10章 甾体激素类药物的分析

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HPLC法
不少甾体激素药物用HPLC法测定含量，一般可在相同条件下检查其他 甾体。方法为主成分自身对照法。以供试品溶液的稀溶液为对照液， 将对照液主峰的面积作为参比，来控制药物中杂质的量。 例：黄体酮中“有关物质”检查： 取本品适量，精密称定，以甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶 液，作为供试品溶液，精密量取1ml，置50ml 量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶 液10μl，注入液相色谱仪，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高 约为满量程的50%。再精密量取供试品溶液 与对照溶液 各10μl，分 别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的1.5倍。供试品 溶液色谱图中如有杂质峰，不得多于1个。其峰面积不得大于对照溶液 主峰面积的3/4 。
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TLC法 TLC法：
多数杂质结构未知且与药物结构相似，用高低浓度对比法来检查。 例：醋酸氟轻松中“有关物质”检查： 取本品，加三氯甲烷-甲醇（9：1）溶解并制成每1ml中约含3mg的 溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加三氯甲 烷-甲醇（9：1）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱 法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（97：3）为展开剂，展开，晾 干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检 视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照溶液 的主斑点比较，不得更深。 氢化可的松和雌二醇见课本p252 展开剂：不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶剂；苯-无水乙 展开剂 醇；二氯甲烷-甲醇-水；三氯甲烷-甲醇等。 显色剂：碱性四氮唑蓝试液；硫酸-乙醇(2:8；1:1；3:7)；20%硫 显色剂 酸；10%磷钼酸-乙醇液
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O CH3 CH3 11 H H
R 20
还可用于含量测定
2、酮基的呈色反应
C3和C20位的酮羰基可与羰基试剂(2,4-二硝基苯肼，硫 酸苯肼，异烟肼等)反应，生成黄色的腙而用于鉴别。 如黄体酮的鉴别：取供试品约0.5mg，置小试管中，加 异烟肼约1mg和甲醇1ml溶解后，显黄色。
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3 O
H
3、甲酮基的呈色反应
HO H CH3 11 9 F H
1 2 3
1 2
O 20 CH3 OH H 17 CH3
O 2010-12-24
曲安西龙
3 O
地塞米松磷酸钠： 增强水溶性 地塞米松磷酸钠 3
H
雄性激素及蛋白同化激素(天然产物或天然产物的结构改造产物)：
雄性激素同时具有蛋白同化激素作用，经结构改造后，雄性激素作用减弱， 同化作用保留或增强，成为蛋白同化激素。
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C C
6、卤素的反应
对连接在C6,C9或其它位置上的氟或氯进行确认。 (1)卤素连接在母核的环上：需用氧瓶燃烧法破坏， 使有机卤素转变为无机卤素离子，再进行鉴别(如地塞 米松磷酸钠，丙酸倍氯米松)。 (2)卤素连接在侧链上：可通过加热水解方法产生卤 素离子，再进行鉴别(如丙酸氯倍他索)。
O CH3 CH3 11 H H 20 OH
C6H5 C N N N Cl
+
C6H5 C 2e (H) C6H5 C 6 H5 N N H N N C 6 H5
17
3
H
C6H5
N
氯化三苯四氮唑 (TTC)
深红色
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还可用于皮质激素类药物杂质检 查(TLC)时的显色剂，皮质激素类 药物的含量测定
甾体激素与硫酸的呈色反应操作简便，不同药物可形成不同 的颜色或荧光而能相互区别，反应灵敏，为各国药典所应用
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不同的甾体激素药物有不同的官能团，利用官能团 反应可区别不同药物。 醇酮基的呈色反应——肾上腺皮质激素类 1、C17-α-醇酮基的呈色反应 肾上腺皮质激素类 α-醇酮基有还原性，可与碱性酒石酸酮试液(红色Cu2O↓)，氨 制硝酸银试液(黑色Ag↓)，四氮唑试液 四氮唑试液反应。 四氮唑试液
9
C D
A B
6
C 21 C
7、酯的反应
有些本类药物，在C17或C21位上连接有酯基，可将 其水解，产生相应的羧酸，再根据羧酸的性质进行鉴别 (如醋酸泼尼松，己酸羟孕酮等)。 醋酸,在酸性条件 下与乙醇生成醋 酸乙酯，有香气 己酸，有特臭
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C D A B
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部分本类药物用测定衍生物熔点的方法进行鉴别 1、缩氨基脲的生成 C3位的羰基和氨基脲发生缩合，生成缩氨基脲，可测定其熔点，对 药物进行鉴别。 COCl 如苯丙酸诺龙，产物熔点约为182℃，熔融同时分解。 CH3 CH3 2、酯的水解 O KOH + + K C l+ H 2 O C O C N OH C 若结构是有机酸的酯，可水解后测定产物熔点。 HO O 如丙酸睾酮C17位是丙酸和睾酮形成的酯，碱性水解后得到睾酮， +2HO NH +2H2O 熔点应为150~156℃。 2 m.p.201℃ 炔雌醇 3、酯的生成 O N HO 某些药物有羟基，可与酰卤生成酯，可测定酯的熔点进行鉴别。 双肟m.p.238℃ 如炔雌醇C3位上的羟基与苯甲酰氯成酯后，熔点为200~202℃。 黄体酮 4、酮肟的生成 有些药物C3位的羰基可与羟胺形成肟，可测定肟的熔点对药物进行 鉴别。 如黄体酮与盐酸羟胺反应后生成黄体酮双肟，熔点为235~240℃。
药品名称 醋酸可的松 氢化可的松 泼尼松 醋酸泼尼松 泼尼松龙 醋酸泼尼松龙 地塞米松磷酸钠 炔雌醇 炔雌醚 苯甲酸雌二醇 己酸羟孕酮 颜色 黄或微带橙色 棕黄至红色并显绿色荧光 橙色 橙色 深红色 玫瑰红色 黄或红棕色 橙红色并显黄绿色荧光 橙红色并显黄绿色荧光 黄绿色并显蓝色荧光 微黄色 加水稀释后 颜色消失溶液澄清 黄至橙黄，微带绿色荧光，有少 量絮状沉淀 黄至蓝绿 黄至蓝绿 红色消失，有灰色絮状沉淀 红色消失，有灰色絮状沉淀 黄色絮状沉淀 玫瑰红色絮状沉淀 红色絮状沉淀 淡橙色 由绿经红至带蓝荧光的红紫色
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UV： 甾体激素类药物有共轭结构或有苯环，有紫外特征 吸收， 可规定其最大吸收波长λmax，λmax处的吸收度，或 某两 个波长处吸收度的比值进行鉴别(如中国药典中丙酸 倍氯米 松的鉴别 )。 IR： 对于本类药物，几乎所有药物原料药都采用IR进行 鉴别。
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C C
21 20
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结构特点：具有环戊烷并多氢菲母核。
2
1
C B
D
16 15
A环、B环有一个或两个双键
A
8 7
3
甾
2
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肾上腺皮质激素(天然产物或天然产物的结构改造产物)：
O HO H CH3 11 H H CH3 20 OH OH
HO H CH3 11 9 F H H O 20 CH3 17 O OH H
OH C CH
17Βιβλιοθήκη 17雌二醇炔雌醇
结构特点：
1. A环为苯环 2. 3-酚羟基； 3. C17： 羟基 有些药物有羟基成酯，或有炔基
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几种甾体激素类药物结构的比较：
皮质激素：有21个碳原子，C17-α酮醇基，或该醇基形成的磷酸酯或磷酸酯的二 钠盐 雄性激素：母核有19个碳原子 蛋白同化激素：母核有18个碳原子 同：C17- β羟基或它形成的酯 异：C10一般无角甲基
3
H
3 O
H
O CH3
黄体酮
醋酸甲地孕酮 结构特点：
1. 3-酮基； 2. C17： 有甲酮基 有些药物有羟基或酯基
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雌性激素 (天然产物或天然产物的结构改造产物)：
天然雌性激素为雌二醇，经结构改造得到高效及长效衍生物。
CH3 H A 3 HO H H
3 HO
H
OH
CH3 H A H H
雄性激素
OH CH3 17 CH3 10 3
O
O CH3 O CH3 17 CH3 H H H H
CH3
H H H
结构特点：
10 3
甲睾酮
O 1. 3-酮基； 丙酸睾酮 2. C17： 有羟基或酯基 丙酸睾酮：C 酯化后延长作用时间 17
O
雄性激素：母核有19个碳原子 蛋白同化激素：母核有18个碳原子 C10一般无角甲基 C17- β羟基或它形成 的酯
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O 3
H2 C H
O CH3 17 H 10 H H H
蛋白同化激素
4
苯丙酸诺龙
孕激素 (天然产物或天然产物的结构改造产物)：
天然孕激素为黄体酮，口服无效，经结构改造后得到口服有效及长效衍生物。
O CH3 O O CH3
O CH3 17 CH3 H H
CH3 H
CH3 H H
CH3 17
黄体酮与亚硝基铁氰化钠 黄体酮与亚硝基铁氰化钠反应，显蓝紫色，可认为是黄体酮的灵 敏、专属的鉴别反应。其它分子结构中含有甲酮基的甾体激素呈现淡 橙色或不显色。
4、酚羟基的呈色反应
雌激素的C3位上有酚羟基，可与重氮苯磺酸反应生成红色偶氮染 雌激素 料(JP：苯甲酸雌二醇)。
5、炔基的沉淀反应
具有炔基 炔基的甾体激素药物(炔雌醇、炔诺酮等)，遇硝酸银试 炔基 液，即生成白色的炔化银沉淀。 R-C≡CH + AgNO3 → R-C≡CAg↓ + HNO3
O CH3
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氢化可的松： 天然皮质激素
2
1
CH3
3 O
H
醋酸地塞米松：肌 注延长作用时间 O