酶免疫试验的影响因素分析
酶联免疫吸附试验(ELISA)测定错误结果的原因分析
ELISA测定错误结果的原因分析ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。
但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。
本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：1．内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。
常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
（1）类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫（EliSA）是检验科目前常用的免疫学检测方法之一，其操作方便、简单，不须要特殊设备，使其在各级医院都可应用。
但如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性的结果。
因此了解影响结果的因素，是减少差错事故发生很必要的。
1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。
因为我们是为人服务的，所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。
如果在工作中出现了张冠李戴，就有可能造成严重后果。
其次文化素质和技术素质很重要，我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。
还要不断努力学习新的理论知识，努力提高业务水平。
有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折，在繁忙工作中有条不紊。
所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。
2标本处理因素实验室人员收到标本后应：“三查七对”，对不符合要求的标本和申请单拒收，合格标本及时分离血清，避免溶血。
提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分，对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始记录。
从冰箱取出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，充分混匀再用。
3操作过程的影响因素3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18～25℃），反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，各种条件必须符合要求。
3.2 正确使用加样器，加样器应垂直加入标本或试剂，避免摩擦包被板底部。
加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要一次性使用，加样次序要与说明书一致，否则易发生错误，造成实验重复性差。
3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大，洗涤次数不超过说明推荐的次数，洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。
不要让洗液造成孔间污染，导致假阴性和假阳性。
3.4 要保证加液量一致，我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确，滴瓶加液量不准造成显色不一，造成判断错误。
影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素分析
【 键 词 】 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 ； 乙型 肝 炎 ； 测 试 结 果 关 中图分类号 ：４ ６ Ｒ ４ 文 献 标 识 码 ： Ｂ 文章 编 号 ： ６ ２ ９ ５ （ ０ ８ １ — １ ９０ １ ７ — ４ ５ ２ ０ ） ９１ ８ — ２
８ ００ ） ３ ０ ２
随 着科 学 技 术 的不 断 发 展 ， 联 免 疫 吸 附 试 验 （ Ｌ Ｓ 酶 Ｅ Ｉ Ａ）
一
吸 嘴 ， 免 发 生 交 叉 污 染 。 加 酶 结 合 物 、 色 剂 和 终 止 液 时 可 避 显
步 法 检 测 乙 型 肝 炎 （ 称 乙 肝 ） 毒 （ Ｖ） 对 半 的 试 剂 、 下 病 ＨＢ 两
维普资讯
检 验 医 学 与 临床 ２ ０ ０ ８年 １ Ｏ月 第 ５卷 第 １ ９期
Ｌ ｂ Ｍｅ ｌ ， ｔ ｂ ｒ ０ ８ Ｖ １ ５ Ｎｏ １ ａ ｄＣ ｉ Ｏｃｏ ｅ ０ ； ｏ ． ， ． ９ ｎ ２
影 响 酶联 免 疫 吸 附试 验 结 果 的 常见 因素 分 析
不是 一 个 反 应 步 骤 ， 却 也 决 定 着 实 验 的 成 败 。Ｅ Ｓ Ａ 就 是 但 ＬＩ
告， 由此 会 出现 血 液 凝 固不 完 全 （ 样 时 会 带 动 血 球 ） 血 细 胞 取 、
靠 洗 涤 来 达 到 分 离 游 离 和 结 合 酶 标 记 物 的 目 的 。通 过 洗 涤 以
方 法 已成 熟 ， 其 方 法 简 便 、 敏 度 高 、 异 性 强 、 验 条 件 要 因 灵 特 实 求 不 高 而 被 各 级 、 类 医 疗 机 构 广 泛 采 用 ＿ 。尽 管 Ｅ ＩＡ 一 各 １ ］ ＬＳ 步 法 在 一 定 程 度 上 解 决 了 临 床 需 求 ， 面对 人们 日益 严 格 的要 但 求 仍 存 在 一 定 的 差 距 。 除 了 其 方 法 学 上 的 缺 陷 之 外 ， 响 影
影响酶联免疫吸附试验操作显色原因分析
２ 如１ 篇文稿 已以全文方式在某刊物发表 ， 除非文种不同， 否则不可再将该文投寄给本刊。 ３ 请 作者所在 单 位在 来稿介 绍信 中注 明该 文稿 有无 一稿 两投 问题 。
非特异性假 阳性或假 阴性 ， 但我们可以通过分析并采取相关 措施把非特异性显色或假 阴性 降至最低 限度 ． 从而提高检测 的准确性 ， 得到更稳定更可靠 的实验结果 。
（ 稿 日期 ：０ １１ －３ 收 ２ １ －１ ） ２
・
作 者 ・ 者 ・ 者 ・ 编 读
对 一 稿 两 投问 题 处 理 的 声 明
ｍａ ｌ ９４，９ ３ ： １—１ ． ｔ ，１ ９ １ （ ）２ ０２ ６ ｏ
２０ ， ０ ４ ：２ —３ ． ０ ７ １ （ ）８ ３８ ７ ２
［３ ＪｙＣ ， ｕｔ ， ａｎｒＤ ｅ ａ． Ａ ｒｖｅ ｆｑ ａｉ ｆｉ ｎ １］ ａ Ｌ Ｂ ｔ Ｚ Ｌ ｄ ｅ Ｐ，ｔ １ ｅｉｗ ｏ ｕｌｙｏ ｆ ｉ一 ｔ ｌｅ
ｃ ｓ ｔ ｎ ｅ ｏ ｓｒ ｔ ｅ ｂ ｅ ｓ ｕ ｇ ｒ ｏ ｍｅ ｉ ａ ｄ ｒ ｃ ｎ ｔ ｉ ｒ ａ ｔｓ ｒ ｅ ｙ： ａ ｓ ｓｅ ｔｃ ｒ ｖ ｅ ｃ ｕｃ ｖ ｙ ｔ ｍａｉ ｅ ｉｗ
［ ］ Ｆ ｌ Ｙ Ｋ ａ Ｋ Ｄ ｒ ａ ｌ ｙｌｅ ｕｌｙｉ ｅ Ｄ Ｑ ） ａ １ ４ ｉ ａ Ａ ， ｈ ｎＧ ． ｅ ｔｏ ｆ ｑ ａ ｔ ｎ ｘ（ Ｌ Ｉ ： ｎｙ ｍ ｏ ｇ ｉ ｉ ｄ
ｑ ａｉ ｆｉ ｌ ｉ ｌ ａｃｒｔａｓＪＣｉ Ｅ ｉｅ ｏ，０ ０ ５ ｕ ｌｙｏ ｆ ｉ ｃ ｎｃ ｎ ｅ ｌ． ｌ ｐｄ ｍｉ ２０ ，３ ｔ ｌｅ ｎ ｉ ａ ｃ ｉ ｒ ｎ ｌ （ ）４ １４ ８ ５ ：５ —５ ．
酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法
成污染或效价降低 ， 可引起假 阴性 ， 因此应尽量 用新鲜标本 。 冰
冻标本应避免反 复冻融 ， 因冰冻标本 的反 复冻融产生的机械力
查找原因可能是这批试剂在进入科室前储存温度出现了问题，
与试剂商联 系更换新 的批号试 剂后 ， 此现象 消失 。
对标本中的蛋白分子有破坏作用 ， 可引起假 阴性鹳 。
箱 中取 出， 检测 时试剂盒可与室温平衡。 ２ 标本因素
吸附试验 。该试验用 已知抗原检测未知抗体 ， 或用 已知抗 体检
测未知抗原 ， 虽 然操作 简便 ， 但影响 因素诸多 ， 一个环节出现问 题， 都可能会导致检 测的失败 。现将 酶联免疫吸附试验常见影 响因素及处理方法总结如下。
酶联免疫 吸附试验 的常见影 响因素及处理方法
董 文婷
（ 夏县人民医院 ， 山西 夏县 Ｏ ４ ４ ４ Ｏ ０ ）
临床免疫室开展的乙肝系列 、 丙肝抗体 、 艾滋病抗体 、 梅毒
特异性检测等 日常检测工作 ， 最 为常用 的检测方法 为酶联免疫
疫 吸附试验 中， 试剂准备最关键的是使试剂盒在使用前 与室温 平衡 ， 以满足检测要 求 ， 一 般检测前 ３ ０ ｍ ｉ ｎ即应将试剂盒从 冰
的质量 ， 试剂盒从 出厂到用户手 中 ， 均要历 经运输 （ 如送检 、 检
定、 发货等 ） 及运输 中的储存 环节 ， 某一环节 不当 ， 均影 响试 剂 盒 的临床使 用质量 。去年 我科有一段 时间所做 的表面抗 原项
目， 今天阳性 ， 同一份标本 明天复检有可能是弱 阳性甚 至阴性 ，
结 果 比 较 ｑ值 分 别 为 １ ． ９ ７ ， ２ ． ０ ４和 １ ． １ ２ ， Ｐ均 ＞ ０ ． Ｏ ５ 。
酶联免疫吸附试验的影响因素分析及控制方法
的方法 是 ： 要注 意 采血 手 法 ， 心 速度 ， 育 温度 ， ① 离 孵 避 免 组 织 液 过 多 的 进 入 血 液 。 ② 采 用 二 步 法 操 作 可 以 排 除 Ｈ 对 Ｅ ＩＡ的 影 响 。③ 良好 的 洗 涤 效 果 可 减 少 ｂ ＬＳ
非 特异 吸 附 的干扰 。
事 ， 能 有 丝 毫 差 错 ， 须 克 服 一 切 困 难 ， 得 最 满 不 必 取 意 的效 果 。
参 考 文 献
１ Ｃ ａ ｏ Ｈ ． ， ａ ｃ Ｗ ． Ｃａｎ ｚｏ ｈ ｍｐｉｎ Ｒ Ｓ ｃｏ Ｊ， ｒ ａｚ Ａ ． Ｔ ｅ Ｊ， ｈ Ｔｒｕ Ｓ ｏｅ． ａ ｍａ ｃ ｒ
３ ｍ ｎ 热 血 清 使 Ｃ ｑ 活 ‘ 溶 血 的 影 响 主 要 是 反 应 ０ ｉ加 ｌ灭 。 板 对 血 清 中 Ｈｂ 非 特 异 性 吸 附 和 细ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胞 内 液 对 血 清 的 的
１ １ ＬＳ ． Ｅ ＩＡ是 将 酶 的 催 化 作 用 与 抗 原 抗 体 免 疫 反 应 相 结 合 的 一 种 分 析 技 术 ，低 温 试 验 材 料 影 响 抗 原 与 抗 体 免疫 反 应的特 异性 ， 降 低酶 本 身 的催 化 活性 ， 也
从 而 影 响 实 验 结 果 ， 故 从 冷 藏 环 境 中 取 出 的 试 剂 及
稀 释 作 用 。 具 有 类 过 氧 化 物 酶 活 性 ， 以 辣 根 过 氧 Ｈｂ 在
化 物 酶 为 标 记 的 Ｅ ＩＡ测 定 中 ，如 果 反 应 板 非 特 异 性 ＬＳ 吸 附Ｈ ｂ而 残 留 ， 可 催 化 底 物 显 色 引 起 假 阳性 。 制 则 控
热 变 性 ＩＧ的 固 相 吸 附 剂 处 理 。 ③ 检 测 抗 原 时 ， 可 用 ｇ ２ 基 乙 醇 加 入 到 标 本 稀 释 液 中 使 Ｒ 降 解 。 补 体 的 一巯 Ｆ
酶联免疫试验法检测梅毒的影响因素及结果分析
ＡＢ Ｓ Ｔ ＲＡＣ Ｔ ： ０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ — ｌ ｉ ｎ ｋ ｅ ｄ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ ｓ ｙ ｐ ｈ ｉ ｌ ｉ ｓ ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ
ｒ ｅ ｃ ｏ ｇ ｎ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ ｓ ｙ ｐ ｈ ｉ ｌ ｉ ｓ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ ｎ ｅ ｇ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ． Ｅａ ｃ ｈ ｉ Ｓ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ． ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ Ｏｎ ｅ ： Ｐ ｌ ａ ｃ ｅ ｔ ｈ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎ ｉ ｎ ａ ｒ ｅ ｆ ｒ ｉ ｇ ｅ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｔ ４ ｏ Ｃ ｏ ｖ ｅ ｍｉ ｇ ｈ ｔ 。 ｎｄ ａ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ； Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ Ｔ１ 】 ｌ ， ０ ： Ｄｏ ｎ ｏ ｔ ａ ｄ ｄ ｎ ａ ｎｔ ａ ｉ ｃ ｏ ａ ｇ ｕ ｌ ａ ｎ ｔ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ；Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ： Ａｄ ｄ ｔ ｈ ｅ ＥＤＴＡ ａ ｎ ｔ ｉ ｃ ｏ ａ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｃ ａ ｕ ｓ ｅ ｓ ｖ ａ ｒ ｙ ｉ ｎ ｇ ｄ ｅ ｇ ｒ ｅ ｅ ｓ ｏ ｆ ｈ ｅ ｍｏ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ｏｒ ｆ ｐ ｌ ａ ｓ ｍａ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ． Ｕｓ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｏ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｏｒ ｆ ｓ ｙ ｐ ｈ ｉ ｌ ｉ ｓ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｉ ｅ ｓ ． Ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｂ ｅ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｎ ｅ ｘ ｔ ｄ ａ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｌ １ ． ４ ％， ２ ０ ． ５ ％， １ ． １ ％， ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ Ｏ ｄ ０ ｆ ａ ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｗａ ｓ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｔ ，
酶免检测技术原理及影响
2、反应环境条件： 电解质 酸8·碱5度g/LNaCl溶液
酸碱度 pH6--9为宜
温 度 温最适度温度为37℃
.
11
二、酶免疫技术的分类、特点及原理
.
12
1、酶免技术的分类
.
酶 免 疫 技 术
酶免疫组化 组织切片或其它标本中抗原的定位
均相 1、酶放大免疫测定技术EMIT 2、克隆酶供体免疫分析CEDIA 小分子激素、半抗原测定
2加样量不一致3孵育时间不一致4洗涤条件不同5操作人员不同阳性对照不显1把终止液误当作酶结合物或底物使用严格按试剂说明书操作加液时看准标签正确稀释洗涤液不要漏加试剂2漏加试剂如酶结合物底物a3蒸馏水被污染或盛洗涤液桶被污染留有使酶失活的物质换用合格水盛蒸馏水的瓶子要洁净现象可能原因解决方法1底物失效或被污染更换底物2加好底物后在保温时受强光或紫外线照射显色时避光保温3反应时间过长准确定时4水浴箱温度过高调准水浴箱温度5加酶量过多50ul误当100ul
.灰区是客观存在的，没 有不存在灰区 的试剂， 我们只是尽量减少灰区的 出现比例。 .减少灰区最有效的方法 就是尽量将板洗涤干净。
.
33
五、ELISA法检测常见问题及解决方法
.
34
ELISA实验常见问题及解决方法
内源性标本因素 ：
p 类风湿因子：一般为IgM型，可与变性IgG Fc段非特异结合，因此可能与包
.
35
现象
可能原因
解决方法
1、试剂盒未平衡至室温 2、水浴箱温度不到37℃
实验前试剂盒置于室温平衡30分钟 以上
调整水浴箱温度至37℃ 孵育期间不宜多开门
3、孵育时间不够
显 色 4、样品加样量偏少
淡 5、酶结合物加样量偏少
影响酶联免疫检测因素的分析
实验室人 员的素质主要包括五个方面 ： 思想素质 、 文化 素质 、
技术 素 质 、 理 素 质 、 体 素 质 。首 先 应 具 备 一 个 良好 的 思 想 素 心 身
量保证体系 ， 在操作过程 中时刻 注意 ， 质控贯 穿到 整个实 验过 将
程， 包括待标本 的采集 、 输 、 运 处理 、 操作 过程 、 检验 结果 的审核 、 结果 的登记 与保存 、 报告单 的发放等 全过程 ， 而为 临床提供 正 从 确可靠的检测结果。
中外 医学 研 究
２１ ０ ０年 １ 第 ８卷 １月
第２ ５期 Ｃ Ｉ Ｅ ＥＡ Ｄ Ｆ Ｒ Ｉ Ｎ ＭＥ ＩＡ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ Ｈ Ｎ Ｓ Ｎ Ｏ ＥＧ Ｄ Ｃ ＬＲ Ｓ Ａ Ｃ
毫 曩 ≯≥ ≯≯曩 曩≯≯ 曩 曩 嚣 ≯≯≯ 曩 ∥≯ ≯≯簪 曩 ∥
０≯分曩 ≯≯≯
影 响 酶联 免 疫 检 测 因素 的分 析
黄 培 胜
崇左市人 民医院（ 西 崇左 ５ ２ ０ ） 广 ３２ ０
【 关键词 】 影响 ； 检测 ； 酶联 免疫
酶联免疫 吸附试验 （ ＬＳ 是 目前 临床 上最 为常用 的免 疫 Ｅ ＩＡ） 测定方法之一 ， 由于 Ｅ ＩＡ方法灵敏 ， 异性 强不需要特殊设备 ， ＬＳ 特 所 以被广泛应用于各种 抗原 和抗体 测定 Ｊ 。但在 临床 实验检 测
中 ， 常 出 现不 同 的 检 验 科 ， 同 的 检 测 人 员 所 测 定 的 检 测 结 果 经 不
３ 操作 过程的影响因素 ３ １ 操作前 应 对 实验 的物理 参 数 有充 分 的 了解 ， 环境 温 度 ． 如 （８℃ ～ ５℃ ） 反应孵育温度是否符合实验要求 。 １ ２ 、
酶联免疫吸附试验的影响因素
酶联免疫吸附试验的影响因素酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
它的原理是通过特异性抗体与抗原结合，再利用酶标记的二抗介导的颜色反应，来定量分析和检测目标物质。
在进行ELISA实验时，有多个因素会对实验结果产生影响，下面将详细介绍其中的几个主要影响因素。
1.试剂的质量ELISA实验的试剂质量对实验结果至关重要。
这包括酶标记抗体和底物酶的纯度、活性，抗原或抗体的纯度和浓度，以及稀释缓冲液的组成和pH值等。
选择高质量的试剂可以提高实验结果的准确性和重复性。
2.样本处理和储存条件样本的处理和储存条件也会对ELISA结果产生影响。
样本的收集、保存和处理方法需要标准化，以确保稳定性和一致性。
如血液或组织样本的离心速度、温度和时间等要控制一致。
另外，样本的冻结和解冻过程也需要避免反复，以防止损坏细胞结构和影响实验结果。
3.特异性抗体的选择ELISA实验需要选择特异性抗体与目标抗原结合。
抗体的选择要考虑其亲和力、特异性和纯度等特性。
如果抗体不够特异性，可能会导致非特异性结合和假阳性结果。
因此，在实验中选择合适的抗体对实验结果至关重要。
4.孵育条件和时间孵育条件和时间对ELISA实验结果也起着重要影响。
这包括孵育温度、时间和摇床的震荡速度等。
不同的试剂和实验需要不同的孵育条件。
孵育温度过高或过低，孵育时间太长或太短，都可能导致结果的偏差。
5.光度计的精度和校准ELISA测量实验结果时需要使用光度计，光度计的精度和校准对结果的准确性和可重复性至关重要。
定期检查和校准光度计以确保其准确性，并遵循使用指南来保持恒定的测量条件。
6.数据分析和计算ELISA实验得到的数据需要进行合理的分析和计算。
如对标准曲线进行拟合和计算待测样品的浓度等。
合理的统计分析和数据处理能够提高实验结果的可靠性。
酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒标志物的影响因素及存在问题
Ｄ ： ０ ３ ６ ／ ．ｓ ． ６ ２ ９ ５ ． ０ １ ０ ． ８ 文 献 标 志 码 ： 文 章 编 号 ： ６ ２９ ５ （ ０ １ ４ ５ ２ １ ． ２ ０ ６ ｓ Ｂ １ ７—４ ５ ２ １ ）２０ ５—２
３ ３ Ｃ Ｐ与 骨 关 节 疾 病 （ ） 助 鉴 别 诊 断 关 节 痛 、 痛 和 ． Ｒ １帮 肌 不 典 型 背 痛 ； ２ 可 用 于 风 湿 病 的处 理 ； ３ Ｃ Ｐ可 用 于 骨 关 节 （） （） Ｒ
ｍｅ ｓ ｒｍｅ ｔ ｆＣ ｒ ａ ｔ ｅ ｐｏ ｅ Ｃ Ｐ ［ ］ Ｂ ｎ ａ ｕ ｅ ｎ —ｅ ｃｉ ｒ ｔｉ Ｒ ） Ｊ ． ｒＪ Ｇｅ ｏ ｖ ｎ（
自２ 世 纪 ８ ０ ｏ年 代 以来 ， 酶联 免 疫 吸 附试 验 （ Ｌｓ 以 其 Ｅ ＩＡ） 灵 敏 度 较 高 、 异 性 较 好 、 格 低 廉 、 展条 件 要 求 不 高等 特 点 特 价 开 在 各 级 医学 实 验 室 得 到 了广 泛 应 用 ， 别 是 对 于 乙 型 肝 炎 病 毒 特 （ Ｖ） 志 物 （ Ｖ Ｍ） ＨＢ 标 ＨＢ 的检 测 ， 目前 国 内 大 多 数 实 验 室 均 采 用 Ｅ ＩＡ 一 步 法 ， 操 作 简 单 ， 其 检 测 结 果 的 准 确 性 容 易 受 ＬＳ 其 但 到多 种 因素 的 影 响 ， 已成 为各 级 医 院实 验 室 最 易 引起 纠纷 的 检 测 项 目 。本 文 结 合 临 床 工 作 对 Ｅ ＩＡ 检 测 ＨＢ — 的影 响 因 ＬＳ ＶＭ
ｎｏ ｔｃ ｃ ｕ ａ ｙ ｆ ｓ ｉ ａ ｃ ｒ ｃ ｏ ｂａ ｔ ｒａ ｐｈ ｒ ｇｉｉ ｂｙ ｃ ｅ ｉｌ ａ ｙ ｔｓ ｎｅ ｒ ａ ｉｎ ｓ ａ ｐ ｔｅ ｔ
酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法
酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是一种常用的实验技术，用于测定样品中特定蛋白质或抗原的浓度。
然而，在进行ELISA实验时，存在许多可能影响实验结果的因素。
本文将介绍一些常见的影响因素及如何处理这些问题。
1.样品质量：样品质量是影响ELISA实验结果的一个重要因素。
如果样品质量不合格，可能会导致错误的实验结果。
处理方法包括：-选择合适的样品储存条件，避免样品的变性、降解等问题。
-对样品进行适当的纯化和浓缩处理，以提高样品的纯度和浓度。
2.抗体选择：在ELISA实验中，正确选择适合的抗体也是非常重要的。
处理方法包括：-确保抗体的特异性和亲和力，避免与其他非特定蛋白结合。
-对抗体进行亲和纯化，以提高抗体的纯度和活性。
3.反应条件：ELISA实验中的反应条件包括温度、时间、pH等，这些条件的选择直接影响到实验结果的准确性。
处理方法包括：-对反应条件进行优化，确定最佳的温度、时间、pH等参数。
-控制反应时间，避免反应过长或过短而引起实验结果的偏差。
4.检测方法：ELISA实验中常用的检测方法有酶标记物检测、放射性同位素检测、荧光检测等。
不同的检测方法对实验结果的影响也不同。
处理方法包括：-选择合适的检测方法，根据实验的目的和需要进行选择。
-对检测方法进行优化和标准化，以提高检测的准确性和灵敏性。
5.交叉反应：ELISA实验中，样品中的其他成分可能会引起交叉反应，导致实验结果的误差。
处理方法包括：-使用对特定抗原具有高度特异性的抗体，避免与其他非特定抗原结合。
-对样品进行适当的稀释，以减少交叉反应的可能性。
6.数据分析：ELISA实验的数据分析是实验结果的重要环节。
处理方法包括：-使用适当的统计方法对实验数据进行分析，确定浓度或活性的可靠性。
-进行实验重复和平行实验，以确保实验结果的可重复性和准确性。
酶联免疫吸附试验过程中的影响因素分析
ＥＬＩＳＡ 的灵敏度＞ｌｎｇ／ｍ［水 平 卜，因此 ，标 本问的污染要 尽量避 免 ，尤其不 应 与生 化试验用 一管标 本 ．最起码 应先做免 疫后做生 化 ． ２ 试 剂 的 影 响
不』一Ｊ厂家生产的 试剂灵敏度 特 异性 存在一定 的差别 ，资料显示 ， 不 同厂家试剂的特 异性和敏感 性分别为 ８９．４％－９９．３％，７８％－８９％存 在较 大差异Ｉ Ｉ。有的厂家 酶标 板扎 间吸光度 （Ａ）值人 丁 ｌ５％；标记 酶的 活性及显 色液的稳定比较差 。使用 质劣的试剂必然导致 结果的假 阳性 或假 阴性 。
９６４Ｌ酶杯板结 构特别 ，易产生边缘效 应 ，抗原抗体结 合及酶促 反应
对温度有严格 要求 ，酶标 板周 围及 内部 扎升降温速 率不 ，造成周边 Ｌｊ 部孔结 果差异 ，干浴 与水浴 存在 明 的差异 ，尽 可能使 用水浴 ，并要
求 相板 放入水 中 ，水的高 度以浸过小 孔 １／３处为 宜 ，孵育温 度为 ３７ ℃ ± １℃为宜 ，时 间 为试 剂 ｜兑明书为 准 ，如反应 时 间长 ，会造成 整板本 底 高 ，阳性 率高 。为避 免蒸 发 ，板 卜应 加 。 ３．４ 洗板
Ｃｈｉｎａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ＼
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占 ｌ、
酶联免疫 吸附试验 过程 中的影响 因素分析
周 守 勤 贾小 群 枨作 清 杜 小娟 李 玉敏 马 笑讼
酶联免疫吸附试验影响因素的分析
【关键 词 】 酶联 免 疫 吸附 试 验 ； 临床 标 本 ； 血 清 样 本
中图 分 类 号 ：Ｒ４４６．６
文献 标 志 码 ：Ｂ
文 章 编 号 ：１６７２—９４５５（２００７）１０—９８５—０２
ＥＩ ＩＳＡ 法 以微 孔 板 条 为 固相 的 测 定 模 式 ，操 作 非 常 简 单 ， 其 技 术 条 件 要 点 包括 ：试 剂 的制 备 ，反 应 条 件 的 选 择 和 操 作 标 准 化 。影 响 因素 一 般 涉 及 到 样 本 的 收集 保 存 、试 剂 准 备 、加 样 、 温 育 、洗 板 、显 色 、比色 、结 果 判 断 和 结果 报 告 及 解 释 等 方 面 ，其 中任 一 步 骤 的不 当都 会 影 响测 定 结 果 ，现 分 述 如 下 。 １ 临床 标 本 的 收 集 和 保存
维普资讯
检 验 医学 与 临床 ２００７年 １Ｏ月 第 ４卷 第 １Ｏ期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００７，Ｖｏｌ ４，Ｎｏ １０
９８５
４．２．２ ｗＢｃ假 性 降 低 的 因 素 Ｗ ＢＣ凝 集 素 或 非 特 异 性 凝 集 素使 Ｗ ＢＣ变 性 破 坏 及 临 床用 免 疫 抑 制 剂 的 尿 毒 症 患 者 等 。 ４．３ 影 响 ＰＬＴ的 因 素 ４．３．１ 血 小 板 假 性 升 高 的 因素 （１）末 梢采 血 时 ，非 血 液 成 分 的污 染 ；（２）微小 ＲＢＣ或 ＲＢＣ 碎 片 ；（３）ＷＢＣ特 别 是 白 血病 细 胞 的碎 片 ；（４）细菌 人血 或 污 染 ；（５）溶 血 不 全 ；（６）冷 球 蛋 白血 症 的沉 淀 物 ；（７）尘 粒 等 。 ４．３．２ 血 小 板 假 性 降低 的 因 素 （１）抗 凝 不 充 分 ；（２）血 液 细 小 凝 结 ；（３）ＩｇＧ 或 ＩｇＭ 凝 集 素 与血 小 板 ＥＤＴＡ 依 赖 性 凝 集 ； （４）糖 尿 病 患 者 高 凝状 态等 。 同 时 ，糖 尿 病 高 凝 状 态 对 血 小 板 体 积 、血 小 板 压 积 、血 小 板 分 布 宽 度 均 有 影 响 。
酶联免疫吸附试验技术的影响因素分析
Ｒ Ｃ贫 血 ； Ｖ 值 正 常 ， 只 有 Ｈｂ Ｒ Ｃ的 比值 小 ， 就 要 考 Ｂ ＭＣ 而 ／Ｂ 那
２ 讨 论
分 析 和质 量控 制 ， 实 验 结 果 和 直 方 图 异 常 的 提 示 ， 明原 因 ， 对 查 排 出 十扰 ， 以便 获 得 准 确 的 实 验 数 据 。 参 考 文 献
２ １ 冷 凝 集 （ Ａ） 称 冷 型 自身 抗 体 ， Ａ 自身 或 ０ 型 人 的 ． Ｃ 又 Ｃ Ｒ Ｃ 多 发性 骨髓 瘤 ， 些 支 原 体 、 Ｂ病 毒 感 染 患 者 ， 中 含 Ｂ 。 某 Ｅ 血 有 冷 球 蛋 白可 使 血 中非 晶 体 物 质 聚 集 。 这例 冠 心 病 患 者 ， 因 受凉而加重心 累、 嗽 ， 咳 双肺 感 染 。但 支原 体 阴性 ， 白细 胞 总 数
体 内 的 水 体 量 要 大 且 保 持恒 定 。使 用 恒 温 箱 温 育 时 ， 除保 证 恒 温 箱 内温 度 为 ３ ７℃ 外 ， 应 注 意 尽 量 少 开 启 恒 温 箱 门 ； 育 时 还 温
微 孔 反 应 板 不 要 叠 加 。 微 孔 反 应 板 不 要 置 室 温 温 育 。 严 格 按
的 一 检 测技术 ， 种 因其 具 有 敏 感 性 高 、 异 性 强 、 作 简 单 等 优 特 操
点 ， 广 泛 应 用 于各 种 抗 原 和 抗 体 的测 定 ［ 。 为辅 助 ｌ 诊 断 被 ＝ １ ］ 临床
与牛 物 科 研 起 到 了 积 极 的推 动 作 用 。 笔 者 从 事 检 验 工 作 多 年 ， 深 知 Ｅ Ａ 测 定 中 影 响 因 素 较 多 ， 作 过 程 中 每 个 环 节 都 会 ＩＳ Ｉ 操
酶联免疫吸附试验检测结果的影响因素和应对措施
３小
结
护理安 全是患者 的基 本需要 ，是 医院生存 的根本 ，是护理管理 的 重要 内容 ；护 理人员是护理活动 的执行者 ，也 是护理安全不可 或缺的
一
每一位 护士作相应 的指导 ，做 到 “ 一对一 ”指导 ，能够更好更快地提
高护 士 的护理 文 书的 书写水 平 。医 院还可 组织 了 “ 护理 文 书修改 活 动” ，每 个科室选 出两位护理 人员针对护理 文书 中存在 的 问题进 行抢
录 时添加 了过 多 的主观 判断 ，从 而破 坏 了护理 记录 的原 始性 、客观 性及真 实性 ］ 。护 理部 应定期组 织护士学 习并掌握 护理文 书的规范 写 法 ，提 高护理文书 的书写水平 ，保 证记录 的真实完整 。还可成立护理
文书写作 小组 ，帮 助年轻护士 纠正护理 文书书写 中出现的 问题 ，针对
理 人员树立 良 好 的人生观 、价值观 。
［ ４ ］ 余 云 红． 低 年资护 士在 临 床护理 工作 中潜 在的不安 全 因素与管理
各 种主客 观因素 的影响下 ，可 影响检测结果 的准确性 。为此 ，笔者 总 结 分析Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验操 作各个环 节 中容易 出现的 问题 和注意事 项 ，以不
１试 剂 的准 备
目前 各种 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试验 均有 商 品化 的专 用试剂 盒 。应选 择质 量优 良、有批准文号 的检测试剂 ，试 剂必须在有效期 内使 用 ，实际操作 时 严格 执行试剂 说明书。试剂从冰箱取 出后 ，应放 在室 温或３ ７℃条件 下 ３ ０ ｍｉ ｎ 再进 行检测 。保存 试剂盒 的冰箱 应经常检查储存 温度并做好记 录 ，冰箱应避 免频繁开关 。试剂使用前应摇匀 。 ２标 本 的采 集和 保存 血站Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验所 用标本均 为血清 ，临床 上使用 的标 本还包括 经
酶联免疫吸附试验检测艾滋病病毒抗体的失控原因分析
酶联免疫吸附试验检测艾滋病病毒抗体的失控原因分析艾滋病毒是一种可致命的病毒，导致艾滋病的发生。
艾滋病毒的传播方式主要是通过血液、精液、阴道分泌物等体液传播。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的检测艾滋病病毒抗体的方法。
但在现实运用中，ELISA检测存在失控现象，这会对艾滋病防治工作产生重要影响。
本文将结合生化原理和实际应用情况，探讨ELISA检测失控的原因并提出相应的解决策略。
ELISA的原理是利用抗原和抗体的特异性结合反应，通过特异性结合的酶标记抗体来确定特定抗原或抗体的存在。
可分为直接ELISA、间接ELISA和竞争ELISA等不同类型。
ELISA是一种高效、敏感性较高且易于自动化的技术，被广泛应用于临床检测和科研领域。
在ELISA检测中，失控（false positive或false negative）是一种常见的问题。
失控可能会导致假阳性或假阴性结果，这对检测结果的准确性和可靠性造成很大影响。
主要原因有以下几方面：1. 操作不当ELISA是一种精密的检测方法，其中任何一步操作不当都可能导致结果失控。
例如抗原或抗体的配制、试剂的储存、反应条件的控制（温度、时间等）等方面的操作问题，都可能出现失控。
2. 抗体的选择ELISA检测AC抗体，关键在于选择合适的抗体，而不同的抗体的性能和特性差异较大，往往也决定了检测结果的准确性。
因此在抗体的筛选和鉴定过程中要十分谨慎，并进行适当的验证。
3. 抗原的纯度抗原的纯度是保证检测准确性的重要因素之一。
如抗原的纯度不足时，特异性抗体可能与零星分离的杂质靶分子结合，产生假阳性结果。
4. 污染ELISA的空白对照是保证负对照的有效手段。
但是，若在实验中发生技术上的污染，如盲样污染、实验器具污染等都可能导致假阳性结果等现象。
针对上述失控问题，相应的处理策略是：1. 操作人员与操作培训ELISA检测操作人员必须配备经验丰富、熟练掌握操作要点的人员。
培训尤其关键，可以借助模拟实验、调查方法、案例分析等方式，提高操作人员的技能、意识和责任心。
影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法
影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法摘要】酶联免疫吸附试验是免疫酶技术中固相酶免疫测定的一种技术。
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但是操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大，如不注意排除干扰因素，有可能导致显色不全、花板等现象。
现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。
【关键词】酶联吸附试验影响因素【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）09-0369-021 试剂的因素1.1 试剂的选择试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。
虽然国家采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关，但不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别，要选购知名度相对高、具有“三证”的试剂，不要用无批号的试剂，最好选用与仪器配套的试剂。
更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。
使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。
因此。
选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。
1.2 试剂的准备在临床实验室，对试剂的准备一般不太注意，通常的做法是在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此，在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20～30 min后，再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度，以满足后面的测定需求。
2 样本的因素2.1 标本严溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本禁用。
2.2 标本的污染菌体可能含有内源性辣根过氧化物酶，可使实验出现非特异性显色。
因此，ELISA检测宜采集新鲜标本，如不能当时测定，5 d之内应4℃保存，1周后检测应低温冻存；同时，收集标本采用无菌试管，可防止标本的污染。
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三可能影响测定结果的标本因素
标本含有干扰酶免疫测定，可以出现假阳性和假阴性 结果的因素，分为两类，即内源性和外源性因素。
（一）内源性干扰因素 内源性干扰因素：一般包括类风湿因子、补体、高浓 度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、 因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体、交叉反 应物质等。在日常的临床血清（浆）检测中，有相当 比例的标本不同程度含有上述各类干扰物质，导致测 定结果的假阳性。
二、患者准备及标本采集
对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注 意收集时间及体位有可能会对测定结果产生影响。
如：可的松在早晨4：00～6:00之间，会有一峰值出现； 生长激素、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以阵 发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在 密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值 为测定值；又如当从卧位变为立位时，血清中肾素活 性将出现明显增高。再如治疗药物的检测，应根据药 代动力学选择服药后的最适时间采血检测。
需要使用其他方法如：重组免疫印迹（rerconbinant im munoblot assay，RIBA）、蛋白印迹(Western blot，WB)或中 和试验来确认，才能报告阳性。
HBsAg的测定主要是弱阳性的问题，即“灰区”，处 于cut-off值周围即“灰区”，其结果的可靠性通常较 差，阳性当然需要确认，阴性却也未必是真，这一点 在血站筛检献血员血液时非常重要，须引起注意，并 采取相应的措施，防止此类严重影响人们健康的传染 性疾病经输血传播。
1．类风湿因子(rheumatoid factors，RF)的影响
在类风湿患者、其他疾病以及正常人血清中，常含有 较高或不同浓度的RF，RF一般为IgM型，亦有IgG和 IgA型，RF具有与变性IgG产生非特异结合的特点，因 为在ELISA测定中，其可与固相上包被的特异抗体IgG 及随后加入的酶标的特异抗体IgG结合，从而出现假阳 性结果。尤其是在捕获法IgM型特异抗体的测定中，因 为此时固相包被的抗体为抗人μ链抗体，IgM型RF的存 在可使其大量结合于固相上。为避免RF对ELISA测定的 干扰，通常可以采取下述措施：
酶免疫试验的影响因素 分析
酶免试验 的优点和局限性
酶免技术是临床免疫检测中应用最广的 主导技术。
优点：特异性强、灵敏性高、操作简便、 试剂稳定，对环境没有污染威协。
局限性：检测所用生物学样本如血清中 有可能存在各种干扰实验的因素，而且 在实验过程中影响结果的因素也很多， 尤其是进行手工的ELISA法测定时。
阳性判定值(CUT-OFF)的建立
在一定的统计学基础上建立的，相对于某个具体的受检者有 可能并不具备正确性。
ELISA方法检测抗HCV、抗HIV及HBsAg时，检测所得的阳性结 果也许并不是真正的阳性，因为抗HCV和抗HIV的检测均使用 病毒的部分基因工程抗原，而其它一些病毒如：流感病毒、腮 腺炎病毒和水痘病毒等感染人体后，或一些自身抗体，也可导 致假阳性结果。
ELISA法测定是免疫实验室最常用的手 工操作方法，是以微孔板条为固相的测 定模式，操作简单，涉及到标本的收集 保存、试剂准备、加样、温育、洗板、 显色、比色、结果判断和结果报告及解 释等方面工作，其中任何一个步骤的操 作不当都会影响测定结果的准确性。
一 临床标本的收集和保存
ELISA测定的临床最常用标本是血清、 血浆，因特定的检测目的，也用到脑脊 液、尿液、粪便、唾液等标本。目前临 床上使用血清（浆）标本测定的标志物， 一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿 瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子 和治疗药物等。
(4)测定抗原时，可在标本中加入可使RF降解 的还原剂：如2一巯基乙醇，2一巯基乙醇等还 原剂可使抗体内的巯基裂解，可以去除RF的干 扰，但只应用于抗原的测定。
现在，一些特异IgM检测ELISA试剂盒要求直接检测，不需要稀释 标本，这样虽然方便了实验室的操作，但容易出现假阳性结果， 某些慢性感染，如HBV的感染，血循环中抗HBc IgM可持续以一 定的滴度存在，标本不做稀释即进行检测，可出现假阳性结果， 从而失去抗HBc IgM用于HBV急性感染的诊断价值。因此，建议 实验室使用要求对标本做1：1000稀释的试剂盒，从而保证相应 检测结果的可靠性及临床应用价值。
（1）稀释标本：用于判断急性病原体感染的特异IgM抗体，如 抗HAV IgM，抗HBc IgM中。
TORCH的IgM抗体检测尤其重要，在急性感染时，血循环中特异 的IgM抗体滴度通常很高．而RF滴度通常相对较低，在测定前对 标本进行稀释，特异的IgM因高滴度存在仍可检出，而非特异的 RF会因为稀释成非常低的滴度，对测定结果几乎不产生干扰。
抗原抗体的特异反应，检测抗原时，需要（单抗或双 抗）是特异的外，还要求抗原上必须存在能与所用抗 体相结合的抗原决定簇，如果基因突变导致某些位点 的不表达，或结合位点因某些原因被封闭或阻断，都 会影响抗体与抗原的结合，造成假阴性结果。
检测抗体时，则要求所用包被抗原应尽可能包 含所有的特异抗原决定簇，同时又尽可能不含 有非特异成分，这一点由于技术水平的限制而 难以完全实现，因此，假阳性、假阴性不可能 完全避免，可以通过努力，尽量将其降低至最 低限度，这也是我们建立临床免疫检测新方法 的努力方向。
（2）改变酶标抗体：由于RF结合的是IgG的Fc 片段，如果将待酶标抗体的Fc片段酶切去除、 仅留下具有特异结合功能的F（ab’）2部分切 记酶，则在测定中即可避免干扰。
（3）标本中RF用变性IgG预先封闭：将经热变 性(63℃，10 min)的动物如兔、羊等的IgG加 入到标本稀释液中，或是将该变性IgG连接至 一颗粒固相如聚苯乙烯微球或微孔，然后加入 临床血清标本，反应后，再吸出标本进行检测。 此外，在测定特异IgM时，也可使用抗人IgG去 除临床标本中RF和IgG。