临床病原体检查
临床病原学检查
酸杂交技术、技术、芯片技术等）
细菌感染检查检验特点
•通过对标本直接显微镜检，病原菌的分离培养鉴定， 病原菌的抗原检测，核酸检测和细菌感染后机体免 疫应答产物的测定及药物的测定及药物敏感性试验， 对细菌感染性疾病可作出及时、准确的病原学诊断。
7
革兰染色法（ ）
由丹麦医生 于1884年创立。 1.步骤
诊断学
临床病原学检查
2
临床病原体检查目的
• 临床病原体检查目的: • 是确定感染的发生和性质，在疾病早期提
供恰当的治疗方案，并采取有效的预防措 施，防止感染传播造成的危害。
各种不同病原体的实验诊断方法遵 循以下基本原则
1.正确、规范采集和运送标本。 2.直接显微镜查见病原体或检出病原体抗原，借助分子 生物学的方法检测病原体核酸，结合病人的病史、症状 或体征，快速作出初步诊断。 3.初步诊断同时，对病原体进行分离与鉴定。 4.检测机体对病原体的免疫产物。 5.参与临床选择抗菌药物，指导和监控微生物的治疗方 案，避免 耐药菌株的产生。
母婴垂直传播 宫内传播 分娩时微小皮损处传播 产后母婴密切接触 性传播
• 高 (>8%): 占45% • 一生感染的危险 >60% • 婴幼儿感染常见 • 中等 (2%～7%): 占43% • 一生感染的危险是 20%～60% • 感染存在于所有年龄组 • 低 (<2%): 占12% • 一生感染的危险 <20% • 许多感染发生在成人危险组
涂片 结晶紫 碘液 酒精 染色 媒染 脱色
革兰阳性菌
(Gram positive bacteria)
革兰阴性菌
(Gram negative bacteria)
复红 复染
9
临床常见病原体检查
02
病毒检查
病毒分离培养
分离培养
将病原体从患者体内或环境中分 离出来，在细胞培养基中进行培 养，观察病毒对细胞的感染和增
殖过程。
培养基选择
根据病毒的种类和特性选择适宜的 培养基，如动物细胞、昆虫细胞或 植物细胞培养基。
培养条件
病毒分离培养需要在一定的温度、 湿度和气体环境条。
衣原体抗原检测
衣原体抗原检测的优点是操作简便、快速，适用于大 量人群的筛查。
衣原体抗原检测是通过检测患者体内是否存在衣原体 抗原，来判断是否感染衣原体。
衣原体抗原检测的缺点是敏感性较低，可能出现假阳 性或假阴性的结果，需要结合临床表现和其他检查结 果进行综合判断。
衣原体核酸检测
培养分离的缺点是操作复杂、 耗时较长，需要专业人员操作 和解读结果。
组织病理学检查
组织病理学检查是一种有创性的真菌检查方法，通过取疑似感染部位的活组织进行病理学检 查。
组织病理学检查的优点是可以观察到真菌在组织中的侵犯情况和组织反应，有助于确诊和评 估病情。
组织病理学检查的缺点是有创伤性，需要专业人员操作和解读结果。
感染。
直接镜检通常使用涂片或刮片法， 将疑似感染部位的标本涂抹在载 玻片上，然后进行显微镜检查。
直接镜检的优点是操作简便、快 速，但敏感性较低，有时需要多
次检查才能确诊。
培养分离
培养分离是真菌检查的常用方 法，通过将疑似感染部位的标 本接种在培养基上，观察真菌 的生长和繁殖情况。
培养分离的优点是特异性高， 可以明确病原体的种类和药敏 试验，有助于指导临床治疗。
支原体培养分离是诊断支原体感染的重 要方法，通过采集患者呼吸道分泌物、 痰液等标本，在培养基上进行培养，观 察支原体是否生长繁殖，从而确定是否
临床病原体检查的常用方法
病原体是指侵犯人体、导致人体受感染的微生物，其中对人体伤害性最大的是病毒和细菌。
当人体被病原体入侵之后，这些微生物开始在人体中繁殖生长、释放毒性，进而导致人体出现不同的病症，这个过程就称为感染。
但是人体在被病毒入侵以后，能够激发人体内的抵抗力，与病毒对抗，这也就是我们常说的免疫力。
然后身体内部的免疫和入侵后的病毒，不断对抗，如果身体免疫能力强，那身体就不形成感染，病原体便会逐渐消失，如果身体免疫力较弱，无法对抗强悍的病毒，那将会形成感染，感染一旦恶化、扩散，就会对人体造成生命安全的威胁。
对抗感染性病毒，除了机体自身的免疫功能，还可以借助外力，比如抗菌药物，在药物的帮助下，可以有效击退病毒，将疾病治愈。
一、临床病原体检查临床病原体检查的目的主要是为了明确是否已经发生感染，确定病原体属于什么类型，其次是将体外抗微生物药物敏感实验结果呈现出来。
此外，检查临床病原体也是为了配合流行病学的调查，协助密切监察病毒的发生趋势，然后及时向有关部门报告。
一般来讲，展开一次临床病原体检查，首先要通过医生和护士采集标本，然后由检验师送往检验科进行检验，检验科通过直接显微镜检查、血清学检查、细菌培养等方式进行检验，然后出具检验报告，最后再由医生明确诊断，分析后予以合理的用药。
二、临床病原体标本采集在采集标本的过程中，要遵循以下几个原则，第一，要根据患者的患病史，同时结合患者的临床表现，确定采集什么类型的标本，然后再选择患者病变发生明显的部位进行采集；第二，要明确采集标本前，患者是否使用过抗生素药物，一般在发病的早期，患者会采取抗生素药物治疗，来对抗病毒，如果患者使用过抗生素，要在标本采集上注明，以免影响标本的检验结果；第三，采集标本的环境要干净卫生，采集后的标本要置于无菌器皿中，并且密封完好，以免在采集、运送过程中被污染；第四，标本在采集之后，必须立刻贴上标签，和检验申请单一起送入检验科，以免出现差错。
总之，要遵循无菌、及时、符合要求、标清注明的原则。
检验科常见病原体检测原理与方法
检验科常见病原体检测原理与方法一、引言病原体检测是临床检验科的重要工作之一，通过对患者体液、组织或分泌物中潜在的病原微生物进行检测，可以帮助医生确定疾病的诊断、预后以及治疗方案的选择。
本文将介绍常见的病原体检测原理与方法。
二、细菌检测原理与方法1. 培养法培养法是最常用的细菌检测方法之一。
基本原理是将样本接种到富含营养物的培养基上，利用细菌的生长及代谢特性，在培养条件下培养出细菌并进行鉴定。
常用的培养法有血培养法、尿培养法等。
2. PCR法PCR法是一种基于聚合酶链式反应（PCR）原理的细菌检测方法。
通过特异性引物，可以扩增靶标基因序列，进而检测细菌的存在。
PCR法具有高度敏感性和特异性的优势，可以快速准确地检测细菌。
3. 蛋白质组学分析蛋白质组学分析是一种通过检测样本中的蛋白质组成来鉴定细菌的方法。
通过质谱仪等设备，可以分析样本中的蛋白质质量和序列，进而确定细菌的种类。
三、病毒检测原理与方法1. 核酸检测法核酸检测法是目前最常用的病毒检测方法之一。
该方法通过提取样本中的核酸，利用PCR等技术检测病毒的核酸序列，进而确定病毒的存在。
2. 免疫学检测法免疫学检测法是基于免疫学原理来检测病毒的方法。
通过检测患者体液中的抗体或抗原，可以确定病毒的感染情况。
常用的免疫学检测法包括ELISA、免疫荧光等。
3. 电镜法电镜法是一种利用电子显微镜对病毒进行直接观察和检测的方法。
通过放大病毒颗粒的形态特征，可以确定病毒的存在。
四、寄生虫检测原理与方法1. 寄生虫卵检测法寄生虫卵检测法是最常用的寄生虫检测方法之一。
该方法通过对患者样本中的粪便、尿液等进行检测，寻找寄生虫卵的存在，以确定寄生虫感染的情况。
2. 血液学检测法血液学检测法是通过检测患者血液样本中的寄生虫的存在来确定感染情况。
常用的检测方法包括滴虫检测、钩虫检测等。
3. 分子生物学检测法分子生物学检测法是一种利用核酸检测寄生虫的存在的方法。
通过PCR等技术，可以检测患者样本中的寄生虫核酸序列，确定寄生虫感染情况。
临床分析病原体的快速检测方法
临床分析病原体的快速检测方法在临床医学领域，快速准确地检测病原体对于诊断疾病、制定治疗方案以及预防疾病传播至关重要。
随着科技的不断进步，临床上出现了一系列快速检测方法，极大地提高了病原体检测的准确性和速度。
本文将介绍几种主要的病原体快速检测方法。
1. 免疫层析法免疫层析法是一种常用的病原体快速检测方法。
它基于抗原与抗体之间的特异性结合原理，能够快速检测出特定病原体的存在。
免疫层析法操作简便，结果快速可靠。
常见的免疫层析法有比色法、荧光法和化学发光法等。
2. 核酸扩增技术核酸扩增技术是一种高度敏感和特异性的病原体检测方法。
其中最为常用的是聚合酶链式反应（PCR）技术。
PCR技术可以扩增极少量的目标DNA或RNA分子，从而实现对病原体的检测。
PCR技术的快速发展，使得临床上诊断病原体感染的准确性大幅提高。
3. 质谱分析法质谱分析法是一种高灵敏度的病原体检测方法。
它基于测量样品中病原体分子的质量和相对丰度，通过分析得到病原体的特征谱图，从而快速进行检测和鉴定。
质谱分析法在快速检测病原体方面具有显著优势，但是设备复杂且昂贵，需要专业人员操作。
4. 原位杂交法原位杂交法可以直接在细胞或组织中检测病原体的存在，具有高灵敏度和高特异性。
这种方法利用标记有特异性探针的核酸杂交，形成特异性结合，从而实现对病原体的检测。
原位杂交法在细菌、病毒和真菌等病原体的检测中具备良好的应用前景。
5. 快速培养法传统的细菌培养需要较长的时间，无法满足迅速诊断的需求。
然而，近年来，一些快速培养方法的出现，使得细菌感染的快速检测成为可能。
例如，基于分子生物学技术的快速培养法能够在短时间内检测出细菌的存在，从而大大加速疾病的诊断和治疗。
结语随着临床诊断技术的不断发展，病原体的快速检测方法不断涌现。
免疫层析法、核酸扩增技术、质谱分析法、原位杂交法和快速培养法等，都在不同程度上提高了临床病原体检测的速度和准确性。
未来，随着新技术的应用，我们相信病原体检测方法将会更加快速、准确，为临床医学的发展和患者的健康提供更多的支持和保障。
临床病原体检查
2.AST选择与应用
1) K-B纸片琼脂扩散法：技术简单、所用试剂量少、 不需特殊设备、易于判断，自由选择用药，是临床 实验室普遍使用的定性药敏试验。
2) 稀释法：定量药敏试验技术，易于标准化，但试验 费时，多用于研究
3) E试验：直接定量药敏技术，结果准确、重复性好、 操作简便易行，但试纸条昂贵，多用于研究
可见生长的最低浓度 II. MBC：能杀死99.9%测试菌的最低药物浓度
常用AST方法
常用并比较成熟的实验室方法是NCCLS推荐 的方法
1) K-B纸片琼脂扩散法 2) 稀释法 3) E试验 4) 联合药敏试验 5) 一些特殊细菌的药物敏感试验
3)E试验
a) 药敏试验的直接定量技术，结合稀释法和 扩散法的原理、特点
标本采集和运送各论
1. 血液标本 2. CSF与其他无菌体液标本 3. 尿液标本 4. 呼吸道标本 5. 粪便标本 6. 泌尿生殖道标本 7. 创伤、组织和脓肿标本
1.血液标本
❖ 采集时间： ➢发热初期和高峰期(≥38℃）或低温（≤36℃） ➢已用抗菌药物治疗者，在下次用药前采集
❖ 采血量： ➢成人5 ～ 10ml/次， ➢婴儿和儿童1 ～ 2ml/次
临床医学五年制
实验诊断学
许 建 成 讲师
一、标本采集和运送 二、检测方法 三、临床感染常见病原学实验诊断 四、抗菌药物敏感性试验和细菌耐药性检查 五、医院感染的实验诊断
一、标本采集和运送 1. 基本原则 2. 各论
标本采集和运送基本原则
1. 采集的标本无外源性污染 2. 标本在应用抗菌药物或伤口局部处理前收集 3. 采集后及时送检 4. 不要在标本中添加任何防腐剂 5. 在检验申请单上医生应提供患者的临床资料
临床感染之病原体检验
(二)细菌学检验程序
1. 细菌学检验见第一节血液感染及有关章节。 2. 病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。
由于菌群复杂，正常寄生菌和种类繁多， 一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病 有关，另外由于接受药物治疗，使某些细 菌受到抑制，可影响阳性检出率。因此， 在分析结果时应紧密结合临床。
3. 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾 炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑 膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口 腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。
第四节 上呼吸道感染
(一)常见病原体 1.革兰阳性
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓 链球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒 状杆菌、厌氧菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母 菌、放线菌、奋森螺旋体; 2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、大肠埃希菌、肺炎克雷白杆菌、
铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、不动 杆菌、百日咳杆菌、军团菌、肺炎支原体
4. 呼吸道还可见病毒感染，常见 普通感冒或流行性感冒，咽炎 和扁桃腺炎等，均应结合临床 进行诊断。
第五节 下呼吸道感染
1.革兰阳性
(一)常见病原体
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、
肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、结核
分枝杆菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆
菌、白假丝酵母菌、毛霉、曲霉;
2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠
3.抗体检测
为病毒检测的快速诊断方法，较常用。 (1)中和试验：主要检测中和抗体lgG，此抗
体持续时间长有诊断意义，阳性率和特异 性均高。双份血清效价4倍增高。 (2)特异性IgM抗体测定：此抗体在病后4天即 可出现，2周可达高峰，常用于早期诊断。 用 ELISA、间接免疫荧光法等检测，敏感 性和特异性较高。
临床常见病原体检测方法及诊断意义
临床常见病原体检测方法及诊断意义简介本文介绍了临床常见病原体的检测方法及其诊断意义。
病原体检测对于正确诊断并治疗疾病至关重要，因为不同的病原体可能导致不同的病情和治疗方法。
常见病原体检测方法以下是常见病原体检测的一些常用方法：1. 病原体培养：通过将患者样本接种到特定培养基中，培养条件适合病原体生长繁殖，然后观察培养结果，鉴定病原体种类。
2. PCR（聚合酶链式反应）：通过扩增病原体DNA或RNA片段，使其数量增加到可以观察到的水平。
PCR可用于检测细菌、病毒、真菌等多种病原体。
3. 血清学检测：通过检测患者血液中的抗体或抗原，判断是否存在特定病原体感染。
血清学检测方法包括ELISA、免疫荧光等。
4. 影像学检查：通过X射线、CT、MRI等影像学技术，观察病变部位或病原体引起的影响，如肺部感染的阴影。
诊断意义病原体检测的诊断意义在于确定病原体种类及其数量，对选择合适的治疗方案和预后评估具有重要意义。
1. 确定病原体种类：不同的病原体可能导致不同的疾病，因此准确确定病原体种类有助于明确疾病的诊断。
2. 指导治疗方案：针对不同的病原体，可能需要使用特定的抗生素或抗病毒药物进行治疗。
病原体检测结果可以指导医生选择合适的治疗方案，避免盲目使用药物。
3. 预后评估：某些病原体可能与严重的疾病及不良预后相关。
通过病原体检测及其数量的评估，医生可以更好地评估患者的预后情况，采取相应的治疗措施。
结论临床常见病原体的检测方法及其诊断意义对于疾病的准确诊断和治疗具有重要作用。
通过选择合适的病原体检测方法，并正确解读检测结果，可以更好地指导医疗决策和改善患者预后。
诊疗临床病原体检查专家讲座
诊疗临床病原体检查
第31页
二.临床类型
➢ 下呼吸道感染 为我国最常见医院感染类型 ➢ 尿路感染 主要为侵入性操作所引发 ➢ 手术切口感染 ➢ 胃肠道感染 ➢ 血液感染 ➢ 皮肤和软组织感染
诊疗临床病原体检查
第32页
➢ 病房送检—试验室检测统计--院内感染科汇总 公布
诊疗临床病原体检查
第9页
抗菌药品选择性压力
耐药菌株极少
抗生素暴露
耐药菌株为 主
诊疗临床病原体检查
第10页
细菌耐药性及其发生机制
1.遗传学机制 染色体介导耐药 为细菌本身所固有耐药, 普
通含有种属特异性,如肠球菌耐头孢菌素, 一 些革兰阴性杆菌耐万古霉素等。 质粒介导耐药 耐药基因易于传输,当前该类 耐药在临床上占有主要地位。如由质粒介 导产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）大肠埃希 菌和肺炎克雷伯菌。
主动外排机制 如铜绿假单胞菌对各种惯用抗生 素耐药,主要是因为其外膜存在着独特药品泵 出系统。
诊疗临床病原体检查
第12页
药品敏感试验
1.纸片扩散法（K-B法） 菌液浓度: 0.5麦氏浊度（1.5×108CFU/mL） 琼脂平板厚度: 4mm（9cm，25ml；15cm，60ml) 抗生素纸片: 9cm，6-7张（4张左右）；15cm，
➢ 病原学和临床类型 ➢ 细菌-淋病奈瑟菌, 杜克雷嗜血杆菌 ➢ 螺旋体-梅毒螺旋体 ➢ 病毒-HIV、HSV、HPV ➢ 支原体、衣原体 ➢ 真菌、原虫
诊疗临床病原体检查
第23页
1.AIDS检测
分为HIV-1和HIV-2两型, 主要经过检测血液中对 应抗体诊疗, ELISA用于筛选, Western Blot 用于确诊。
临床病原体检查
或在测定药物浓集部位的体液中被抑制。
其细菌对这类抗菌药物的反应性通常低于
敏感菌，中度敏感药物在生理浓集部位或
高于常规剂量也可有临床疗效。
验铜
结绿
果假
单
I
胞 菌
药
敏
实
耐药（R）：测试菌不能被在体内感染部 位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，感 染菌对该抗菌药物治疗不发生反应，即 使加大剂量或药物浓集部位也不发生反 应。
新的传染病陆续被发现，曾绝迹的老传染病部 分死灰复燃。
几率逐年
增高。 ------临床病原体检查的重要性
临床病原体检查的目的：确定感染的发生和性 质；及早明确诊断；早期提供治疗方案；采取 预防措施防止感染传播。
临床病原体实验诊断方法遵循的原则：正确、 规范的标本前处理；一般可借助某些实验室手 段可先作出初步诊断；在初步诊断基础上做出 确诊诊断并参与治疗。
2.医院环境微生物学监测：主要包括空气消毒 效果监测，消毒物品监测， 物体表面微生物监 测，洗手效果的监测等。其目的是观察医院内 环境中细菌总数、种类及其动态变化，以便有 目的地采取措施，控制和降低医院感染的发生 率。另外，当发生医院感染暴发流行时，通过 环境微生物检测，及时发现传染源及传染途径， 以控制感染的蔓延。
（五）脑脊液等无菌体液
1.严格无菌条件下采集标本。 2.尽量采集多的标本送检。 3.尽快送检或床旁接种可提高阳性率，特
殊标本需保温送检。
（六）创伤、组织和脓肿标本：
1、无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无 菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物。
2、对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消 毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检， 也可以切开排脓时用无菌拭子采样。
(7)多重耐药的铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜 麦芽窄食单胞菌
临床病原体检查
➢ 培养瓶消毒
➢ 采血量
➢ 采血套数
➢ 振摇
➢ 室温送检
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9
（二）尿标本的采集
➢ 晨起第一次尿液为佳 ➢ 冲洗外阴部、尿道口 ➢ 清洁中段尿 ➢ 导尿 ➢ 耻骨穿刺采集膀胱内尿液 ➢ 不得加防腐剂和消毒剂
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10
（三）粪便标本的采集
➢ 自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。 ➢ 排便困难者，采用直肠拭子采集。 ➢ 根据细菌种类不同选用合适的运送培养液以提高阳性检
➢ Diagnosis.
➢ Source of the specimen.
➢ Ordering physician.
➢ Immunization history and antimicrobial therapy.
➢ Objective.
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8
（一）血液标本的采集
➢ 适应症
➢ 采集时机
➢ 皮肤准备
烈性传染病标本的采集和运送不符合相关规定
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19
三、检查方法
➢ 直接显微镜检查。 ➢ 病原体抗原与抗体的检测。 ➢ 病原体核酸的检测。 ➢ 病原体的分离培养与鉴定。
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20
（一） 直接显微镜检查本检查法：
革兰染色：细菌、真菌 抗酸染色：抗酸杆菌（结核、麻风） 墨汁染色：隐球菌
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52
寄生虫感染检查项目的选择与应用评价
➢直接显微镜检查：观察寄生虫 生活史的各阶段，是寄生虫感 染的主要诊断依据。 ➢寄生虫抗体检测：辅助诊断。
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53
支原体感染检查项目的选择与应用
➢ 直接显微镜检查：无价值。 ➢ 分离培养：阳性可明确诊断。 ➢ 目前临床多检测支原体抗原
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第二节 病原体耐药性检测
临床常见病原体检测－2009
一、耐药性及发生机制
抗菌药物治疗的现状和存在的问题
使用增加，疗效下降 出现难以治疗的感染
加剧细菌耐药性
引起菌群失调，二重感染
滥用，污染造成危害
临床常见病原体检测－2009
1.重点监测耐药菌株
(1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)和对万古霉 素敏感性降低葡萄球菌(VIS) (2)高水平耐氨基糖苷类药物的肠球菌 (HALR) (3) 耐 万 古 霉 素 肠 球 菌 ( VRE)、 葡 萄 球 菌 (VRS) (4)耐青霉素G的肺炎链球菌(PRP)
梅毒螺旋体感染检测
筛选试验：RPR－快速血浆反应素试验
确诊试验：TPHA－梅毒螺旋体血凝试验
临床常见病原体检测－2009
淋病病原体检测
1.直接显微镜涂片检查：早期诊断，敏感性稍差，对 男性患者特异性高而对女性患者特异性稍差。 2.PCR方法：早期、快速、敏感的方法，不能区别是 活菌还是死菌。
3.分离培养和鉴定：特异性高，为诊断“金标准”， 同时可作药敏试验。
（1）手工试验 1.纸片扩散法（S，I，R） 2.稀释法（MIC） 3.E test（MIC） （2）自动仪器 Vitek，Microscan， Phoenix （3）分子试验 PCR直接检测mecA基因
临床常见病原体检测－2009
K-B 法
临床常见病原体检测－2009
临床常见病原体检测－2009
S
绿 假 单 胞 菌 药 敏 实 验 结 果
S
临床常见病原体检测－2009
中度敏感（I）：测定菌能被测定药物大剂
量给药后在体内达到的血药浓度所抑制， 或在测定药物浓集部位的体液中被抑制。 其细菌对这类抗菌药物的反应性通常低于 敏感菌，中度敏感药物在生理浓集部位或 高于常规剂量也可有临床疗效。
铜 绿 假 单 胞 菌 药 敏 实 验 结
临床常见病原体检测
温医检验医学院 温医附一医实验诊断中心
主要内容
第一节 标本的采集运送、实验室
评价和检查方法
第二节 病原体耐药性检测 第三节 临床感染常见病原体检测 第五节 性传播疾病病原体检测 第六节 医院感染常见病原体检测
临床常见病原体检测－2009
感染性疾病的现状
感染性疾病的病原体：细菌、病毒、支原体、
收。
临床常见病原体检测－2009
三.临床病原体检查方法
其主要手段包括：
1.直接显微镜检查：重要的基本方法，常作为初步诊断但阳性 率相对较低。
2.特异性抗原检查：可作为早期快速诊断，但特异性是关键。 如免疫荧光技术、酶免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集技 术等。 3.核酸检查：近年来发展迅速，敏感性和特异性均较好。如 PCR、分子杂交、DNA测序等。 4.病原菌分离培养和鉴定：常为确诊的关键步骤，但常较费时。 5.血清学检查：通过检测相应的特异性抗体以辅助诊断。如肥 达氏试验、军团菌抗体检查等。应进行双份血清检测，两次 抗体效价相差4倍以上有意义。
临床常见病原体检测－2009
标本的正确采集和运送是实验室取得正
确结果的前提和基本要素。但对标本采集 的方法和时间，标本的来源，实验室常不 能直接加以控制，因此，临床医师和护士 必须对此予以高度重视。
临床常见病原体检测－2009
病原检测标本采集与送检的基本原则：
采集标本须考虑选择标本的种类和采集部位并要反应
临床常见病原体检测－2009
(四)痰液-最常见的呼吸道标本
1、 自然咳痰：清水反复漱口后用力咳嗽， 从呼吸
道深部咳出新鲜痰液于无菌容器内送检。痰量极
少者可用45℃10%氯化钠液雾化吸入导痰，一般
以清晨第一口痰为好。
2、气管镜下采集法、气管穿刺法：可减少污染， 但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。 （符合要求的痰标本在低倍视野中≤10个鳞状上皮 细胞，≥25个白细胞）
临床常见病原体检测－2009
2、导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起逆行感染， 除非必要，须避免用此方法。对留臵导尿者，可用碘 酒消毒尿道口处的导尿管壁，用无菌注射器斜穿管壁
抽吸尿液，或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿液，
留无污染的膀胱内尿液送检。不可从集尿袋的下端管 口留取标本。
临床常见病原体检测－2009
衣原体、立克次体 以及寄生虫等。
自从抗生素的发现和预防接种的实施，许多曾
严重危害人体健康的病原体已消灭或基本消灭
新的传染病陆续被发现，曾绝迹的老传染病部
分死灰复燃。
条件致病菌感染比例增加。 多重耐药菌株不断出现，真菌感染的几率逐年
增高。
------临床病原体检查的重要性
临床常见病原体检测－2009
3.血清学检查：临床常用，如HIV检查等。 4.核酸杂交和PCR方法：近年来发展迅速。
临床常见病原体检测－2009
三.真菌感染： 1.形态学检查：重要手段。 2.分离培养、鉴定。 3.抗原检查及血清学诊断：少用。
四.寄生虫感染：
1.涂片检查：最可靠确诊方法，如粪便中找蠕虫卵、 外周血中找疟原虫等。 2.免疫学方法：广泛应用 。 3.DNA探针及PCR技术： 近年发展迅速。
临床常见病原体检测－2009
2. 耐药产生的主要机制
细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统 产生灭活抗生素的水解酶和钝化酶 细菌抗生素作用靶位的改变 细菌膜外排泵出系统
细菌生物膜的形成
临床常见病原体检测－2009
二、检查项目、结果和临床应用
（一）药物敏感试验(antimicrobiol susceptibility test)
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(5) 产 超 广 谱 β- 内 酰 胺 酶 ( extended-spectrum beta lactamases ESBLs)的肺炎克雷伯菌和
大肠埃希菌
(6)持续高产染色体Ι型β-内酰胺酶(AmpC)阴沟
肠杆菌、产气肠杆菌
(7)多重耐药的铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜
麦芽窄食单胞菌
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3.痰标本采集后应及时送检和处理，最好不
超过1小时，室温下延搁数小时，定植于口
咽部的非致病菌呈过度生长，导致检出率 则明显下降。另外上呼吸道存在正常菌群， 在采集标本与结果分析时应予考虑。
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（五）脑脊液等无菌体液
1.严格无菌条件下采集标本。
2.尽量采集多的标本送检。 3.尽快送检或床旁接种可提高阳性率，特 殊标本需保温送检。
E-试验
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（二）药敏试验的结果解释
最低抑菌浓度（MIC）：抑制细菌生长的最
低药物浓度。
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敏感（S）：测试菌能被测定药物常规剂量给药
后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭，即该 菌引起的感染可以用推荐剂量（常规剂量）的 该抗菌药物治疗。其体外的最低抑菌浓度 （MIC）必须低于临床上该种抗菌药物的常规 用量。 铜
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（六）创伤、组织和脓肿标本：
1、无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无
菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物。
2、对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消
毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检，
也可以切开排脓时用无菌拭子采样。
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二、标本的质量评估标准：
标本及送检单上应注明被检人的姓名、性别、年龄、
3、膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以 无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌培
养或中段尿采集困难的婴幼儿。
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（三）粪便
1、挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约2-3克盛于清洁 容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入运送培养基
中送检，可提高病原菌的检出率。
2、对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集 送检。
（一）血液与骨髓
适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的病人。
1、通常采血部位为肘中静脉，但感染灶附近血管采 血，可提高阳性率。切忌在静滴抗菌药物的静脉处 采集血标本。标本采集过程应严格无菌操作。 2、选择体温上升或高峰时采 血可提高阳性率。
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3、每次采血量为5-10（10-20）ml，婴幼儿1-5ml，培
临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况等， 无患者信息及标识的不予接收。
标本须及时送检，超过时限的标本不予接收。
送检容器须完整，有容器破损或标本渗漏的不予接收。 标本储存、运送方式不当的，不予接收。 明显被污染的标本不予接收。 标本量明显不足的标本不予接收。
除血培养之外的同一天内重复申请检验的标本不予接
I
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耐药（R）：测试菌不能被在体内感染部
位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，感 染菌对该抗菌药物治疗不发生反应，即 使加大剂量或药物浓集部位也不发生反 应。
铜 绿 假 单 胞 菌 药 敏 实 验 结 果
R
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（三）.重点耐药菌株监测试验
耐甲氧西林的葡萄球菌 （methecillin resistance staphylococcus，MRS）筛 OX 选试验
1.CTX/CA比CTX抑菌圈 或CAZ/CA比CAX >5mm即为阳性 2.若ESBLs阳性,对青霉素 类、所有头孢菌素类 及单环类抗菌素耐药 3.主要在大肠埃希菌和克 雷伯菌属等肠杆菌科 细菌中产生
CTX CTX/CA CAZ CAZ/CA
注:CTX为头孢噻肟;CTX/CA为头孢噻肟/棒酸 CAZ为头孢他啶;CAZ/CA为头孢他啶/棒酸
有效病程。
尽量在抗生素使用前采集标本。