实验7 直接抗人球蛋白实验
合集下载
实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件
若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗 IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈 阴性反应。 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性 。
实验重点掌握：
直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
多特异性抗球蛋白试剂 1 1
1
1
受检者标本检测
混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
受检者标本检测
标记3支试管，分别为待检管、阴Βιβλιοθήκη 对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 待检管 1 1 阴性对照 阳性对照
5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC
实验7 直接抗人球蛋白 实验
第一部分
直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。 ——直接抗人球蛋白试验阳性
受检标本 红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
实验重点掌握：
直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
多特异性抗球蛋白试剂 1 1
1
1
受检者标本检测
混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
受检者标本检测
标记3支试管，分别为待检管、阴Βιβλιοθήκη 对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 待检管 1 1 阴性对照 阳性对照
5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC
实验7 直接抗人球蛋白 实验
第一部分
直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。 ——直接抗人球蛋白试验阳性
受检标本 红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件
.
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
.
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
.
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
.
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
.
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
.
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗
实验七 直接抗人球蛋白试验
.
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
.
直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被
不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
.
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
.
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
.
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
.
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
.
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
.
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗
实验七 直接抗人球蛋白试验
.
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
.
直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被
不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
.
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
实验7直接抗人球蛋白实验
注意事项：避免干扰因素， 确保实验准确性
解读方法：结合临床资料， 综合分析结果
直接抗人球蛋白实 验的局限性
直接抗人球蛋白实验的局限性之一是可能出现假阳性结果，即错误地将正常红细胞判定为阳性。 假阳性结果可能是由于抗体与红细胞结合的亲和力不足或抗体浓度过高导致。 抗体与红细胞结合的亲和力不足可能导致实验结果不稳定，容易出现假阳性或假阴性。 抗体浓度过高可能导致非特异性结合增加，从而产生假阳性结果。
直接抗人球蛋白实 验的步骤
采集静脉血液样本 避免溶血和污染
分离血清或血浆 记录样本信息
准备试剂和器材： 确保所需的试剂 和器材已经准备 好，包括抗人球 蛋白抗体、离心
机、试管等。
样本处理：将 待检测的样本 进行离心处理， 分离出血浆和
红细胞。
抗体孵育：将 抗人球蛋白抗 体与离心后的 红细胞混合， 孵育一定时间。
红细胞上的抗原与特异性抗体结合后，可引起红细胞凝集，出现阳性反应。
未结合抗体的红细胞不会发生凝集，呈现阴性反应。
通过观察凝集程度，可以判断待测血清中抗体的含量。
直接抗人球蛋白实验的原理是利用抗原抗体反应的特异性，将抗人球蛋白抗体与待测血清中的红细胞结合，观察 是否发生凝集反应。 抗人球蛋白抗体与红细胞上相应的抗原结合后，可引起红细胞凝集，从而判断待测血清中是否存在相应的抗体。
正确使用试剂：使用经 国家药品监督管理局批 准的合格试剂，确保实 验结果的准确性。
标准化操作：严格按 照试剂盒说明书进行 操作，避免操作过程 中的人为误差。
避免交叉污染：在实验 过程中，要确保不同样 本之间的交叉污染，以 免影响实验结果。
阳性结果：可能存在自身 抗体
阴性结果：不能完全排除 自身抗体存在
直接抗人球蛋白实 验的局限性之一是 可能出现假阴性结 果。
实验7直接抗人球蛋白实验
洗涤红细胞
将红细胞洗涤多次， 去除血浆中的干扰物 质。
进行实验
将抗人球蛋白血清与 洗涤后的红细胞混合， 观察反应结果。
结果判定
根据显微镜下观察到 的反应结果，判断是 否为阳性或阴性。
02
实验材料
实验器材
01
试管
用于混合和离心处理。
02
移液管
用于精确测量溶液。
03
离心机
用于分离血清和红细胞。
04
显微镜
05实验总结与展望Fra bibliotek实验总结
实验原理
直接抗人球蛋白实验是一种用于检测红细胞表面是否存在不完全抗体（IgG和IgM）的 实验。这些不完全抗体可以引起红细胞凝集，导致溶血性贫血。
实验步骤
实验包括洗涤红细胞、加抗体、离心和观察结果等步骤。
实验结果
实验结果为阳性或阴性，阳性结果表明存在不完全抗体，阴性结果表明不存在不完全抗 体。
阳性结果
若直接抗人球蛋白实验结果为阳性， 则表示样本中存在针对红细胞抗原的 抗体，即红细胞抗原已被致敏。
结果解读
阴性解读
阴性结果通常表明患者未发生免疫性溶血性贫血等疾病，但 也需要结合其他检查结果和临床表现进行综合判断。
阳性解读
阳性结果提示患者可能存在免疫性溶血性贫血等疾病，需要 进一步检查和确诊。同时，阳性结果也可能出现在某些生理 或非免疫性因素导致红细胞抗原暴露的情况下。
观察红细胞凝集现象。
实验试剂
抗人球蛋白抗体
用于检测红细胞上的抗体。
盐水
用于清洗红细胞。
缓冲液
维持实验体系的pH值。
标记抗体
用于标记红细胞上的抗体。
实验样本
患者血清
含有待检测的抗体。
实验7 直接抗人球蛋白实验
——直接抗人球蛋白试验阳性
学习交流PPT
3
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
学习交流PPT
4
抗球蛋白试剂通常有三种： • 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗-
C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 • 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG • 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 • 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
学习交流PPT
13
结果判定
进一步分析。
学习交流PPT
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 直接抗人球蛋白试验操作
学习交流PPT
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
学习交流PPT
8
受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
学习交流PPT
3
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
学习交流PPT
4
抗球蛋白试剂通常有三种： • 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗-
C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 • 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG • 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 • 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
学习交流PPT
13
结果判定
进一步分析。
学习交流PPT
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 直接抗人球蛋白试验操作
学习交流PPT
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
学习交流PPT
8
受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
抗人球蛋白试验(直接法)
抗人球蛋白试验（直接法）简介抗人球蛋白试验（直接法）是一种常见的免疫学实验方法，用于检测机体内特定抗体（抗人球蛋白抗体）的水平和活性。
通过这一试验可以评估机体对人球蛋白的免疫反应情况，是许多研究和临床诊断工作中重要的实验手段之一。
实验原理抗人球蛋白试验（直接法）基于抗原-抗体相互作用的原理。
人球蛋白是一种外源蛋白，当人体受到人球蛋白的免疫刺激后，机体会产生抗人球蛋白抗体。
通过将待测血清与标准人球蛋白溶液混合反应，通过测定溶液中抗体与抗原结合的程度，进而评价该血清中抗人球蛋白抗体的水平。
实验步骤1.准备试剂：标准人球蛋白溶液、待测血清、辅助试剂等。
2.取等量的标准人球蛋白溶液和待测血清，混合均匀。
3.将混合溶液孵育一段时间，促使抗体与抗原结合。
4.添加特定试剂，使未结合的物质沉淀或产生其他特定反应。
5.通过光密度仪或其他检测仪器测定光密度值，计算出抗体水平。
实验结果分析实验结果以光密度值或其他测量指标呈现，一般抗体水平较高的样本对应较高的光密度值。
通过比较待测样本的结果与标准曲线或对照组的结果，可以判断该样本中抗人球蛋白抗体的水平及活性。
应用领域抗人球蛋白试验（直接法）在免疫学研究、临床诊断以及药物疗效评价等领域有着广泛的应用。
例如，在自身免疫性疾病的诊断中，该试验可帮助医生评估患者的免疫系统功能状态；在药物疗效评价方面，可用于监测药物对患者免疫功能的影响。
结论抗人球蛋白试验（直接法）是一种重要的实验技术，可以用于评估机体对人球蛋白的免疫反应水平。
通过本实验，我们可以深入了解机体免疫系统的功能状态，为研究和临床诊断提供有力的支持。
实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件
精选ppt
9
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的 压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
精选ppt
11
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
1
阴性对照 1 1
阳性对照
1 1
精选ppt
12
受检者标本检测
❖ 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
精选ppt
3
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
精选ppt
4
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
精选ppt
13
结果判定
实验七 直接抗人球蛋白试验
实验7 直接抗人球蛋白实验
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
受检者标本检测
标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
进一步分析。
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
实验7 直接抗人球蛋白实验
实验7 直接抗人球蛋白实验
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可
呈阴性反应。 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳
性。
——直接抗人球蛋白试验阳性
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
抗球蛋白试剂通常有三种： 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
实验7-直接抗人球蛋白实验PPT课件
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可
呈阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳
性。
14
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
15
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
3
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和
抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
9
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
10
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
12
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
呈阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳
性。
14
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
15
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
3
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和
抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
9
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
10
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
12
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
实验直接抗人球蛋白实验
抗IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 • 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验
可呈阴性反应。 • 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假
阳性。
第14页/共16页
实验重点掌握： • 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
第15页/共16页
感谢您的观看！
第10页/共16页
受检者标本检测
• 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 阳性对照 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 1 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
第11页1/共16页
阴性对照 1
1
受检者标本检测
• 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。 • 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，
第8页/共16页
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
第9页/共16页
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
抗球蛋白试剂通常有三种： • 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG
可呈阴性反应。 • 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假
阳性。
第14页/共16页
实验重点掌握： • 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
第15页/共16页
感谢您的观看！
第10页/共16页
受检者标本检测
• 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 阳性对照 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 1 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
第11页1/共16页
阴性对照 1
1
受检者标本检测
• 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。 • 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，
第8页/共16页
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
第9页/共16页
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
抗球蛋白试剂通常有三种： • 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG
实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件
进一步分析。
最新编辑ppt
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
最新编辑ppt
6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
最新编辑ppt
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗 IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。
❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可 呈阴性反应。
❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳 性。
最新编辑ppt
15
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
实验七 直接抗人球蛋白试验
最新编辑ppt
1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
最新编辑ppt
2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
最新编辑ppt
16
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
最新编辑ppt
9
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
最新编辑ppt
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
最新编辑ppt
6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
最新编辑ppt
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗 IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。
❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可 呈阴性反应。
❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳 性。
最新编辑ppt
15
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
实验七 直接抗人球蛋白试验
最新编辑ppt
1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
最新编辑ppt
2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
最新编辑ppt
16
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
最新编辑ppt
9
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件
抗人球蛋白 致敏红细胞
直接抗人球蛋白试验
抗球蛋白试剂通常有三种：
多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗 - C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。
单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG
单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3
在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3 进一步分析。
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
第二部分
直接抗人球蛋白试验操作
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案：
试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
受检标本 红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）： 1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
实验7 直接抗人球蛋白实验
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
精选版课件ppt
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
精选版课件ppt
8
受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min
分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
精选版课件ppt
14
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。
11新生儿溶血病胎婴儿致敏红细胞检测22自身免疫溶血性贫血的诊断33溶血性输血反应的研究第二部分直接抗人球蛋白试验操作直接抗人球蛋白试验难点
实验七 直接抗人球蛋白试验
精选版课件ppt
1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
精选版课件ppt
2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
精选版课件ppt
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
精选版课件ppt
8
受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min
分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
精选版课件ppt
14
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。
11新生儿溶血病胎婴儿致敏红细胞检测22自身免疫溶血性贫血的诊断33溶血性输血反应的研究第二部分直接抗人球蛋白试验操作直接抗人球蛋白试验难点
实验七 直接抗人球蛋白试验
精选版课件ppt
1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
精选版课件ppt
2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
实验 直接抗人球蛋白实验课件
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
实验 直接抗人球蛋白实验
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无15
实验重点掌握： • 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
实验 直接抗人球蛋白实验
16
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
实验 直接抗人球蛋白实验
17
实验七 直接抗人球蛋白试验
实验 直接抗人球蛋白实验
1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
实验 直接抗人球蛋白实验
2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
实验 直接抗人球蛋白实验
实验 直接抗人球蛋白实验
11
受检者标本检测
• 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
1
阴性对照 1 1
实验 直接抗人球蛋白实验
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无15
实验重点掌握： • 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
实验 直接抗人球蛋白实验
16
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
实验 直接抗人球蛋白实验
17
实验七 直接抗人球蛋白试验
实验 直接抗人球蛋白实验
1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
实验 直接抗人球蛋白实验
2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
实验 直接抗人球蛋白实验
实验 直接抗人球蛋白实验
11
受检者标本检测
• 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
1
阴性对照 1 1
实验直接抗人球蛋白实验
第10页，共15页。
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须 单克隆IgG抗D血清致敏）
第11页，共15页。
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC
5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
录结果。
第13页，共15页。
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集者直接抗球 蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
第14页，共15页。
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。
第9页，共15页。
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离血 浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积红细胞 各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的单克隆 IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的 NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5％的致敏红 细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用
——直接抗人球蛋白试验阳性
第3页，共15页。
致敏红细胞
抗人球蛋白直ຫໍສະໝຸດ 抗人球蛋白试验第4页，共15页。
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗- C3
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须 单克隆IgG抗D血清致敏）
第11页，共15页。
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC
5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
录结果。
第13页，共15页。
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集者直接抗球 蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
第14页，共15页。
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。
第9页，共15页。
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离血 浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积红细胞 各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的单克隆 IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的 NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5％的致敏红 细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用
——直接抗人球蛋白试验阳性
第3页，共15页。
致敏红细胞
抗人球蛋白直ຫໍສະໝຸດ 抗人球蛋白试验第4页，共15页。
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗- C3
实验7 直接抗人球蛋白实验课件
实验七 直接抗人球蛋白试验
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性
。
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以IgG、抗
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
进一步分析。
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性
。
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以IgG、抗
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
进一步分析。
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
抗人球蛋白 致敏红细胞
直接抗人球蛋白试验
抗球蛋白试剂通常有三种：
多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗 - C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。
单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG
Βιβλιοθήκη 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3
在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3 进一步分析。
结果判定
如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集
者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
注意事项
标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上 释放出来。 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
离心时间和离心力要按标准操作。
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离 血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积 红细胞各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的 单克隆IgG抗D血清，混匀，臵于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体 积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5 ％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用
实验七
直接抗人球蛋白试验
第一部分
直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。 ——直接抗人球蛋白试验阳性
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
第二部分
直接抗人球蛋白试验操作
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案：
试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
多特异性抗球蛋白试剂 1 1
1
1
受检者标本检测
混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管臵室温孵育5min，再离心，观察凝集。 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗 IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可 呈阴性反应。 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳 性。
实验重点掌握：
直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
受检者标本检测
标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 待检管 1 1 阴性对照 阳性对照
5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC
受检标本 红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血
1000g
2ml（与抗凝剂混匀）
离心3min
分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：