5章 凝集(免疫学)
免疫学实验教案
实验一凝集反应一、目的要求学习和掌握用试管凝集反应测定抗血清效价的方法。
二、实验说明细菌、螺旋体、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在有适量电解质存在的情况下，抗原颗粒相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
参加反应的抗原称凝集原，抗体称凝集素。
三、实验材料1．试剂抗原、石炭酸生理盐水、阳性血清、被检血清、阴性血清。
2．器材及其他载玻片、小试管（1 cm×6.5 cm）、试管架、移液管、吸管、水浴锅。
四、方法步骤1．玻片凝集实验（1）在载玻片两端各滴一滴大肠杆菌菌悬液。
（2）在一端的菌悬液中加入一滴1:10稀释的大肠杆菌抗血清，另一端悬液加入一滴生理盐水。
（3）将载玻片小心地振动使混合液混匀后静置于室温，数分钟后便可观察到加抗血清的一端产生凝集块，而另一端生理盐水对照没有凝集块产生。
若反应不明显，可放入培养皿中（皿内放入湿滤纸，以保持一定湿度），37℃保温30 min后观察结果。
亦可将载玻片放置显微镜下，凝集块明显可见。
2．试管凝集试验（1）抗血清的稀释抗血清稀释采取倍比稀释法。
取干净小试管7支，排列在试管架上，依次注明号码，每支试管用移液管加入0.5 ml生理盐水。
（2）按下表操作用0.5%石炭酸生理盐水，将待检血清稀释成4个稀释度，5、6、7管分别设为抗原对照、阳性对照和阴性对照。
（3）加入抗原各管中加入抗原0.5ml，充分混匀。
（4）抗原抗体反应把各管混合液振摇混匀，置37℃水浴箱中水浴4 h或在室温中过夜，观察结果。
（5）结果观察与效价判断①生理盐水对照管中的抗原（细菌）应分散，无凝集块沉淀而呈混浊菌悬液。
②实验管如有凝集，管底可见到凝集块，液体上部澄清、半澄清或混浊度降低，管底凝集块轻摇即浮起，呈片块状。
③凝集强弱的判断（以“+”表示）“-”：细菌不被凝集，液体混浊、无透明度，管底无伞状沉淀，但由于菌体自然下沉，管底中央出现圆点状沉淀，振荡时复呈均匀混浊状态。
“+”：液体透明度不明显（25%清亮），25%菌体凝集，管底有少许不明显的伞状沉淀。
实验五 凝集反应—医学免疫学实验指导
医学免疫学实验指导实验五凝集反应由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。
BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。
BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。
BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。
【实验目的】1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。
2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。
【实验用品】1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。
2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。
【内容和方法】一、玻片凝集试验(slide agglutination)1.原理玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。
此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。
5章 沉淀反应(免疫学)
3.方法评价
操作简便。 灵敏度较高，比双扩高约10倍。 分辨率低于双扩。
4. 临床应用
常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴 定等
(二) 火箭免疫电泳
火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中
加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形
似火箭，故称为火箭电泳。
1. 基本原理
一、透射免疫比浊法
（transmission turbidimetry）
(一) 基本原理
抗原抗体结合后形成的CIC引起液体介质出 现浊度改变，光线的透过量减少，被吸收 光线量与CIC形成量呈正相关，依所测吸光 度值推算待测抗原的量 。
二、散射免疫比浊法
（nephelometry）
1967年， Ritchie等
方法稳定、简便的方法，不需特别仪器设 备，重复性好，但灵敏度稍差(1.25mg/L)。
（四）临床应用
1．血清学诊断:出现沉淀线，表明存在相应的Ag或Ab.
2.
免疫化学分析:浓度、分子量、纯度、反应性 沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；反之则反
出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单 一成分。可用于鉴定抗原或抗体的纯度。
三、速率抑制免疫比浊法
(rate inhibition immunoturbidimetry)
是一种竞争性结合试验，主要用于测定半抗原和 药物等小分子物质。
试验时先将一定量的已知半抗原-载体（大分子） 与限量的特异性抗体发生反应，生成的免疫复合 物可形成一定的速率散射峰值。
待测抗原与抗体竞争结合，速率散射峰值降低， 降低程度与标本中的待测半抗原成正比。
第5章 沉淀反应 Precipitation
免疫学实验整理
免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
(完整版)免疫学及免疫学检验学+题库答案
一、名词解释第1章概论1.免疫学：2.免疫分子：3.补体：4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应：6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence）10.最适比（optimalratio）11.带现象（zonephenomenon）第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原(immunogen)13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb)第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应免疫学及免疫学检验试卷第1页（共13页）20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫免疫学及免疫学检验试卷第2页（共8页）42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应(GVHR)60.血清学分型法二、填空题。
免疫学及免疫学检验试卷第3页（共13页）第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学。
免疫凝集实验
生物检测作业免疫凝集试验免疫凝集试验颗粒性抗原与相应抗体特异性结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象，成为凝集反应。
直接凝集试验病原菌（如细菌、螺旋体等）颗粒性抗原与相应抗体特异性混合后，在适量电解质存在的条件下，经过一定的反应时间后，出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。
试验中的抗原称为凝集原；抗体称为凝集素常用的实验方法有玻片法和试管法。
1、玻片法：——细菌薄片凝集试验将已知的抗体滴加于洁净的载玻片或凹玻片孔内，自加入待检病原体悬液混合均匀，同时做生理盐水或正常血清对照。
放置室温内数分钟后即可观察实验结果，出现颗粒状凝集者为阳性反应。
优点：其操作简便、迅速，适用于血型鉴定及微生物的菌种鉴定和分型等。
特别是诊断肠道传染病时用于鉴定病人标本中肠道杆菌的感染。
细菌薄片凝集试验：（1）实验目的：该试验用于菌种的鉴定及分型.（2）实验材料：待测菌培养物、已知菌培养物和已知诊断血清（3）实验过程:1.取洁净玻片一张，用蜡笔画为四格。
2.用接种环无菌去诊断血清各两环分别置于第1、3格中。
3.用接种环取生理盐水各两环分别放于第2、4格中。
4.用接种环取已知菌少许放入第2格生理盐水中混匀，随即转移1环于第1格中混匀。
5.同样用灭菌的接种环取待测菌少许放入第4格生理盐水中混匀，然后移一环菌液于第3格中混匀。
灼烧灭菌。
6.结果：已知菌在诊断血清中应出现颗粒状凝集，若待测菌在诊断血清中也出现颗粒状凝集，表明两种菌为同一种或属。
2、试管法：——肥达试验（试管凝集实验）将已知的抗原与系列等比稀释的待检血清在小试管内混合，39℃温育2~24h后观察结果。
生理盐水加抗原作为对照，应用非特异性自凝现象。
以出现明显的颗粒状或絮片状凝集现象的待检血清最高稀释度作为抗体的效价。
试管凝集实验为半定量试验，常用于某病原微生物感染的免疫学诊断，亦可用已知抗体鉴定未知的抗原。
（1）材料：病人血清、肥达实验诊断抗原、生理盐水、试管、吸管、试管架等。
凝集反应、沉淀反应
当抗原与相应抗体结合时，抗体的交联作 用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒 相互靠拢，聚集在一起。 当抗体的分子太少或分子量小，不能克服 相当厚度的离子云层时，则不能使颗粒聚 集。在凝集反应中IgM的作用远大于IgG。 为促使凝集现象的出现，可采取以下措施： 1、增加蛋白质和电解质，缩短颗粒间的距 离；2、增加溶液的黏稠度；3、用胰酶和 神经氨酸酶处理；4：以离心的方式克服颗 粒间的排斥力。
第五章
凝集反应
颗粒性抗原与特异性抗原结合后，在适当 的电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现 象，称为凝集反应。 可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合形成致 敏颗粒后，与相应的抗原或抗体结合，也 能发生凝集反应。
1
第一节 凝集反应的特点 凝集反应的发生分为两个阶段：1、抗原抗 体的特异性结合阶段；2、出现肉眼可见的 凝集现象。 颗粒性抗原在悬液中带负电荷，周围吸引 一层与之牢固结合的正离子，外面又排列 一层松散的负离子，构成一个双层电子云。 在松散层内界和外界间的电位差形成Z电位。 溶液中负离子强度越大，Z电位也越大，Z 电位使颗粒间互相排斥。
示意图
标准品抗原浓度测定
抗原浓度 1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找
不同病人抗原浓度测定
相应抗原浓度
35
单向扩散试验 （平板法）
沉淀环的直径与待测标本含量两种计算方法
Mancini曲线： 大分子抗原 时间扩散＞48h， 常数K＝C∕d2 普通坐标纸曲线
Fahey曲线： 小分子抗原 扩散时间24h 常数K＝logC∕d 半对数坐标纸曲线
C为抗原浓度， d为沉淀环直径
36
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为48h以 上,可见T3为直线，T1为反抛物线
凝集反应
质偶联在红细胞上，常用的偶联剂有戊二醛、CrCL3
和双偶氮联苯胺。
临床免疫学及免疫检验
2.胶乳颗粒载体及致敏
聚苯乙烯胶乳颗粒是人工合成的载体，它是一种大小均
一，直径为0.8μm大小的圆形颗粒，带有负电荷，可用物 制备成带有化学活性基团的颗粒(如带有羧化聚苯乙烯胶 乳)，抗原或抗体能以共价键交联在胶乳表面(通过缩合剂 碳化二亚胺将胶乳颗粒表面的羧基与被交联物上的氨基
的反应。1945年Coombs等根据抗体球蛋白对异种动物亦 是抗原的原理，把产生“不完全抗体”的机体正常血清球 蛋白，注射到异种动物使之产生抗球蛋白，这种抗球蛋 白加入表面结合有不完全抗体的红细胞的复合物中，就
能出现可见的凝集现象，称抗球蛋白试验。因为此反应是
Coombs首先建立的，故又称Coombs试验。
(1) 取细菌或红细胞悬液1滴，在玻片上 和1滴诊断血清混匀。 (2) 置室温，数分钟后即可用肉眼或低 倍显微镜观察凝集结果，出现颗粒凝 集者为阳性。
临床免疫学及免疫检验
3．方法评价 本试验是一种特异性强、简
便、快速的定性试验方法。 4．临床意义 适用于大量普查，未知菌种 的鉴定或分型，或用标准血清作红细胞 ABO血型的鉴定。有时也可用于定量检测 前的筛选试验(如布氏菌、土拉弗氏菌等 抗原)，初步观察病人血清中有无相应的 抗体，然后再对阳性标本作试管凝集试验 测定其效价。
间接凝集试验又称被动凝集试验(passive agglutination test)。所用的与免疫无关颗 粒称为载体，将抗原(或抗体)吸附或偶联 于颗粒表面的过程称致敏。而吸附有已 知抗原或抗体的颗粒称致敏颗粒。
临床免疫学及免疫检验
一、间接凝集技术类型
根据致敏载体用的是抗原或抗体以及 凝集反应的方式，间接凝集反应可分为：
免疫学-5章测试增加
《病原生物与免疫学基础》4-5章测试卷增加姓名班级学号得分A型题（单选题，每个题目有且仅有一个正确选项,1分7题一1.引起化脓性感染最常见的细菌是------------------------------- （）2.A、葡萄球菌B、脑膜炎球菌C、链球菌 D、肺炎球菌E、淋球菌3.化脓性炎症其脓汁粘稠、病灶局限，这是由于病原菌产生： ------- （）4.A透明质酸酶B血浆凝固酶C耐热核酸酶D链道酶 E链激酶5.肺炎链球菌的致病因素主要是--------------------------------- （）6.A毒性酶 B菌毛 C外毒素D荚膜E内毒素7.化脓链球菌与人肾小球基底膜、心肌组织的共同抗原是： --------- （）8. A G蛋白 B M蛋白 C T蛋白 D R蛋白 E S蛋白9.能引起超敏反应性疾病的化脓性球菌最常见的是： --------------- （）10.A金黄色葡萄球菌B化脓链球菌C肺炎链球菌11.D脑膜炎奈瑟菌E淋病奈瑟菌12.能引起亚急性细菌性心内膜炎的常见细菌是- -------------------- （）13.A金黄色葡萄球菌B甲型链球菌C肺炎链球菌14.D绿脓杆菌E脑膜炎奈瑟菌15.主要通过呼吸道传播的细菌是：------------------------------- （）16.A、肺炎球菌、白喉杆菌、结核杆菌B、百日咳杆菌、痢疾杆菌、链球菌17.C、葡萄球菌、破伤风杆菌、霍乱弧菌D、肺炎球菌、伤寒杆菌、白喉杆菌18.E、葡萄球菌、埃托弧菌、百日咳杆菌19.A群链球菌产生的致病物质不包括---------------------------- （）20.A链激酶B红疹毒素C溶血素D剥脱性毒素E透明质酸酶21.能引起人类猩红热的主要毒性物质是------------------------- （）22.A M蛋白B透明质酸酶C致热外毒素D溶血素E链激酶23.淋病奈瑟菌引起疾病不正确的是------------------------------- （）24.A细菌借菌毛吸附粘膜上皮细胞致病B人是细菌的唯一宿主25.C可引起淋病性阴道炎、尿道炎26.D细菌抵抗力不强，在外界易死亡E是一种性病，只能通过性接触传播27.淋病奈瑟菌的主要传播途径是：------------------------------- （）28.A呼吸道传播B消化道传播C创作伤口感染D性接触传播E节肢动物叮咬29.产生红疹毒素引起猩红热的细菌最常见的是- -------------------- （）30.A、金黄色葡萄球菌B、甲型链球菌C、乙型溶血性链球菌31.D、丙型链球菌E、肺炎球菌32.引起人类疾病的链球菌中90%属于：-------------------------------- （）33.A肺炎链球菌B A群链球菌C D群链球菌 D B群链球菌E甲型链球菌34.下列中不产生外毒素的细菌是：--------------------------------- （）35.A霍乱弧菌B伤寒沙门菌C痢疾志贺菌36.D鼠伤寒沙门菌E肠产毒素性大肠杆菌37.下列无动力的细菌是：--------------------------------------- （）38.A霍乱弧菌B伤寒沙门氏菌C痢疾志贺菌D大肠埃希菌E变形杆菌39.伤寒病程第一周阳性率最高的检验是： --------------------------- （）40.人、粪便培养B、尿培养C、血清学反应D、血液培养E、补体结合试验41.痢疾患者的粪便标本不能及时送检应： ------------------------- （42.A、保存在35%的甘油盐水中B、保存在25%的甘油盐水中43.C、保存在50%的甘油盐水中D、保存在30%的甘油盐水中44.E、保存在40%的甘油盐水中45.通过消化道传播的病原菌是：---------------------------------- （）46.A、痢疾杆菌、霍乱弧菌、破伤风杆菌B、链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌47.C、链球菌、沙门氏菌、埃托弧菌D、沙门氏菌、副伤寒杆菌、肺炎杆菌48.E、伤寒杆菌、霍乱弧菌、痢疾杆菌49.我国规定的水、食品等卫生细菌学检查的指标菌是： -------------- （）50.A克雷伯氏菌B变形杆菌 C沙门菌 D志贺菌E大肠埃希菌51.肥达氏反应的原理是：---------------------------------------- （）52.A、凝集反应，用已知抗体测未知抗原B、凝集反应，用已知抗原测未知抗体53.C、间接凝集反应D、协同凝集反应 E、沉淀反应54.具有Vi抗原的细菌是：--------------------------------------- （）55.A、大肠杆菌B、伤寒杆菌C、志贺氏菌 D、脑膜炎球菌 E、变形杆菌56.诊断霍乱时粪便标本应采集：---------------------------------- （）57.A、脓血粘液便B、粘液血便C、水样便D、米泔水样便E、柏油样便58.关于霍乱弧菌的叙述，下列哪项是错误的： ---------------------- （）59.A菌体短小，弯曲成弧形或逗点形B呈革兰氏染色阴性60.C 一端单鞭毛而运动活泼D营养要求高E耐碱不耐酸61.吃海产品或盐渍食品引起食物中毒的细菌是： -------------------- （）62.A霍乱弧菌B大肠埃希菌 C肉毒芽胞梭菌63.D痢疾志贺菌E副溶血性弧菌64.关于霍乱，下述哪项是错误的：-------------------------------- （）65.A为烈性传染病B人类是霍乱弧菌的唯一易感者 C经口感染D对霍乱的免疫力主要是SIgA的作用E病后可获得短暂的免疫力66.下列哪组是G-菌：----------------------------------------------- （）67.A肺炎球菌与葡萄球菌B白喉杆菌与链球菌 C百日咳杆菌与白喉杆菌68.D志贺氏菌与霍乱弧菌E结核杆菌和麻风杆菌69.患以下疾病后可获得持久免疫力，例外的是： ----------------------- （）70.A、猩红热B、伤寒 &百日咳D、细菌性痢疾E、霍乱71.能引起食物中毒的细菌不包括：----------------------------------- （）72.A葡萄球菌B霍乱弧菌C肉毒杆菌 D沙门氏菌 E副溶血性弧菌73.下列细菌除哪项外均为革兰氏阳性菌：----------------------------- （）74.A肺炎链球菌B脑膜炎奈瑟菌C白喉杆菌75.D产气荚膜杆菌E结核杆菌76.破伤风抗毒素治疗破伤风的机制是 ------------------------------ （）77.A、在补体参与下溶解破伤风杆菌B、中和与神经细胞结合的外毒素78.C、抑制破伤风杆菌生长D、中和游离的外毒素E、减轻临床症状79.紧急预防破伤风最好注射-------------------------------------- （）80.A破伤风类毒素B破伤风抗毒素C破伤风死疫苗81.D球蛋白E抗生素82.引起气性坏疽的病原菌主要是---------------------------------- （）83.A炭疽芽胞杆菌B产气荚膜杆菌C肉毒芽胞梭菌84.D破伤风芽胞梭菌E枯草芽杆菌85. 下列哪种微生物是专性厌氧菌 ---------------------------------- （ ） 86. A 、结核杆菌 B 、白喉杆菌 C 、变形杆菌 D 、破伤风杆菌E 、炭疽杆菌87. 可多途径传播的细菌是： -------------------------------------- （） 88. A 结核杆菌B 脑膜炎球菌C 百日咳杆菌D 白喉杆菌E 肉毒杆菌89. 在无芽胞厌氧菌感染中，最常见的是： -------------------------- （ ） 90. A 脆弱类杆菌 B 消化链球菌C 双歧杆菌D 梭形杆菌E 丙酸杆菌91. 从痰中检出下列哪种细菌时有临床意义： --------------------------- （ ） 92. A 、肺炎球菌 B 、溶血性链球菌C 、结核杆菌D 、流感杆菌E 、脑膜炎球菌93. 下列最适于接种卡介苗的是： ------------------------------------- （ ）94. A 、长期低热、咳嗽，疑为肺结核的患儿 B 、OT 试验阴性的麻疹患儿95. C 、OT 试验阳性儿童 D 、OT 试验阴性儿童E 、OT 试验阴性的细胞免疫缺陷者96. 结核菌素试验观察反应时间应为： --------------------------------- （ ） 97. A 15分钟B 30分钟 C 24小时 D 48~72小时 E 一周以后98. 结核菌素试验阳性解释正确的是： --------------------------------- （ ）99. A 成人可以确诊为结核病 B 表示病人对结核分枝杆菌无免疫力 100. C 阳性表示有传染性 D 表示人体对结核分枝杆菌产生超敏反应101. E 以上均正确102. 下列哪种不属于外毒素： --------------------------------------- （ ） 103. A 、霍乱肠毒素B 、破伤风痉挛毒素C 、肉毒毒素 D 、红疹毒素E 、结核菌素 104. 不经呼吸道感染的病原菌是： ----------------------------------- （ ）105. A 白喉棒状杆菌 B 破伤风芽胞梭菌 C 化脓链球菌106. D 肺炎链球菌E 脑膜炎奈瑟菌107. 不属于金葡萄感染病灶特点的是 ----------------------------------- （ ）A.局限性B.与周围组织分界清C.脓液稀薄D.脓液淡黄E.不易扩散 1.21、1、属于革兰阴性化脓性球菌的是（ ）A 、金黄色葡萄球菌 8、甲型链球菌 &乙型链球菌D 、肺炎链球菌E 、淋病炎奈瑟菌109 .链球菌属中主要的致病菌是（ ）A 、C 群链球菌B 、A 群链球菌C 、D 群链球菌 D 、B 群链球菌E 、E 群链球菌110 .肺炎链球菌的主要致病物质是（）A 、脂多糖B 、SPAC 、荚膜成分D 、M 蛋白E 、杀白细胞素111 .链球菌所致化脓性炎症易扩散的主要原因是该菌能产生（）A 、血浆凝固酶B 、透明质酸酶C 、链激酶D 、链道酶112 .属于革兰氏染色阴性的球菌是（ ）113 .能产生肠毒素的球菌是（ ） A 、链球菌 B 、肺炎链球菌C 、脑膜炎奈瑟菌D 、金葡菌 114 .引起医院内交叉感染最常见的细菌是：（ ） A 、结核杆菌 B 、肺炎球菌 C 、痢疾杆菌D 、金黄色葡萄球菌A 、金葡菌B 、肺炎链球菌C 、溶血性链球菌D 、脑膜炎奈瑟菌£、乙型溶血性链球菌 ）£、乙型溶血性链球菌115.医护人员携带率最高的病原菌是：（A、结核杆菌B、肺炎球菌C、痢疾杆菌D、金黄色葡萄球菌116.葡萄球菌生物学特性不包括（A.革兰氏染色阳性B.有透明质酸组成的荚膜C.可产生脂溶性色素D.无鞭毛E.无芽胞117.链球菌属中主要的致病菌是（）A、C群链球菌B、A群链球菌C、D群链球菌D、B群链球菌E、E群链球菌118.肺炎链球菌的主要致病物质是（）A、脂多糖B、SPAC、荚膜成分D、M蛋白E、杀白细胞素119.链球菌所致化脓性炎症易扩散的主要原因是该菌能产生（）A、血浆凝固酶B、透明质酸酶C、链激酶D、链道酶120.属于革兰氏染色阴性的球菌是（）A、金葡菌B、肺炎链球菌C、溶血性链球菌D、脑膜炎奈瑟菌121.能产生肠毒素的球菌是（）A、链球菌B、肺炎链球菌C、脑膜炎奈瑟菌D、金葡菌122.引起化脓性感染最常见的细菌是：A、葡萄球菌B、脑膜炎球菌C、链球菌D、肺炎球菌E、淋球菌123. 化脓性炎症其脓汁粘稠、病灶局限，这是由于病原菌产生：A 透明质酸酶B 血浆凝固酶C耐热核酸酶D链道酶 E链激酶124.鉴定葡萄球菌有无致病性的重要指标是：A、溶血素B、血凝固酶C、杀白细胞素D、甘露醇试验E、透明质酸酶125. 能引起大叶性肺炎的病原菌是：A金黄色葡萄球菌B肺炎杆菌C肺炎链球菌D草绿色链球菌 E化脓链球菌126.对青霉素产生耐药性最常见的细菌是：A 淋球菌B 脑膜炎奈瑟菌C 化脓链球菌D金黄色葡萄球菌E铜绿假单胞菌127. 化脓链球菌与人肾小球基底膜、心肌组织的共同抗原是：A G蛋白B M蛋白C T蛋白D R蛋白E S蛋白128.下列哪项不是化脓链球菌的致病因素：A溶血素 B红疹毒素 C M蛋白 D链激酶 E肠毒素129. 能引起超敏反应性疾病的化脓性球菌最常见的是：A 金黄色葡萄球菌B 化脓链球菌C 肺炎链球菌D 脑膜炎奈瑟菌E 淋病奈瑟130..医务人员鼻咽部带菌率高的细菌是：A 肺炎链球菌B 脑膜炎奈瑟菌C 化脓链球菌D 葡萄球菌E 铜绿假单胞菌131. 能引起亚急性细菌性心内膜炎的常见细菌是：A金黄色葡萄球菌B甲型链球菌C肺炎链球菌D 绿脓杆菌E 脑膜炎奈瑟菌132.621岁男青年发热.休克。
临床免疫学检验 课件 第5章 凝集反应
4.协同凝集试验 (coagglutination test )
载体 可溶性抗原
粒颗敏致
用特异性抗原致 敏载体，检测标 本中的相应抗体 的方法。
致敏
NS
待测抗体
结果判读：凝集，阳性(+)。 不凝集，阴性(-)。
粒颗集凝
粒颗集凝 粒颗敏致
载体
已知抗体
＋
致敏
用特异性抗体
致敏载体，检
NS
测标本中的相
? 结果判读： 已知Ab ＋ 未知Ag → 凝集，阳性 (+)。 不凝集，阴性 (-)。
? 方法评价： 特异性强; 简便、快速 ;敏感度低。 ? 应用：ABO 血型鉴定。
细菌的鉴别与分型 。
ABO血型的鉴定
1.已知抗体
抗A
抗B
2.未知抗原 (待检RBC)
3.结果：
凝集
不凝集
4.结论： 受检者血型为：A型
?致敏颗粒（sensitized particle) :吸附有已知抗 原或抗体的颗粒。
粒颗敏致
载体 可溶性抗原 致敏
NS
粒颗集凝
一、常用载体种类及其处理方法
?红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一
般先醛化后应用。
?聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学
活性基团的颗粒。
?活性炭： ?SPA：
? 方法评价：
– 特异性易受影响； 敏感性不高。
? 应用：
– 多用以测定 抗体的含量 （效价、滴度 ）。 –肥达氏反应 、外斐氏反应 、交叉配血试验 。
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
免疫学实验-凝集试验
实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。
4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检血清有多份，对照只需做1份。
2. 被检血清稀释：第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
医学免疫学第五章 补体系统
42
二、旁路（替代）途径
激活物：细菌、其它成分（LPS、肽聚糖、酵 母多糖等）和凝聚的IgA和IgG4等物质。 参与成分： C3、C5~C9 、B、 D、 P因子 参与非特异性免疫，在进化和发挥抗感染作 用的过程中，旁路途径是最先出现和发挥作用
的，有早期抗感染作用。
二、旁路（替代）途径
早期抗感染的原因有三个
基本概念
一般理化性质：
主要产生细胞为肝细胞和巨噬细胞； 糖蛋白,且多属ß球蛋白； 血清中各成分含量不等，C3含量最多； 加热56℃，30min 失活; 正常生理情况下，以非活化形式存在.
第二节 补体激活途径
在激活物作用下，在特定的固相表面，补 体可被激活，这是一个级联放大反应，最终导 致溶细胞效应。依据补体的激活物、起始顺序 不同可分3条途径：
旁路途径是补体系统重要的放大机制
二、旁路（替代）途径
三、MBL途径（甘露糖结合凝集素途径）
激活物: MBL/纤维胶原素FCN与病原体结合物
MBL: mannan-binding lecMtiAnSP1 C3 MASP:MBL-associated seMriAnSePp2roteasCe4、C2
经典途径 旁路途径 MBL途径
激活物是什么? 参与的成分是什么? 最终导致的结果是否相同? 补体激活的本质和意义是什么?
膜攻击复合物
补体系统激活的三条途径
经典途径
抗原抗体复合物
MBL途径
病原体甘露糖残基
旁路途径
病原体固相表面
前端效应
C1q C4,C2
末短通路
MBL-MASP
C4,C2
C3
C5
C6 C7 C8 C9
• 既参与免疫生理，也参与免疫病理，是免疫系统重 要的效应和效应放大系统。
医学免疫学：第五章(2) 凝集反应
第五章（2）凝集反应Chapter 15 Agglutination Test第一部分教学内容和要求一、目的要求·掌握：凝集反应的原理、类型及临床应用；熟悉：凝集反应的技术要点、实验影响因素、方法评价、间接凝集常用的载体；了解：凝集反应各阶段的特征。
二、教学内容1。
凝集反应的特点与类型。
2。
直接凝集反应：玻片凝集试验，试管凝集试验。
3。
间接凝集反应：间接凝集反应的类型，间接血凝试验，胶乳凝集试验，间接凝集试验的临床应用。
4．自身红细胞凝集试验。
5．抗球蛋白试验。
第二部分测试题一、选择题（一）单项选择题（A型题）1．直接抗球蛋白实验用于检测A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体2．玻片凝集实验A．只能检测抗原，不能检测抗体B．既能检测抗原，又能检测抗体C．只能检测抗体，不能检测抗原D．为半定量实验E．不能用于ABO血型鉴定3。
下列哪一项不属于玻片凝集试验A。
菌种鉴定 B。
血清学分型 C。
人类ABO血型鉴定D．定量检测前筛选试验 E。
血清抗体效价测定4.试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝集现象A．“+”B．“+或++”C．“++”D．“+++”E．“++++”5．间接抗球蛋白实验用于检测A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体6．协同凝集试验所用的载体是A．新鲜红细胞B．洗涤红细胞C．醛化红细胞D．聚苯乙烯颗粒E．金黄色葡萄球菌7．自身红细胞凝集试验红细胞是A．标准新鲜红细胞B．标准洗涤红细胞C．标准醛化红细胞D．受检者未致敏红细胞E．受检者致敏红细胞（二）多项选择题（X型题）1．实验中,促进凝集现象的措施有A．低温离心 B．增加电解质或蛋白质 C．加入右旋糖酐或葡聚糖D．用胰酶处理 E．加入抗原2。
免疫学实验凝集试验
+＋＋＋：１0０％抗原凝集，上清液完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底,振荡时,沉淀物呈片状、块状或颗粒状。
＋＋＋:75％抗原凝集,上清液略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡时情况如上。（管底凝集物与１00％凝集时相同,只是上清液稍浑浊)。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向,在电解质（如生理盐水)参与下，由于离子的作用,中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]
１. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
３． 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]
１. 玻板,载玻片,试管(1cｍx8cm）,试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
(二)布氏杆菌病平板凝集试验
1． 加血清:取洁净玻板一块,用蜡笔划成方格（4cｍ2)，并注明被检血清号码，以１00L微量可调加样器按下列量加被检血清于方格内,第l格8０Ｌ、第2格40Ｌ、第3格20L、第4格1０L。血清用前需放室温,使其温度达2０℃左右。每一份检样需换一个ｔiｐ头。
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
凝集反应(免疫学检验课件)
【材料】 (1)TRUST抗原悬液 （牛心提取的类脂质） (2)被检血清。 (3)阳性对照血清；阴性对照血清 (4)试验专用卡片；专用滴管及针头
【意义】 RPR是定性试验，用于梅毒的筛选和疗效的判定。
阳性标本如有需要，也可将血清作1:2—1:32稀释后，按 上述方法做半定量试验。
注意：
1.一期梅毒：70%； 二期梅毒：100%
TPPA （梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验）
U型板（微量反应板）
TPPA是梅毒确诊试验。 TPPA在梅毒治愈后它还 是阳性的，而RPR可以 转阴或者滴度效价很低
RF因子检测（正向间接凝集）
❖ 【原理】
类风湿因子(rheumatic factor，RF)是一种 发生于类风湿病人血清中的抗人变性 IgG抗体 (IgM为主)，此种抗体可与IgG的Fc段呈特异反 应。将变性IgG致敏胶乳颗粒，与病人血清中的 RF相遇时，即可发生凝集现象。
3、O与H抗体在诊断上的意义
OHAB
诊 断 意 义（可能）
伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒
甲型副伤寒
乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
H与O抗体的性质及其消长意义
抗体 类型
O IgM 抗 体
H IgG 抗 体
❖ 【操作方法】
(1)试剂使用前，预置达室温。 (2)轻轻摇匀胶乳试剂 (3)反应板上滴加一滴未稀释血清滴(20ul) (4)然后滴加一滴胶乳试剂，并立即旋转摇动 使两者充分混匀。
(5)每次实验均应设阳性与阴性对照。 【结果观察与报告】
2分钟内出现明显而均匀的凝集颗粒者为阳 性，不凝集者为阴性。（凝集RF >20IU/mL)
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪
加样
+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
ELISA(酶联免疫吸附试验) 凝集反应(ABO血型测定)
凝集反应
原理:
颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并 在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。
应用：检测未知Ag或Ab
分类：
1.直接凝集反应： 玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定
试管法---肥达反应
2.间接凝集反应
ABO血型测定
实验目的: 检测待测者ABO血型
材料: 抗A和抗B血清, 生理盐水, 载玻片, 采血针等.
实验方法
间接凝集实验报告
篇一：直接凝集反应实验报告免疫学·直接凝集反应实验报告实验一：玻片凝集实验1.实验原理：颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质（通常是0.85%nacl）存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。
凝集反应的方法有两种：①直接法；②间接法。
颗粒性抗原（如完整的细菌或细胞）与相应抗体在体外直接结合而出现的凝集反应，称为直接凝集反应。
如玻片凝集反应和试管凝集反应。
将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象，称为间接凝集反应。
如rf因子检测玻片凝集试验是使用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的凝集反应。
此类反应较简单迅速，常用于抗原或抗体的定性检测。
本次实验使用玻片凝集试验的原理进行人类abo血型的鉴定。
abo血型系统是按照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。
人类abo血型抗原有两种：a抗原和b抗原。
a型血红细胞表面具有a型抗原，血液中具有抗b抗体；b型血红细胞表面具有b型抗原，血液中具有抗a 抗体；ab型血红细胞表面具有a抗原和b抗原，血液中不具有抗a、b抗体；o型血红细胞表面不具有a、b抗体，但血液中含有抗a、b抗体。
若用已知的抗a血清和抗b血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可引起红细胞凝集，根据凝集反应结果便可判断出受试者的血型。
2.实验方法：（1）取洁净载玻片一张，用马克笔分为两格并注明a、b分区。
（2）倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗a血清一滴，滴在a区内；同法在b区内滴加抗b血清一滴。
（3）使用消毒液对左手无名指进行消毒，待消毒液自然干燥后，使用无菌三棱采血针快速刺破手指。
（4）用木棒的两端取血，分别在抗a血清和抗b血清中搅拌均匀。
（5）用无菌棉棒压迫手指止血。
（6）静置玻片数分钟后，观察红细胞凝集反应结果。
3.实验结果：4.结果分析：实验二：试管凝集实验1.实验原理：试管凝集反应是在试管内将待检血清对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，然后观察试管内有无凝集快出现。
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机体受某些抗原刺激后，产生不完全 ，其体积小、 机体受某些抗原刺激后，产生不完全Ab，其体积小、 长度短，与相应抗原结合后不出可见现凝集现象。 长度短，与相应抗原结合后不出可见现凝集现象。 此时，若加入抗 的抗体(第二抗体 此时，若加入抗IgG的抗体 第二抗体 后，出现可见 的抗体 第二抗体)后 的疑集现象。 的疑集现象。
常用载体： 常用载体： 红细胞、细菌和多种惰性颗粒如聚苯乙烯胶乳。 红细胞、细菌和多种惰性颗粒如聚苯乙烯胶乳。
间接凝集反应的类型 正向间接凝集反应 反向间接凝集反应 间接凝集抑制反应 协同凝集反应
正向： 正向
测抗体
反向： 反向： 测抗原
正向间接凝集抑制： 正向间接凝集抑制：测Ag 间接凝集抑制反应 反向间接凝集抑制： 反向间接凝集抑制：测Ab
玻片法：定性试验 玻片法： 常用于细菌鉴定、 常用于细菌鉴定、ABO血型鉴定 血型鉴定
1．生理盐水 1．诊断血清 ． ． 2. 细菌 2．细菌 ．
二、试管凝集试验（tube agglutination） 试管凝集试验（ ） 是在试管内颗粒性抗原与相应抗 体直接结合，在一定条件下，会出现 体直接结合，在一定条件下， 肉眼可见的凝集现象。 肉眼可见的凝集现象。
第一节 直接凝集反应 (direct agglutination reaction)
颗粒性抗原直接与相应抗体结合，在电解质参与， 颗粒性抗原直接与相应抗体结合，在电解质参与， 出现肉眼可见的凝集现象。 出现肉眼可见的凝集现象。 凝集反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。 凝集反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。
协同凝集试验
抗体致敏金葡菌
脑膜炎球菌抗体
凝集 （+） ）
？Ag 脑膜炎球菌
三、间接血凝试验
以红细胞为载体的间接凝集试验。 以红细胞为载体的间接凝集试验。 将可溶性Ag（ 将可溶性 （或Ab）吸附于人O型RBC或绵 ）吸附于人 型 或绵 家兔的RBC制成致敏的 制成致敏的 ， 羊、家兔的 制成致敏的RBC， 与相应Ab（ 与相应 （或Ag）作用，在有电解质存在 ）作用， 的条件下， 的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红 细胞凝集现象。 细胞凝集现象。
直接凝集试验：玻片法、 直接凝集试验：玻片法、试管法
一、玻片凝集试验 （一）基本原理
玻片凝集试验（ 玻片凝集试验（slide agglutination test） ） 在玻片上颗粒性抗原与相应抗体直接结合， 在玻片上颗粒性抗原与相应抗体直接结合，在 一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。 一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。
标本： 标本：RBC 新生儿溶血等 患者RBC上不 上不 患者 完全抗体
标本： 标本：血清 检测母体Rh 检测母体 （D）抗体 ）
小结
凝集反应： 凝集反应： 是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原 的颗粒性载体与相应抗体结合后， 的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的 凝集现象。 凝集现象。 直接凝集反应、间接凝集反应。 分为；直接/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
Patient
8 6 4 1 <2 128 32 4 Titer 512 32 64 8
7
5
3
间接血凝试验
四、胶乳凝集试验（latex agglutination） 胶乳凝集试验（ ）
第四章 凝集反应 Agglutination Reaction
凝集反应: 凝集反应:
颗粒性抗原或覆盖了 （ 颗粒性抗原或覆盖了Ag（或Ab）的颗粒状载体 或覆盖了 ） 与相应Ab或 结合后 出现肉眼可见的凝集现象。 结合后， 与相应 或Ag结合后，出现肉眼可见的凝集现象。
抗原
抗体
凝集
凝集反应分类: 凝集反应分类: 直接凝集反应 间接凝集反应
第二节 间接凝集反应 （indirect agglutination） ）
将可溶性Ag（ Ab） 吸附于适当大小的颗 将可溶性Ag（或Ab）先吸附于适当大小的颗 Ag 粒性载体表面， 粒性载体表面， 然后与相应Ab（ Ag）作用， 然后与相应Ab（或Ag）作用， Ab 在适宜的电解质存在的条件下， 在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性 条件下 凝集现象称间接凝集反应。 凝集现象称间接凝集反应。 现象称间接凝集反应
先将可溶性Ag 先将可溶性 与Ab反应一定时 反应一定时 间后， 间后，再加入免 疫微球， 疫微球，无相应 的Ab或Ag则出现 或 则出现 凝集,有则不凝集 有则不凝集。 凝集 有则不凝集。
(四)协同凝集反应
与间接凝集反应的原理相类似。 与间接凝集反应的原理相类似。 载体为金黄色葡萄球菌。 能与IgG的Fc段 载体为金黄色葡萄球菌。SPA能与 能与 的 段 结合，当葡萄球菌与IgG抗体连接时 抗体连接时， 结合，当葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体 致敏的颗粒载体。 致敏的颗粒载体。 当与相应的抗原结合时，则出现凝集反应。 当与相应的抗原结合时，则出现凝集反应。
也是一种间接凝集试验，载体： 也是一种间接凝集试验，载体：聚苯乙烯胶 乳颗粒。 乳颗粒。 Ag（或Ab）与该载体颗粒结合（致敏）后， （ ）与该载体颗粒结合（致敏） 直接与待测标本中Ab（ Ag） 直接与待测标本中Ab（或Ag）发生凝集反 称胶乳凝集试验。 应，称胶乳凝集试验。
胶乳凝集抑制试验
Ag与Ab先反应； 与 先反应 先反应； 加入Ag致敏胶乳试剂 加入 致敏胶乳试剂 若标本中无相应Ag ，出现凝集，结果阴性 出现凝集， 若标本中无相应 若标本中存在相应Ag ，不出现凝集，结果阳性 若标本中存在相应 不出现凝集，
试管凝集试验
颗粒性抗原 + 一系列稀释血清
凝集
可半定量，以效价报结果， 可半定量，以效价报结果，即以产生明显凝集现象 的最高血清稀释度为该Ab的效价。 的最高血清稀释度为该 的效价。 的效价 用途： 用途： 肥达试验: 伤寒、副伤寒的辅助诊断。 肥达试验: 伤寒、副伤寒的辅助诊断。 外斐试验: 斑疹伤寒、恙虫病的辅助诊断。 外斐试验: 斑疹伤寒、恙虫病的辅助诊断。 交叉配血试验等。 交叉配血试验等。
五、间接凝集试验的临床应用
特点：快速、敏感、操作简便、无需特殊设备。 特点：快速、敏感、操作简便、无需特殊设备。 抗原的检测 抗体的检测
抗球蛋白试验（ 第三节 抗球蛋白试验（antiglobulin test） ）
Coombs试验 试验 1945年由 年由Coombs建立的一种抗球蛋白抗体参与的 年由 建立的一种抗球蛋白抗体参与的 血凝试验，用于检测抗RBC不完全 。 不完全Ab。 血凝试验，用于检测抗 不完全 分为:直接抗球蛋白试验、 分为:直接抗球蛋白试验、间接抗球蛋白试验
小结
抗球蛋白试验又称为Coombs试验，是检测抗红细 抗球蛋白试验又称为 试验， 试验 胞不完全抗体的一种很有用的方法。 胞不完全抗体的一种很有用的方法。 直接Coombs试验：检测病人红细胞上不完全抗； 试验：检测病人红细胞上不完全抗； 直接 试验 间接Coombs试验：检测血清中的不完全抗体。 试验：检测血清中的不完全抗体。 间接 试验