第二节 基因工程的酶学基础
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DNA连接酶 DNA聚合酶和反转录酶 DNA修饰酶 外切核酸酶 单链内切核酸酶 RNA酶
第一节 限制性核酸内切酶
任何一种生物体都存在防御外界物质进入的机制 限制/修饰系统
(R-M, Restriction-modification system)
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
人们发现侵染大肠杆菌的噬菌体都存在着一些功能性障
PvuII等产生的平头末端
5‘…G--C--T--C--A--G--C--T--G--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--G--T--C--G--A--C--C--T--C … 5’
PvuII 37 ℃ 5‘…G--C--T--C--A--G--OH P--C--T--G--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--G--T--C--P OH--G--A--C--C--T--C … 5’
双功能（具甲基化） 异源三聚体 ATP Mg2+ SAM 距识别序列1kb处 随机性切割
单一功能 同源二聚体 Mg2+ 4-6bp回文序列 识别序列内或附近 特异切割
双功能（具甲基化） 异源二聚体 ATP Mg2+ 距识别序列下游 24-26bp处 随机性切割
注： SAM为S－腺苷甲硫氨酸
第一节 限制性核酸内切酶
第二节 DNA连接酶
一、概念与机理
DNA连接酶只能连接缺口（nick），不能连接裂口 （gap）。而且被连接的DNA链必须是双螺旋DNA分子的 一部分。注意：缺口（或称切口）和裂口的区别！！！！！
第二节 DNA连接酶
DNA连接酶对不同DNA分子的连接作用
第二节 DNA连接酶
DNA连接酶应用图解 （一）分子间的连接
第二节 基因工程的酶学基础
基因工程的操作，是在分子水平上的操作，是依赖一 些酶(如限制性核酸内切酶，连接酶，DNA聚合酶等)作为 工具对基因进行人工切割，拼接和扩增等操作。所以把这 些酶称之为“工具酶”。
第二章 基因工程的酶学基础
第一节
第二节 第三节 第四节 第五节 第六节 第七节
限制性核酸内切酶
EcoR I 5’-GAATTC-3’ 3’-CTTAAG-5’ Pst I 5’-CTGCAG-3’ 3’-GACGTC-5’ 产生粘性末端 EcoR V 5’-GATATC-3’ 3’-CTATAG-5’
产生平齐末端
HindⅢ切割位点
DNA
HindⅢ
AA G C T T T T C G AA
限制性核酸内切酶的应用： 重组DNA前的切割 构建新质粒 构建物理图谱 DNA分子杂交 用限制性内切酶消化受体DNA 制备DNA探针 亚克隆以用作序列分析 基因定位，DNA同源性研究
第二节 DNA连接酶
剪刀—限制性内切酶 针线、胶水—连接酶
第二节 DNA连接酶
DNA连接酶
第二节 DNA连接酶
一、概念与机理 DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一 种能够将DNA链上彼此相邻的3’-羟基（ OH ）和5’-磷酸基 团（-P），在NAD+或ATP供能的作用下，形成磷酸二酯键。 大肠杆菌和其他细菌的DNA连接酶以NAD+作为能量来源， 动物细胞和噬菌体的连接酶则以ATP作为能量来源。
使之甲基化。 EcoB核酸酶不能识别已甲基化的序
列。
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
基因工程中，应采用缺少限制作用的菌株作为受体。
第一节 限制性核酸内切酶
未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列（多数是回 文序列），与DNA的来源无关。
A B C C’ B’ A’ 或 A B N B’ A’
A’ B’ C’ C B A
A’ B’ N’ B A
第一节 限制性核酸内切酶
（2）切割位点 识别位点处。 切开双链DNA。形成粘性末端（sticky end）或平齐末 端（blunt end）。如：
第一节 限制性核酸内切酶
四、 Ⅱ限制性核酸内切酶的基本特性 （二）切割方式 Ⅱ限制性核酸内切酶切割双链DNA，水解磷酸二酯键 中3‘位酯键产生两个末端，末端结构是5’-P和3’-OH，产生 3种不同的切口。
第一节 限制性核酸内切酶
1. 5’突出的末端
第一节 限制性核酸内切酶
EcoRI等产生的5‘粘性末端 5‘…G--C--T--G--A--A--T--T--C--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--C--T--T--A--A--G--C--T--C … 5’ EcoRI 37 ℃ 5‘…G--C--T--G--OH P--A--A--T--T--C--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--C--T--T--A--A—P OH--G--C--T--C … 5’ 退火 4--7 ℃
5‘…G--C--T--G--A--A--T--T--C--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--C--T--T--A--A--G--C--T--C … 5’
第一节 限制性核酸内切酶
2. 3’突出的末端
第一节 限制性核酸内切酶
PstI等产生的3‘粘性末端 5‘…C--T--G--C--A--G… 3’ 3‘…G--A--C--G--T--C … 5’ PstI 37 ℃ 5‘…C--T--G--C--A--OH P--G … 3’ 3‘…G-- P OH --A--C--G--T--C … 5’ 退火 4--7 ℃
第一节 限制性核酸内切酶
三、限制性内切酶的命名
Escherichia
Coli
Ry13
EcoR I
属名 第三个字母。 种名 株系 编号 若种名头2个字母相同则其中一个可用种名的第一和
第一节 限制性核酸内切酶
四、 Ⅱ限制性核酸内切酶的基本特性 （一）识别序列 识别顺序的碱基数一般为4-6 bp，少数识别更长，多 数识别位点具有旋转对称性（回文结构），少数的识别位 点在切割位点之外，具旋转对称性
DNA A A TTCGA B AGCTT A C D
核酸内切酶HindⅢ对双链DNA分子的切割作用
第一节 限制性核酸内切酶
3. III类限制性内切酶 在完全肯定的位点切割DNA(识别位点下游24-26bp)， 但反应需要ATP、 Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。
EcoP1: AGACC
EcoP15: CAGCAG
Recognize site 1-1.5kb
cut
（3）作用机理 需ATP、Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。
第一节 限制性核酸内切酶
2. II类限制性内切酶 首先由H.O. Smith和K.W. Wilcox在1970年从流感嗜血 菌中分离出来。 分离的第一个酶是Hind Ⅱ
（1）识别位点序列
二、限制性内切酶的类型
限制性核酸内切酶（限制性酶）：在细胞内能够识别双链DNA 分子中的特定核苷酸序列，并对DNA分子进行切割的一种酶。 据限制性核酸内切酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修 饰酶活性，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。
基因工程中使用 主要特性 Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型
限制修饰 蛋白结构 辅助因子 识别序列 切割位点
第一节 限制性核酸内切酶
三、限制性内切酶的命名 1973年H.O Smith和D. Nathans提议的命名系统，命名 原则如下： 1.用属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个字 母的略语表示寄主菌的物种名。 大肠杆菌（Escherichia coli）用Eco表示； 流感嗜血菌（Haemophilus influenzae）用Hin表示。 2. 用一个右下标的大写字母表示菌株或型。如EcoK, EcoR（现在都写成平行，如EcoRI）。 3. 如果一种特殊的寄主菌内有几种不同的限制与修复 系统，用罗马字母表示。如EcoR I，EcoR V。 4. 限制酶前面要带上R（Restriction)， 修饰酶前面要带上M（Modification）(现已省略)。
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
四、 Ⅱ限制性核酸内切酶的基本特性
（二）切割方式 同裂酶（isoschizomers）：指来源不同但识别相同靶序列的核酸
内切酶。同裂酶进行同样的切割，产生不同或相同的末端。
同尾酶（isocaudamer）：指来源不同、识别靶序列不同但产生 相同的粘性末端的核酸内切酶。利用同尾酶可使切割位点的选择余地 更大(相容性末端)。
（二）分子内的连接
第三节 DNA聚合酶和反转录酶
DNA聚合酶（DNA polymerase)是指能在引物和模板的存在下，将脱氧核 糖单核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3‘-OH末端，催化核苷酸的聚合 作用。分为：依赖于DNA的DNA聚合酶和依赖于RNA的DNA聚合酶。
DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶 Klenow fragment T4 DNA聚合酶 T7 DNA聚合酶 化学修饰T7DNA聚合酶 遗传修饰T7DNA聚合酶 逆转录酶 Taq DNA聚合酶 3’5’外切酶 活性 低 低 高 高 低 无 无 无 5’3’外切酶 活性 有 无 无 无 无 无 无 有 聚合速率 持续能力 中 中 中 快 快 快 低 快 低 低 低 高 高 高 中 高
4bp
5bp
6bp
11bp 12bp
HpaⅠ C CGG HaeⅢ GG CC AvaⅡ G GWCC EcoRⅡ CCWGG BamHⅠ G GATTC SmaⅠ CCC GGG Bg1Ⅰ GCCNNNN NGGC BstXⅠ CCANNNNN NTGC N=A, T, G, C
5‘…C--T--G--C--A--G… 3’ 3‘…G--A--C--G--T--C … 5’
第一节 限制性核酸内切酶
粘性末端的意义 ①连接便利 i）不同的DNA双链： 只要粘性末端碱基互补就可以连接。 这比连接两个平齐末端容易的多。
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
ii）同一个DNA分子内连接： 通过两个相同的粘性末端可以连接成环形分子。
1. I型限制性内切酶 首先由M. Meselson和R. Yuan在1968年从大肠杆菌 B 株和 K株分离的。 如 EcoB和 EcoK。 （1）识别位点序列 未甲基化修饰的特异序列。
EcoB： TGA(N)8TGCT EcoK：AAC(N)6GTGC
第一节 限制性核酸内切酶
（2）切割位点 在距离特异性识别位点约1000—1500 bp处随机切开 一条单链。
在基因工程操作中用途不大。
第一节 限制性核酸内切酶
核酸限制性内切酶的类型及主要特性
主要特性 限制修饰 蛋白结构 辅助因子 识别序列 切割位点 Ⅰ型 多功能（具甲基化） 异源三聚体 ATP Mg2+ SAM 距识别序列1kb处 随机性切割 Ⅱ型 单一功能 同源二聚体 Mg2+ 4-6bp回文序列 识别序列内或附近 特异切割 Ⅲ型 双功能（具甲基化） 异源二聚体 ATP Mg2+ 距识别序列下游 24-26bp处 随机性切割
碍。即所谓的寄主控制的限制与修饰现象简称（R/M体
系）。 细菌的R/M体系类似于免疫系统，能辨别自身的 DNA与外来的DNA，并能使后者降解掉。 维护宿主遗传稳定的保护机制。
E.coliB含有EcoB核酸酶和EcoB甲基化酶
当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有 EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。而 E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，但可在 EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸 （SAM）将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基，
第一节 限制性核酸内切酶
常用的限制酶BamHⅠ、BclⅠ、 BglⅡ、Sau3AⅠ和XhoⅡ就是一组 同尾酶，它们切割DNA之后都形成由GATC 4个核苷酸组成的粘性末端 。
பைடு நூலகம்
同尾酶举例： 如：BamHI BglII MboI, Sau3AI G GATCC A GATCT N GATCN
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
② 5’末端标记
凸出的5’末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P标记。
凸出的3’端可以通过末端转移酶添加几个多聚核苷
酸的尾巴（如AAA或TTT等）造成人工粘性末端。
③ 补平成平齐末端 粘性末端可以用DNA聚合酶补平成平齐末端。
第一节 限制性核酸内切酶
3. 平头末端
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
任何一种生物体都存在防御外界物质进入的机制 限制/修饰系统
(R-M, Restriction-modification system)
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
人们发现侵染大肠杆菌的噬菌体都存在着一些功能性障
PvuII等产生的平头末端
5‘…G--C--T--C--A--G--C--T--G--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--G--T--C--G--A--C--C--T--C … 5’
PvuII 37 ℃ 5‘…G--C--T--C--A--G--OH P--C--T--G--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--G--T--C--P OH--G--A--C--C--T--C … 5’
双功能（具甲基化） 异源三聚体 ATP Mg2+ SAM 距识别序列1kb处 随机性切割
单一功能 同源二聚体 Mg2+ 4-6bp回文序列 识别序列内或附近 特异切割
双功能（具甲基化） 异源二聚体 ATP Mg2+ 距识别序列下游 24-26bp处 随机性切割
注： SAM为S－腺苷甲硫氨酸
第一节 限制性核酸内切酶
第二节 DNA连接酶
一、概念与机理
DNA连接酶只能连接缺口（nick），不能连接裂口 （gap）。而且被连接的DNA链必须是双螺旋DNA分子的 一部分。注意：缺口（或称切口）和裂口的区别！！！！！
第二节 DNA连接酶
DNA连接酶对不同DNA分子的连接作用
第二节 DNA连接酶
DNA连接酶应用图解 （一）分子间的连接
第二节 基因工程的酶学基础
基因工程的操作，是在分子水平上的操作，是依赖一 些酶(如限制性核酸内切酶，连接酶，DNA聚合酶等)作为 工具对基因进行人工切割，拼接和扩增等操作。所以把这 些酶称之为“工具酶”。
第二章 基因工程的酶学基础
第一节
第二节 第三节 第四节 第五节 第六节 第七节
限制性核酸内切酶
EcoR I 5’-GAATTC-3’ 3’-CTTAAG-5’ Pst I 5’-CTGCAG-3’ 3’-GACGTC-5’ 产生粘性末端 EcoR V 5’-GATATC-3’ 3’-CTATAG-5’
产生平齐末端
HindⅢ切割位点
DNA
HindⅢ
AA G C T T T T C G AA
限制性核酸内切酶的应用： 重组DNA前的切割 构建新质粒 构建物理图谱 DNA分子杂交 用限制性内切酶消化受体DNA 制备DNA探针 亚克隆以用作序列分析 基因定位，DNA同源性研究
第二节 DNA连接酶
剪刀—限制性内切酶 针线、胶水—连接酶
第二节 DNA连接酶
DNA连接酶
第二节 DNA连接酶
一、概念与机理 DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一 种能够将DNA链上彼此相邻的3’-羟基（ OH ）和5’-磷酸基 团（-P），在NAD+或ATP供能的作用下，形成磷酸二酯键。 大肠杆菌和其他细菌的DNA连接酶以NAD+作为能量来源， 动物细胞和噬菌体的连接酶则以ATP作为能量来源。
使之甲基化。 EcoB核酸酶不能识别已甲基化的序
列。
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
第一节 限制性核酸内切酶
一、寄主的限制与修饰现象
基因工程中，应采用缺少限制作用的菌株作为受体。
第一节 限制性核酸内切酶
未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列（多数是回 文序列），与DNA的来源无关。
A B C C’ B’ A’ 或 A B N B’ A’
A’ B’ C’ C B A
A’ B’ N’ B A
第一节 限制性核酸内切酶
（2）切割位点 识别位点处。 切开双链DNA。形成粘性末端（sticky end）或平齐末 端（blunt end）。如：
第一节 限制性核酸内切酶
四、 Ⅱ限制性核酸内切酶的基本特性 （二）切割方式 Ⅱ限制性核酸内切酶切割双链DNA，水解磷酸二酯键 中3‘位酯键产生两个末端，末端结构是5’-P和3’-OH，产生 3种不同的切口。
第一节 限制性核酸内切酶
1. 5’突出的末端
第一节 限制性核酸内切酶
EcoRI等产生的5‘粘性末端 5‘…G--C--T--G--A--A--T--T--C--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--C--T--T--A--A--G--C--T--C … 5’ EcoRI 37 ℃ 5‘…G--C--T--G--OH P--A--A--T--T--C--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--C--T--T--A--A—P OH--G--C--T--C … 5’ 退火 4--7 ℃
5‘…G--C--T--G--A--A--T--T--C--G--A--G … 3’ 3‘…C--G--A--C--T--T--A--A--G--C--T--C … 5’
第一节 限制性核酸内切酶
2. 3’突出的末端
第一节 限制性核酸内切酶
PstI等产生的3‘粘性末端 5‘…C--T--G--C--A--G… 3’ 3‘…G--A--C--G--T--C … 5’ PstI 37 ℃ 5‘…C--T--G--C--A--OH P--G … 3’ 3‘…G-- P OH --A--C--G--T--C … 5’ 退火 4--7 ℃
第一节 限制性核酸内切酶
三、限制性内切酶的命名
Escherichia
Coli
Ry13
EcoR I
属名 第三个字母。 种名 株系 编号 若种名头2个字母相同则其中一个可用种名的第一和
第一节 限制性核酸内切酶
四、 Ⅱ限制性核酸内切酶的基本特性 （一）识别序列 识别顺序的碱基数一般为4-6 bp，少数识别更长，多 数识别位点具有旋转对称性（回文结构），少数的识别位 点在切割位点之外，具旋转对称性
DNA A A TTCGA B AGCTT A C D
核酸内切酶HindⅢ对双链DNA分子的切割作用
第一节 限制性核酸内切酶
3. III类限制性内切酶 在完全肯定的位点切割DNA(识别位点下游24-26bp)， 但反应需要ATP、 Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。
EcoP1: AGACC
EcoP15: CAGCAG
Recognize site 1-1.5kb
cut
（3）作用机理 需ATP、Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。
第一节 限制性核酸内切酶
2. II类限制性内切酶 首先由H.O. Smith和K.W. Wilcox在1970年从流感嗜血 菌中分离出来。 分离的第一个酶是Hind Ⅱ
（1）识别位点序列
二、限制性内切酶的类型
限制性核酸内切酶（限制性酶）：在细胞内能够识别双链DNA 分子中的特定核苷酸序列，并对DNA分子进行切割的一种酶。 据限制性核酸内切酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修 饰酶活性，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。
基因工程中使用 主要特性 Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型
限制修饰 蛋白结构 辅助因子 识别序列 切割位点
第一节 限制性核酸内切酶
三、限制性内切酶的命名 1973年H.O Smith和D. Nathans提议的命名系统，命名 原则如下： 1.用属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个字 母的略语表示寄主菌的物种名。 大肠杆菌（Escherichia coli）用Eco表示； 流感嗜血菌（Haemophilus influenzae）用Hin表示。 2. 用一个右下标的大写字母表示菌株或型。如EcoK, EcoR（现在都写成平行，如EcoRI）。 3. 如果一种特殊的寄主菌内有几种不同的限制与修复 系统，用罗马字母表示。如EcoR I，EcoR V。 4. 限制酶前面要带上R（Restriction)， 修饰酶前面要带上M（Modification）(现已省略)。
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
四、 Ⅱ限制性核酸内切酶的基本特性
（二）切割方式 同裂酶（isoschizomers）：指来源不同但识别相同靶序列的核酸
内切酶。同裂酶进行同样的切割，产生不同或相同的末端。
同尾酶（isocaudamer）：指来源不同、识别靶序列不同但产生 相同的粘性末端的核酸内切酶。利用同尾酶可使切割位点的选择余地 更大(相容性末端)。
（二）分子内的连接
第三节 DNA聚合酶和反转录酶
DNA聚合酶（DNA polymerase)是指能在引物和模板的存在下，将脱氧核 糖单核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3‘-OH末端，催化核苷酸的聚合 作用。分为：依赖于DNA的DNA聚合酶和依赖于RNA的DNA聚合酶。
DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶 Klenow fragment T4 DNA聚合酶 T7 DNA聚合酶 化学修饰T7DNA聚合酶 遗传修饰T7DNA聚合酶 逆转录酶 Taq DNA聚合酶 3’5’外切酶 活性 低 低 高 高 低 无 无 无 5’3’外切酶 活性 有 无 无 无 无 无 无 有 聚合速率 持续能力 中 中 中 快 快 快 低 快 低 低 低 高 高 高 中 高
4bp
5bp
6bp
11bp 12bp
HpaⅠ C CGG HaeⅢ GG CC AvaⅡ G GWCC EcoRⅡ CCWGG BamHⅠ G GATTC SmaⅠ CCC GGG Bg1Ⅰ GCCNNNN NGGC BstXⅠ CCANNNNN NTGC N=A, T, G, C
5‘…C--T--G--C--A--G… 3’ 3‘…G--A--C--G--T--C … 5’
第一节 限制性核酸内切酶
粘性末端的意义 ①连接便利 i）不同的DNA双链： 只要粘性末端碱基互补就可以连接。 这比连接两个平齐末端容易的多。
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
ii）同一个DNA分子内连接： 通过两个相同的粘性末端可以连接成环形分子。
1. I型限制性内切酶 首先由M. Meselson和R. Yuan在1968年从大肠杆菌 B 株和 K株分离的。 如 EcoB和 EcoK。 （1）识别位点序列 未甲基化修饰的特异序列。
EcoB： TGA(N)8TGCT EcoK：AAC(N)6GTGC
第一节 限制性核酸内切酶
（2）切割位点 在距离特异性识别位点约1000—1500 bp处随机切开 一条单链。
在基因工程操作中用途不大。
第一节 限制性核酸内切酶
核酸限制性内切酶的类型及主要特性
主要特性 限制修饰 蛋白结构 辅助因子 识别序列 切割位点 Ⅰ型 多功能（具甲基化） 异源三聚体 ATP Mg2+ SAM 距识别序列1kb处 随机性切割 Ⅱ型 单一功能 同源二聚体 Mg2+ 4-6bp回文序列 识别序列内或附近 特异切割 Ⅲ型 双功能（具甲基化） 异源二聚体 ATP Mg2+ 距识别序列下游 24-26bp处 随机性切割
碍。即所谓的寄主控制的限制与修饰现象简称（R/M体
系）。 细菌的R/M体系类似于免疫系统，能辨别自身的 DNA与外来的DNA，并能使后者降解掉。 维护宿主遗传稳定的保护机制。
E.coliB含有EcoB核酸酶和EcoB甲基化酶
当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有 EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。而 E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，但可在 EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸 （SAM）将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基，
第一节 限制性核酸内切酶
常用的限制酶BamHⅠ、BclⅠ、 BglⅡ、Sau3AⅠ和XhoⅡ就是一组 同尾酶，它们切割DNA之后都形成由GATC 4个核苷酸组成的粘性末端 。
பைடு நூலகம்
同尾酶举例： 如：BamHI BglII MboI, Sau3AI G GATCC A GATCT N GATCN
第一节 限制性核酸内切酶
第一节 限制性核酸内切酶
② 5’末端标记
凸出的5’末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P标记。
凸出的3’端可以通过末端转移酶添加几个多聚核苷
酸的尾巴（如AAA或TTT等）造成人工粘性末端。
③ 补平成平齐末端 粘性末端可以用DNA聚合酶补平成平齐末端。
第一节 限制性核酸内切酶
3. 平头末端
第一节 限制性核酸内切酶