酶法与金标法检测HBSAg的比较

酶法与金标法检测HBSAg的比较
摘要：酶联免疫吸附法（elisa）和胶体金法都是临床检测hbsag 的重要手段，二者各具优势，临床应用中需要根据实际需求进行选择。

关键词：胶体金法酶联免疫法 hbsag 检测
【中图分类号】r9 【文献标识码】b 【文章编号】1671-8801（2013）06-0397-01
我国是乙肝高发地区，作为流传最广、危害最大的病毒性肝炎之一，控制乙肝感染率是降低其发病率的关键，需要从源头切断感染源，早期乙肝患者的检测与诊断具有重要意义。

乙肝作为临床中引起肝硬化、肝癌等恶性疾病的高危因素，乙型肝炎病毒表面抗原（hbsag）是其感染的特征性标志之一。

提升hbsag检测的灵敏度，对于更好的筛选感染患者有积极的参考价值。

下面我们对常用的酶联免疫吸附法（elisa）和胶体金法检测hbsag的情况进行对比。

1 酶法与金标法检测原理与操作
胶体金法是以胶体金标记特异性抗体，对检测标准中的相应抗原进行筛选，它在具体应用中效果快速、简便，且对仪器需求低，快速检测方面应用价值高。

以胶体金免疫技术检测患者样品血清，样品中的hbsag会与胶体金抗体结合形成复合物，层析作用的发挥会使形成的复合物沿着试纸向前移动，如果检测结果为阳性，则与其中的抗体结合形成夹心物凝聚显色[1]。

胶体金法的操作只需要将所采集的受检者血液滴在试纸条的垫片上，在半个小时后观察结果
即可。

受检者血清在试纸上会自动通过滤膜向检测端渗透，室温下十分钟左右就能观察到结果。

对于结果的判断标准以试纸上检测线与对照线均出现两条紫红色线为阳性，反之出现一条为阴性，两条都不出现颜色则为失败，需要重新进行检测。

酶联免疫吸附法（elisa）是采用夹心法的原理对受检者血液或血清中的hbsag进行检测，它是基于抗原与抗体的特异反应将待检测物与酶连接，通过酶本身的特性与底物连接产生颜色反应[2]。

elisa法具有特异性强、灵敏度高等特点。

elisa法的操作除了要注意操作人员的自我保护，标本检测期间要防止溶血现象发生，加酶试剂要使用定量移液器，以确保定量准确。

操作中洗涤环节要确保质量，避免留有污渍，对结果的计算要严格依照试剂盒说明进行，做好阴性与阳性对照。

2 酶法与金标法检测hbsag比较
对hbsag的检测，能够明确患者有否感染，准确定位治疗群体，并通过定量检测选择合适治疗方案，在治疗期间，通过定量检测监测治疗效果，预测临床预后，对于监控患者耐药性、药物过敏反应及复发有积极作用。

根据临床研究结果来看，胶体金法和elisa法在hbsag临床阳性率的检测结果方面差异不大，二者检测原理较为类似，都是以特异性的抗原抗体反应为主，区别只在于二者一个标记物是胶体金，一个是过氧化酶，理论上两种方法检测结果差别不大。

从敏感度上进行对比，胶体金法的敏感度比elisa稍低，这是由于胶体金法需要高浓度的标记物且较大直径的金颗粒才能够得
到较高的敏感度，因此，在敏感度对比上胶体金法受限较多。

使用elisa法检测，当hbsag含量过高的时候，其与包被的抗体含量相比过剩，会导致抗原抗体反应的后带现象，这也是临床中常见的“钩状效应”[3]。

从胶体金法角度来看，能够有效避免“钩状效应”的出现导致假阴性现状，这也是临床elisa法检测需要加以注意的地方。

临床hbsag检测中有时elisa法检测结果为阴性而胶体金法检测结果为阳性，对其重新进行测定发现，elisa法以弱阳性为主，不仅显色很淡，且吸光度值与cut-off值相近，除了“钩状效应”影响结果之外，这种现象的发生还与其他多种因素有关系。

比如hbsag 检测中试剂的预备不够充分，在日常操作中，有时候实验室工作人员将试剂盒从冰箱中取出的时候，并未放置达到室温平衡阶段就直接操作，这就直接导致了有效反应时间缩短，致使hbsag检测结果中弱阳性出现假阴性的检测结果。

针对这些干扰因素，最好的规避方法是从冰箱中取出的时候，放置半个小时到一个小时，这样在测定中就能够获得更可靠的检测结果。

hbsag检测中有时候会出现假阳性现象，这种现象出现的主要原因根据临床研究结果可总结归类为标本被污染、溶血现象、凝固异常和血清中某些因子过量等造成的[4]。

如果血液中血红蛋白过氧化物酶含量过高，则会吸附其底物发生反应造成假阳性的检测结果。

所以对于所采集标本要做好保管工作，避免发生用力震荡或溶血现象等，以免被污染或产生溶血现象，影响检测结果。

结合两种方法在临床hbsag检测中的应用情况来看，elisa法在特异性上和灵敏度上相较胶体金法更胜一筹，且经济实惠，因此临床应用价值更高一些，不过在具体操作中影响因素较多，需要严格按照操作规程谨慎进行处理。

胶体金法最典型的优势是对仪器和方法限制较少，检测结果快速，在一些现场检测中应用价值较高，并且实验结果需要长期进行保存，与之相比，虽然elisa法操作步骤较为复杂，且限制较多，出结果较慢，但是在敏感性和特异性上优质显著，二者在hbsag检测中需要根据检测需求选择方法[5]。

临床医学的发展使得hbsag检测变得更为方便，对于阻断乙肝传染源来说有积极意义。

无论是胶体金法还是elisa法都是检测的有效手段，在临床中根据实际检测情况选择合适方法十分必要，对于检测中存在的假阳性和假阴性结果，会对患者和临床诊疗增加负担，因此需要综合多种因素考虑、筛选，尽量确保这类情况的出现，以免发生医疗纠纷或加重患者身心负担。

参考文献
[1] 曾章新，刘文星，乐忠勇，等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价[j].中华医学检验杂志，2009，22（6）：327-329 [2] 李曼，陈正徐，陈玉梅，等.一步法测hbsag产生钩状效应的原因分析及对策探讨[j].齐鲁医学检验，2011，15（6）：94-95 [3] 陈保民.酶免疫技术hbsag中试验操作个体差异及可疑区域的界定[j].郑州大学学报：医学版，2010，42（5）：904-905 [4] 钱厚民，赵江燕，张燕.应重视elisa检测hbsag灰区范围
内样品的复检[j].上海医学检验杂志，2012，17（3）：156-157 [5] 周继文，戎广亚，杨守纯，等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原[j].中华检验医学杂志，2009，21（1）：30-32。