临床病原体检查

复制出相应的动物模型
建立新的检测方法
• PCR法 • 间接免疫荧光法 • ELISA
直接显微镜检查的目的与评价 （ 1）
• 染色标本目的：了解细菌的形 态、染色性或观察宿主细胞内 包涵体。 • 评价：为临床初步诊断提供依 据。如CSF找到抗酸杆菌，应初 步考虑结核分枝杆菌感染。
革兰氏阳性球菌
血液标本的采集
• 适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血 症的病人。 • 一般在抗生素使用前，于发热初期或高 峰期采血。 • 24小时内采血2~3次可提高阳性率。 • 血液与培养基的比例为1：10，一般成人 血量10~20ml，婴儿1-5ml。
血液标本的采集方法
呼吸道标本采集
• 类型：鼻咽拭、痰和 经气管采集的标本。 • 上呼吸道存在正常菌 群，在采集标本与结 果分析时应予考虑。
病原体核酸的检测
• 聚合酶链式反应：扩增 病原体微生物特异的 DNA或 RNA片段。 • 探针杂交法：通过已知 序列的探针与病原体的 核苷酸杂交，用以了解 病原体的有无。
病原体核酸检测结果评价
• 是检测病原体微生物最灵敏的方法，但 具有一定的假阳性与假阴性。 • 阳性只表明存在某种病原体的核酸，是 否正被感染应结合临床具体分析。
生殖道标本
• 男性：无菌采集尿道 口分泌物或前列腺液。
生殖道标本
• 女性：用无菌棉纤采集阴道或宫颈分泌 物。怀疑厌氧菌感染，应采用阴道后穹 隆穿刺法，并立即接种于厌氧平板。 • 疑似梅毒螺旋体感染，直接从外生殖器 硬下疳蘸取渗出液，置于盖玻片上，立 即送检。
脑脊液
• 由临床医生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml， 置于无菌容器中立即送检，不能暂时保 存于冰箱中。
胸腹水等穿刺液标本
• 标本采集应在用药前或停止用药后1~2天 后进行。 • 用无菌注射器抽取可疑标本，分别置于 抗凝与不抗凝无菌容器中立即送检。 • 怀疑厌氧菌感染，采用床边接种为宜。
脓液及创伤感染分泌物标本
• 开放性脓肿及脓性分泌物：用无菌棉纤 采取脓液或病灶深部分泌物，置于斯氏 运送培养基送检。 • 封闭性脓肿：局部消毒后，用注射器抽 取，怀疑厌氧菌感染，应隔绝空气采集。 • 大面积烧伤的创面分泌物：用无菌棉纤 多点采取脓液或分泌物，置于无菌试管 中送检。
检验申请单的基本内容
• • • • • • • The patient,s name and hospital number. Age and sex. Collection date and time. Diagnosis. Exact nature and source of the specimen. Ordering physician. Immunization history and antimicrobial therapy. • Objective.
重要的性病及病原体
• 性病 病原体 • 淋病 淋球菌 • 梅毒 梅毒螺旋体 • 艾滋病 人类免疫缺陷病毒 • 非淋球菌尿道炎 溶脲支原体、沙眼衣原体等 • 生殖器疱疹 单纯疱疹病毒 • 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒
淋病病原体的检测方法选择与 评价（1）
• 直接显微镜检查：多 形核白细胞内见革兰 氏阴性双球菌，男性 泌尿生殖道标本可明 确诊断，而女性需结 合培养结果分析。
单纯疱疹病毒
• 分离培养；阳性可确诊。 • 目前临床常检测HSV-DNA与HSV抗原， 用于早期快速诊断。
人乳头瘤病毒
• 不能分离培养 • 目前临床常检测HPV-DNA与HPV抗原， 用于早期快速诊断。
重要的性病及诊断金标准
• 性病 • 淋病 • 梅毒 • 艾滋病 • 非淋球菌尿道炎 • 生殖器疱疹 • 尖锐湿疣 诊断金标准 分离培养 特异性抗体检测 免疫印迹法与RT-PCR
革兰氏阴性杆菌
墨汁染色找 新型隐球菌
抗酸染色
直接显微镜检查的目的与评价 （ 2）
• 不染色标本：用于观 察病原体的大小、形 态与运动等特性。 • 结果评价：部分病原 体可借此初步诊断， 如暗视野显微镜下见 弹簧状螺旋体，应怀 疑梅毒螺旋体的感染。
病原体分离培养与鉴定的目的
• 明确感染病原体。 • 为临床提供体外抗微 生物药物敏感试验结 果。
非淋球菌性尿道炎检测方法选 择与评价
• • • • 特异性抗体的检测：意义不大。 分离培养；阳性可确诊。 直接显微镜检查：适用于衣原体的检测。 目前临床多检测抗原与核酸，用于早期 快速诊断。
艾滋病病原体检测
• 直接显微镜检查与分离培养：临床较少 采用。 • HIV-RNA检测：排除假阳性可确诊。 • HIV抗体检测：ELISA等为过筛实验， Westerblot为确诊实验。
检查方法
• • • • 直接显微镜检查。 病原体抗原与抗体的检测。 病原体核酸的检测。 病原体的分离培养与鉴定。
SARS（severe acute respiratory syndrome ）病原体 的确定
电子显微镜发现为 某种冠状病毒
基因组测序锁定为 新型冠状病毒
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分离培养、鉴定
分离培养、鉴定 PCR
第三节 医院感染常见病原体检查
• 医院感染（nosocomial infection）：又称 医院获得性感染（hospital acquired infection），指患者在入院时不存在，也 不处于潜伏期，而在医院内发生的感染， 包括医院内获得的而在出院后发病的感 染。广义的医院感染对象不仅指住院患 者，还包括门诊病人、医院职工、探视 人员与陪护人员等。
细菌分离培养与鉴定的结果评价
• 正常人群的无菌体液中检测到细菌，应 考虑细菌为感染的病原体。 • 存在正常菌群的标本检测到细菌，应结 合细菌的量考虑是否为致病菌。 • 如临床表现支持感染，但培养阴性，应 考虑为标本不合格、培养不恰当等因素。 • 直接镜检找到病原体，而培养阴性，应 考虑有L细菌、厌氧菌或苛氧菌感染。
病原体抗原与抗体的检测
• 特异性 IgM可作为感染性 疾病的早期诊断指标，且 可区分原发与复发感染。 • 特异性 IgG，尤其双份血 清的滴度呈4倍或4倍以上 升高，考虑病原体感染。 • 排除交叉抗原的影响，病 原体抗原检测可明确感染 的病原体。
第二节 临床常见病原体检查
• 临床常见病原体为：细菌、病毒、支原 体、衣原体、立克次体 以及寄生虫等。
真菌感染检查项目的选择与应 用评价（1）
• 直接显微镜检查：初步明确真菌 感染。
真菌感染检查项目的选择与应 用评价（2）
• 分离培养：明确何种真菌感染。 • 真菌抗原检测：只适合于血清与脑 脊液中隐球菌、念珠菌以及荚膜组 织胞浆菌等。 • 真菌抗体检测：深部真菌的检测。
寄生பைடு நூலகம்感染检查项目的选择与 应用评价
临床病原体检查
赵友芳
临床病原体检查目的
• 明确感染是否发生以及病原体的类型。 • 提供体外抗微生物药物敏感实验的结果。 • 密切监视烈性传染病与新的传染病的发 生，及时向行政主管部门报告。 • 配合相关机构进行流行病学调查。
感染性疾病的现状
• 感染性疾病的病原体：细菌、病毒、支 原体、衣原体、立克次体 以及寄生虫等。 • 自从抗生素的发现和预防接种的实施， 许多曾严重危害人体健康的病原体已消 灭或基本消灭。 • 新的传染病陆续被发现，曾绝迹的老传 染病部分死灰复燃。 • 条件致病菌感染比例增加。 • 多重耐药菌株不断出现。
痰标本的采集
• 采集时间：晨痰，且 在取痰前用清水反复 漱口。 • 方法：（1）自然咳 痰法：（2）气管镜 下采集法；（3）气 管穿刺法。
尿标本的采集
• 无菌采集中段尿 • 如考虑厌氧菌感染， 采取膀胱穿刺法采集 标本。 • 排尿困难者考虑导尿 采集标本。
粪便标本采集
• 自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清 洁容器中送检。 • 排便困难者，采用直肠拭子采集。 • 怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻，立即接 种或将标本置于碱性蛋白胨或卡-布运送 培养液送检。 • 传染性腹泻应连续送检3次。
淋病病原体的检测方法选择与 评价（2）
• 分离培养；广泛采用，阳性即可确诊。 • PCR：可用于早期快速诊断，但假阳性 率高。 • 特异性抗原与抗体检测：方法尚不成熟。
梅毒螺旋体感染检查项目的选 择与评价
• 直接显微镜检查：有 初步诊断价值。 • 非特异性抗体的检测： 过筛试验。 • 特异性抗体的检测： 确诊试验。
标本送检
• 标本要求在30min内送检，否则影响阳性 率。 • 烈性传染病标本需专人护送。
检验科可拒收部分标本
• The information on the label does not match the information on the requisition. • The specimen has been transported at the improper temperature or in improper medium. • The quantity of specimen is insufficient for testing . • The specimen is leaking .
细菌感染检查项目的选择
• 普通细菌：常采用直接镜检、分离培养 与鉴定明确病原体。 • 难培养或培养要求高的细菌：综合运用 免疫学或分子生物学检测，如结核分枝 杆菌感染以及幽门螺杆菌感染等。 • 流行病学调查：病原体抗体检测，如 ASO试验与Widal反应等。
病毒感染检查项目的选择
• 细胞培养快速复制的病毒：细胞培养。 • 细胞培养不能快速复制的病毒：目前多 检测病毒抗原、特异性抗体或核酸，如 CMV。 • 不能细胞培养的病毒：病毒核酸检测与 病毒特异性抗体检测，如HCV、HPV等。
病毒分离培养与鉴定的结果评价
• 必须结合流行病学资料、临床表现、标 本来源及病毒种类加以分析。 • 从组织、血液以及脑脊液中分离到病毒 可明确诊断。 • 从呼吸道、肠道等分离到病毒，如该病 毒人体不能长期携带，有诊断价值，如 麻疹病毒、流感病毒等。反之需相应的 临床表现，才有病原学意义，如巨细胞 病毒，肠道病毒等。 • 阴性不能排除病毒感染。
• 直接显微镜检查：观 察寄生虫生活史的各 阶段，是寄生虫感染 的主要诊断依据。 • 寄生虫抗体检测：辅 助诊断。
支原体感染检查项目的选择与 评价
• 直接显微镜检查：无 价值。 • 分离培养：阳性可明 确诊断。 • 目前临床多检测支原 体抗原与核酸，用于 早期快速诊断。
螺旋体感染检查项目的选择与 评价
检验科可拒收部分标本
• The specimen transport time exceeds 2 hours postcollection and the specimen is not preserved. • The specimen was received in a fixative which kill any microorganism present. • The specimen is dried. • The specimen has been received for anaerobic culture from a site known to have anaerobes as part of normal flora.
• 直接显微镜检查有初 步诊断价值。 • 特异性抗体的检测为 确诊依据。
衣原体感染检查项目的选择与 评价
• 直接显微镜检查：检 查衣原体包涵体可提 供早期初步诊断。 • 分离培养：阳性可明 确诊断。 • 目前临床多检测衣原 体抗原与核酸，用于 早期快速诊断。
第四节性传播疾病病原体检测
• 性传播性疾病（sexually transmitted disease,STD）：是指通过各种性接触而 传播的侵犯皮肤、性器官及全身多脏器 的疾病，简称性病（venereal disease）
临床病原体检查的基本程序
• 医生、护士、病人、检验师：正确采集 运送标本。 • 检验科：直接镜检、免疫学和分子生物 检测、病原体分离培养鉴定、药敏实 验——报告结果。 • 医生：明确诊断、合理用药。
标本采集的基本原则
• 根据病史与临床表现确定标本采集的类 型与部位，尽量采集病变明显部位标本。 • 在发病的早期或急性期采集标本，最好 在抗生素使用前（如使用过抗生素应在 申请单上注明）。 • 采集标本防止污染，并置于无菌容器， 加盖密封、立即送检。 • 标本必须贴上标签，与检验申请单同时 送检。