一起军团菌爆发事件的流行病学调查和军团菌TaqMan探针PCR检测技术的建立
肺炎衣原体Taqman探针实时荧光定量PCR检测法
肺炎衣原体Taqman探针实时荧光定量PCR检测法程永婷;贾晓晖;马良;贾天军【摘要】目的针对Cpn0308基因建立检测肺炎衣原体的Taqman探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法.方法根据肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308基因序列设计引物和Taqman探针,建立Taqman FQ-PCR检测体系,对反应体系进行优化,进行灵敏度、特异性、重复性评价;并与商品化肺炎衣原体核酸检测试剂盒检测临床标本进行对比分析.结果肺炎衣原体TaqmanFQ-PCR方法的引物浓度300nmol/L,探针浓度200 nmol/L,Mg2+ 4.0 mmol/L为最优反应条件;灵敏度为8.36×102copies/μL;该法对常见几种呼吸道病原菌及沙眼衣原体无交叉反应;重复性试验中4个浓度变异系数均小于3％.自建方法与商品化试剂盒对呼吸道感染组、心血管疾病组及正常对照组标本检出率分别为10％vs 10％ (x2 =0.167,P＞0.05),44.44％vs 40.74％(x2 =0,P＞0.05),6.67％ vs3.33％(x2 =0,P＞0.05),各组阳性率间差异无统计学意义;2种方法的总阳性率(16.54％ vs 14.96％)比较差异无统计学意义(x2=0.071,P＞0.05).结论本研究建立的Taqman探针实时荧光定量PCR检测肺炎衣原体的方法灵敏度好,特异性高,重复性好,可应用于临床肺炎衣原体核酸检测.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)005【总页数】4页(P343-346)【关键词】肺炎衣原体;Taqman探针;实时荧光定量PCR;Cpn0308【作者】程永婷;贾晓晖;马良;贾天军【作者单位】河北北方学院病原生物学与免疫研究所,临床检验诊断学重点实验室,河北张家口075000;河北北方学院病原生物学与免疫研究所,临床检验诊断学重点实验室,河北张家口075000;河北北方学院病原生物学与免疫研究所,临床检验诊断学重点实验室,河北张家口075000;河北北方学院病原生物学与免疫研究所,临床检验诊断学重点实验室,河北张家口075000【正文语种】中文【中图分类】R446.5肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cp)感染通常为隐性感染，却可引起严重的并发症[1-2]。
TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用
１６ ｐ ８ ｂ 的片段 。 以克隆Ⅳ基 因的质 柱作 为 阳性标 准品 ，建立 了一种 快速检 测猪 流行腹 泻病毒含 量 的Ｔ ｑ ｎ ａ Ｍａ
荧光定量Ｐ Ｒ方法 。该方法在１ １ ｏ ｉ ／ Ｃ ０～ ０ ｃｐｅ Ｌ范围内具 有 良好 的线性 关 系，可检测到初始模板 中１ ｃｐｅ／ Ｌ ｓ ０ ｏ ｉｓｕ
Ａ ｂ ｔ ａ ｔ Ａ ８ ｐ ｆａ ｍ ｅ ｔ ｓａ ｓｒ ｃ ： １ ６ｂ ｇ ｎ ｍｐｌ ｅ ｓｎ ｅｓ ｅ ｉ ｃｐｒ ｅ ｓ ｎ ｑ ａ ｒ ｂ ｅ ｉｎｅ ｃ ｏ ｄ ｎ ｒ ｗａ ｉ ｄｕ ｉｇｔ ｐ ｃｆ ｉ ｒ ｄＴａ Ｍ ｎｐ ｏ ｅｄ ｓｇ ｄａ ｃ ｒ ｉｇｔ ＰＥＤＶ－ ｉ ｆ ｈ ｉ ｍ ａ ｏ Ｎ ｇ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅｄ ｐ ｓｔｄｉ ｎ ｎ Ｓ ｓ ｑ ｅ ｔ ， ｅ ｌｔｍ ｅｑ ａ ｔ ａ ｉ ｅＰＣＲ ｒｄ ｔ ｃｉ ｎｏ ＰＥＤＶ ａ ｅ ｅ ｏ ｄ ｅ ｅｓ ｑ ｅ ｃ ｅ ｏ ｉ Ｇｅ Ｂａ ｋ． ｕｂ ｅ ｕ ｎ ｌ ａｒ ａ—ｉ ｕ ｎ ｉ ｔｖ ｅ ｎ ｙ ｔ ｆ ｅｅ ｔｏ ｆ ｏ ｗ ｓｄ ｖ ｌｐｅ ｗｉ ｔｎ ａｄｐ ａ ｍｉ ｔ ｓａ ｄ ｒ ｌｓ ｄＤＮＡ ｏ ｔ ｅｃｏ ｅ ｈ ｆ ｍ ｌｎ ｄＰＥＤＶ－ ｇ ｎ ． ｅｓ ｎ ｉ ｖｔ ｆｔ ｓａ ｓ１ ｏ ｉｓ “Ｌ ａ ｍ ｉ ｒ ｈ Ｎ ｅ ｅ Ｔｈ ｅ ｓｔ ｉ ｏ ｈｅａ ｓ ｙｗａ ｃ ｐ ｅ ／ ｉ ｙ ０ ｐｌｓ ｄＤＮＡ ．
中图分 类号 ：￥ ５ ．８ ５ ．： ８ ８２ ２６ ９６Ｑ７
文献标识 码 ：Ａ
文章编 号 ：１ ７ —４ ２ （０ ０ １０ ２ ．６ ６ ４６ ２ ２ １ ）０ －０ ８０
尼帕病毒TaqMan_探针荧光定量PCR_检测方法建立
Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报收稿日期：2022-03-11基金项目：国家重点研发计划（2022YFD1800504）作者简介：孙彤，女，兽医学硕士，主要从事动物疫病检测通信作者：陈鸿军，E-mail：***************.cn 2024,32(1):122-128·研究论文·尼帕病毒TaqMan 探针荧光定量PCR 检测方法建立摘 要：尼帕病毒病是一种人畜共患烈性传染病，为能够快速特异检测该病毒，本研究根据尼帕病毒（NiV ）N 基因序列保守区设计特异性引物和探针，建立一种针对NiV 的TaqMan 探针荧光定量PCR （qPCR ）检测方法，该方法特异性好、敏感性高、稳定性强，可鉴别NiV 与其他猪病病毒，扩增效率为102%，最低检测限14.8 copies/μL ，敏感性高于常规PCR 10倍，该检测方法的建立可为NiV 的快速检测提供技术手段，对促进猪类养殖业的健康发展具有重要意义。
关键词：尼帕病毒；N 基因；TaqMan 探针；实时荧光定量PCR 中图分类号：S852.65文献标志码：A文章编号：1674-6422（2024）01-0122-07Development of a TaqMan Probe Fluorescence Quantitative PCR Method forDetection of Nipah VirusSUN Tong, SUN Zhuyun, LIU Jingyi, WANG Peipei, SU Chang, CHEN Hongjun(Evaluation Center for Veterinary Drug, Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China)孙 彤，孙竹筠，刘静宜，王培培，苏 苌，陈鸿军（中国农业科学院上海兽医研究所 兽药评价中心，上海 200241）Abstract: Nipah virus (NiV) infection is a severe infectious disease and also a zoonotic illness. In order to detect the virus quickly and specifi cally, specifi c primers and probe were designed in this study based on the conserved region of the NiV N gene . Subsequently, a TaqMan probe fluorescence quantitative PCR ( q PCR) method was developed for detection of NiV. This qPCR method had good specificity without reaction with other swine viruses and high sensitivity with 10 times sensitive than conventional PCR and strong stability. In addition, its amplifi cation effi ciency reached to 102% and the minimum detection limit was 14.8 copies/μL. Availability of this qPCR method provided a technical means for the rapid detection of NiV and was of great signifi cance to pig industry. Key words: Nipah virus; N gene; TaqMan probe; quantitative PCR尼帕病毒（Nipah virus, NiV）为副粘病毒科，亨尼病毒属，具有宿主范围广、致死率高的特点，尼帕病毒病（Nipah virus disease, NVD）为人畜共患的自然疫源性疾病，于1998年首次在马来西亚被发现，随后在新加坡、马来西亚、印度等国家暴发[1]，给养猪业造成巨大经济损失，为公共卫生带来巨大威胁。
军团菌及其检测方法
武汉市疾病预防控制中心—. —微生物检验科
淋浴器
• 收集最初流出的水标本 • 如果淋浴器有一个大的莲蓬头式喷嘴，用一个干净的
未用过的塑料袋，该装置包裹起来，切掉一个角，将 该切口处置于接取标本容器的开口处
值得注意的是新发现的某些种的军团菌所具有的特征可能会和上述特征有所区别可疑军团菌菌落的进一步鉴定bcye或其他培养基上传代培养革兰染色镜检生化鉴定pcr检测军团菌特异性基因片段免疫荧光的方法确定军团菌的种类bcye或其他培养基上传代培养1至少从每块gvpc平板上挑选出两个典型的军团菌菌落在bcye和bcyecys培养基上传代培养传代培养要在两种培养基上同时进行
武汉市疾病预防控制中心—. —微生物检验科
冷却塔
• 警告：为安全起见，采样前，负责供水系统的工作人员应关掉 冷却塔的鼓风机。戴一副齐肘的橡胶手套，从池内舀水，由于 机器继续运行而不能关闭冷却塔时，则需要采样人员做出专门 的安排，这种情况下，应佩戴安全护目镜和呼吸道防护装备。
• 在塔的入口处采样：将干净的硅胶管插入瓶内，通过虹吸作用 吸取顶部蓄水池的水。先用水充满管子并夹住其一端，以防止 管子空了。管的一端放在蓄水池里，另一端放在采样瓶里，使 瓶内管的一端低于蓄水池管的一端。松开夹子，水开始流出， 取够所需的量，停止虹吸，将管从蓄水池内取出。
Legionella shakespearei
武汉市疾病预防控制中心—. —微生物检验科
发现时间
1985 1985 1985 1985 1985 1985 1986 1988 1989
1989 1989 1990 1990 1991 1991 1991
军团菌的流行病学及检测技术研究进展
２ ８人 患 病 ， ２人 死亡 ， 病死率 ７ ％； ２ ０ ０ １ 年 ７月 ， 西 班
起严重的呼吸道疾病 ， 可导致非典型肺炎 。 １ ９ ７ ６ 年美 国费 城 召开 的退 伍 军人 大 会 上首 次 暴发 了 由军 团菌
引起 的肺 部 感 染 ， ３ ４人 死亡 。 １ ９ ７ ７年美 国疾病 预 防
家和地区均有军团菌病 （ Ｌ Ｄ） 的报道 ， 培养分 离获得过
吸入被军团菌污染的气 溶胶 和污染水导致 。 目前检测方法多采用聚合酶链式反应（ Ｐ Ｃ Ｒ技术 ） 辅以尿抗原检测来确定 是否感染军团菌 。随着我国经济的快 速发展 ， 各种排水管道 、 空调 、 加湿器等大量使用 ， 为军团菌 的滋生创造 了良好环
牙 的木尔西亚市暴发 了一次大规模 的 Ｌ Ｄ，共报告 ８ ０ ０ 多可疑病例 ， 其 中确诊 ４ ４ ９ 例， 病死率 １ ％； 经证 实 ，上述 ３ 起规模较大的暴发均由空调冷却塔污染 军 团菌 引起 。 随着我 国经 济 的飞 速发 展 ，集 中空调 、冷却 水
塔、 热 水器 等不 断 使用 ， 在 给人们 生 活 带来 便 利 的 同
境， 增 大了 Ｌ Ｄ的发病率 。 加 强饮水 系统和室 内空调系统 的卫生管理 ， 对有效地控制军团菌的传播 途径 十分 必要 。 本文 就军 团菌病的流行病学 、 检测技术和预防控制等方面的进展作一 综述 。 关键词 ： 军团菌 ； 军 团菌病 ； 检测
军 团菌是 一 种 常见 的革 兰 氏 阴性致 病 菌 ，能 引
时， 因为设计 、 运行管理不善等原因成为军 团菌的播 散工具 ，我 国 １ ９ ８ ０ ～ ２ ０ １ ０ 年报道 Ｌ Ｄ病例 １ ４ ３ ６ 例， 死亡 ８ ５例 ， 病 死率 ６ ％ｍ ； 其中 １ ９ ８ ５ ～ ２ ０ ０ ５年 ， 正 式报
Taqman探针荧光聚合酶链式反应实时同步鉴定动物源性食品中猪肉、鸡肉源性成分
Taqman探针荧光聚合酶链式反应实时同步鉴定动物源性食品中猪肉、鸡肉源性成分作者：金萍结莉陆俊陈英丁洪流来源：《肉类研究》2016年第09期摘要：目的：建立一种能实时同步检测动物源性食品中猪肉源性和鸡肉源性成分的Taqman探针双重荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）方法，应用于动物源性食品的成分掺假快速检验。
方法：分别依据猪和鸡的种间保守基因（Cytb）序列设计、合成特异性引物及不同荧光标记（FAM、HEX）的Taqman探针，建立可同步检测动物源性食品中的猪源性和鸡源性成分的Taqman探针双重荧光PCR方法。
结果：所建立的Taqman探针双重荧光PCR检测方法特异性强，仅对猪、鸡成分有扩增；灵敏度高，最低检测到猪源、鸡源DNA的含量分别为0.02、0.10 ng；抗干扰性强，当DNA混样中猪源、鸡源性成分含量在2%以上水平时，所建立的混合检测体系均能对DNA混样给出正确判断。
结论：所建立的混合检测体系具有高特异性、高灵敏度，能够适用于动物源性食品中猪肉、鸡肉成分的同时快速检测。
关键词：双重荧光聚合酶链式反应；动物源性食品；猪源性成分；鸡源性成分A Dual Fluorescent Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for Concurrently Detecting Pork-Derived and Chicken-Derived Ingredients in Animal-Origin FoodsJIN Ping， JIE Li， LU Jun， CHEN Ying， DING Hongliu*（Suzhou Quality Supervision and Inspection Center， Suzhou 215128， China）Abstract： Objective： To establish a dual fluorescent real-time polymerase chain reaction （PCR） assay for the simultaneous detection of pork-derived and chicken-derived ingredients which enables rapid detection of adulteration in animal-origin foods. Methods： With this aim， specific primers and TaqMan probes were designed according to the interspecific conservative sequences. Results： The dual fluorescence PCR method had good specificity and could only amplify pork-derived ingredients and chicken-derived ingredients. The method had high sensitivity and could detect as low as 0.02 ng of porcine DNA and 0.10 ng of chicken DNA. It had strong anti-interference ability and could correctly detect more than 2% pork-derived and chicken-derived ingredients spiked in mixed DNA samples with other species. Conclusion： The dual fluorescent real-time PCR provides a specific and sensitive method for the detection of pork and chicken-derived ingredients in animal-origin foods.Key words： dual fluorescent real-time polymerase chain reaction （RT-PCR）； animal-origin product； pork-derived ingredients； chicken-derived ingredientsDOI：10.15922/ki.rlyj.2016.09.004中图分类号：TS207.3 文献标志码：A 文章编号：1001-8123（2016）09-0017-06引文格式：金萍，结莉，陆俊，等. Taqman探针荧光聚合酶链式反应实时同步鉴定动物源性食品中猪肉、鸡肉源性成分[J]. 肉类研究， 2016， 30（9）： 17-22. DOI：10.15922/ki.rlyj.2016.09.004. http：//JIN Ping， JIE Li， LU Jun， et al. A dual fluorescent real-time polymerase chain reaction method for concurrently detecting pork-derived and chicken-derived ingredients in animal-origin foods[J]. Meat Research， 2016， 30（9）： 17-22. （in Chinese with English abstract） DOI：10.15922/ki.rlyj.2016.09.004. http：//牛肉享有“肉中骄子”之美称，是中国人的第二大肉类食品。
贵州蓝莓蜜TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用
贵州蓝莓蜜TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用张致豪1,2，孙丽萍2，师丰丰2,3，黄家兴2*，韦小平4*（1.黑龙江省农业科学院牡丹江分院，黑龙江牡丹江 157000）（2.中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093）（3.伊犁哈萨克自治州农业科学研究所，新疆伊犁 835000）（4.贵州省农业科学院现代农业发展研究所，贵州贵阳 550006）摘要：该研究利用TaqMan特异性探针实时荧光PCR检测手段，建立了高效、精准鉴别贵州特色（中蜂）蓝莓蜜的方法。
对贵州白竹林、麻卡和乌卡坪三个地域的蓝莓种植区蓝莓蜜进行采集（包括意蜂蓝莓蜜），同时购买市售蜂蜜及加拿大蓝莓蜜，该方法通过采集贵州麻江县白竹林地区蓝莓种植园及蜂场周围蓝莓同花期26种植物样本，基于植物基因组中trnL基因序列的多序列比对，设计蓝莓trnL基因特异性引物，并进行TaqMan探针验证。
结果表明，本研究设计的TaqMan探针特异性强，建立的TaqMan探针实时荧光PCR 检测方法能检测到蓝莓花粉DNA最低浓度为0.3 ng/μL；利用建立的方法对11种市售蜂蜜和贵州蓝莓蜜样本进行检测，发现贵州蓝莓蜜的Ct值为24~26，蓝莓花粉数在800~1 700颗，其余蜂蜜Ct值在30以上，表明该方法能够有效实现贵州蓝莓蜜和其他蜂蜜的区分，具有良好的应用前景。
关键词：蓝莓蜜；实时荧光PCR；TaqMan探针；蜜源植物文章编号：1673-9078(2024)03-342-349 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2024.3.0332Establishment and Application of TaqMan Probe Real-time Fluorescent PCR Detection Method for Blueberry Honey in GuizhouZHANG Zhihao1,2, SUN Liping2, SHI Fengfeng2,3, HUANG Jiaxing2*, WEI Xiaoping4*(1.Mudanjiang Branch, Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Mudanjiang 157000, China)(2.Institute of Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China)(3.Institute of Agricultural Science of Ili Prefecture, Yili 835000, China)(4.Guizhou Institute of Integrated AgricultureDevelopment, Guizhou Academy of Agricultural Sciences, Guiyang 550006, China) Abstract: In this study, a highly efficient and accurate method was developed for identifying Guizhou characteristic blueberry honey (from honey bee Apis cerana) based on specific TaqMan probe of real-time fluorescent PCR. Blueberry 引文格式：张致豪,孙丽萍,师丰丰,等.贵州蓝莓蜜TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用[J].现代食品科技,2024, 40(3):342-349.ZHANG Zhihao, SUN Liping, SHI Fengfeng, et al. Establishment and application of taqman probe real-time fluorescent pcr detection method for blueberry honey in Guizhou [J]. Modern Food Science and Technology, 2024, 40(3): 342-349.收稿日期：2023-03-20基金项目：财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系资助项目（CARS-44-SYZ4）；贵州喀斯特山区优势特色产业提质增效技术集成与示范（2021YFD1100300）；黔科合支撑[（2021）160]作者简介：张致豪（1991-），男，硕士，研究实习员，研究方向：蜂产品品质，E-mail：通讯作者：黄家兴（1979-），男，博士，研究员，研究方向：蜜蜂生物学，E-mail：；共同通讯作者：韦小平（1977-），女，博士，研究员，研究方向：蜜蜂生物学、蜂产品品质，E-mail：342我国主要饲养的蜜蜂包括意大利蜜蜂（Apis mellifera，简称意蜂）和中华蜜蜂（Apis cerana，简称中蜂）两大种群[1] 。
TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用
TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用罗宝正;王振全;薄清如;徐海聂;沙才华;廖秀云;陈伟生【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2011(027)006【摘要】为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针；并对副猪嗜血杆菌标准菌株提取DNA后进行PCR扩增,将产物测序鉴定后克隆到pMD1s-T载体,再转化到大肠杆菌感受态细胞,细菌培养后对菌液进行PCR扩增,把产物测序鉴定后获得的重组质粒作为标准阳性对照；最后将建立的TaqMan探针荧光PCR方法进行灵敏度、特异性、稳定性试验.结果显示,该检测方法可以达到1μl1.0×101拷贝数量级的灵敏度；另外,该方法可以将HPS和大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌分开,特异性良好；稳定性试验显示,2次批内变异系数分别为0.65％和0.92％,批间变异系数为1.31％,稳定性良好.对口岸送检的56份猪肉和12份血浆蛋白粉样品进行检测,结果表明TaqMan探针荧光PCR方法和细菌分离方法的检测效果一致.【总页数】4页(P1367-1370)【作者】罗宝正;王振全;薄清如;徐海聂;沙才华;廖秀云;陈伟生【作者单位】珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春130062;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015【正文语种】中文【中图分类】S855.1【相关文献】1.副猪嗜血杆菌实时荧光PCR快速检测方法的建立和应用 [J], 李军;谢永平;潘艳;谢宇舟;禤雄标;陈泽祥;杨威;马春霞;胡帅;彭昊;许力干2.猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌多重PCR检测方法的建立和应用[J], 孙学飞;倪艳秀;茅爱华;何孔旺3.副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重 PCR 检测方法的建立及应用[J], 余远迪;曾泽;岳华;张斌4.副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立及应用 [J], 梁乔;杨本勇;石霖;李井春;张健;赵凤菊5.副猪嗜血杆菌环介导等温扩增检测方法的建立及应用 [J], 李璐璐;骆延波;张庆;赵效南;任金瑞;胡明;张印;齐静;刘玉庆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的建立
嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的建立吕沁风;郑伟;罗鹏;吴忠华;李禾;沈建根【摘要】目的:建立一种快速简便的嗜肺军团菌分子检测方法.方法:运用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计一套引物特异性识别嗜肺军团菌毒力基因--mip基因的6个特殊区域,在恒温条件下,对8株嗜肺军团菌和5株其它细菌进行检测,并与普通PCR方法进行比对,验证该方法的特异性和灵敏度.结果:所有嗜肺军团菌扩增产物均产生肉眼可见的白色沉淀,而其它不同菌株均不产生沉淀;加入荧光染料smart green后,嗜肺军团菌扩增产物均产生强绿色荧光,其它菌株呈弱荧光.与普通PCR(检出限约为57.6 pg,)比,LAMP扩增反应的灵敏度大100倍左右,基因组DNA检出限为576 fg,阳性水样检出限为8 cfu/ml.结论:LAMP技术可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏地检测嗜肺军团菌.【期刊名称】《浙江大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(039)003【总页数】6页(P305-310)【关键词】军团病杆菌,嗜肺;军团杆菌病/诊断;基因扩增;聚合酶链反应/方法;增强子元件(遗传学)【作者】吕沁风;郑伟;罗鹏;吴忠华;李禾;沈建根【作者单位】浙江大学医学院,浙江,杭州,310058;浙江国际旅行卫生保健中心,浙江,杭州,310003;浙江国际旅行卫生保健中心,浙江,杭州,310003;浙江国际旅行卫生保健中心,浙江,杭州,310003;浙江国际旅行卫生保健中心,浙江,杭州,310003;浙江国际旅行卫生保健中心,浙江,杭州,310003;浙江大学医学院,浙江,杭州,310058【正文语种】中文【中图分类】R378.99嗜肺军团菌 (Legionella pneumophila)于1976年首次在美国被发现[1],是一种革兰氏阴性条件致病菌,主要通过污染建筑物中的水系传播,易大规模爆发和流行。
TaqMan探针荧光RT-PCR检测狂犬病病毒
TaqMan探针荧光RT-PCR检测狂犬病病毒王振全;罗宝正;薄清如;周昌芳;白鸽;许远靖;王冲;吴殿君【摘要】根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法.对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组质粒作为标准阳性对照.对建立的TaqMan探针荧光RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验.结果显示,该方法可以达到10拷贝/μL 的灵敏度,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒和犬副流感病毒分开,方法重复性好,稳定可靠.%To establish the method of TaqMan probe real-time RT-PCR for detection of rabies virus, a pair of primers and probe were designed based on the nucleoprotein sequences of rabies virus that published in GenBank. RNA was extracted from rabies virus vaccine, and then amplified by RT-PCR, cloned the target fragment and took the recombination plasmid as standard positive control. The results showed that the method can distinguished rabies virus from canine distemper virus, canine parvovirus, canine adenoviruses, canine coronavirus and canine para influenza virus, the sensitivity could attained 10 copies/μL and the stability test was good.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)006【总页数】4页(P79-82)【关键词】狂犬病病毒;TaqMan探针;荧光RT-PCR【作者】王振全;罗宝正;薄清如;周昌芳;白鸽;许远靖;王冲;吴殿君【作者单位】吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春130062;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室,广东珠海519015;吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春130062【正文语种】中文【中图分类】S854.4狂犬病病毒属于单股负链病毒目（Mononegaviruses）、弹状病毒科（Rhabdoviridae）、狂犬病毒属（Lyssavirus）。
TaqMan探针法荧光定量PCR检测脑脊液细菌方法的建立及应用
TaqMan探针法荧光定量PCR检测脑脊液细菌方法的建立及应用韩慧;胡子有;姚芳;吴炳义【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2011(026)001【摘要】目的建立TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,用于脑脊液标本细菌的快速检测.方法针对细菌的16S rRNA基因,设计合成细菌的通用引物和革兰阳性菌、革兰阴性菌分型探针,通过构建质粒和制作脑脊液模拟标本来研究引物和探针的检测特异度和敏感度.结果两种革兰分型探针只对相应的细菌可以检测到荧光信号,乙肝病毒DNA、白色念珠菌及人基因组DNA检测结果均为阴性,此方法最低可以检测到10个拷贝的质粒DNA以及102CFU/ml的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌.结论 TaqMan探针法荧光定量PCR检测细菌的特异度和敏感度高,检测快速,对脑脊液细菌的早期诊断有重要意义.【总页数】3页(P6-8)【作者】韩慧;胡子有;姚芳;吴炳义【作者单位】南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州,510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州,510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州,510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州,510515【正文语种】中文【中图分类】Q503;R446.14【相关文献】1.TaqMan探针实时荧光定量PCR检测聚集性细菌性腹泻病原的初步应用 [J], 严寒秋;黄瑛;曲梅;吕冰;张新;杨扬2.猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 石林;王晓杜;宋厚辉;吴瑗;巴少波;刘正奎;陈琳;王磊;邵春艳;孙静;周莹姗3.猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 石林;吴瑗;巴少波;刘正奎;陈琳;王磊;邵春艳;孙静;周莹姗;王晓杜;宋厚辉;;;;;;;;;;;4.Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J], ZHANG Yundan;YANG Yuan;WANG Jun;WEN Ming;ZHOU Bijun;YUE Jun;LI Tao;CHENG Zhentao5.非洲猪瘟病毒TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法建立 [J], 任名; 牛婷婷; 于婉琪; 孙海伟; 邬静; 陈鸿军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立
TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立苏建青;郑学星;候小强;岳妙姝;夏咸柱【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2007(23)11【摘要】根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。
构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。
利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。
结果显示:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.994。
犬瘟热病毒FQ-PCR检测反应的灵敏度为10TCID50;5种非犬瘟热病毒病原体检测均为阴性;说明实验建立的FQ-PCR具有快速、灵敏和稳定的特点,适用于临床样品的检验。
【总页数】5页(P33-37)【关键词】TaqMan探针;荧光定量;犬瘟热病毒【作者】苏建青;郑学星;候小强;岳妙姝;夏咸柱【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院;解放军军事医学科学院军事兽医研究所,长春130062;河北北方学院动医系,张家口075131;长春理工大学生命科学技术学院;解放军军事医学科学院军事兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】S858.292;S858.92【相关文献】1.猪蓝耳病病毒变异株TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法的建立[J], 晏勇邦;龚中贵;王俊峰;邓理主;王林川2.犬瘟热病毒、犬细小病毒二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 赵雪丽;刘毅;班付国;闫若潜;王华俊;王淑娟;马震原;王东方3.鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 陈翠腾;陈珍;朱春华;蔡国漳;刘斌琼;黄瑜4.Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J], ZHANG Yundan;YANG Yuan;WANG Jun;WEN Ming;ZHOU Bijun;YUE Jun;LI Tao;CHENG Zhentao5.新型鸭呼肠孤病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[J], 张博;陈立功;武华;阴雅洁;孟利佳;郭康康;侯绍华;董世山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用PCR方法检测军团菌病
应用PCR方法检测军团菌病
朱乃军;吴琦
【期刊名称】《天津医药》
【年(卷),期】1995(023)004
【摘要】自从1976年在美国宾西法尼亚州费城爆发军团病以来,全世界已有许多散发和流行报道,我国也有爆发流行并分离到军团菌。
本文应用PCR方法检测了40例临床诊断为非典型肺炎的病人及10例无呼吸道及发热症状的正常人痰液,并对PCR结果阳性病人进行了抗体追踪调查,现将结果报告如下。
【总页数】2页(P252-253)
【作者】朱乃军;吴琦
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R517.904
【相关文献】
1.同时检测CSFV、PRRSV的二重RT-PCR方法的建立及其在临床样品检测中的初步应用 [J], 岳丰雄;崔尚金;冉多良;张超范;周盛华;戚亭
2.PCR方法在检测军团菌病中的应用 [J], 朱乃军;吴琦
3.检测山羊嵴病毒的实时荧光定量PCR方法的建立和应用 [J], 阿比克哈莫;余忠华;景志忠;汤承
4.应用套式RT-PCR方法检测文山州疑似猪瘟的病例报告 [J], 吴孟洁;赵敏;朱玲云;
张绍卫;唐清;陈瑞雪
5.检测牛5种腹泻病毒的多重RT-PCR方法的建立及应用 [J], 孙吉;岳华;汤承因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
TaqMan荧光定量RT-PCR 快速检测甲3型流感病毒
TaqMan荧光定量RT-PCR 快速检测甲3型流感病毒严菊英;卢亦愚;冯燕;史雯;茅海燕【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2005(021)002【摘要】目的建立一种特异、灵敏、快速的荧光定量RT-PCR方法用于检测甲3型流感病毒核酸.方法根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物学软件进行序列比对,在甲3型流感病毒血凝素(HA)基因的保守区设计引物和TaqMan探针、并进行筛选.对荧光RT-PCR反应条件进行优化,检测该方法的特异性和灵敏度.并对疑似流感含漱液标本进行检测.结果该方法对甲3型流感病毒的检测有高度的特异性,对甲1型、乙型、禽流感病毒H5、SARS病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.01TCID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3 h左右. 结论本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR是一种快速检测甲3型流感病毒特异、敏感的新方法.【总页数】4页(P169-172)【作者】严菊英;卢亦愚;冯燕;史雯;茅海燕【作者单位】浙江省疾病预防控制中心病毒研究所,杭州,310009;浙江省疾病预防控制中心病毒研究所,杭州,310009;浙江省疾病预防控制中心病毒研究所,杭州,310009;浙江省疾病预防控制中心病毒研究所,杭州,310009;浙江省疾病预防控制中心病毒研究所,杭州,310009【正文语种】中文【中图分类】R373.1【相关文献】1.TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒 [J], 卢亦愚;严菊英;冯燕;徐昌平;史雯;茅海燕2.柯萨奇病毒A组16型TaqMan一步法荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立[J], 蔡丽娟;陈瑶;杜红延;陈骊嘉;李明3.快速检测A型流感病毒的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法的建立 [J], 马继红;于海;周艳君;李国新;闫丽萍;张善瑞;王斌;童光志4.TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测登革1、2型病毒 [J], 徐昌平;卢亦愚;严菊英;冯燕;茅海燕;史雯;翁景清5.TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR快速检测副流感3型病毒 [J], 徐昌平;严菊英;卢亦愚;史雯;茅海燕;陈小芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
军团菌 方案
军团菌方案一、背景介绍近年来，由于环境污染、气候变化等原因，菌群生态受到了严重破坏，导致部分微生物种群数量减少、生态系统受到了破坏。
在这一背景下，军团菌逐渐被人们所关注。
二、军团菌的特点军团菌是常见的一种细菌，根据鉴定这种菌的药物灵敏度可以划分为多个亚种。
军团菌的传播方式主要有两种：空气传播和水传播。
军团菌是一种比较容易感染人体的病菌，易引起肺炎、肺泡炎及其他呼吸系统疾病。
三、军团菌方案为了更好地治疗军团菌感染，保障人类健康，需要制定出一套完整的方案。
该方案应包括以下内容：1.军团菌检测方案：建立一套完整的军团菌检测标准，开发出高准确性的检测方法。
对受感染的病人进行及时检测，及时发现和诊治感染病例。
2.军团菌传播治疗方案：针对军团菌主要通过空气和水途径传播的特点，通过加强环境卫生管理措施，消除潜在传播源，保障人们生活环境的清洁。
加强饮用水源的流程控制，完善冷热水系统设计，消除水垢，防止水垢及其他抵御肥皂和其他清洗剂的物质的生长，从而保障饮用水的安全性。
3.军团菌药物治疗方案：在药物治疗方面，应准确判断军团菌的亚种，并给予对应的治疗药物。
同时应充分利用中药药方、喷雾和吸入治疗等手段，提高治疗效果及患者治愈率。
对于治疗较困难的病例，可以考虑行支气管肺泡灌洗术等手段辅助治疗。
四、方案实施措施为了更好地实施军团菌治疗方案，需要采取一系列的措施。
包括：1.加强科技支持，建立一套完整的军团菌检测标准和检测方法；2.加强环境卫生管理，消除军团菌的传播源；3.加强医疗卫生服务，提高医护人员的诊疗技能及对军团菌的认识；4.强化公共宣传和教育，提高公众对军团菌的认知及防范意识。
五、方案效果评估方案实施后，需要对方案的效果进行评估。
主要包括以下几个方面：1.军团菌感染发病率的下降情况；2.军团菌的检测准确率提高情况；3.基础设施改善，环境清洁程度提高情况；4.军团菌感染治愈率的提高情况；5.公众对军团菌的认知水平提升情况。
TaqMan荧光PCR技术在霍乱弧菌毒力基因检测中的应用
TaqMan荧光PCR技术在霍乱弧菌毒力基因检测中的应用曲梅;黄芳;严寒秋;刘桂荣;窦相峰;刘园;吴晓娜;王全意【期刊名称】《中国预防医学杂志》【年(卷),期】2008(9)6【摘要】目的利用快速灵敏的TaqMan实时荧光定量PCR方法检测分离到的81株霍乱弧菌的毒力基因。
方法根据霍乱弧菌毒力基因ctxAB和zot分别设计特异性引物和探针,在对2组引物和探针进行灵敏度、特异性和重复性评价的基础上对分离到的菌株进行毒力基因的检测。
结果81株霍乱弧菌中,有20株菌(24.7%)产CT毒素,来自于外环境的有19株;25株菌(30.9%)携带zot毒素基因;5株菌(6.2%)CT阴性而zot毒素基因阳性。
使用这两套系统检测其他肠道致病菌无交叉反应,检测限可达到2～20cfu/ml。
结论本研究所采用的TaqMan荧光定量PCR 检测霍乱弧菌毒力基因灵敏度高,特异性好,为今后霍乱日常监测和疫情应急处理提供快检的平台。
【总页数】4页(P546-549)【关键词】实时荧光PCR;霍乱弧菌;毒力基因【作者】曲梅;黄芳;严寒秋;刘桂荣;窦相峰;刘园;吴晓娜;王全意【作者单位】北京市疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R446.9;R378.3【相关文献】1.应用改良的实时TaqMan荧光定量 RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平 [J], 石立立;顾潮江;张倩;张玮莹;李勇;鲁彬;何成;屈三甫;郑从义2.产毒型O1群霍乱弧菌特异性基因序列实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系的建立 [J], 杨辉;龚成;吴丽娟;汪仕奎;蔡剑平;胡继红3.基于TaqMan实时荧光PCR技术检测转基因作物中的调控基因 [J], 罗建兴;海小;刘国强;其勒木格;郭梁4.四种基因定量方法对实时荧光PCR与微滴式数字PCR检测霍乱弧菌基因表达量的分析 [J], 唐静;贾俊涛;赵丽青;王静;张健;姜英辉;徐彪;王昌军;马云5.TaqMan荧光定量PCR技术快速检测霍乱弧菌方法的建立 [J], 黄世旺;卢亦愚;徐丹戈;方叶珍;徐昌平;包芳珍;高海明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。