酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三是关于酵母核糖核酸（RNA）的提取和测定的实验。
1. 提取酵母RNA：
a. 取一份含有酵母的培养基培养液，将其转移到离心管中。
b. 将离心管在12000转/分钟的速度下离心5分钟，将沉淀（酵母细胞）收集到离心管底部。
c. 弃去上清液，加入适量的稀释RNA保护剂，如TRIZOL 或RNeasy试剂。
d. 快速颠倒离心管以完全溶解酵母细胞，并使RNA与纯化试剂进行结合。
e. 加入氯仿溶液，再次快速颠倒离心管混合，形成水相和有机相层。
f. 离心管在12000转/分钟的速度下离心15分钟，使两个相分离。
g. 将水相（含有RNA）转移到新的离心管中，并加入同等体积的异丙醇。
h. 用洗涤液和乙醚混合洗涤RNA样品，最后用无水乙醚洗涤RNA。
i. 最后，将RNA用无水乙醚洗涤并直接转移到无附加盐的水中得到纯化的RNA样品。
2. 测定酵母RNA：
a. 使用分光光度计在260nm波长下测量纯化的RNA溶液的吸光度。
b. 根据吸光度读数，用以下公式计算RNA的浓度：浓度（μg/mL）= 吸光度读数 ×稀释倍数 × 50。
c. 可选的是用琼脂糖凝胶电泳分析纯化的RNA样品，以确定RNA的完整性和纯度。
这是一个简单的方法，用于提取和测定酵母中的RNA。
根据需要，还可以使用其他提取试剂和测定方法。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核酸的理解。
实验仪器和试剂，离心机、pH计、琼脂糖凝胶电泳仪、琼脂糖、酵母细胞、蛋白酶K、RNase A、RNase T1、DNase I、酚/氯仿、异丙醇、无水乙醇、三氯乙酸、乙醇、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K缓冲液、RNase A 缓冲液、RNase T1缓冲液、DNase I缓冲液。
实验步骤：1. 酵母细胞的裂解。
将酵母细胞加入磷酸盐缓冲液中，加入蛋白酶K，用pH计调节至碱性，加入酚/氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀。
2. RNA的提取。
将上清液加入异丙醇，离心，取上清液，加入无水乙醇，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
3. RNA的纯化。
将RNA加入三氯乙酸和乙醇混合液，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
4. RNA的酶切。
将RNA加入RNase A缓冲液，RNase T1缓冲液和DNase I缓冲液进行酶切反应。
5. RNA的电泳分析。
将酶切后的RNA样品加入琼脂糖凝胶电泳仪中进行电泳分析，观察RNA的组分鉴定。
实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳分析，我们观察到了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定结果。
根据不同的迁移率，我们可以清晰地看到RNA在凝胶上的分布情况，从而确定RNA的组成和大小。
实验结论：通过本次实验，我们成功地实现了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。
通过实验，我们加深了对核酸的理解，掌握了相关的实验技术和方法。
实验总结：本次实验不仅是对课堂知识的巩固和实践，也是对科学研究方法的探索和运用。
通过实验，我们不仅学到了理论知识，更加深了对实验技术和方法的理解和掌握。
在今后的学习和科研工作中，我们将继续努力，不断提高实验技术水平，为科学研究做出更大的贡献。
以上就是本次酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验的报告内容，谢谢阅读。
酵母核糖核酸的提取及测定
酵母核糖核酸的提取及测定酵母核糖核酸的提取及测定⼀、实验背景及⽬的核糖核酸(RNA)和它的降解物核苷酸、核苷及其衍⽣物在⽣物化学、医药、⾷品添加剂、农业等领域有着⼴泛的应⽤。
⽐如能够促进作物的⽣长，在⽔稻、⼩麦、柑橘及多种蔬菜⽣产中应⽤，取得了明显的增产效果。
像鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)还是强⼒助鲜剂，胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)可作为⽣产治疗癌症、肝炎及冠⼼病等药物的原料。
⽽利⽤微⽣物资源提取氨基酸、核苷酸等⽣物⼩分⼦，具有成本低、⾮化学合成、⽆毒、⽆害的特点。
[1] 随着啤酒等发酵⾏业的快速发展，产⽣了相应的⼤量发酵副产物，如何利⽤这些副产物，既做到不污染环境，还能产⽣良好的经济效益，⼀直是研究的热点。
⽽啤酒废酵母中RNA 含量达6%~8%，是⽣产RNA的较好原料，此外，抽提后的菌体蛋⽩质(占⼲菌体的50%)还具有很⾼的利⽤价值。
所以利⽤啤酒废酵母⽣产RNA形成了⾮常有益的产业链。
[2] 本实验⽬的就是学习从酵母中提取RNA的⽅法并掌握其测定⼿段。
⼆、实验原理微⽣物是⼯.业上⼤量⽣产核酸的原料，其中以酵母最为理想，酵母核酸中主要是RMA (2.67~10.0%)，DNA很少(0.03~0.516%)，菌体容易收集，RMA也易于分离。
RMA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋⽩质分离，然后将菌体除去，再根据RNA等电点在pH2. 0~2.5的特点，将体系pH调⾄其等电点，使之沉淀，进⾏离⼼收集。
提取RNA的⽅法很多，在⼯业⽣产上常⽤的是稀碱法和浓盐法。
稀碱法利⽤碱使细菌细胞壁⽔解，使RNA释放出来，浓盐法是在加热条件下，利⽤⾼浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，RNA 钠盐易溶于⽔，在含盐的菌体溶液中，RVA 有较⾼的溶解度。
⼆者均通过控制温度使蛋⽩质变性沉淀，通过离⼼将RNA及蛋⽩质和酵母菌体分离，进⽽在等电点沉淀RNA，从⽽达到提取⽬的。
本实验采⽤浓盐法(10% NaCl),是⾷品医药卫⽣领域制备RNA 制剂的经典⽅案。
实验三酵母核糖核酸(RNA)的提取
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12
2.磷酸的鉴定：取试管两只，分别标明测 定管与对照管，然后依次加入下列各试剂：
管号
RNA水解 5％H2SO4 钼酸铵试剂 液
测定管 0.2ml
不加
5滴
VC 5滴
对照管 不加
0.2ml
5滴
5滴
放置数分钟，观察两管颜色有何不同。 磷酸+钼酸铵——磷钼酸+Vc——钼蓝
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实验三 酵母菌RNA的提取、鉴定及
定量测定
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1
一、实验目的
• 掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理 与方法
• 了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
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2
二、实验原理
• （一）目前常用的RNA的制备方法 • 浓盐法：是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁
的通透性，使核酸从细胞内释放出来。成本低、适于大规模 操作。
3.核糖的鉴定：取试管两只，分别标明测定管与 对照管，然后依次加入下列各试剂。
管 号 RNA水解液 5％H2SO4 3，5-二羟甲苯
测定管 4滴
不加
6滴
对照管 不加
4滴
6滴
将两试管放入沸水浴内加热10分钟，比较两管之颜色。
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4.脱氧核糖的鉴定：取两试管分别标明测定管与 对照管，然后依次加入下列各试剂。
管 号 RNA水解液 5％H2SO4 二苯胺
测定管 4滴
不加
6滴
对照管 不加
4滴
6滴
将两试管同时放入沸水浴内，加热10分钟后，比较两 管之颜色。
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思考题
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验名称：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验目的：通过实验，掌握分离酵母核糖核酸的技术和方法，
了解酵母核糖核酸的结构和组成，为深入研究生物分子提供基础
知识。
实验原理：酵母是常见的单细胞真菌，其细胞内含有多种生物
分子，其中包括核糖核酸，其主要作用是传递遗传信息。
酵母核
糖核酸在组成上分为核糖体RNA和转运RNA两类，其中核糖体RNA分子量较大，可以通过葡萄糖等物质的离心分离、盐析和凝
胶过滤等方法进行纯化。
实验步骤：
1.将酵母菌株培养至对数生长期，并收集其含有核糖核酸的细胞。
2.将酵母菌细胞裂解，并加入一定量的盐，使其发生盐析反应。
3.将含有核糖核酸的盐析液进行凝胶过滤，通过分子量筛选，
分离出核糖体RNA。
4.对分离出的核糖体RNA进行电泳实验，检测该分子的分子量和组成。
实验结果：
1.通过盐析实验，成功从酵母菌细胞中分离出核糖体RNA，依
据电泳图谱，该分子的分子量约为20kD。
2.通过对核糖体RNA的电泳图谱进行分析，可以发现，在核糖体RNA中，存在大约四分之三的核糖核酸分子为16S rRNA，其
它分子为其他转运RNA。
结论：通过本次实验，我们成功地从酵母菌的细胞中分离出核
糖体RNA，掌握了酵母核糖核酸的分离和组分鉴定等技术和方法，为深入研究生物分子提供了基础研究支持。
实验一 酵母核糖核酸的提取及组分鉴定
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四、【实验方法与步骤】
1. RNA的提取
（1）称取1g酵母粉（或者酵母片）放入研钵中，加入10ml 0.04M NaOH 充分研磨｡ （2）将研磨液加入25ml大试管中，于沸水中加热30min。注意：加热 过程中（7min左右搅拌一次）或摇晃试管充分混匀均可。加热完毕后自 然冷却方可后续试验。 （3）将冷却后的试管内液体用离心机3000r/min离心15min。注意： 离心前务必平衡！ （4）将上清液缓慢倒入10ml的酸性乙醇溶液中。注意：要边到边 搅拌或者摇晃烧杯使之混匀。静置约15min后3000r/min离心5min，弃去 上清液，用10mL 95%乙醇洗涤沉淀1次。（即倒入乙醇后震荡试管，然 后3000r/min离心5min ，弃去上清液。） （5）所得沉淀即为提取的酵母中粗RNA，在空气里干燥后备用。
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五、【实验结果、计算与分析】
• 说明各试管中现象 • 解释原因 • 得出结论
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六、【思考题】
RNA组分鉴定的原理是什么？
七、【注意事项】
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实验一 酵母核糖核酸的分离与组分鉴定
P178页
一、【实验目的】
掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法。
了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方法。
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二、 【实验原理】
酵母核酸中RNA含量较多，RNA可溶于碱性溶液。在碱
性提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，
由此即得出RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和磷酸各 组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组 分的存在。
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【实验方法与步骤】
2. RNA的组分鉴定
建议：可先将除RNA水解液以 外的试剂先混匀，最后加RNA 水解液亦可。定磷试剂除外。
酵母中RNA的提取与含量测定
酵母中RNA的提取与含量测定酵母是一类广泛应用于工业生产中的微生物，具有高温抗性、高碱性和高盐度等特殊环境适应能力，可生产出酵母菌辅酶、乳酸、醋酸、酒精、面包等产品。
酵母的研究也成为生物学、生物技术等领域的重要课题之一。
RNA（核糖核酸）是生命体中发挥重要生物学功能的分子之一，能够参与DNA复制、转录和翻译等生命过程，是研究生物学、分子生物学和基础医学等领域的重要手段之一。
因此，酵母中RNA的提取与含量测定是酵母研究的重要内容之一。
酵母中RNA的提取方法主要包括以下几个步骤：1.预处理样品：将培养的酵母细胞通过离心和去除培养基中的各种杂质，得到净化后的酵母细胞。
2.细胞破碎：通过化学方法或物理方法对细胞膜进行破坏，将细胞内的RNA暴露出来。
3.溶解RNA：加入适量的含有RNA保护剂（如二硫苏糖）的缓冲液，使RNA得到保护，不会受到核酸酶的影响，可以得到RNA溶液。
4.精制RNA：通过酚/氯仿提取及异丙醇沉淀的方法分离出纯化的RNA。
5.分析RNA：通过吸光度测定、电泳或荧光分析等方法检测RNA的纯度和含量。
酵母中RNA的含量测定可通过紫外吸收光度法进行。
该方法利用RNA在260nm处的吸收峰和RNA在280nm处的吸收峰的比值，来计算RNA的浓度。
其计算公式为：RNA浓度 = OD260值× 40 ug/ml × 稀释倍数其中，OD260值为RNA样品的吸光度值；40ug/ml为RNA样品在260nm处的吸收系数；稀释倍数为样品的稀释倍数。
除紫外吸收光度法外，也可以采用其他方法如电泳或荧光分析来测定RNA的含量。
总之，酵母中RNA的提取和含量测定可为酵母研究提供重要的实验基础和理论支持，为探索酵母生物学和基因工程等应用领域提供更为广阔的前景和新的研究突破。
酵母核糖核酸的提取及测定
酵母核糖核酸的提取及测定一、实验背景及目的核糖核酸(RNA)和它的降解物核苷酸、核苷及其衍生物在生物化学、医药、食品添加剂、农业等领域有着广泛的应用。
比如能够促进作物的生长，在水稻、小麦、柑橘及多种蔬菜生产中应用，取得了明显的增产效果。
像鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)还是强力助鲜剂，胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料。
而利用微生物资源提取氨基酸、核苷酸等生物小分子，具有成本低、非化学合成、无毒、无害的特点。
[1] 随着啤酒等发酵行业的快速发展，产生了相应的大量发酵副产物，如何利用这些副产物，既做到不污染环境，还能产生良好的经济效益，一直是研究的热点。
而啤酒废酵母中RNA含量达6%~8%，是生产RNA的较好原料，此外，抽提后的菌体蛋白质(占干菌体的50%)还具有很高的利用价值。
所以利用啤酒废酵母生产RNA形成了非常有益的产业链。
[2] 本实验目的就是学习从酵母中提取RNA的方法并掌握其测定手段。
二、实验原理微生物是工.业上大量生产核酸的原料，其中以酵母最为理想，酵母核酸中主要是RMA (2.67~10.0%)，DNA很少(0.03~0.516%)，菌体容易收集，RMA也易于分离。
RMA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去，再根据RNA等电点在pH2. 0~2.5的特点，将体系pH调至其等电点，使之沉淀，进行离心收集。
提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
稀碱法利用碱使细菌细胞壁水解，使RNA释放出来，浓盐法是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，RNA 钠盐易溶于水，在含盐的菌体溶液中，RVA有较高的溶解度。
二者均通过控制温度使蛋白质变性沉淀，通过离心将RNA及蛋白质和酵母菌体分离，进而在等电点沉淀RNA，从而达到提取目的。
本实验采用浓盐法(10% NaCl),是食品医药卫生领域制备RNA 制剂的经典方案。
实验三酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一目的了解并掌握稀碱
实验五酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一、实验目的1、了解并掌握稀碱法提取核糖核酸（RNA）的原理和方法；2、掌握苔黑酚显色法鉴定RNA组分的基本原理和操作方法。
二、实验原理酵母中含有丰富的RNA，含量达2.67%~10.0%，而DNA含量很少，仅为0.03%~0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
提取制备RNA的方法较多，一般有苯酚法，去污剂法、浓盐法和稀碱法等。
其中苯酚法是实验中最常见的方法。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
本实验用稀碱法提取RNA。
先用稀碱（本实验用0.04mol/L的NaOH溶液）使酵母细胞裂解，RNA可溶于稀碱溶液，在碱性提取液中加入酸性乙醇可使核糖核酸沉淀出来，由此即可得到RNA的粗制品。
RNA含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加入硫酸煮沸可使RNA水解，从水解液中可用定糖、定磷和加银沉淀等方法测出上述组分的存在。
三、仪器、试剂和材料1、仪器（1）100mL烧杯1个；（2）移液管：2.0mL1个，5.0mL1个，1.0mL4个；（3）量筒：10mL1个，50mL1个；（4）试管：15mL4个；（5）恒温水浴锅（6）离心机；(7）布氏漏斗；（8）抽滤瓶；（9）研钵；（10）滴管；（11）洗耳球；（12）电子天平。
2、试剂（1）0.04mol/L的NaOH溶液；（2）95%乙醇；（3）乙醚；（4）1.5mol/L的硫酸；（5）浓氨水；（6）0.1mol/L的硝酸银；（7）酸性乙醇溶液：0.3mL浓盐酸加入30mL乙醇中；（8）三氯化铁浓盐酸溶液：2mL10%的三氯化铁溶液加到400mL浓盐酸中。
（9）苔黑酚乙醇溶液：称取6g苔黑酚溶于100mL 95%乙醇中（可在冰箱中保存1个月）；（10）2.5%钼酸铵溶液3、材料干酵母粉四、操作步骤1、酵母RNA 提取称2g干酵母粉置于研钵中，加少许石英砂和2mL0.04mol/LNaOH溶液，在研钵中充分研磨，然后将匀浆液转移到100mL的烧杯中，再用8mL0.04mol/LNaOH溶液分两次洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中，沸水浴上加热30min，经常搅拌。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告目录1. 实验目的1.1 研究背景1.2 实验目的2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸2.2 分离技术3. 实验步骤3.1 样品制备3.2 离心分离3.3 纯化提取3.4 鉴定分析4. 实验结果与讨论5. 实验结论6. 参考文献1. 实验目的1.1 研究背景在细胞内，核糖核酸（RNA）是一种重要的核酸分子，其功能涉及到基因的转录和翻译。
酵母细胞中的RNA有着重要的生物学功能，因此进行酵母核RNA的分离与组分鉴定具有一定的研究意义。
1.2 实验目的通过实验，掌握酵母核RNA的分离技术，了解其基本组成和结构特点，为后续RNA在生物学领域的应用提供基础支持。
2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸酵母核RNA是一种由核糖核酸组成的RNA，主要参与酵母细胞内的基因表达和蛋白质合成过程。
2.2 分离技术本实验将采用离心分离和纯化提取的方法，通过差速离心将细胞裂解液中的酵母核RNA和其他细胞组分进行分离，再利用纯化技术进行酵母核RNA的提取。
3. 实验步骤3.1 样品制备准备酵母细胞样品，通过适当的处理方法制备得到待分离的样品。
3.2 离心分离采用差速离心技术，以不同细胞组分的密度差异进行分离，获得含有酵母核RNA的分离物。
3.3 纯化提取通过特定的纯化方法，将酵母核RNA从其他细胞组分中纯化提取出来，得到较纯的酵母核RNA溶液。
3.4 鉴定分析对分离得到的酵母核RNA样品进行各种分析技术，如凝胶电泳和质谱分析，确定其组分、纯度和结构特点。
4. 实验结果与讨论根据实验结果进行数据分析，探讨实验过程中出现的现象和可能的问题，进一步加深对酵母核RNA的理解。
5. 实验结论总结实验过程中取得的重要发现和结论，反思实验方法的可行性和局限性，为未来相关研究提供借鉴。
6. 参考文献列出本实验报告涉及的参考文献，方便读者进一步了解酵母核RNA分离及组分鉴定的相关知识。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定实验三酵母核糖核酸的提取及测定⽣物111 杨明轩1102040128⼀、研究背景及⽬的⽣物⼤分⼦通常指的是动物、植物和微⽣物进⾏新陈代谢是所产⽣的蛋⽩质、核酸等有机化合物。
它们不仅是⽣物科学⼯作者研究的重要对象，⽽且与化学、医学和⾷品等⼯业部门有着密切的关系。
核酸作为⽣命体常见⽽重要的⼤分⼦物质，它通过酶解或化学法⽔解可得到4个核苷酸，再经脱磷酸可得4种相应的核苷。
核酸构成遗传物质、传递遗传信息、构成核糖体和酶等⼤分⼦、合成多糖，与正常的⽣命活动密不可分。
医学家、诺贝尔奖得主富兰克研究认为，⼈体的⽼化是因其体内的核酸变质减少所致，可见核酸在⽣物正常发育中的重要性。
由于核酸在⽣命体中的物质构成、功能⽅⾯的作⽤，近100年来核糖核酸（RNA）被⼴泛应⽤与⾷品⼯业、医药⼯业和农业⽣产上。
在⾷品⼯业⽅⾯，RNA是开发新型⾷品调味品、保健品必不可少的原料；在医药⼯业上，RNA是⽣产治疗冠⼼病、肿瘤、⼼肌梗塞等疾病药物的原料；在农业上，RNA及其衍⽣物⼴泛⽤作农作物的⽣长促进物质。
⽽在这些领域，所需要的是并不是结构完整的RNA，⽽是其单体核苷酸。
因此，我们需要获得能够在⾷品医药卫⽣领域应⽤的核苷酸。
⽽核酸制品⽆⾮是利⽤其核苷酸或衍⽣物，因⽽⼯业上⽣产核酸的⽬的在于获得纯品核苷酸，以作为⽣产各种药物或测序分析等的原料。
在⼯业⽣产中，还常常考虑到利润和成本的问题。
因⽽实验室⾥提取核酸和将其放到⼯业⼤⽣产中是不同的。
⼯业⽣产对核酸制品的完整性要求不⾼，⽽注重其产率和成本。
考虑核苷酸分⼦的复杂结构，直接化学合成是⼗分困难的。
所以⽬前⼈们主要采取从⽣物体系中分离纯化RNA，将其⽔解并通过其他分离⼿段获得⼩分⼦核苷酸的⽅法。
本实验在于模拟⼯业⽣产的流程，探究提取酵母核糖核酸的⼯艺，掌握提取和测定酵母核糖核酸的⽅法，明确从⽣物体中提取RNA的思路和具体操作⽅法，了解产业开发的思路，体会⼯业化⽣产与实验室科研之间的不同。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、目的了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、原理酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材四、试剂和材料将2 mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400 mL浓盐酸中。
9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）。
10．定磷试剂 50 mL（1）17％硫酸溶液将17mL浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 mL水中。
（2）2.5％钼酸铵溶液将2.5g钼酸铵溶于100 mL水中。
（3）10％抗坏血酸溶液10g 抗坏血酸溶于100 mL水中，贮棕色瓶保存。
溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失效，需纯化抗坏血酸。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
17％硫酸溶液∶2.5％钼酸铵溶液∶10％抗坏血酸溶液∶水=1∶1∶1∶2（V／V）。
11．酵母粉 200 g五、操作将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。
将悬浮液转移至150毫升锥形瓶中。
在沸水浴上加热30分钟后，冷却。
离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。
注意要一边搅拌一边缓缓倾入。
待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟。
弃去清液。
用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。
沉淀可在空气中干燥。
取200 mg提取的核酸，加入1.5 mol／L硫酸溶液10 mL，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
1．嘌呤碱取水解液1mL加入过量浓氨水，然后加入约1mL0.1mol／L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
酵母核糖核酸
实验六：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、目的：了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、原理：酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、主要器材： 1．水浴2、离心机四、试剂和材料1．0.04 mol/L氢氧化钠溶液2．酸性乙醇溶液3．95%乙醇5．1.5 mol/L硫酸溶液6．浓氨水7．0.1 mol／L硝酸银溶液8．氯化铁浓盐酸溶液9．苔黑酚乙醇溶液10．定磷试剂11．酵母粉五、操作：将1g酵母悬浮于10mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。
将悬浮液转移至玻璃试管内。
沸水浴加热30分钟，冷却后移入到离心管内，离心(3000r/min)10分钟，将上清液缓缓倾人10mL酸性乙醇溶液中。
注意要一边搅拌一边缓缓倾人。
待核糖核酸沉淀完全后，移入离心管内，再离心(3000r/min)5分钟。
弃上清液。
用95%乙醇离心洗涤沉淀1次，弃乙醇后，得RNA沉淀。
将RNA沉淀从离心管内转移到一只试管中，然后向试管内加入1.5 mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加热10分钟，制成水解液，通过下述实验进行组分鉴定：1、嘌呤碱做三组对照实验：取3支试管分别进行如下操作（1）水解液1mL＋浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？（2）浓氨水1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无沉淀？（3）水解液1mL＋0.1 mol/L硝酸银溶液1mL，有无嘌呤碱的银化合物沉淀？2、核糖：取1支试管，水解液1mL ＋三氯化铁浓盐酸溶液2mL ＋苔黑酚乙醇溶液0.2 mL，沸水浴中3分钟。
注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
3、磷酸：取1支试管，水解液1mL ＋定磷试剂1mL，在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
酵母核糖核酸的提取和组分鉴定1
本实验采用稀碱法提取制备RNA,其原理是利用稀的NaOH溶液，将细胞 裂解， RNA溶于碱性提取溶液中，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质 与核酸分离，然后通过离心除去菌体等残渣，在上清液（碱提取液） 中加入酸性乙醇溶液使解聚的RNA沉淀，即得到RNA的粗制品。
核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可 使其水解，在水解液中用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组分 的存在。
2、 核糖：取1支试管加入水解液1ml，加FeCl3浓盐酸溶液2 滴管和苔黑酚乙醇溶液5滴，放沸水浴中，注意观察溶液是 否变成绿色，说明核糖是否存在。
3、 磷酸：取1支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1滴管， 在沸水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存 在。
结果与讨论：
1、用稀碱法提取RNA，如何得到高提取率的 RNA粗制品? 2、本实验RNA组分是什么?怎样验证的?
11、定磷试剂 (1)17％硫酸，将17m1浓硫酸(比重1. 84)缓缓加到83ml 水中。 (2)2．5％钼酸铵溶液：2．5g钼酸铵溶于100m1水中。 (3)10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮 棕色瓶内保存。 临用前将上述三种试剂与水按如下比例混匀： (1):(2):(3):H2O= 1:1:1:2（v/v），溶液呈淡黄色时可用， 如呈深黄或棕色则失效。
仪器
研钵、锥形瓶、量筒、布氏漏斗及抽滤瓶、 SHZ-D循环水式真空泵、电子分析天平、离 心机、恒温水浴箱等。
材料与试剂
1、活性干酵母 2、0. 04mol/L氢氧化钠溶液 3、酸性乙醇溶液 4、95％乙醇 5、乙醚 6、1.5M硫酸 7、浓氨水 8、0.1mol/L硝酸银溶液 9、三氯化铁浓盐酸溶液 10、苔黑酚乙醇溶液
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告引言：酵母核糖核酸（RNA）是一种重要的生物分子，具有多种功能。
通过对酵母RNA的分离和组分鉴定实验，我们可以更好地了解其结构和功能。
本实验旨在通过一系列实验步骤，从酵母细胞中分离出RNA，并对其进行组分鉴定。
实验材料和方法：1. 酵母细胞培养液2. 细胞裂解液3. 高速离心机4. RNase酶5. RNA提取试剂盒6. 紫外可见光分光光度计实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获：将酵母细胞培养液置于适宜的培养条件下，培养至细胞密度达到一定程度后，用离心机将细胞沉淀下来。
2. 细胞裂解：将细胞裂解液加入细胞沉淀中，充分裂解细胞膜，释放出内部的细胞器和分子。
3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行RNA的提取。
这一步骤主要是通过化学方法将RNA分离出来。
4. RNase酶处理：为了去除可能存在的DNA和蛋白质的污染物，可以使用RNase酶对提取的RNA进行处理。
5. 紫外可见光分光光度计测定：使用紫外可见光分光光度计对提取的RNA溶液进行测定，以确定RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过以上的实验步骤，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
在RNase酶处理后，我们发现RNA的纯度得到了明显的提高。
通过紫外可见光分光光度计的测定，我们确定了RNA的浓度。
酵母RNA的组分鉴定是一个复杂而重要的过程。
通过进一步的实验，我们可以对RNA进行凝胶电泳分析，以确定RNA的大小和分子量。
此外，我们还可以使用逆转录酶和聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，对RNA进行进一步的研究，以了解其在基因表达调控中的作用。
结论：通过本实验，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
这为我们进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
酵母RNA在生物学研究中具有重要的意义，对于深入了解细胞的基因表达调控机制具有重要的参考价值。
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定(实验报告)
生物化学实验报告实验三酵母核糖核酸的提取及测定一、研究背景及目的RNA（核糖核酸）属酸性高分子化合物，是遗传信息的载体，由数量不等的核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成。
由于RNA在细胞内能够行使各种各样的生物功能，参与蛋白质生物合成、调控基因表达、作为核酶催化生化反应活性等，对维持生物体的正常发育有着重要作用。
RNA制剂是以RNA及其衍生物为材料，经加工制成的产品，主要包括从富含RNA 的生物体中的提取物、自溶物或者降解产物加工制成的各种商品。
核糖核苷酸与其衍生物作为一大类RNA制剂，在生物体内有着诸多的功能，例如：ATP是细胞内的能量通用货币，cAMP作为第二信使传递胞外信号，CoⅠ、CoⅡ、CoA、FAD作为酶的辅因子在催化反应中起重要作用，UDP等作为单糖载体在糖代谢中起着重要作用等。
此外，鸟苷酸（GMP）和肌苷酸（IMP）是强力助鲜剂，胞苷酸（CMP）和尿苷酸（UMP）可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料；在化妆品中加入核酸或其水解物，可促进皮肤蛋白合成，达到养护皮肤的作用；在农业上，RNA降解物具有促进作物生长增产的作用，因此RNA制剂被广泛应用于医药、食品、农业、日化、环境保护等各产业，具有广阔的商业前景，形成了一大新兴产业。
[1]可见，无论是科研工作还是商业产品的生产过程，都需要大量的纯品RNA作为原料。
但是RNA的活化能较高，不易直接合成，而天然材料中的RNA往往与细胞内的其他化合物混在一起，故采用廉价、合适的手段分离纯化得到RNA就显得至关重要。
目前，人们已经摸索出来了多种多样的方法，这些方法各有特点，但其基本的思路和程序大致相似，基本战略也是有规律可循的。
本实验中，我们需要了解RNA制剂开发应用的前景和基本思路，掌握RNA分离纯化的设计思想及主要的操作细节，并以酵母为材料学习RNA提取和测定的基本操作方法。
二、原理1.选材即选取富含RNA的生物材料，微生物由于其原料的易获得性被广泛应用于工业上大量生产RNA的原料，本实验中我们以食品用干酵母粉直接作为RNA提取的原料。
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定—预习报告一、研究背景生物大分子物质通常是指动物植物微生物进行新陈代谢时所产生的蛋白质和核酸等有机化合物。
它不仅是生物科学工作者研究者的重要对象，且与化学、医学和食品等工业部门有密切关系。
在科研和医学方面，探讨结构与功能、防治某些疾病时常需要较纯的生物大分子物质。
然而这类物质往往与自然界存在的各种不同的化合物结合在一起或自身之间相互结合在一起，离体后稳定性较差，含量偏低，且提取的材料复杂，因此纯化的方法也很多。
微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中酵母最为理想。
本次实验以干酵母粉为实验材料，提取RNA，并测定其含量。
二、研究目标掌握核酸分离纯化的基本设计思想及主要操作细节和生物制品开发的基本思路。
三、研究策略酵母细胞中RNA通常与蛋白质结合。
要提取RNA就要破细胞壁，让它释放出来。
浓盐法通过改变细胞膜的通透性释放出胞内物质，然后沸水浴使RNA水解酶失活。
再通过调节pH将RNA充分沉淀，洗涤，干燥，测量。
四、研究方案及可行性分析浓盐法是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
提取RNA时需注意掌握温度，直接在90~100℃浸提，避免在20~70℃之间的时间过长，磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
洗涤沉淀时要反复抽提，离心以纯化RNA。
测定提取的核酸含量，只需测定组成核苷酸的任意一种组分即可。
碱基在260nm有光吸收，采用紫外吸收法可测定核酸含量。
五、具体实验设计1、所需主要材料：食品用干酵母粉；试剂：10%NaCl, 6MHCl , 95%乙醇，2%氨水，RNA沉淀剂（0.5g钼酸铵+193ml水+7ml70%过氯酸）；仪器设备：烘箱，离心机，天平，紫外分光光度计，移液器，恒温水浴锅，玻璃匀浆器，pH计。
主要器皿：研钵，离心管，容量瓶25ml 50ml；具塞试管；三角瓶；小烧杯。
2、具体操作步骤1.提取：称取7g酵母粉，于研钵中小心研磨成面粉状粉末，转移至三角瓶。
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定一.研究背景及目的核苷酸类物质及其衍生物是遗传工程、医药、食品、农业生产和科研领域十分重要的生化试剂和原料。
其功能有：二.原理微生物是工业上大量生产核酸的主要原料。
采取酵母因为核酸的提取不需要很高活性的菌体，酵母是啤酒厂废弃的原料，从经济角度讲，用来提取核糖核酸最为理想。
提取RNA的方法很多，常见的有如下几种：（本次实验采取浓盐法10%NaCl）核酸是由糖、碱基、磷酸以一定比例构成的，理论上定量核酸只需测定其中一种即可。
定磷法准确、微量、快速，是最好的方法。
紫外吸收法简单快速，但是当体系内有蛋白质及其他含共轭双键物质存在时干扰较大。
本次实验采用紫外吸收法。
基本的提取策略为：我们可以通过使用化学因素破坏细胞膜，使其中的核酸流出来，接着纯化、测定含量即可。
其中影响我们纯度和定量的主要因素就是蛋白质及有共轭双键物质的干扰，所以，我们的主要目标就是排除蛋白质和有共轭双键物质对含量测定的影响。
尽量保持RNA的完整性有利于提取率。
对于RNA酶的干扰，工业生产的流水化作业，使得人员参与较少，而且工业生产并不像实验室对RNA的完整性要求那么高，所以工业生产中RNA酶的存在不是主要矛盾。
三.仪器与试剂试剂：10%NaCl；6MHCl；95%乙醇（分析纯）；2%氨水；RNA沉淀剂仪器：722-分光光度计（上海分析仪器总厂）；微量可调手动移液器(大龙牌)；具塞试管（15ml）;漏斗（25ml一只，50ml两只）；研钵；匀浆器；低速离心机（飞鸽牌，TDL-40B，上海安亭科学仪器厂）；药物天平（HCTP12B1，北京宣武天平厂制）；硫酸纸；烘箱（）四.实验步骤按下表进行操作：五.数据整理与结果计算I.干燥RNA 样品含量：260260280一般RNA 的OD 260/ OD 280>2;DNAOD 260/ OD 280约为1.9；样品中有蛋白质含量较高时比值下降。
因此，可推断，该体系为RNA 且较纯。
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酵母RNA的提取及测定
姓名：张弛学号：201100140157 班级：生院2011级生物基地时间：2013年3月18日
实验目的
1、掌握稀碱法提取酵母RNA
2、了解测量核酸浓度不同方法的原理
3、掌握紫外吸收法测核酸浓度的原理和技术
实验原理
酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260nm处有最大吸收，且在一定浓度范围内吸收值与浓度成正比（5-45μg/mL），符合朗伯-比尔定律。
优点：样品用量少，不用显色，测完后样品可以继续使用。
试剂与仪器
材料：干酵母粉、0.2%氢氧化钠溶液、pH试纸（pH1-14）、标准核酸：200μg/mL 仪器：紫外分光光度计、精密电子天平、烧杯、量筒、离心机、移液枪、试管
实验步骤
1.提取：称取4g酵母，研钵中研磨成粉末，倒入200mL三角瓶中，然后加入40ml 0.2%NaOH溶液，混匀，沸水浴30分钟。
2.分离： 4000转/分，15min，保留上清液。
3.沉淀RNA：在上清液中加入40mL酸性乙醇，边加边搅拌，静置5min左右，再4000转/分离心，5min，保留沉淀。
4.洗涤纯化：用20mL95%乙醇分两次洗涤沉淀，每次洗后3000转/分离心5min；再用20mL无水乙醇洗涤两次，每次洗后3000转/分离心5min；收集沉淀
5.含量测定（紫外分光光度法）：准确称取0.2-0.25g样品核酸，加2mL0.2%氢氧化钠溶液和1mL水浸泡，再加入50mL左右的水调成糊状，转移至100mL烧杯中，用0.2%氢氧化钠溶液调pH至7，定容至100mL。
测定步骤：
取11支试管，编号，按下表加入试剂：
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
标准RNA/mL 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 0 0 0
水/mL
7.8
7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 4.0 4.0 4.0 待测液 0
4.0
4.0
4.0
摇匀，测定吸光值
实验结果
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 吸光值 0.001
0.144
0.243
0.30
5
0.419
0.519
0.60
4
0.715
0.278
0.26
8
0.274
样品RNA 平均吸光值=0.273
由图可知样品RNA 浓度（所测）=18.7μg/mL 稀释前RNA 浓度=18.7×2×50=1870μg/mL 100mL 溶液中RNA=0.187g RNA 含量=0.187/0.2411=77.6%
注意事项
1、沸水浴时，电炉下必须垫上大理石板，以防止桌面被烫坏。
2、第二次洗涤时，按理应当用无水乙醚来洗，但是乙醚极易挥发，过多吸入会产生危险，所以从安全考虑改用无水乙醇。
3、离心时液体必须对称放置，相对的两个离心管所盛物体必须质量相等，用天平校准。
4、测RNA 含量时，溶解样品先加入一部分NaOH 调成糊状，再加溶液定容。
5、测吸光度时，以5μg/mL 的试管为参照。
6、计算时注意稀释度。
思考讨论
1、RNA的吸光值与溶液的pH有关系，标准曲线是在一定pH下测出的，所以RNA 溶解后要将pH调至7.0。
2、实验中会有多次转移、离心、沉淀、洗涤，期间不可避免地有样品损失，肯定会造成RNA提取量降低。
3、核酸在260nm处有紫外吸光最大值，在RNA浓度为5-45μg/mL时，吸光值于浓度成正比，所以在溶解RNA后需要计算并稀释样品，使之浓度落在成正比的范围内，否则会使测量结果不准确。
4、在测定RNA样液时，要避免假重复，不是取第二次定容后的样品连续测量三次，而是取第一次定容后的样液取三次，分别再定容，分别测定，这样可以消除定容、移液时的误差，如果分别测定的结果相差较大，可以再取第一次定容后的溶液继续定容。
5、在测量吸光度时要选择好对比，用于校正。
可以选用蒸馏水或是5μg/mL的标准RNA溶液来做对照。
但考虑到吸光值与浓度成正比的范围是5-45μg/mL，而蒸馏水RNA的浓度不在这个范围内，所以最好选择5μg/mL的标准RNA溶液来最对照。