麻痹性贝类毒素的生物法与酶联免疫法测定比较
水产品中麻痹性贝类毒素(PSP)检测论文
水产品中麻痹性贝类毒素（PSP）检测探析[摘要]目的：使用美国abraxis麻痹性贝类毒素试剂盒对40个北海海域的文蛤样品进行psp检测。
方法：使用酶联免疫试剂盒对文蛤麻痹性贝类毒素进行检测，检测限为0.02ng/g，灵敏度为为0.015 ng/g。
通过建立psp纯溶液的标准曲线测定，待测水产品的psp浓度。
结果：建立标准曲线后，最终测得水产品样品psp的平均含量为1.7ng/g结论：应用elisa法检测麻痹性贝类毒素，具有简便、快捷、成本低廉等特点，适用于快速检测的样品。
可以应用于水产品质量的快速检测以及对贝类进行质量监控。
麻痹性贝类毒素（psp）指存在于贝类体内，摄食后可以产生麻痹作用的一种海洋生物毒性物质。
psp的化学结构主要是石房蛤毒索（saxitoxin），是目前世界上一类分布最广、食物中毒频率最高、危害度最大的毒素。
关键词：水产品；麻痹性毒素；检测中图分类号：s9 文献标识码：a 文章编号：1009-914x（2013）02-01-011 资料与方法1.1 样品随机选取40个北海海域的文蛤样品，用于后续psp检测使用。
1.2 试剂美国abraxis贝类毒素试剂盒，甲醇。
1.3仪器酶标比色仪（bio一tek）、均质器、微量进样器、离心机、电子天平。
1.4方法1.4.1测定原理用特异性抗体同石房蛤毒素进行结合。
样本中的石房蛤毒素可与石房蛤毒素一酶的结合物进行竞争，与微孔板上的兔抗一石房蛤毒素抗体发生特异性结合。
石房蛤毒素抗体和微孔底部的二抗发生结合，洗板后加入底物，此时会产生蓝色物质。
颜色的深度同样本中的石房蛤毒素浓度成反比。
在规定时间内终止颜色反应，用酶标仪进行读值。
每个孔内的样本浓度通过做出标准曲线来读取。
1.3.2样品前处理除去样品的贝壳，用蒸馏水洗净后放入均质器中。
称取15g均质后的样品，加入15ml0.1 mol/l的盐酸溶液，并煮沸5min。
煮沸过程中需要不断搅拌。
冷却均质后，以3500r/min 的速度进行10分钟离心。
贝类中麻痹性贝类毒素的测定 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准贝类中麻痹性贝类毒素的测定1 范围本标准适用于贝类及其制品中麻痹性贝类毒素的测定。
第一法为小鼠生物法，适用于麻痹性贝类毒素的总量测定；第二法为酶联免疫吸附法，适用于麻痹性贝类毒素的筛查检测；第三法为高效液相色谱法，适用于麻痹性贝类毒素总量(STXeq)，以及GTX4、GTX1、dcGTX3、B1、dcGTX2、GTX3、GTX2、neoSTX、dcSTX、STX等组分含量的常规检测；第四法为液相色谱-串联质谱测定法，适用于GTX1、GTX 4、GTX2、GTX 3、dcGTX2、dcGTX 3、neoSTX、STX、dcSTX、GTX5等10种麻痹性贝类毒素组分含量的测定及确证。
第一法小鼠生物法2 原理方法采用小鼠生物法对PSP予以定量。
根据小鼠腹腔注射贝类提取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位(corrected mouse unit，CMU)，计算确定每100 g样品中PSP的鼠单位。
以石房蛤毒素作为标准，将鼠单位换算成毒素的微克数，计算确定每100 g贝肉内的PSP微克数。
所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的PSP毒素总量。
3 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 氢氧化钠（NaOH）：将4.0 g氢氧化钠（NaOH）溶于1 L蒸馏水中。
3.2 盐酸（HCl）：分析纯。
3.2.1盐酸溶液（0.18 mol/L）：将15 mL浓盐酸（HCL）用蒸馏水稀释至1 L。
3.2.2盐酸溶液（5 mol/L）：将41.7 mL浓盐酸用蒸馏水稀释至100 mL。
3.3 无水乙醇（CH3CH2OH）：分析纯。
3.4 石房蛤毒素标准品（Saxitoxin，STX,C10H17N7O4·2HCl）：纯度≥98.0％。
3.5 标准溶液的配制3.5.1 石房蛤毒素贮备液（100 μg/mL）：用蒸馏水配制20％（v/v）的乙醇溶液，用5 mol/L盐酸调节pH到2.0～4.0之间，备用。
麻痹性贝毒单克隆抗体的制备和酶联免疫检测方法的建立
文献标识码 Ａ 文章编号 １ ０ ０ ０ － ４ ８ ４ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） ０ １ － ０ ０ ６ ９ － ０ ５
中 国 图 书分 类号
Ｒ ３ ９ ２ ． ４
［ 摘
ＢＡＬＢ／ｃ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ．Ｔｈｅ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｐｒ ｏ ｄ ｕｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ｆ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｍｏ ｕｓ ｅ ｓ ｐ ｌ ｅ ｅ ｎ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ＳＰ ２／ ０ ｍｙ ｅ ｌ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ，ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎｇ
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麻痹性贝毒的分析方法研究进展
麻痹性贝毒的分析方法研究进展作者：石昌磊周志刚刘童丁家林于永刚来源：《现代农业科技》2010年第21期摘要针对麻痹性贝毒的检测技术,着重从生物学测试方法、化学测试分析方法2个方面概括地介绍了贝毒检测技术研究的进展。
总结了几种相关检测技术各自的优点和不足及几种方法有机结合和优势互补,提出了技术的革新和新方法的使用将是贝类毒素检测手段的发展方向。
关键词麻痹性贝毒;分析方法;生物学测试法;化学测试法中图分类号R994.6;X55文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)21-0340-03AdvanceintheResearchMethodtoDetermineDiarrheticShellfishPoisonsSHI Chang-leiZHOU Zhi-gangLIU TongDING Jia-linYU Yong-gang(The Fishery Technology Spread Station of Lvshun in Dalian City of Liaoning Province,Dalian Liaoning 116041)AbstractIn this paper,focusing on the detection of paralytic shellfish poisoning techniques,the biological testing methods,and chemical test analysis methods were described in general on shellfish poisoning detection technology progress. The advantages and disadvantages of several related detection techniques,and several ways to combine and complement each other were summarized. New technology and new methodology will be the direction for shellfish toxins.Key wordsparalytic shellfish poisoning toxins(PSP);analytical method;biologicalmethod;chemicalmethod随着社会的发展,人们的生活质量渐渐提高,各种海产贝类食品越来越多地进入了寻常百姓家的餐桌,并且越来越受到欢迎。
贝类中麻痹性贝类毒素的测定 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准贝类中麻痹性贝类毒素的测定1 范围本标准适用于贝类及其制品中麻痹性贝类毒素的测定。
第一法为小鼠生物法，适用于麻痹性贝类毒素的总量测定；第二法为酶联免疫吸附法，适用于麻痹性贝类毒素的筛查检测；第三法为高效液相色谱法，适用于麻痹性贝类毒素总量(STXeq)，以及GTX4、GTX1、dcGTX3、B1、dcGTX2、GTX3、GTX2、neoSTX、dcSTX、STX等组分含量的常规检测；第四法为液相色谱-串联质谱测定法，适用于GTX1、GTX 4、GTX2、GTX 3、dcGTX2、dcGTX 3、neoSTX、STX、dcSTX、GTX5等10种麻痹性贝类毒素组分含量的测定及确证。
第一法小鼠生物法2 原理方法采用小鼠生物法对PSP予以定量。
根据小鼠腹腔注射贝类提取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位(corrected mouse unit，CMU)，计算确定每100 g样品中PSP的鼠单位。
以石房蛤毒素作为标准，将鼠单位换算成毒素的微克数，计算确定每100 g贝肉内的PSP微克数。
所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的PSP毒素总量。
3 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 氢氧化钠（NaOH）：将4.0 g氢氧化钠（NaOH）溶于1 L蒸馏水中。
3.2 盐酸（HCl）：分析纯。
3.2.1盐酸溶液（0.18 mol/L）：将15 mL浓盐酸（HCL）用蒸馏水稀释至1 L。
3.2.2盐酸溶液（5 mol/L）：将41.7 mL浓盐酸用蒸馏水稀释至100 mL。
3.3 无水乙醇（CH3CH2OH）：分析纯。
3.4 石房蛤毒素标准品（Saxitoxin，STX,C10H17N7O4·2HCl）：纯度≥98.0％。
3.5 标准溶液的配制3.5.1 石房蛤毒素贮备液（100 μg/mL）：用蒸馏水配制20％（v/v）的乙醇溶液，用5 mol/L盐酸调节pH到2.0～4.0之间，备用。
麻痹性贝毒的分析方法研究进展
的最 低 限为 ２ ｇＴ ｅ／０ ０ｐ Ｓ Ｘ ｑ１０ｇ贝组 织ｌ。 由于该 方法 需 要 ｌ但 １ 借助 显微镜 注射 样品 。 作困难 ， 有被推 广使 用。 操 没
蝗 虫 生 物 测试 法 分 析 Ｐ Ｐ： 蝗 虫 的腹 部 在 体 节 之 间 Ｓ 沿 注射 １ Ｌ的测 试样 品 ， 察并 记 录一 定 时 间 内被 麻痹 蝗 ０ 观
细胞 毒性 测试 法也 叫组 织培 养分析 法 ， 该方 法 测试Ｐ Ｐ Ｓ
毒 素的原理 是箭 毒 、 藜芦 定对 神经 母细胞 瘤 Ｎ ａ通道 具有协
同的开放 作 用 ， 增进 Ｎ 可 ａ向细 胞 内 的流 动 ，至 导致 细胞 裂 解死 使 亡。 作为 Ｎ ￣ 道 阻断剂 的 Ｐ Ｐ毒 素可 拮抗 这种 细胞肿 胀作 ａ通 Ｓ 用 ， 且 拮抗 程 度 与 毒 素 的剂 量 具 有很 好 的相 关 性 。ｅ ｅ 并 ＪＨ ａ 等 【应 用这 一原 理 建 立 了测 试 Ｐ Ｐ的方 法 ， 要 步 骤是 将 ｔ ３ １ Ｓ 主 分 离 的小 脑 神 经细 胞 悬浮 于 一定 的培 养 基 中 ， 细 胞一 旦 该
随着社会 的发 展 ， 人们 的生活 质量 渐渐提 高 ， 各种 海产
方法 与小鼠生物测 试很相近 。 该方 法检测 贝样 中 ＰＰ 用 Ｓ
贝 类食 品越来 越 多地 进入 了 寻常 百 姓家 的 餐桌 ， 且越 来 并
越 受到 欢迎 。 然而 人们 在享受 美味 的同时 ， 不知道 有 些 贝 却 类 是有 毒的 ， 使近 年来 贝类 中毒事 件频 繁发 生ｌ 。 洋 中的 ｌ 海
动物科 学
现 代农 业科技
２１ ０ ０年第 ２ 期 １
麻痹 性贝 毒 的分 析方 法研 究进 展
贝类毒素及其贝类毒素检测的研究
导读：贝类毒素及其贝类毒素检测的研究，摘要：贝类中毒是由一些浮游藻类合成的多种毒素而引起的，这些藻类是贝类的食物,这些毒素在贝类中蓄积，通过生物测定、物理分析、免疫化学可测定贝类毒素，赤潮毒素对人类造成的危害事件日益增多，贝类毒素属于海洋天然高分子有机化合物，它的形成与海洋中有毒素藻类赤潮密切相关，经过生物积累和放大转化为有机毒素，即贝类毒素，因此开展对贝类毒素的研究对人类有重要意义，1贝类毒素贝类（南京财经大学食品科学与工程学院,江苏南京，210000）摘要：贝类中毒是由一些浮游藻类合成的多种毒素而引起的，这些藻类是贝类的食物,这些毒素在贝类中蓄积。
通过生物测定、物理分析、免疫化学可测定贝类毒素。
关键词：贝类；毒素；检测；藻类；毒理效应；化学分析。
Shellfish poison and shellfish toxin detection research(Nanjing University of Finance and Economics Institute of Food Science and Engineering，Nanjing 21000,Nanjing,China) Abstract: shellfish poisoning is by some planktonic algae synthesis of a variety of toxin and cause, these algae is shellfish food, the poison in the shellfish accumulation. Through the bioassay, physical analysis, immune chemical measurement shellfish poison.Keywords: Shellfish; Poison; Detection; Algae, Toxicological effect; Chemical analysis. 20世纪50年代以后，海洋赤潮频繁，赤潮毒素对人类造成的危害事件日益增多。
贝类毒素的测定
精品课件
样品的测定
小鼠试验
若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间 大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样 品的毒力
若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提 取液后，再注射另一组小鼠（3只），得到 5min-7min的死亡时间
将混合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却至室温， 调节pH至2.0-4.0（切勿＞4.5）。将混合物移至 量筒中并稀释至200mL
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样品的测定
提取
将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至 上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可
必要时将混合物或上清液以3000r/min离心5min， 或用滤纸过滤
DSP是由于双壳贝类滤食含毒的涡鞭毛藻而引起 影响较严重的地区主要是日本和欧洲沿海国家，
发病率高，引起许多国家地区的关注 受DSP中毒的症状表现为消化功能紊乱（腹泻、
呕吐、腹痛），食用含毒贝类后30分钟至几小 时出现症状，中毒者一般在3-4天康复，尚无死 亡病例
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腹泻性贝类毒素的测定方法
试剂
盐酸溶液：0.1 mol/L 盐酸溶液：5 mol/L 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L
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仪器和设备
均质器 天平（感量0.1g） 离心机 pH计 秒表 玻璃皿；烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等 注射器：1mL 注射器针头：8#
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小白鼠：
体重为19-21g的健康ICR系雄性小白鼠 若体重＜19g或＞21g，查表中的校正系
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剂
样品的测定
检样的制备
贝类罐头 1.将罐内所有内容物（包括贝肉组织及汁液），
ELISA法与小白鼠生物法检测麻痹性贝类毒素的研究
亡事故。麻痹性贝类毒素具有毒性大、 反应快 、 防治 困难 等特 点 一Ｊ 。联 合 国卫 生 组 织 规 定 ， 可食 贝 类
（ ｎｔ ｉ ｅｔ Ｍｏ ｉｒ ｇ Ｃｎｅ ｏ ｏｎ ｒｆＭａｉｅ ｎｉ ｎ ｅ ｔ ｎ ｉ ｅ ｅｏｒ ｓｏ Ｆ ｚｏ ｉ ， ｕａ ｒｖ ｃ ５ ０ ３ ｒ ｖ ｏｍ ｎ ａｄＦｓ ｒ Ｒ ｓｕｃ ｕｈｕＣｔ Ｆｊ ｎＰｏｉ ｅ ０ ０ ） ｎＥ ｒ ｈｙ ｅｆ ｙ ｉ ｎ ３ Ａ ｓ ａｔ Ｐｒｌｔ ｈｌｉ ｏ ｏ （ Ｓ ）ｉ ｏｅｏ ａｉｅｂｏ ｘ ｓ ｉ ｏ ｄ—ｗｄ ｉ ｒ ｕｉ ｎ ｏｔ ｅ ｏｓｈｒ ・ ｂｔ ｃ ： ａａ ｉ ｓｅｌｓ ｐｉ ｎ Ｐ Ｐ ｓ ｎ ｆ ｒ ｉｔ ｉ ｔ ｗ ｒ — ｉｅｄｓ ｉ ｔｎａｄｍ ｓ ｓｒ ｕ ａ ｒ ｙｃ ｆｈ ｓ ｍ ｎ ｏｎ ｗ ｈ ｌ ｔｂ ｏ ｉ ｍ・
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ａ ａ ｙ ｉ ｈ ｌ ｓ ｏｓ ｎ ｂ ａ ｓ ｏ ｔ ｒ ｎ ｔ ｆｐ ｒ ｌ ｔ ｓ ｅｌ ｈ ｐ ｉ ｙ ｍｅ ｎ ｆＥＵ Ｓ ａ ｄ ｍｏ ｓ ｉａ ｓ ｙ ｏ ｃ ｉ ｆ ｏ Ａ ｎ ｕ ｅ ｂ ｏ ｓ ａ
ＨＵＡＮＧ Ｙ ． ｅ ｉｗ ｎ
黄 奕 雯
（ 福建省海洋环境 与渔 业资源监测 中心 ３ ００ ） ５ ０ ３
摘 要 ：麻痹 性贝 类毒 素 （ Ｓ ） 是 当前 世界 范 围 内分 布 最 广 、危 害 最 大 的 一种 海 洋 生 物 毒 素。 ＰＰ
该研 究以福建地区贻贝为原料，采用酶联免疫 吸附法 （ ＬＳ ） 与传统的小 白鼠生物测定法对 ２ Ｅ ＩＡ ０ 份贻贝样品中的麻痹性贝类毒素进行检测，结果表明：两种方法检测麻痹性贝 类毒素的结果 吻合
近 年来 ， 着工 农 业 生 产 的迅 猛 发 展及 沿 海地 随 区人 口的逐 渐 增 多 ， 量 未 经 处 理 的 工农 业 废 水 和 大 生 活污 水排 人 海 洋 ， 致 近 海 和 港 湾 的 富 营 养 化 程 导 度 日趋 严 重 ， 潮 现 象 在 我 国沿 海 地 区频 频 发 生 。 赤 赤 潮对 海洋 生态 环境 、 天然 海洋 生 物 资源 、 海 增养 近 殖 业等 都 产生 了直 接 或 间 接 的 危 害 ， 中有 毒 赤 潮 其
贝类毒素的测定
使用
BG
7
样品的测定
检样的制备
贝类
洗净外壳，切断闭壳 肌，开壳，用清水淋 洗内部去除泥沙及其 他外来杂质，仔细取 贝 肉 ， 收 集 沥 水 5min （避免贝肉堆积）， 捡出碎壳等杂物，将 贝肉均质
BG
注意：取肉时切勿
割破肉体，开壳前
贝类毒素的测定 生物法
BG
1
一、麻痹性贝类毒素（PSP）
Para1ytical shellfish poisoning
PSP中毒是最常见的食用贝类中毒 PSP由一组石房蛤毒及其衍生物组成，PSP与涡
鞭毛藻的水华有关（＞106个细胞／升） PSP在世界范围内分布 PSP中毒引起神经系统紊乱，呼吸困难，感觉
生物法(即小白鼠法)，系采用ICR系列的小白鼠作为检验 动物，进行贝类毒素分析
生物法(即小白鼠法)优势：当使用生物法检测法时，一旦 发现超标样品，则本批样品不得食用，这说明所检测贝类
中相关的毒素含量已经影响到人们的食用安全，不适合食
用。
BG
3
麻痹性贝类毒素的测定 生物法
(SC/T 3023-2003)
BG
9பைடு நூலகம்
样品的测定
提取
取 100g 样 品 于 800mL 烧 杯 中 ， 加 0.1mol/L HCl溶液100mL充分搅拌， 检 查 pH （ pH 应 为 2.0-4.0 ） 。 需 要 时，可逐滴加入5mol/L HCl溶液或 0.1mol/L NaOH溶液调整pH，加碱 时速度要慢，同时需不断搅拌，防 止局部碱化破坏毒素
BG
14
结果的计算与判断
毒力的计算
小鼠生物法检测麻痹性贝类毒素技术探讨及应用
&&近年来#随着近岸水体污染日益严重和生态环境 的持续恶化#中国海域赤潮发生频率呈上升趋势#而 且有毒赤潮记录也大幅上升$#' #这不仅对渔业)滨海 旅游业造成了严重的破坏#同时也对海洋生态系统以 及人类健康产生影响$! J%' " 海洋藻毒素是由海洋中 的有毒赤潮藻类通过食物链传递给藻食性的鱼)虾及 贝类等生物#并在其体内蓄积形成的有毒高分子化合 物$O JI' #人类食用了含有藻毒素的海产品时可能会引 起中毒#严重可致其死亡$A' " 赤潮毒素中的麻痹性 贝类毒素% =2.23/4)?,(+33>),( =:),:*)*@#^6^& 因对人类 危害严重而受到广泛关注#已成为全球水产养殖业和 海洋食品进出口部门的重点检测对象" 现已证实亚 历山大藻% ,"-.%*/'0&1& )膝沟藻属 % 23*4%&"%'.& )原 甲藻 属 % +'3'3#-*$'&1& 等 甲 藻 是 ^6^的 直 接 生 产 者$$' " ^6^具有毒性大)中毒范围广)反应快等特点# 其毒性与河豚毒素相当$K' "
麻痹性贝类毒素标准样品的研制
麻痹性贝类毒素标准样品的研制王秋艳;赵景红;徐杨;郑秋月;赵昕【摘要】Scallop, naturally contaminated with paralytic shellfish poison (PSP) toxins were collected and the shells were opened. Meat were removed, homogenized and lyophilized. Homogeneity and stability testing results showed that the PSP reference material was homogeneous and stable. The certification value was the average assigned by eight laboratories, The PSP content and its expanded uncertainty was (589 ±42) MU/g (k=2 ). The PSP reference material can be used in the method evaluation and quality control in the determination of PSP.%将麻痹性贝类毒素阳性的新鲜扇贝去壳后取贝肉,经过匀浆,冷冻干燥等步骤制备成冻干粉,然后进行均匀性和稳定性检验,结果表明,制备后的样品均匀,稳定,满足标准样品的要求.以多家实验室定值的方式对该标准样品进行定值,定值结果为( 589±42 )MU/g(k=2).该标准样品可用于麻痹性贝类毒素检测过程的方法验证与质量控制.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2012(021)002【总页数】3页(P4-6)【关键词】麻痹性贝类毒素;标准样品;小鼠生物法;扇贝【作者】王秋艳;赵景红;徐杨;郑秋月;赵昕【作者单位】辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连116001【正文语种】中文【中图分类】O652.3麻痹性贝类毒素（paralytic shellfish poison，PSP）是指化学结构以石房蛤毒素（Saxitoxin，STX）为代表，摄食后可产生麻痹作用存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称［1］。
贝类毒素的测定
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样品的测定
提取
将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至 上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可
必要时将混合物或上清液以3000r/min离心5min， 或用滤纸过滤
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提取
以少量乙醚将浓缩物移入100mL磨口烧瓶中，再次减压 浓缩去除乙醚
以1%吐温60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释 到10mL。此时1mL试液相当于20g去壳贝肉的重量，以 此悬浮液做为试验原液
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小白鼠试验
振荡使试液或其稀释液成为均匀的悬浮液
将每只小白鼠称重，每三只小白鼠为一组，分别将1mL 试液注射到小白鼠腹腔中
稀释提取液时，要调节pH至2.0-4.0,逐滴加入 0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液
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结果的计算与判断
毒力的计算
根据小鼠的死亡时间，在附录B 中查出相应的每毫升注射
液的鼠单位数M
将存活鼠的死亡时间视为大于60min即相当于＜0.875MU
若试验动物重量＜19g或＞21g。则根据附录C查出重量校 正系数k
试剂和材料
丙酮（分析纯）
乙醚（分析纯） 1%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐温-60，溶于生理盐
水（0.8%NaCl）中，并定容至100.0mL
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仪器和设备
旋转蒸发器 均质器 磨口烧瓶：圆底，500 mL，250 mL，100 mL 布氏漏斗：φ100mm 分液漏斗：具塞，500 mL 天平：感量0.1g 刻度试管：10mL，具塞 冰箱：0℃-5℃和-15℃- -20℃ 注射器：1mL 注射器针头：8# 小白鼠：体重为16-20g的健康ICR系雄性小白鼠
麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法的建立
麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法的建立于志强;孙运;陈小青;刘汉伟;马中春【摘要】目的:建立麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法.方法:小鼠神经干细胞(NSC)培养于96孔培养板中,至对数生长期,每孔加入170μL培养液和10μL石房蛤毒素(STX)标准品(分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ng),再加入10 mmol/L的乌本苷10μL及1 mmol/L的藜芦碱10μL.同时设置乌本苷及藜芦碱对照孔,以及空白对照孔.CCK-8溶液孵育后用酶标仪测定各孔D(450)值,根据石房蛤毒素标准液含量与D(450)值之间的剂量反应关系,建立标准曲线.结果:培养的正常NSC第1天为单细胞悬液,第2～3天聚集成为小神经球,第4天为大神经球;加入乌本苷及藜芦碱后较多细胞出现肿胀破裂,加入STX后可见肿胀或破裂死亡的细胞,但细胞形态多为正常.并于0.2～1.0 ng范围内建立了麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法并建立了标准曲线,其回归方程为y=1.252+0.495x(r=0.9980,P<0.01).结论:成功建立了麻痹性贝类毒素体外生物毒性检测方法,该研究为神经性贝类毒素的体外检测相关研究奠定了基础.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2019(031)004【总页数】4页(P323-326)【关键词】麻痹性贝类毒素;小鼠神经干细胞;体外检测方法;乌本苷;藜芦碱【作者】于志强;孙运;陈小青;刘汉伟;马中春【作者单位】宁波中盛产品检测有限公司/宁波海关技术中心,浙江宁波 315000;宁波中盛产品检测有限公司/宁波海关技术中心,浙江宁波 315000;宁波中盛产品检测有限公司/宁波海关技术中心,浙江宁波 315000;宁波中盛产品检测有限公司/宁波海关技术中心,浙江宁波 315000;宁波中盛产品检测有限公司/宁波海关技术中心,浙江宁波 315000【正文语种】中文【中图分类】R991贝类毒素是由海洋中的有毒藻类通过食物链传递给藻食性的贝类，并在其体内蓄积、放大、转化形成的有毒高分子化合物[1]。
水产品中麻痹性贝类毒素(PSP)的快速检测
水产品中麻痹性贝类毒素(PSP)的快速检测黄玉柳;黄国秋;叶欣宇;黎小正;吴祥庆;庞燕飞;谢宗升;陈静【摘要】介绍了美国ABRAXIS麻痹性贝类毒素试剂盒的测定原理和测定方法,应用该试剂盒对广西钦州和防城港海域近江牡蛎样品各20个、北海海域文蛤样品20个,进行麻痹性贝类毒素检测.应用酶联免疫试剂盒检测麻痹性贝类毒素,全部试验过程在2h内完成,检测限0.02 ng/g,灵敏度为0.015 ng/g.应用ELISA法检测麻痹性贝类毒素,具有简便、快捷、灵敏、成本低廉等特点,非常适于快速检测的实际需求,有望作为理想的筛选分析方法之一,在水产品质量快速检测、养殖区染毒情况调查以及上市贝类质量监控方面发挥重要作用.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】2页(P255-256)【关键词】麻痹性贝类毒素;酶联免疫;食品检验;小白鼠生物法【作者】黄玉柳;黄国秋;叶欣宇;黎小正;吴祥庆;庞燕飞;谢宗升;陈静【作者单位】广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021;广西水产研究所,广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R446.62麻痹性贝类毒素(PSP)是指存在于贝类体内、化学结构以石房蛤毒素(Saxitoxin，STX)为代表、摄食后可产生麻痹作用的海洋生物毒性物质的总称，主要是由甲藻类中的亚历山大藻(Alexandrium)以及膝沟藻属(Gonyaularx)、原甲藻属(Prorocentrum)等一些形成赤潮的种类产生的一系列氨基甲酸酯类衍生物，是目前世界上分布最广、食物中毒发生频率最高、危害程度最大的一类毒素。
目前国际上普遍采用小鼠法、生物免疫法、色谱法和质谱法等手段来检测贝类并做出预警预报［1-2］。
贝毒有哪些检验方法
贝毒有哪些检验方法贝类毒素又称赤潮生物毒素，是由赤潮生物产生的一系列天然活性物质。
对其贝毒需要了解其检验工作，那么贝毒有哪些检验方法?给大家详细的讲解一下。
贝毒一共有4种检验方法，1、生物检测法二十世纪五十年代，小白鼠生物学方法被首先采用于测定PSP 和NSP的毒性。
该方法是经过一系列的前处理过程(针对水溶性或脂溶性的毒素)，将确定为有毒性的部分按不同剂量注射到实验用纯品系的小白鼠腹腔内，观察小白鼠的中毒情况，通过半致死浓度等指标，将致死的鼠单位(Mu)换算成毒素含量。
小白鼠生物学检测法在未知贝毒的发现和研究过程中发挥了巨大作用，在化学方法没有建立以前，作为贝毒检测的常规方法而得到了非常广泛的应用，目前世界上大约有81%的国家采用该方法检测DSP 和PSP，对于NSP和ASP 的检测有的国家仍用该方法。
我国目前也采用该方法对贝毒实施检测。
但该方法存在着很多不足和缺陷，例如：仅能指出毒性的大小,无法确定毒素的组成和含量;所测得的毒性和小鼠的品系有关，可比性较差，必须进行标准毒素的校准才有可能相比;毒性测定结果的重复性差;毒性测试所需时间长;需要受过专门训练的操作人员;小鼠维持费用较高;对很多脂溶性毒素来说，过多的干扰基质很容易造成假阳性和假阴性;另外，由于动物保护主义的反对，越来越需要其他的方法来替代它。
2、免疫分析法免疫分析法，如ELISA (酶联免疫吸附检测)、RIA(放射免疫分析)、EIA (竞争性酶免疫分析) 以及S-PIA(固态免疫珠检测)，是以抗原-抗体特异性反应原理为基础，将毒素作为抗原注射到兔子等实验动物体内使其产生专一性抗体，然后从其血清中提取抗体，用放射性或荧光物质进行标记，将提取的贝毒或贝类匀浆组织暴露于标记物中，通过检测抗血清-抗原混合物中放射性或荧光强度以测定样品中毒素含量的方法。
通常采用的方法为ELISA，酶联免疫方法便宜、快速，适合处理大批量样品，它不需要非常复杂和昂贵的设备，并能够实现自动化。
贝类毒素检测技术及研究进展
贝类毒素检测技术及研究进展
曹际娟;卫锋;马惠蕊;唐守亭;储晓刚;方晓明;张艺兵
【期刊名称】《检验检疫学刊》
【年(卷),期】2004(014)001
【摘要】本文针对腹泻性贝毒、麻痹性贝毒、神经性贝毒和遗忘性贝毒4种贝类毒素的检测技术,着重从小白鼠生物试验法、化学仪器分析技术和免疫学方法三个方面概括地介绍了贝毒检测技术研究的进展情况.总结了三类检测技术各自的优点和不足,并明确在一个较长的时间内,生物法、免疫法及高灵敏度、高特异性的仪器法及三种方法的有机结合和优势互补将继续是贝类毒素检测手段的发展方向.【总页数】4页(P53-56)
【作者】曹际娟;卫锋;马惠蕊;唐守亭;储晓刚;方晓明;张艺兵
【作者单位】辽宁出入境检验检疫局;辽宁出入境检验检疫局;辽宁出入境检验检疫局;辽宁出入境检验检疫局;中国进出口商品检验技术研究所;中国进出口商品检验技术研究所;山东出入境检验检疫局
【正文语种】中文
【中图分类】R1
【相关文献】
1.贝类毒素及检测技术的研究现状 [J], 马荣桧;高彦;万进;宫小明;孙军
2.水产品中麻痹性贝类毒素的微流体免疫检测技术研究 [J], 赵涵;孙帅;董益阳;王斌;刘佳蕙;刘锐萍
3.贝类毒素检测技术现状与进展 [J], 朱昱
4.脂溶性贝类毒素安全评价与检测技术研究进展 [J], 谭志军;吴海燕;郭萌萌;杨帆;王联珠;李兆新;翟毓秀
5.麻痹性贝类毒素检测技术研究 [J], 汤云瑜;黄冬梅;蔡友琼
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麻痹性贝类毒素 ｆ Ｐ Ｓ Ｐ １是 指 存 在 于 贝 类 体 内 化 学 结 构 以石 房 蛤 毒 ｆ Ｓ ａ ｘ ｉ ｔ ｏ ｘ ｉ ｎ ， Ｓ Ｔ Ｘ ）为 代 表 ．摄 食 后 可产 生 麻痹 作 用 的海 洋 生 物毒 性 物 质 的总 称
其 它 设 备 ：离 心 机 、 电炉 、涡 旋 振 荡 器 、秒 表 、烧杯 、量 筒 、离心 管 、微 量 移液 器 、注射 器 ； 试 验 小 鼠 ：体 重 １ ９ ～ ２ １ ｇ的健 康 Ｉ Ｃ Ｒ系雄 性 小
鼠． 由浙 江省 动物 实验 中心繁 育 。
１ ． ３ 提 取 和 净 化
主要 是 由 甲 藻类 中 的 亚 历 山 大 藻 属 ｆ Ａ ｌ ｅ ｘ ａ ｎ ｄ ｒ ｉ ｕ ｍ ）
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材料 与试 剂
试剂 ：盐 酸 （ 分析 纯 ） ，水 为超 纯水 ； 麻痹 性 贝类 毒素 试 剂盒 （ ９ ６孔微 孔 板 ） ：美 国
Ａ ｂ ｒ ａ ｘ ｉ ｓ 公司：
较 为繁琐 、过程 较 为复杂 、对 小 白 鼠和 实验 环境 要 求 较 高 ，且 重 现性 差 。近年来 。利用抗 原抗 体结 合 的酶联 免疫 法 在海 洋生 物毒 素检测 方 面得 到 了迅 速 发展 ，该法 操 作 简单 ，实 验 时 间较 短 ，灵 敏 度 高 ， 适 合 浓度低 的样 品 ，但该 法成 本 较高 ，且 由于 贝类 的复 杂性 ．很 多毒 素类 似物 容易 相互转 化 ．因此 对
以及 膝 沟 藻 属 ｆ Ｇ ｏ ｎ ｙ ａ ｕ ｌ ａ ｒ ｘ ） 、原 甲藻 属 ｆ Ｐ ｒ ｏ ｒ ｏ ｃ ｅ ｎ ． ｔ ￣ ｕ ｍ ）等 一些 形 成赤 潮 的种 类 产生 的一 系列 氨 基 甲 酸 酯类 衍生 物 ．是 目前世界 上 分布最 广 、食物 中毒 发 生频 率最 高 、危害 程度 最大 的一类 毒 素 。麻 痹性 贝 类毒 素最 常见 的生 物是蛤 和 贻贝 ．偶 尔也 出现 于 布 氏海菊蛤 、扇 贝 和牡蛎 目前 国际上 普遍 采用 小 白 鼠生 物法 、酶联免 疫法 、色 谱法 和质 谱法 等手 段 来 检测 贝类 毒 素 ．并 做 出预警 ［ １ － ２ ］ 。 小 白 鼠生 物 法 和酶 联 免疫 法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ）是 近 几 年来测定 Ｐ Ｓ Ｐ最 常 用 的 的 方 法 。小 白 鼠生 物 法 是
将 每个 西林 瓶 中 的冻 干 粉 末 作 为 一 个 检 测 样
样 品 中的原 始 或潜 在总 毒素作 出判 断 比较 困难 由
于国内 Ｐ Ｓ Ｐ标 准 物 质 获 取 困难 ．本 文 以历 年 农 业 部能 力验 证盲 样检 测 为实验 基础 同时采 用小 白鼠
生 物法 和 酶联 免疫 法对 样 品进 行测 定 ，通 过 比较 ２ 种方 法 的优缺 点 ．为建 立快 速准 确 的麻痹 性 贝类毒
１ ． ２ 仪器 与 设备
酶 标仪 ：雷 勃 ＭＳ Ｋ ３ ，美 国 Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍｏ 公 司；
电子 天平 （ 感应 ０ ． ０ １ ｇ ） ：Ｔ Ｅ ４ １ ２ 一 Ｌ ，德 国 Ｓ ａ ｒ ．
ｔ ｏ ｕ ｒ ｉ ｕ ｓ 公司 ：
法 ．该 法 较 适 用 于 Ｐ Ｓ Ｐ浓 度 较 高 的 样 品 ，但 操 作
目前 唯一 得 到 国际 公 认 Ａ Ｏ ＡＣ标 准 生 物检 测 的 方
ｐ Ｈ精 密试 纸 ：测定 范 围 ０ ． ５ ～ ５ ； 试验 样 品 ：采 用 天然海 域生 长 的含麻 痹性 贝类 毒 素 的扇 贝肝 胰腺 做基 质 ，经低 温冷 冻 干燥制 备 而 成 ．并 经过 均匀 性实 验验证 的冻干 粉末 ．封 装于 西 林 瓶 ．由农 业部麻 痹 性贝类 毒 素能力 验 证组 织部 门 提供。
没有结 合 的酶标 记 物在 洗涤 步骤 中被 除去 。将 底物
提取 液转移 到 ５ ０ ｍＬ离 心 管 中 ． ４ ０ ０ ０ ｒ ｐ ｍ 离 心
ｌ ４
宁 浊 栉 技
２ ０ １ ４ 年 第 ３ 期
麻痹性贝类毒素的生物法与酶联免疫法测定 比较
吴蓓 莉 ，钟 惠 英 ，邱 洁琼 ，郑 文炳
（ 宁波 市海 洋－ ９渔 业 研 究 院 ３ １ ５ ０ １ ２ ）
摘
பைடு நூலகம்
要 ：采 用 小 白 鼠生 物 法 和试 剂 盒 酶 联 免 疫 法 对 近 ４年农 业部 贝类 毒 素 的 实 验 室 间 能 力 验 证 比对 ，结 果 表 明 ，２
种 方 法 检 测 的 数 据 结 果 吻 合 性 较 好 ，检 测 同一 样 品 时 相 对 偏 差 为 １ ． １ ９ ％一 ６ ． ２ ５ ％ ，准 确 度 较 高 。 但 ２种 方 法 各 有 其 优 缺 点 ，如将 这 ２种 方 法 结 合 运 用 ，可 以 提高 实 验 数 据 的准 确 性 ，可 作 为 实验 室质 控 的一 种 有 效 手 段 。
４ ． ０ ．将 烧 杯置 电炉 上 加热 ．徐 徐煮 沸 ５ ｍｉ ｎ后 ，冷
素 检测 方法 奠定 良好 的基 础
却至 室 温 ，调 节 ｐ Ｈ至 ２ ． ０ ～ ４ ． ０ 。将该 混合 物 移到 量
２ ０ １ ４年第 ３期
宁皿 杯鼓
１ ５
筒 中 ．用 水 定 容 到 ５ ０ ｍＬ 。静 置数 分 钟 后 ，将 上 层
本 ，转 移 人 １ ０ ０ ｍＬ烧 杯 中 ，用 ２ ０ ｍＬ 、０ ． １ ８ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 盐 酸 溶液分 数 次反 复冲洗 西林 瓶 ．最终 合 并到烧 杯 中制 备 成 混 悬 样 本 然 后 再 加 入 约 ３ ０ ｍ Ｌ蒸 馏 水 ， 充 分 混 合 ．用 ０ ． １ ８ ｍ０ １ ／ Ｌ盐 酸 溶 液 调 节 ｐ Ｈ至 ２ ． ０ ～