酵母菌DNA的提取
实验讲义
酵母菌的分离鉴定、固定化及酒精发酵酵母菌（yeast）是一类单细胞真菌。
一般呈圆形、卵圆形、圆柱形，其菌落呈乳白色或红色，表面湿润、粘稠，易被挑起。
酵母菌多数为腐生，专性或兼性好氧，广泛生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，例如水果、蔬菜、蜜饯的内部和表面以及在果园土壤中最为常见。
酵母菌在有氧环境下将葡萄糖转化为水和二氧化碳，主要用于馒头、面包等食品发酵；在工业上，酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）将葡萄糖、果糖、甘露糖等单糖吸入细胞内，在无氧的条件下，经过体内酶的作用，把单糖分解为二氧化碳和酒精。
此作用即酒精发酵。
C6H i2O6（葡萄糖）T 2 C2H5OH（酒精）+2 CO2 f 在酿酒酵母酒精发酵的生产和应用中，由于细胞破碎和酶纯化等操作往往导致酶活性和稳定性都受影响，从而降低产酒精效率。
而利用细胞固定化可以很好的解决这一问题。
微生物细胞固定化方法主要有三种：载体结合法，交联法和包埋法，其中固定包埋法是目前比较理想的方法。
包埋法就是将微生物细胞均匀地包埋在多孔的水不溶性的紧密结构中，细胞中的酶处于活化状态，因而活性高，活力耐久。
目前，利用聚乙烯醇（PVA）—海藻酸盐是包埋法中比较高效的一种，这种方法以PVA-海藻酸钠作为混合溶胶，将酵母细胞固定起来进行酒精发酵，不仅可以使细胞浓度增加，而且可以多次使用，减少了酵母培养增殖所消耗的糖分；操作简单、过程迅速、颗粒不粘连、颗粒强度大大提高，且增加了颗粒的生物活性和稳定性，因此可实现连续化生产，提高酒精生产效率。
【实验一】一、酵母菌的分离与培养一、【实验目的】学习用选择性培养基分离酵母菌。
二、【实验原理】大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH值为4.5〜6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，在液体培养基中比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离纯化出酵母菌。
酵母的dna提取实验报告
酵母的dna提取实验报告
（最新版）
目录
一、实验目的
二、实验材料
三、实验步骤
四、实验结果
五、实验讨论
六、实验结论
正文
一、实验目的
本实验旨在通过提取酵母的 DNA，研究酵母的基因组成，并为后续的基因工程实验提供 DNA 样本。
二、实验材料
1.酵母菌种
2.蒸馏水
3.乙醇
4.氯化钠
5.滤纸
6.蒸馏器
7.离心机
三、实验步骤
1.酵母菌种的准备：选用新鲜的酵母菌种，将其放入蒸馏水中，保持适当的浓度。
2.提取 DNA：将酵母菌种放入离心机中，离心一定时间后，取出上清液。
向上清液中加入适量的氯化钠，使 DNA 逐渐析出。
3.滤过：将析出的 DNA 溶液倒入装有滤纸的漏斗中，通过滤纸将杂质滤除。
4.洗涤：将滤纸放入蒸馏水中，反复洗涤，直至滤纸上的 DNA 纯净。
5.乙醇沉淀：将洗涤后的滤纸放入乙醇中，静置一段时间，DNA 会逐渐沉淀。
6.收集 DNA：将沉淀后的 DNA 收集起来，即为提取的酵母 DNA。
四、实验结果
通过实验，成功提取到了酵母的 DNA，实验结果符合预期。
五、实验讨论
在实验过程中，我们发现在加入氯化钠后，DNA 的析出速度较快，说明氯化钠对 DNA 的析出有一定的促进作用。
此外，通过多次洗涤和乙醇沉淀，我们成功地提取到了纯净的酵母 DNA。
六、实验结论
通过本实验，我们成功地提取了酵母的 DNA，为后续的基因工程实验提供了必要的材料。
酵母基因提取实验报告
一、实验目的1. 学习酵母基因提取的基本原理和操作步骤。
2. 掌握利用CTAB法提取酵母基因组DNA的方法。
3. 熟悉DNA纯化、定量和鉴定等实验技术。
二、实验原理酵母基因提取是通过物理或化学方法将酵母细胞中的DNA与蛋白质、RNA等杂质分离的过程。
CTAB法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA的结合能力，以及酚/氯仿等有机溶剂的界面作用，将DNA从细胞中提取出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：酵母菌（如酿酒酵母）、Tris-HCl缓冲液、NaCl、CTAB、酚/氯仿、无水乙醇、RNase A、DNA标准品、琼脂糖凝胶电泳系统等。
2. 仪器：高速离心机、恒温培养箱、紫外分光光度计、凝胶成像系统、电泳仪、微波炉等。
四、实验步骤1. 酵母菌培养：将酵母菌接种于YEP培养基中，于28℃恒温培养箱中培养至对数生长期。
2. 酵母菌收集：用无菌吸管吸取适量酵母菌培养液，转移到无菌离心管中，以8000 r/min离心5分钟，弃上清液。
3. 细胞裂解：向离心管中加入适量Tris-HCl缓冲液、NaCl、CTAB、酚/氯仿，混匀后室温放置10分钟。
4. 分相：将上述混合液转移至新的离心管中，以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
5. DNA纯化：向沉淀中加入适量Tris-HCl缓冲液、酚/氯仿，混匀后室温放置10分钟。
6. 分相：将上述混合液转移至新的离心管中，以12,000 r/min离心5分钟，取上清液。
7. 洗涤：向上清液加入等体积的无水乙醇，混匀后室温放置10分钟。
8. 离心：以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
9. 洗涤：向沉淀中加入适量70%乙醇，混匀后室温放置5分钟。
10. 离心：以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
11. DNA溶解：向沉淀中加入适量TE缓冲液，室温放置5分钟，使DNA溶解。
12. 定量：利用紫外分光光度计测定DNA的浓度和纯度。
酵母菌表面展示载体构建及转化
酵母菌表面展示载体构建及转化酵母菌表面展示系统是一种重要的生物学工具，可用于表面展示重要的蛋白质、肽段等分子，以扩大其在不同研究领域的应用。
酵母菌表面展示系统具有许多优势，如易于操作、高效表达、易于纯化等。
因此，构建和转化酵母菌表面展示载体是实施这种系统的关键步骤。
1. 酵母菌表面展示载体构建酵母菌表面展示载体通常由两个核心组成部分构成：酵母表面蛋白的扩大子和目标蛋白的插入序列。
以下是构建酵母菌表面展示载体的一般步骤：1.1 提取酵母菌基因组DNA：使用适当的方法从酵母菌中提取基因组DNA。
可以选择一种高质量的DNA提取试剂盒来确保DNA的纯度和完整性。
1.2 扩增酵母菌表面蛋白的扩大子：根据需要选择具体的表面蛋白扩大子，并使用聚合酶链式反应（PCR）扩增其序列。
需要使用具有相应限制性内切酶切位点的引物。
1.3 准备载体：选择合适的酵母菌表面展示载体，并使用同样的限制性内切酶切位点将其线性化。
线性化的载体将提供插入序列的位点。
1.4 进行反应与连接：将扩增的酵母菌表面蛋白扩大子与线性化的载体进行连接。
这一步可以在体外进行，使用DNA连接酶（例如T4 DNA连接酶）。
1.5 转化大肠杆菌：将连接好的载体导入大肠杆菌，并培养在含有适当抗生素的培养基上，以筛选带有目标载体的菌落。
1.6 纯化载体：从培养的重组大肠杆菌中提取目标载体，并使用DNA纯化试剂盒纯化。
2. 酵母菌表面展示载体转化转化是将目标载体导入酵母菌的过程。
以下是酵母菌表面展示载体转化的常见方法：2.1 胞壁酶处理酵母菌细胞：使用蛋白酶K等酶处理酵母菌细胞，使细胞壁变薄，提高载体的导入效率。
2.2 制备酵母菌细胞的质粒DNA：通过将酵母菌细胞进一步培养扩增，提取质粒DNA，并确保其质量和纯度。
2.3 酵母菌细胞的化学转化：通过将质粒DNA与聚乙二醇（PEG）或锌盐等化学物质一起处理酵母菌细胞，使质粒DNA进入细胞内。
2.4 酵母菌细胞的电转化：使用高压电脉冲将质粒DNA导入酵母菌细胞，通过瞬时破坏细胞壁和细胞膜，使DNA进入细胞。
酵母菌DNA
采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。
通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/" target="_blank">基因组DNA的提取一：仪器：同方法一二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前三：操作1.5ml 对数生长期细菌细胞离心，12000rpm,1-2min沉淀溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr离心，12000rpm,8-10min沉淀溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混匀 65℃,30min等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心,12000rpm,4-5min上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。
酵母抽提物是一种优良的天然调味料，在食品行业中具有广泛的用途。
对国内和国外酵母抽提物的发展状况做了分析，综述了酵母抽提物应用新进展酵母DNA的提取酵母DNA的提取 1. x新鲜的菌体中加入150ul（200ul）bufferiI25(30)ul蜗牛酶（30mg/ml），37度，10Min（可以30min水浴，中间隔5分钟，振荡一次，避免细胞沉到管底。
2. 离心10000rmp，10min，去上清，沉淀中加入bufferII250ul 3. 加入25ul，10%SDS。
酵母质粒的提取注意事项
酵母质粒的提取注意事项1. 实验前准备在进行酵母质粒提取实验之前，需要准备好所需材料和试剂。
常用的材料包括酵母培养物、细胞裂解液、酶切酶、离心管、离心机等。
试剂方面，需要注意购买高质量的试剂，并按照说明书的要求保存和使用。
2. 细胞培养与处理在进行酵母质粒提取实验之前，需要进行酵母菌的培养和处理。
首先，将酵母菌接种到含有所需培养基的琼脂糖平板上，培养一夜，然后挑取单个菌落转移到液体培养基中，继续培养至所需菌量。
此外，在进行酵母菌细胞处理时，需要注意细胞浓度的控制，避免浓度过高或过低对实验结果产生影响。
3. 细胞裂解与质粒提取酵母菌细胞裂解是酵母质粒提取的重要步骤。
一般情况下，细胞裂解可通过化学方法、机械方法或酶解方法实现。
其中，酶解方法常用于酵母菌质粒提取，具有操作简单、效果较好的特点。
在进行细胞裂解时，需要注意裂解液的选择和浓度，以及裂解时间和温度的控制，以确保细胞完全裂解，质粒DNA充分释放。
4. 质粒DNA纯化与保存在进行质粒提取后，需要对提取得到的质粒DNA进行纯化和保存。
纯化可以通过酚/氯仿法、硅胶柱纯化法或商用质粒纯化试剂盒等方法实现。
在选择纯化方法时，需要根据实验要求和样品特点进行选择，并根据说明书的要求进行操作。
纯化后的质粒DNA应及时保存，可以用TE缓冲液稀释保存在-20°C或-80°C的冰箱中，以避免质粒DNA的降解和损失。
5. 实验操作注意事项在进行酵母质粒提取实验时，还需要注意以下几点操作事项：- 实验室操作要严格遵守无菌操作的要求，以避免外源性DNA的污染。
- 实验过程中注意个人防护，佩戴手套、口罩和实验服，避免实验中的化学品对身体造成伤害。
- 实验前应仔细阅读所用试剂的说明书，了解其性质和使用方法，按照要求准确称取和调配试剂。
- 实验中的离心操作要注意离心管的放置位置和离心速度的选择，以避免样品的溢出和离心管的破裂。
- 实验后要及时清洗实验台面和相关器材，保持实验环境的整洁和无菌。
重组法酵母转基因的操作流程
重组法酵母转基因的操作流程1.酵母基因组DNA的提取酵母基因组DNA提取的目的是获取酵母菌体内的DNA用于后续的操作。
一般采用裂解酵母菌体的方法提取DNA，具体步骤如下：-通过酵母预培养，得到酵母菌悬浮液。
-沉淀酵母菌悬浮液，去除培养基。
-使用细胞裂解缓冲液裂解酵母细胞，释放DNA。
-使用丙酮沉淀DNA，去除其他杂质。
-通过洗涤、溶解等步骤得到纯化的酵母基因组DNA。
2.外源DNA的构建外源DNA的构建是将目标基因或其他DNA片段经过特定的操作，构建成可用于转基因的载体DNA。
-针对目标基因，进行PCR扩增或使用其他适当的方法获得目标DNA片段。
-将目标DNA片段与载体DNA进行连接，一般采用限制酶切和DNA连接酶的方法。
-外源DNA还可以构建其他特殊序列，如启动子、标记基因等，以实现特定的目标。
3.酵母菌体的转化转化是将外源DNA导入酵母中，使酵母细胞能够表达外源基因。
酵母菌体转化一般有两种方法：化学法和电转化法。
-化学法转化：-制备酵母靶菌株，包括选择合适的酵母菌株及对应培养基成分的调整。
-制备产生低盐胆固醇溶液和转化缓冲盐溶液。
-稀释酵母导入质粉末，并加入充足的低盐胆固醇溶液。
-在冰上孵育一段时间，将混合液通过热激冷冻的方法转移到电泳气泡中。
-通过勺子串入导入液，冻结导入液后，电泳电环泵注入电泳。
-电泳过程中伴有导入液的减量。
结束电泳时，针尾切割成小片。
-电转化法转化：-将酵母细胞培养至对应的生长期。
-调整酵母细胞浓度。
-准备转化缓冲盐溶液和性相为空凝气泡的溶液。
-将酵母细胞和目标DNA溶液混合。
-通过不同电压的电击法将酵母细胞进行电转化。
-回收转化后的酵母菌体并进行培养。
4.筛选转基因酵母为了筛选出成功转基因的酵母细胞，一般采用标记基因的方法。
-构建一个可表达特定筛选标记基因的转基因酵母菌株。
-将转化后的酵母菌种悬浮液培养在含有选择性的培养基中，使只有转基因酵母能够存活下来。
-通过对菌落进行PCR扩增或其他方法，确认是否成功获得目标基因的酵母菌株。
酵母菌纯培养的工艺流程
酵母菌纯培养的工艺流程酵母菌的纯培养工艺流程包括以下几个步骤：选择菌株、预处理、接种、培养、鉴定和保存。
下面将详细介绍每个步骤。
首先是选择菌株。
酵母菌是一类单细胞真菌，具有广泛的应用和研究价值。
在选择菌株时，需要根据研究目的或应用需求来确定，常见的有酒精酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）、乳酸酵母菌（Candida utilis）等。
菌株的选择应考虑到其生长速度、产酒或产酶性能以及适应环境的能力等因素。
接下来是预处理。
预处理主要是为了提高菌株的活力，减少杂菌的污染。
预处理包括以下几个步骤：首先，从保存菌株的冷冻管中取出菌株，迅速匀浆于含有营养成分的琼脂培养基上。
然后，将培养基平板置于培养箱内，在25-30下孵育一段时间，一般为24-48小时。
最后，选择单个菌落进行接种。
接种是将预处理好的菌株接入到适宜的培养基中。
接种有两种常用的方法：平板法和液体法。
平板法即将接种菌株均匀涂布在琼脂固体培养基的表面，利用孵育箱保持适宜的温度和湿度，待菌落生长形成后，可进行下一步操作。
液体法则是直接将菌株接入到含有适宜营养成分的液体培养基中，然后在转轴式摇床或培养箱中进行搅拌和培养。
培养是酵母菌纯培养的核心步骤，培养条件的选择对菌株的生长和代谢活性有直接影响。
通常，培养条件包括温度、pH值、浓度和类型的碳源和氮源等。
对于大规模的酵母菌培养，通常会在发酵罐中进行，控制发酵温度、pH值和各种营养物质的供应。
此外，还可以通过添加载体来提高酵母菌的产酶能力。
鉴定是为了确认所培养的菌株是否为纯培养。
鉴定常用的方法包括形态学观察、生理生化检测和分子生物学方法。
形态学观察是通过显微镜观察菌落的形状、大小和结构特征。
生理生化检测则是通过测定酵母菌在不同环境条件下的生长情况、代谢产物和酶活性等。
分子生物学方法则是通过提取酵母菌的DNA并进行PCR 扩增和序列比对来确认菌株的种属。
最后是保存。
为了保持酵母菌的活性和稳定性，需要进行保存。
(整理)酵母菌落PCR
酵母菌落PCR方法酵母菌落PCR方法，酵母菌落PCR方法，涉及提取DNA方法、PCR方法问：很郁闷，最近在做电转毕赤酵母，但是转化完了没有合适的筛选方法，如果提基组的话费时费钱，而且由我这个电转的几率十分低，也就有1%-10%，所以想用菌落PCR 方法筛选，但酵母菌破壁很困难，如果处理不好的话基组释放不出来，就没有阳性结果了。
查了一些资料说用反复冻融法，是不是直接挑单菌落就行了呢？还有说用蜗牛酶帮助消化的，这个我倒不是很清楚，所以请各位大虾们帮帮忙，在实在是被这个伤透脑筋了！求助十万火急！！！！！！！答：蜗牛酶提取DNA以后作PCR效果很稳定酵母DNA的提取1、x新鲜的菌中加入150ul（200ul）bufferiI25(30)ul蜗牛酶（30mg/ml），37度，10Min（可以30min水浴，中间隔5分钟，振荡一次，避免细胞沉到管底。
2、离心10000rmp，10min，去上清，沉淀中加入bufferII250ul3、加入25ul，10%SDS。
65度，30min水浴。
4、加入25ul 5mol/lKAC，冰浴60分钟（4度冰箱放置就可以）5、12000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不振荡，直接离心）6、12000rmp，15min，弃上清。
7、150ul，bufferIII溶液沉淀，12000rmp，15min8、将上清溶液转到干净的离心管中，加入6ul（10ug/ul），ran酶，37度，30min9、加入等积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶50ulbufferIII中10、如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提11、bufferI：0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA12、bufferII：50mmol/l Tris，20mmol/l EDTA13、bufferIII：10mmol/l tris，1mol/l EDTA14、筛选AD/BD可以直接使用抗生素筛选的方法酵母菌落PCR1、酵母质粒和基组DNAPCR模版的备取对数生长期酵母菌株 1.5ml，13000r/min，离心15s，去上清，双蒸水洗涤一次，13000r/min 离心15s，沉淀悬浮200ulTE缓冲液中，在沸水上煮1-10min，冰浴10min，13000r/min，离心5min，将上清液储存－20度取1ul用PCR2、从板上调取长势良好的菌落少许，悬浮含20ul无菌水的0.5ml eppendofff离心管中（离心管中央预先用注射器针头扎一个小孔，放置盖子受热膨胀）水浴煮沸0.2.5.10min3、利用微波炉快速备酵母治理以及菌落取直大3mm的酵母干菌落，至EP管中盖上盖子，在微波炉中加热，加入30ulTE振荡，13000r/min，离心2-5min，上清储存浴－20度，取1ul来作PCR真菌DNA的提取方法改良1、酵母活化后加入YEPD培养基，25-28度培养16-24小时，收集菌2、取少许新鲜的菌，加入0.6ml缓冲液I（0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA）1ml。
DNA的提取及鉴定
六、实验操作
1）粗提 1．称取猪肝 8g于100ml的小烧杯中，用剪刀剪碎，加 入2倍重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液 （16ml），高速匀浆。
2．将匀浆液（ ~25ml）转移到 100ml 离心管中，在 4000r/min下离心10min，弃去上清液。沉淀中继续加 入25ml缓冲液，搅拌均匀后于 4000r/min离心20min， 取沉淀。
2）分离DNP、除蛋白 3．将上述沉淀转移至 250ml烧杯中，加入 40ml0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液、 21ml氯 仿/异戊醇、4ml5%SDS，用保鲜膜封口，振摇 30min。
4．缓慢加入 3.6gNaCl （事先在研钵中研成粉末）使体 系终浓度为1mol/L。将混合液转移至离心管中于 3500r/min离心20min，取上清水相（用滴管吸取并量 体积）。
DNA鉴定或定量（二苯胺法）： 颜色反应可先完成标准曲线的制作，
或配置一个标准管。
(二)二苯胺法测定DNA含量
二、原理 核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和
分别针对DNA和RNA的颜色反应方法
本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在 酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该 物质在595nm有最大吸收，在40～400mg/mL范围内其 峰值与DNA含量成正比
DNA的提取及鉴定
一、动物肝脏中DNA的提取
一 . 实验目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取 DNA的原理和技术
了解分离提取DNA的一般原理
DNA的主要来源
1.动物组织及器官：脾、肝胚芽等 3.微生物：细菌、酵母菌等
核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形 式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA 主要存在于核仁及细胞质中。
酵母单杂交实验dna载体构建流程
酵母单杂交实验DNA载体构建流程1.引言酵母单杂交实验是一种常用的研究基因互作或蛋白相互作用的方法。
在酵母单杂交实验中，需要构建适合该实验的DN A载体。
本文将详细介绍酵母单杂交实验DN A载体的构建流程。
2.实验原理在酵母单杂交实验中，需要构建包含目标基因的D NA载体。
DN A载体的构建通常由以下几个步骤组成：2.1D N A提取首先，从参与实验的酵母菌株中提取D NA。
可以使用商业D NA提取试剂盒或自制D NA提取方法。
确保提取的D NA质量和纯度满足实验要求。
2.2扩增目标基因利用聚合酶链反应（P C R）方法，从酵母菌株的基因组DN A中扩增目标基因。
设计合适的引物，使扩增出的目标基因片段与DN A载体连接所需的限制性内切酶切位点相匹配。
2.3D N A片段连接将扩增出的目标基因片段与适当的DN A载体进行连接。
使用限制性内切酶切割目标基因片段和DN A载体，使它们产生互补的粘性末端，在适当的缓冲液中对其进行连接。
使用DN A连接酶催化连接反应，形成目标基因片段与D NA载体的连接产物。
2.4转化酵母菌将连接产物转化到酵母菌中。
通过电击法或化学法将连接产物导入酵母菌细胞中。
待酵母菌细胞经过恢复和选择后，转化出的菌落中将含有目标基因的DN A载体。
2.5验证构建成功进行酵母单杂交实验前，需要对构建的DN A载体进行验证。
可以通过限制性内切酶切、PC R扩增、测序等方法验证目标基因的正确连接和插入。
3.实验步骤根据上述原理，下面给出酵母单杂交实验D NA载体构建的详细步骤：3.1D N A提取-从酵母菌培养物中收集菌落。
-使用D NA提取试剂盒或自制方法提取DN A。
-检测D NA的质量和纯度，确保满足实验要求。
3.2目标基因扩增-根据目标基因序列设计引物。
-进行P CR反应，扩增目标基因片段。
3.3D N A片段连接-利用限制性内切酶切割扩增出的目标基因片段和DN A载体。
-在相关缓冲液中进行D NA片段连接反应。
PCR实验报告范文
PCR实验报告范文一、实验目的通过PCR技术，掌握PCR实验的基本原理和操作方法，同时将酵母菌基因进行扩增，验证PCR的效果。
二、实验原理PCR (Polymerase Chain Reaction) 是一种体外人工合成DNA的技术，能在数小时内大量扩增特定DNA片段。
基本原理是不断进行DNA的模板复制，其中关键剂量是DNA模板、引物、酶和核苷酸。
实验步骤：1.DNA模板制备：从酵母菌提取DNA，测定其浓度及质量。
2.引物设计及合成：根据目标基因的核酸序列，设计合成引物。
3.PCR反应体系配制：根据实验室配套试剂盒说明书配制PCR反应液。
4.PCR反应条件设置：根据实验室配套试剂盒说明书设置PCR反应条件和温度梯度。
5.PCR扩增：将PCR反应体系放入热循环仪进行扩增。
6.PCR产物电泳：将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
7.验证PCR效果：观察电泳结果，并进行PCR产物的测序验证。
三、实验步骤与操作方法1.DNA模板制备-取适量的酵母菌培养物，使用琼脂糖溶解酵母菌细胞壁。
-使用酸酶处理，释放DNA。
-使用PCR纯化试剂盒进行提取和纯化。
-使用试剂盒中提供的试剂测定DNA的浓度和质量。
2.引物设计及合成-根据目标基因的核酸序列，采用合成引物。
-PCR引物的设计需要根据目标基因的序列进行选择，并考虑引物的长度和互补性。
3.PCR反应体系配制-根据实验室配套试剂盒说明书配制PCR反应体系。
-将DNA模板、引物、酶和核苷酸按比例混合，加入PCR反应液中。
4.PCR反应条件设置-根据实验室配套试剂盒说明书设置PCR反应条件和温度梯度。
-设置PCR反应的时间和温度。
5.PCR扩增-将PCR反应体系放入热循环仪进行扩增。
-根据设定的PCR反应条件，进行PCR扩增，反复循环扩增。
6.PCR产物电泳-取适量PCR反应产物，加载到琼脂糖凝胶上。
-运行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA片段的扩增情况。
7.验证PCR效果-观察电泳结果，发现扩增出的DNA片段是否与预期长度相符。
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定实验三酵母核糖核酸的提取及测定⽣物111 杨明轩1102040128⼀、研究背景及⽬的⽣物⼤分⼦通常指的是动物、植物和微⽣物进⾏新陈代谢是所产⽣的蛋⽩质、核酸等有机化合物。
它们不仅是⽣物科学⼯作者研究的重要对象，⽽且与化学、医学和⾷品等⼯业部门有着密切的关系。
核酸作为⽣命体常见⽽重要的⼤分⼦物质，它通过酶解或化学法⽔解可得到4个核苷酸，再经脱磷酸可得4种相应的核苷。
核酸构成遗传物质、传递遗传信息、构成核糖体和酶等⼤分⼦、合成多糖，与正常的⽣命活动密不可分。
医学家、诺贝尔奖得主富兰克研究认为，⼈体的⽼化是因其体内的核酸变质减少所致，可见核酸在⽣物正常发育中的重要性。
由于核酸在⽣命体中的物质构成、功能⽅⾯的作⽤，近100年来核糖核酸（RNA）被⼴泛应⽤与⾷品⼯业、医药⼯业和农业⽣产上。
在⾷品⼯业⽅⾯，RNA是开发新型⾷品调味品、保健品必不可少的原料；在医药⼯业上，RNA是⽣产治疗冠⼼病、肿瘤、⼼肌梗塞等疾病药物的原料；在农业上，RNA及其衍⽣物⼴泛⽤作农作物的⽣长促进物质。
⽽在这些领域，所需要的是并不是结构完整的RNA，⽽是其单体核苷酸。
因此，我们需要获得能够在⾷品医药卫⽣领域应⽤的核苷酸。
⽽核酸制品⽆⾮是利⽤其核苷酸或衍⽣物，因⽽⼯业上⽣产核酸的⽬的在于获得纯品核苷酸，以作为⽣产各种药物或测序分析等的原料。
在⼯业⽣产中，还常常考虑到利润和成本的问题。
因⽽实验室⾥提取核酸和将其放到⼯业⼤⽣产中是不同的。
⼯业⽣产对核酸制品的完整性要求不⾼，⽽注重其产率和成本。
考虑核苷酸分⼦的复杂结构，直接化学合成是⼗分困难的。
所以⽬前⼈们主要采取从⽣物体系中分离纯化RNA，将其⽔解并通过其他分离⼿段获得⼩分⼦核苷酸的⽅法。
本实验在于模拟⼯业⽣产的流程，探究提取酵母核糖核酸的⼯艺，掌握提取和测定酵母核糖核酸的⽅法，明确从⽣物体中提取RNA的思路和具体操作⽅法，了解产业开发的思路，体会⼯业化⽣产与实验室科研之间的不同。
八年级生物教案：酵母菌和霉菌的实验研究方法和技巧
前言生物学是一门非常重要的学科，它不仅有助于我们了解自己的身体结构和内在机制，还能让我们更好地理解动植物的生命活动。
其中，酵母菌和霉菌是我们日常生活中比较常见的微生物。
本篇文章将介绍八年级生物教案中酵母菌和霉菌的实验研究方法和技巧。
一、酵母菌实验研究方法和技巧1.酵母菌的制备和培养酵母菌属于单细胞真菌，可以利用其进行实验研究。
在进行酵母菌实验前需要先进行制备和培养。
酵母菌培养需要一个培养基，通常使用的培养基是含葡萄糖、酵母提取物、海藻酸钠等成分YPAD培养基。
利用无菌技术，将培养基倒入无菌平板中，等待其凝固后，将酵母菌接种于其上，然后放置在恒温培养箱内进行培养，此时需要保持培养箱的温度在30℃左右，以此来促进酵母菌的生长繁殖。
2.酵母菌的观察酵母菌的观察需要使用光学显微镜，通常可以选择在100倍或400倍的倍数下观察。
用显微镜观察酵母菌时需要特别注意一些问题。
首先需要调整好显微镜的对焦，以确保观察的清晰度。
其次需要保持显微镜与酵母菌之间的距离适当，避免太近或太远导致观察失真。
需要注意培养盘之间的区分，避免混淆记录和数据。
3.酵母菌的实验操作利用酵母菌进行实验操作时，需要相应的仪器和工具。
比如酵母菌的DNA提取需要离心机、酶切酶、热循环仪等器材和试剂；酵母菌营养需求的实验需要精密的量取和加热等操作，这时需要使用到酵母菌营养需求实验装置等工具。
二、霉菌实验研究方法和技巧1.霉菌制备和培养霉菌是一种真菌，与酵母菌一样也可用于实验研究中。
进行实验前需要制备和培养霉菌。
霉菌培养使用的是静置法或霉菌谷法。
静置法是将霉菌接种在培养基上后静置，保持适当的温度和湿度，以便霉菌生长。
霉菌谷法是将霉菌在固体培养基上生长，将将其切成一定大小的块，然后将其放置在毛细管中，使其逐渐长成一根细长的霉丝。
2.霉菌的观察霉菌的观察同样需要利用显微镜，通常使用20倍和40倍的倍数进行观察。
霉菌观察需要注意样本的取样和准备，避免采样不当或准备不充分导致观察结果不准确。
酵母菌DNA的提取
酵母菌DNA的提取酵母dna提取方法方法一：石英砂法1、5000rpm×5min收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μl裂解液(50mmol/ltris-hclph8.0,180mmol/ledtaph8.0,1%sds,现配)中，加入3/10总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。
2、加入200μl5mol/lkac，冰浴8min；3、12000rpm×5min转移上清至新的离心管中；4、重新加入3mol/lnaac35μl，重新加入异丙醇200μl搅匀后冰浴8min，12000rpm×5min搜集结晶；5、200μlte溶解，加入rnase10μl，65℃水浴10min；6、加入200μl氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；7、柔情地拉苏特兰明150μl，重新加入20μl3mol/lnaac及375μl无水乙醇，搅匀后12000rpm×8min搜集dna；8、70%乙醇洗涤沉淀，吹干后te溶解，-20℃保藏。
方法二：蜗牛酶法1.注射于5ml的yepd培养基中在25℃-28℃震荡培育12-16h。
2.3500rpm离心5min沉淀细胞，用1ml的无菌水洗涤一次，再加0.5mlsolutionⅰ(1m山梨醇，0.1medta,ph=7.5)重悬。
3.迁移细胞至1.5ml的离心管中，重新加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min,以赢得原生质体。
4.最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅱ(50mmtris-hcl,20mmedta,ph=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl10%sds,混合65℃保温30min。
5.加入200μl5m醋酸钾，放于冰上30min。
6.最小输出功率Vergt15min，迁移上清液至代莱离心管中，用等体积的异丙醇结晶dna。
酵母菌DNA提取方法
1.将种子液接入100mL液体YPD培养基中培养48h。
2.离心获取湿菌体，用蒸馏水多次洗涤，放在60℃烘箱中烘干备用。
3.选用Eeup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒对DNA进行提取。
（1）取50-100mg新鲜大型真菌（如蘑菇）或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加入1.5mL离心管中。
加入200µL Buffer Digestion 和2µLβ-巯基乙醇，再加入20µL Proteinase K液体，震荡混匀。
56℃水浴1h至细胞完全裂解。
（2）加入100µL Buffer PF，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
（3）室温10000rpm离心5min，将上清转移到新的1.5mL离心管中。
（4）加入200µL Buffer BD，充分颠倒混匀。
（5）加入200µL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
（6）将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm温室离心1min，倒掉收集管中的废液。
（7）将吸附柱放回收集管，加入500µL PW Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（8）将吸附柱放回收集管，加入500µL Wash Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（9）将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
（10）取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50µL TE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。
提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
4.对提取的DNA进行PCR扩增。
5.对提取到的DNA进行琼脂糖凝胶电泳实验，检测DNA的提取情况。
酵母基因组DNA大量提取试剂盒使用说明
酵母基因组DNA大量提取试剂盒使用说明货号：D1910规格：10T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：D1910-10T保存RNase A1m1×5-20℃蛋白酶K1ml×5-20℃酵母破壁酶 1.25m1×5-20℃β-巯基乙醇 1.5m12-8℃山梨醇Buffer125m1RT溶液YA50ml RT溶液YB50ml RT漂洗液15ml×2RT洗脱液20m1RT吸附柱10个RT收集管20个RT说明书1份产品简介：酵母基因组DNA大量提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母基因组DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、在离心管中收集酵母细胞20-40ml(不超过109ce l1s)，10000rpm离心1min，尽量吸除上清。
2、酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入9ml山梨醇Buffer。
充分悬浮菌体，加入600ul 酵母破壁酶和100ulβ-巯基乙醇，充分混匀。
30℃处理1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。
3、10000rpm离心lmin，弃上清，收集沉淀。
4、向沉淀中加入5ml溶液YA，充分悬浮沉淀，向悬浮液中加入500ul的RNase A(10mg/ml)，充分颠倒混匀，室温放置10min。
5、加入500ul的蛋白酶K(10mg/ml)，充分颠倒混匀。
65℃水浴消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。
酵母菌落pcr流程
酵母菌落pcr流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!酵母菌落 PCR 流程。
材料:酵母菌落。
酵母菌 DNA 提取试剂盒。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
酵母DNA提取方法
方法一：
石英砂法
1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min 将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。
2、加入200μL 5mol/L KAc，冰浴8min；
3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；
4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇200μL混匀后冰浴8min，12000rpm×5min收集沉淀；
5、200μL TE 溶解，加入RNase10μL，65℃水浴10min；
6、加入200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；
7、温柔地取上清150μL ，加入20μL 3 mol/L NaAc及375μL 无水乙醇，混匀后
12000rpm×8min 收集DNA；
8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后TE 溶解，-20℃保藏。
方法二：
蜗牛酶法
1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在25℃-28℃振荡培养12-16 h。
2. 3500 rpm离心5min沉淀细胞，用1ml 的无菌水洗涤一次，再加0.5ml solution Ⅰ(1M 山梨醇，0.1M EDTA, pH=7.5)重悬。
3. 转移细胞至1.5 ml 的离心管中，加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min, 以获得原生质体。
4. 最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl, 20mM EDTA,pH=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl 10% SDS, 混合65℃保温30min。
5. 加入200μl 5M 醋酸钾，放于冰上30 min。
6. 最大转速离心15min，转移上清液至新的离心管中，用等体积的异丙醇沉淀DNA。
7. 室温下放置5min，离心10min，用70%的乙醇洗涤一次，真空干燥，用50ul pH=7.4 TE溶液溶解。
方法三：
蜗牛酶过夜处理法
将酵母接种到YPD培养基中30℃过夜培养16～18h，离心收集1.5mL，用灭菌水洗涤两次；加入600μL裂解液，35μL蜗牛酶，37℃消化过夜；加入饱和酚450μL，氯仿-异戊醇(体积比24:1)150μL，轻轻颠倒混匀使溶液成为乳状，并保持10min，3000r/min离心10min；吸取上清液，用氯仿-异戊醇(体积比24:1)450μL再抽提1次，10000r/min离心5min；取上清加入异丙醇800μL，－20℃静置30min；10000r/min离心5min，沉淀物用70%乙醇洗两次，自然干燥后溶于30μL TE缓冲液；加入0.5μL10mg/mL的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存。
方法四：
蜗牛酶反复冻融法
收集过夜培养16～18h的菌体1.5mL，加入500μLPBS溶液重悬菌体，12000r/min离心2min，用PBS重洗一次；将沉淀溶于35μL的蜗牛酶溶液中，加入65μL的PBS，45℃作用2h，加100μL裂解液，－20℃冷冻，然后室温振荡溶解，反复3次；向悬浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)轻轻混匀，然后10000r/min离心5min；取上清液，加入两倍体积的无水乙醇，轻轻混匀，室温放置5min；12000r/min离心10min，将沉淀溶解在100μL TE中；加入等体积的酚-氯仿-异戊醇(体积比25:24:1)，轻柔颠倒混匀，12000r/min离心5min，重复抽提1次；加1/10体积的3mol/L醋酸钠(pH5.2)，2.5倍体积的无水乙醇，－20℃放置30min；10000r/min离心5min，弃上清液，用70%乙醇溶液洗涤沉淀两次，室温干燥后用20μL TE溶解；加入0.5μL 10mg/mL的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存。
方法五：
溶解在100μL TE中；加入等体积的酚-氯仿-异戊醇(体积比25:24:1)，轻柔颠倒混匀，12000r/min离心5min，重复抽提1次；加1/10体积的3mol/L醋酸钠(pH5.2)，2.5倍体积的无水乙醇，－20℃放置30min；10000r/min离心5min，弃上清液，用70%乙醇溶液洗涤沉淀两次，室温干燥后用20μL TE溶解；加入0.5μL 10mg/mL的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存。
方法六：
1、配一个破菌缓冲液：
Triton X-100 2%（v/v）SDS 1%（w/v）
NaCl 100mM Tris-HCl（pH 8.0）10mM
2、把酵母细胞离心收集，加200ul的石英砂或玻璃珠，加入200μl的破菌液再加200μl的酚氯仿，涡旋一分钟，放在冰上一分钟，一共反复4次
3、加入500μl的ddH2O，涡旋，离心，抽上清和等体积的酚氯仿混合
4、涡旋，离心，抽上清和等体积的酚氯仿混合，重复4直到离心后两层之间没有蛋白出现
5、抽上清加1ml的无水乙醇，放在-20度30min
6、离心，抽上清，再用70%乙醇洗一次，真空干燥，用TE或ddH20溶解
方法七：
接种酵母到2.5ml 酵母试管培养基中(YPD培养基)，30℃，培养16～18h；取1.5ml 酵母培养液，室温下，1500 × g 离心5～10min 收集菌体；菌体用灭菌水洗1 次，1500 ×g 离心5min；菌体用200μl SCED(1mol/L 山梨醇、10mmol/L 柠檬酸钠、10mmol/LEDTA、10mmol/L DTT 二硫苏糖醇)溶液重悬，加入3 0μl 10mg/ml 溶菌酶(Lysozyme)37℃温浴1h；加入100μl 2%SDS 混匀，-20℃冰冻，然后室温震荡溶解，反复3 次；向悬浮液中加入150μl 5mol/L KAc(pH 8.9)轻轻混匀，然后10000r/min 离心5min；将上清转移到一新的1.5ml 离心管中，加入 2 倍体积的乙醇，轻轻混匀，室温放置5min 后12000r/min 离心10min；除去上清，将沉淀溶解在300μl TE(10mmol/L Tris-HCl，pH7.4，1mmol/L EDTA，pH8.0) 中，加入6μl RNase (10mg/ml)，37℃温浴30min；加入饱和酚和氯仿各150μl 充分混匀，然后10000r/min 离心5min；转移上清到新的1.5ml 离心管中，加入1/2体积的7.5mol/L NH4Ac(pH7.5)和等体积的异丙醇，-20℃放置20min 后12000r/min 离心10min；除去上清，加入300μl 70% 乙醇漂洗沉淀一次，10000r/min离心5min；风干除去乙醇，用2 0μl TE 溶解酵母DNA。