分之一天平、高压灭菌锅、游标卡尺。
试剂：磷酸氢二钾、磷酸二氢钾，抗生素检定培养基II号、氯化钠。
样品：4批原料和4批可溶性粉三、实验内容3.1金黄色葡萄球菌菌悬液的制备取金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37℃培养20~22h。
临用时，用0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，制成金黄色葡萄球菌菌悬液，备用。
3.2 II号培养基的制备胨6g 牛肉浸出粉 1.5g酵母浸出粉6g 葡萄糖1g琼脂15~20g 水1000ml除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高0.2~0.4；加入琼脂，加热融化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.8~8.0，在115℃灭菌30分钟。
3.3 pH 7.8磷酸盐缓冲液的制备取磷酸氢二钾(K2HP04·3H20)5.59 g，磷酸二氢钾(KH2P04)0.41g，3%氯化钠，溶于1000ml水，灭菌，即得。
3.4预实验确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定。
二剂量法用于抗生素药品效价的常规测定，所以用二剂量法的高剂量浓度溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm。
高剂量与低剂量的抑菌圈直径之差最好不小于2mm。
高低剂量之比为2:1（如高、低剂量所致的抑菌圈差别较小时，可用4:1的剂量比率）。
3.5抗生素溶液的配制标准品溶液的制备：标准品的使用和保存，应按照标准品说明书规定，临用新制，参照《兽药典》抗生素微生物检定管蝶法设计表中规定的抗生素浓度范围4.0~25.0单位/ml进行稀释。
药物分析简答题
总论1.药品质量标准概念，内容药品标准（也俗称为药品质量标准）系依照药物自身的理化与生物学特性，依照批准的来源、处方、生产工艺、贮藏运输条件等所制定的、用以检测药品质量是不是达到用药要求并衡量其质量是不是稳固均一的技术规定。
2.药品查验工作大体程序药品查验工作的大体程序一般为取样（检品收检）、查验、留样、报告。
3.药品质量在临床应用中集中表此刻哪几个方面结构确证，名称，性状，辨别，检查，效价，贮藏4.经常使用缩写意思TLC ,MMR,AAS,LCMS,HCPE薄层色谱法( TLC)、高效液相色谱法( HPLC)、气相色谱法(GC)、毛细管电泳法(CE)5.古蔡检砷法顶用到哪些试剂，各起什么作用样品经消化后，以碘化钾、氯化亚锡将高价砷还原为三价砷然后与锌粒和酸产生的新生态氢生成砷化氢，再与溴化汞试纸生成黄色至橙色的色斑比较定量。
6.周密度的表示方式有哪几种周密度：是指在规定的条件下，同一个均匀样品，通过量次取样测定所得结果之间的接近程度。
用误差、标准误差或相对标准误差表示。
7.什么叫准确度，用什么来表示准确度：是指用该方式测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一样以百分回收率表示。
至少用9次测定结果进行评判。
8.为增强药品质量治理，我国制定相关药品质量治理标准有哪些SFDA(国家食物药物监督治理局）制定了GLP(药物非临床研究质量治理标准）、GCP(药物临床实验质量治理标准）、GMP（药品生产质量治理标准）、GSP(药品经营质量治理标准）、GAP（中药材生产质量治理标准（试行））9.药物中杂质的来源（两大途径）一样杂质检查有哪些生产进程中引入杂质，贮藏进程中引入杂质；一样杂质是指在自然界中散布较普遍，在多种药物的生产和贮藏进程中容易引入的杂质，它们的含量高低与生产工艺水平紧密相关，也称信号杂质。
10.什么缘故要进行药物分析方式验证，药物质量分析方式的验证可供药物含量测定的分析方式要紧包括容量分析法、光谱分析法和色谱分析法。
抗生素效价测定技术—抗生素效价微生物检定法
知识点3：浊度法
四、检定操作方法
（一）线性试验
除另有规定外，取适宜的大小厚度均匀的已灭菌试管，在各试验
管内精密加入含试验菌的液体培养基9. 0ml，再分别精密加入各浓
度的标准品溶液1.0ml，立即混匀，按随机区组分配将各管在规定
条件下培养至适宜测量的浊度值（通常约为4小时）。
知识点3：浊度法
（三）空白试验
线关系，可采用t检验。
4．测定结果的计算及可信限率估计。
5．实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的1 10%，则检验
结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。
知识点3：浊度法
6．原料药效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符
合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。
供试品低剂量溶液
（即SH→TH→SL→TL）
6.测量抑菌圈 双碟透明度好，无破损和不透明现象；抑菌圈应圆满，无破
圈或圈不完整现象，否则应弃去该双碟。
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
在恒温培养箱中培养至规定时间
技能点1：二剂量法操作规程
• 测量抑制圈
的污染，放双碟的台面应用水平仪调水平。
玻璃/塑料
平皿(d=90mm
h=16-17mm)
菌层
5ml
含菌培养基
底层
20ml
灭菌培养基
技能点1：二剂量法操作规程
制备底层
制备菌层
技能点1：二剂量法操作规程
4.放置钢管
5.滴碟、培养
毛细滴管（或滴管）滴碟
滴加顺序：按标准品高剂量溶液→供试品高剂量溶液→标准品低剂量溶液→
抗生素效价测定的方法
抗生素效价测定的方法
抗生素效价测定是用来评估抗生素药物对特定微生物的杀菌或抑菌能力的方法。
以下是几种常见的抗生素效价测定方法：
1. 系列稀释法：通过将抗生素药物制剂按照一定比例进行稀释，然后将每个浓度的药物与一定数量的微生物接种在培养基上，观察药物对微生物生长的影响。
根据微生物的生长情况，确定能抑制或杀灭微生物生长的最小药物浓度，即最低抑菌浓度（MIC）。
2. 纸片扩散法：将含有一定浓度抗生素的纸片放置在含有微生物的琼脂平板上，通过抗生素扩散至琼脂中的方式，形成药物浓度递减的梯度。
培养一段时间后，观察纸片周围菌落的生长情况，根据纸片周围菌落的性状和大小，判断抗生素在不同浓度下对微生物的效果。
3. 悬浮液法：将一定浓度的微生物悬浮液与不同浓度的抗生素药物混合，在一定时间后，通过感光度测定、比色法或荧光法等方法，测定混合液中微生物的生长情况，根据微生物的生长情况确定抗生素的效价。
4. 动物试验法：选择一种特定的动物模型，如小鼠、兔子等，将不同浓度的抗生素药物注射或灌胃给动物，观察抗生素对动物体内微生物的杀菌或抑菌效果。
根据动物的生理反应、细菌计数等指标，确定抗生素的效力。
需要注意的是，不同的抗生素和微生物对上述方法的适用性可能有所差异，具体选择方法时需要根据具体实验目的和条件进行判断。
此外，还需要遵循相关实验操作规范和安全操作指南，确保实验的准确性和安全性。
微生物发酵技术考试模拟题(附答案)
微生物发酵技术考试模拟题（附答案）一、单选题（共40题，每题1分，共40分）1、接种龄以处于生命力旺盛的（）的菌体最合适。
A、迟缓期B、衰退期C、对数生长期D、稳定期正确答案：C2、目前发酵工业常用的处理菌体、固形物杂质和悬浮物等固体物质，保证处理液澄清的主要方法为（）A、蒸馏和萃取B、离心和萃取C、离子交换和过滤D、离心和过滤正确答案：D3、下面不属于抗生素的是（）。
A、链霉素B、溶菌酶C、红霉素D、从植物蒜中制得的蒜素正确答案：B4、在等电点时氨基酸的溶解度（）A、不变B、不一定，有的氨基酸大，有的氨基酸小C、最大D、最小正确答案：D5、萃取后分离时采用的设备是（）A、筛分设备B、过滤设备C、萃取设备D、离心设备正确答案：D6、生产四环素的菌种是( )A、白色链霉菌B、金色链霉菌C、灰色链霉素D、绿色链霉菌正确答案：B7、酶活性调节速度比酶合成调节速度（）A、相等B、无法比较C、慢D、快正确答案：D8、常用的生理酸性物质（）不仅可以调节发酵液pH值，还可以补充氮源。
A、硫酸铵B、NaOHC、尿素D、氨水正确答案：A9、（）空气除菌流程具有对热的利用合理，热交换罐可兼作贮气罐的特点。
A、高效前置空气过滤除菌流程B、将空气冷却至露点以上的空气除菌流程C、冷热空气直接混合式空气除菌流程D、利用热空气加热冷空气的空气除菌流程正确答案：D10、种子罐培养时，一级种子罐又叫做（）A、育种罐B、繁殖罐C、生产罐D、发芽罐正确答案：D11、（）抗生素能够抑制或干扰细胞壁合成A、四环素类B、青霉素类C、多肽类D、氨基糖苷类正确答案：B12、青霉素是谁发现的（）A、弗莱明B、郭霍C、巴斯德D、列文虎克正确答案：A13、管碟法测抗生素效价时，培养基厚度越薄，量-反应直线截距减小，抑菌圈（）A、不定B、一样C、越大D、越小正确答案：C14、发酵过程中，出现了污染，工人们进行了如下处理：a. 严控发酵液流失；b.彻底清理生产环境；c.停产一段时间；d.调换生产菌种。
制霉菌素发酵、提取与效价测定
实验一制霉菌素发酵、提取与效价测定1.1.1 目的与要求(1) 了解抗生素发酵的一般过程及发酵过程中一些重要理化指标检测方法；(2) 学习抗生素（制霉菌素）的提取纯化工艺；(3) 了解制霉菌素化学效价测定的原理；(4) 掌握抗生素生物效价测定的常规方法——管碟法的原理与操作。
1.1.2 基本原理1.1.2.1制霉菌素制霉菌素(nystatin)是由诺尔斯链霉菌(Streptomyces noursei)产生的一种多烯大环内酯类(polyene macrolides) 抗真菌抗生素。
此类抗生素的结构特点是在分子中既有经内酯化作用而闭合的大碳环，又有一系列的共轭双键。
制霉菌素存在于菌丝体中，其纯品为淡黄色微细晶体；不溶于水、氯仿和丙酮等；稍溶于低级醇等；溶于吡啶、冰醋酸和NaOH溶液，但均能使其破坏而失效；对较高和较低的pH以及光和热均不稳定。
临床上使用的制霉菌素，其主要成分为制霉菌素A1，化学结构式如下图所示：图1-1 制霉菌素化学结构图它的氨基糖部分是氨基海藻糖，即3-氨基-3,6-二脱氧-D-吡喃甘露糖，非糖部分为38元的多烯大环内酯。
制霉菌素对各种真菌如白色念珠菌、隐球菌、荚膜组织胞浆菌及球孢子菌等有抑制作用。
主要用于白色念珠菌感染，如消化道念珠菌病、鹅口疮、念珠菌性阴道炎及外阴炎等。
但口服治疗全身性真菌感染或深部真菌感染则无效。
制霉菌素的作用机理是与真菌细胞膜上的特异甾醇相结合，导致原生质膜破坏，通透性改变，以致重要的细胞内容物外漏而死亡，从而杀灭真菌。
由于细菌原生质膜上不含甾醇，故本品对细菌无效；对肠道正常菌丛也无作用。
1.1.2.2 抗生素发酵生产工艺简介抗生素液体发酵共分为三大工序：菌种、发酵和提取。
配合三个工序进行分析化验和有关产物测定。
具体而言，其过程为菌种→孢子制备→种子制备→发酵→发酵液预处理→提取与精制→成品包装。
菌种一般采用液氮超低温保藏或沙土管保藏。
一般生产用菌种经多次转接往往会发生变异而退化，故必须经常进行菌种选育和纯化，以提高其生产能力。
1168《药品生物检定技术》西南大学网教22秋作业参考答案
1168 20222判断题1、由于使用和要求不同，标准品可分为国际、国家、工作用三级标准。
( ). A.√. B.×2、实验动物的分组不管采用什么方法，重要的是不要受到主观愿烈的影响。
（）. A.√. B.×3、处于未完全密封状态下产品的操作和转运，如产品灌装（或灌封）、分装、压塞、轧盖等应在A级或B级背景下局部A级环境下完成。
（）. A.√. B.×4、在破伤风梭菌毒力实验中，小白鼠强直性痉挛，抽搐。
呈现弓背反张，腿部强直，尾巴竖立等症状，最后死亡，即为阳性反应。
（）. A.√. B.×5、每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
（）. A.√. B.×6、在药品的微生物检验中，若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌。
（）. A.√. B.×7、微生物限度检查应在环境洁净度为不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行，检验全过程需严格遵守无菌操作,防止再污染。
（）. A.√. B.×8、在控制菌检查中，白色念珠菌和黑曲霉均接入玫瑰红钠琼脂培养基中，作适应性检查。
（）. A.√. B.×9、药物微生物总数检测时，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30〜35 ℃培养3〜5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20〜25 ℃培养5〜7天。
（）. A.√. B.×10、霉菌、酵母菌计数平板倒置于23-28℃培养箱中培养24 h。
（）. A.√. B.×11、单向流系沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流，所以仅有垂直单向流。
（）. A.√. B.×12、空态系指洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。
（）. A.√. B.×13、IMVC试验是指靛基质试验(I)、甲基红试验(M)、乙酰甲基甲醇试验(V)、枸橼酸盐试验(C)，主要用于金黄色葡萄球菌检测。
黄豆芽的生物效价
黄豆芽的生物效价
于和
【期刊名称】《粮油仓储科技通讯》
【年(卷),期】1996(0)1
【摘要】黄豆芽是普通家庭喜欢常吃的一种蔬菜,其生物效价(即人们常说的营养价值)高。
黄豆芽不仅保存了黄豆所含的原有成分,而且还增加了一些营养素,比如,黄豆本身含维生素C极少,在发芽后每100克
【总页数】1页(P50-50)
【作者】于和
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R151
【相关文献】
1.微生物检测法测定多抗菌素发酵液生物效价 [J], 胡永红;杨洋;张棋;王济奎;杨文革
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微生物检测法测定多抗菌素发酵液生物效价作者：胡永红杨洋张棋王济奎杨文革
来源：《江苏农业科学》2016年第01期
摘要：以多抗菌素生产菌（Streptomyces aureochromogenes NJYHWG66382）为试验菌株，水稻纹枯菌为指示菌株，用管碟法测量不同浓度多抗菌素标准品抑菌圈大小，多抗菌素标准品在质量浓度为200～2 400μg/mL范围内线性拟合度良好，其线性回归方程为：y=138.23x-2 058.46，r2=0.998 4。
确定牛津杯最适装液量为200μL，精密度相对标准偏差RSD为1.51%，稳定性良好。
该法能快速检测多抗菌素效价且灵敏度高，操作简便，回收率高。
关键词：多抗菌素；管碟法；精密度；稳定性
中图分类号：S188 文献标志码：A 文章编号：1002—1302（2016）01—0306—02
多抗菌素（polyoxins）也被称为多抗霉素、多效霉素、多氧霉素，能够抑制真菌细胞壁几丁质的合成，已经被广泛应用于治疗番茄灰霉病、水稻纹枯病和梨黑斑病等植物真菌病害，是一种抗真菌核苷类抗生素和能够有效防治植物真菌病害的生物农药。
多抗菌素不是一种纯净物，由于其碳链上R1、R2、R3 3个位点上官能团的变化，使多抗菌素的组分有多抗菌素A至多抗菌素N 14种之多。
由于其成分的复杂性，导致了高效液相色谱法（HPLC）检测需要很复杂的预处理，同时，考虑到HPLC检测的成本、周期等因素，因此，用多抗菌素微生物检测法探索具有重要意义。
本研究以多抗菌素生产菌（Streptomyces aureochromogenes
NJYHWG66382）为试验菌株，采用管碟法测量多抗菌素效价，同时进行了精确度、稳定性试验，显示出了良好的效果。
1材料与方法
1.1试验菌种
多抗菌素产生菌Streptomyces aureochromogenes NJYH-WG66382，由课题组保藏。
水稻纹枯菌：由课题组保藏。
多抗菌素标准品是由江苏丰源生物有限公司提供。
1.4试验万法
1.4.1标准溶液配制精确称取60 mg多抗菌素标准品置于容量瓶中，用蒸馏水溶解，振荡，定容至25 mL，得到浓度为2 400μg/mL的标准溶液，置于4℃冰箱备用。
1.4.2发酵液前处理取发酵培养基，倒入50 mL离心管，10 000 r/min，4℃离心15 min，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，收集，置于4℃冰箱备用。
1.4.3管碟法检测多抗菌素含量取直径90 mm、高16 mm的平板，向平板中倒入15 mL加热融化的PDA培养基，使其在碟内均匀分布，放置在水平工作台上，凝固。
取直径约为2 mm 的水稻纹枯菌苔，置于平板1/3处，在平板相对位置放置牛津杯[内径（6.0±0.1）mm，外径（8.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm]，静置15 min，使其在培养基上沉降稳定后，使用移液枪向牛津杯中添加200μL发酵液。
放置在28℃培养箱中培养24 h后，在平板底部垫上1张白纸，用游标卡尺测量抑菌圈直径，并记录。
1.4.4线性试验将标准品分别稀释至不同浓度，分别为200、800、1 000、1 600、2 000、2 400μg/mL，使用管碟法（牛津杯法）测定不同浓度多抗菌素标准品的抑菌圈大小（表1），以抑菌圈直径（mm）为横坐标，多抗菌素浓度（μg/mL）为纵坐标绘制标准曲线（图1）。
1.4.5稳定性试验取“1.4.4”节中发酵液6份，分别在0、6、12、18、24 h按“1.4.3”节方法检测多抗菌素含量。
1.4.6精密度试验准确吸取多抗菌素标准品储备液，按“1.4.3”节方法进行检测，做6组平行试验。
1.4.7回收率试验取已知多抗菌素含量的发酵液5份，分别加入同等体积、相同浓度的多抗菌素标准品溶液，按“1.4.4”节方法进行测定，计算回收率。
2结果与讨论
2.1标准曲线
根据抑菌圈大小绘制标准曲线，从图1可以看出，多抗菌素浓度在200～2 400μg/mL范围内线性拟合度良好，其回归方程为：y=138.23x-2 058.46，r2=0.998 4。
2.2牛津杯最佳装液量
分别通过添加100、150、200、250μL的多抗菌素标准溶液，来观察抑菌圈大小。
当牛津杯装液量为250μL时，由于液体表面张力，在牛津杯上方会形成一个曲面弧度，发酵液会因为接触培养皿上盖而造成损失，影响检测结果。
随着装液量的减少，平板上抑菌圈逐渐变小，因此选择200μL的装液量最为合适。
2.3稳定性试验
对发酵液在24 h内稳定性进行抑菌圈观察分析。
结果（图2）表明，发酵液在24 h内多抗菌素含量基本稳定，未发生显著变化。
2.4精密度试验
选择2400μg/mL的标准品溶液进行6次平行试验，分别测量抑菌圈大小，RSD为1.51%（n=6），表明该方法精密度较好（表3）。
2.5回收率试验
通过回收率试验，测量混合液形成的抑菌圈直径，结果见表4，试样回收率分别为
99.3%～101.4%，其RSD值为1.87%～2.15%，其平均回收率为100.1%，回收率效果较好。
3结论
本研究建立了管碟法测量发酵液中多抗菌素含量的方法，使用水稻纹枯菌为指示菌株。
多抗菌素标准品在质量浓度为200～2 400μg/mL范围内线性拟合度良好，其线性回归方程为：
y=138.23x-2 058.46，r2=0.998 4。
并验证了该法的稳定性和精密度，证明回收率较高。
由于微生物检测法操作简便、成本低，相对于HPLC法对于仪器设备的要求低，因此，可采用微生物检测法代替HPLC法检测发酵液中多抗菌素的含量。