1 基因工程的酶学基础
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分两种类型： ① 5’端凸出（如EcoR I切点） 5’3’5’3’GAATTC
-3’ -5’ -3’ -5’
CTTAAG
G AATTC CTTAA G
EcoR I等产生的5‘粘性末端
5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
② 不完全同裂酶：
识别位点相同，但切点不同。
如Xma I 和 Sma I。 Xma I 5’-CCCGGG -3’ 3’-GGGCCC-5’ 5’-CCCGGG-3’ 3’-GGGCCC-5’
Sma I
（5）同尾酶 (Isocaudamers）
识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 如BamH I、Bgl Ⅱ、Bcl I、Xho Ⅱ等 5’-GGATCC-3’ BamH I 3’-CCTAGG-5’ 5’-AGATCT-3’ 3’-TCTAGA-5’ Bcl I
3 4
酶的星号活性
（一）酶的纯度
高质量的限制性内切核酸酶应是通过 全面提纯的，不存在其他内切核酸酶或 外切酶的污染
在长时间酶解时不出现识别序列特异性的下降 酶解的DNA片段连接后能重新被识别和切割等。
（二）DNA样品的纯度
DNA中的杂质如蛋白质、苯酚、氯仿、乙醇、 SDS、EDTA、NaCl等都会影响酶的活性。 一般采取 ①纯化DNA ②适当加大酶的用量， 1g DNA 用 10U 酶 ③适当延长保温时间 ④ 扩大反应体积（ >20l）
寄主控制的限制与修饰的作用:
一是保护自身的DNA不受限制； 二是破坏外源DNA使之迅速降解。 基因工程中，应采用缺少限制作用 的菌株作为受体。
二、限制性内切酶的类型 目前鉴定出三种不同类型的限制性内切酶。 I 型限制性内切酶
II 型限制性内切酶 III型限制性内切酶
1. I型限制性内切酶
首先由M. Meselson和R. Yuan在1968年从大肠杆菌 B株和 K株分离的。
GATCT-3’ A-5’ Bgl Ⅱ
BamH I
5’-GGATCT-3’ 3’-CCTAGA-5’ Sau 3A
Bgl Ⅱ
（6）限制酶的酶活性 限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一 定的温度、离子强度、pH等条件下才表 现最佳切割能力和位点的专一性。 所以一般使用专一的反应缓冲液。 ① 星号（*）活性 如果改变反应条件就会影响酶的专一性和
EcoR I 5’-GAATTC-3’ EcoR V 5’-GATATC-3’ 3’-CTTAAG-5’ 3’-CTATAG-5’ Pst I 5’-CTGCAG-3’ 3’-GACGTC-5’ 产生平齐末端 产生粘性末端
（3）粘性末端（sticky ends，cohensive ends） 含有几个核苷酸单链的末端。
EcoR I 37 ℃
5‘ … G-C-T-G-OH
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P
退火 4-7 ℃
OH P
P-A-A-T-T-C-G-A-G
OH-G-C-T-C
… 3’
… 5’
5‘ … G-C-T-G A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A G-C-T-C … 5’
1. 来源
主要是从原核生物中分离纯化出来。 内切酶。 即在核酸分子链的内部制造切口的酶。
2. 性质
3. 功能
帮助细菌限制外来DNA的入侵
细菌的限制和修饰系统（R/M体系）
限制/修饰系统 (R-M, Restriction-modification system)
B和K分别代表大肠杆菌的B和K菌株（引自Streips等, 2002）
限制性内切核酸酶的类型
基因工程中广泛使用
据限制性核酸内切酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰 酶活性，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型三类。
特性 I型
双功能酶 3种不同亚基
II 型
内切核酸酶和甲基转 移酶分开 单一亚基
III 型
双功能酶 两种不同亚基
限制和修饰活性 酶蛋白分子组成
限制作用所需辅助因 子
P OH
（3）粘性末端的意义
① 连接便利 i）不同的DNA双链： 只要粘性末端碱基互补就可以连接。 这比连接两个平齐末端容易的多。 ii）同一个DNA分子内连接： 通过两个相同的粘性末端可以连接成环形分子。
② 5’末端标记
凸出的5’末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P标记。
凸出的3’端可以通过末端转移酶添加几个多聚核苷 酸的尾巴（如AAA或TTT等）造成人工粘性末端。
P-C-T-G-G-A-G OH-G-A-C-C-T-C
… 3’
… 5’
（4）同裂酶 (Isoschizomers)
识别位点的序列相同的限制性内切酶。
① 完全同裂酶： 识别位点和切点完全相同。
如Hind Ⅲ 和Hsu I。
Hind Ⅲ
Hsu I
5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’ 5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’
切割效率，称为星号（*）活性。
使用的时候要特别注意！
EcoR I和BamH I等都有*活性。 EcoR I： GAATTC 在低盐、高pH（>8）时可识别和切割 GAATTA、AAATTC、GAGTTC等
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（7）Ⅱs型限制性内切酶
移动切割（shifted cleavage):
在离它的不对称识别位点一侧的特 定距离处切割DNA双链。 Hga I GACGCNNNNN 5’ 3’ CTGCGNNNNNNNNNN
（1）识别位点序列 未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列 （多数是回文序列）。
与DNA的来源无关。
识别序列
4-8个核苷酸序列
大部分呈旋转对称、反向重复 结构-----回文结构
切割位点
C-C-G-C-G-G G-G-C-G-C-C
切割位点
对称轴
（2）切割位点 识别位点处 切开双链DNA。形成粘性末端（sticky end）或平齐末端（blunt end）。如：
P OH
② 3’端凸出（如Pst I切点） 5’3’CTGCAG GACGTC -3’ -5’
5’3’-
CTGCA
G
G
ACGTC
-3’ -5’
Pst I等产生的3‘粘性末端
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
特异性识别位点 切割位点
ATP、Mg2+、S-腺 苷甲硫氨酸
非对称序列 在距识别位点至 1kb处随机切割 否 寄主特异性位点 能 无
Mg2+
回文对称结构 识别位点上
ATP、Mg2+、S-腺苷 甲硫氨酸
非对称序列 距识别位点 24～26bp处 是 寄主特异性位点 能 很少
序列特异性切割 甲基化作用的位点 识别未甲基化序列并 切割 分子克隆中应用
Pst I 37 ℃
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH
3‘ … C-G-A-G-P
退火 4-7 ℃
OH P
P-G-G-A-G
OH-A-C-G-T-C-C-T-C
… 3’
… 5’
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
③ 补平成平齐末端
粘性末端可以用DNA聚合酶补平成平齐末端。
Pvu II等产生的平头末端
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G … 3’
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C … 5’
Pvu II 37 ℃
5‘ … G-C-T-C-A-G-OH
3‘ … C-G-A-G-T-C-P
5’-TGATCA-3’ 3’-ACTAGT-5’
Bgl Ⅱ
5’-UGATCY-3’ Xho Ⅱ 3’-YCTAGU-5’
U代表嘌呤；Y代表嘧啶。
Sau 3A
5’-GATC----3’ 3’----CTAG-5’
同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新 位点一般不能再被原来的酶识别。
5’-G BamH I 3’-CCTAG
如 EcoB和 EcoK。
（1）识别位点序列
未甲基化修饰的特异序列。
EcoB： TGA(N)8TGCT
EcoK：AAC(N)6GTGC
（2）切割位点
在距离特异性识别位点约1000—1500 bp处 随机切开一条单链。
Recognize site
cut 1-1.5kb
（3）作用机理 需ATP、Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。
甲基化酶：甲基转移酶 ① Dam甲基化酶
GATC 腺嘌呤N6位置引入甲基
② Dcm甲基化酶
CCAGG或CCTGG 第二个C上C5位置上引入甲基
限制/修饰系统
各种细菌都能合
成一种或几种能够 切割双链DNA的内切 核酸酶，以此来限 制外源DNA的入侵
几乎所有的限制性内 切核酸酶都和能识别、 甲基化相同DNA位点的甲 基转移酶（MTase）共同 作用，一起构成限制-修 饰系统。
水解断裂RNA分子的叫做核糖核酸酶(RNase)，而特异水解断
裂DNA分子的则叫做脱氧核糖核酸酶(DNase)。 按水解断裂核酸分子的方式不同，可分为两种类型： 一类是从核酸分子的末端开始，一个一个核苷酸地消化降解多 核苷酸链，叫核酸外切酶(exonuclease)； 另一类是从核酸分子内部切割磷酸二酯键使之断裂形成小片段， 叫核酸内切酶(endonuclease)。
寄主控制的限制与修饰的机理 限制(restriction)：指一定类型的细菌可以通过限制 酶的作用，破坏入侵的噬菌体DNA，导致噬菌体受 到限制。维护宿主遗传稳定的保护机制。
寄主控制的限制与修饰机理 修饰(modification)：指寄主本身的DNA，由于 在合成后通过甲基化酶的作用得以甲基化，使 DNA得以修饰，从而免遭自身限制性酶的破坏。
是 寄主特异性位点 能 广泛
限制性内切酶的命名原则:
HindⅢ
属 种 菌株 序 Haemophilus influenzae d菌株 流感嗜血杆菌d菌株的第3种酶
① 第一个字母是细菌属名的第一个字母，要大写； ② 第2、3个字母是细菌种名的前两个字母，要小写； 上述字母都是用斜体。 ③ 接着是细菌菌株的第一个字母，用正体字母书写； ④ 如果同一菌株有不同的内切酶时，按发现次序分别 用罗马数字Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……表示。
2. III型限制性内切酶
在完全确定的位点切割 DNA ，但反应需要 ATP 、 Mg2+和SAM (S-腺苷蛋氨酸)的激活作用。 EcoP1: AGACC
EcoP15: CAGCAG 在基因工程操作中用途不大。
3. II型限制性内切酶
1970年，H.O. Smith和K.W. Wilcox首先 从流感嗜血杆菌d株中分离出来。 分离的第一个酶是Hind II，其次是 Hind III
（三）DNA的甲基化程度
原核生物细胞内存在限制-修饰系统，其中甲基转 移酶(Mtase)对DNA起修饰作用，从而使自身DNA不 受体内限制性内切核酸酶的切割。
甲基化作用直接影响限制性内切核酸酶的活性 为了克服甲基转移酶(Mtase)的影响，在基因克隆 中使用MTase缺失的菌株来制备质粒DNA。
基因工程的酶学基础
常见的基因工程工具酶及其应用
1. 使核酸降解的核酸酶类：
核酸内切酶、核酸外切酶
2. 催化核酸合成的酶类：
DNA连接酶、 DNA聚合酶、逆转录酶、 RNA聚合酶
3. 核酸修饰酶类；
甲基化酶、激酶、基团转移酶、 磷酸酶等
第一节 限制性核酸内切酶
一、基本概念及其生物功能
核酸酶：通过切割相邻的两个核苷酸残基之间的磷酸二酯键， 从而导致核酸分子多核酸链发生水解断裂的蛋白酶。其中专门
第一节 限制性核酸内切酶
一、基本概念及其生物功能 限制性核酸内切酶(Restriction endonuclease)是一类
能够识别双链 DNA 分子中的某种特定核苷酸序列 (48bp)，并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 据1994年美国出版的《分子生物学百科全书》统计， 仅II型限制性核酸内切酶就已从各种不同的微生物中 分离出了 2300 种以上，可识别 230 种不同的 DNA 序列。
限制性内切酶的命名原则:
Escherichia Coli Ry13
EcoR I
属名 种名 株系 编号
• 若种名头2个字母相同则可用种名的
第一和第三个字母。
影响限制性内切核酸酶活性的因素
1 3 2
酶的纯度 DNA样品的纯度
DNA的甲基化程度 酶切反应的温度
5 6 3 7
DNA分子的构型 反应缓冲液
-3’ -5’ -3’ -5’
CTTAAG
G AATTC CTTAA G
EcoR I等产生的5‘粘性末端
5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
② 不完全同裂酶：
识别位点相同，但切点不同。
如Xma I 和 Sma I。 Xma I 5’-CCCGGG -3’ 3’-GGGCCC-5’ 5’-CCCGGG-3’ 3’-GGGCCC-5’
Sma I
（5）同尾酶 (Isocaudamers）
识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 如BamH I、Bgl Ⅱ、Bcl I、Xho Ⅱ等 5’-GGATCC-3’ BamH I 3’-CCTAGG-5’ 5’-AGATCT-3’ 3’-TCTAGA-5’ Bcl I
3 4
酶的星号活性
（一）酶的纯度
高质量的限制性内切核酸酶应是通过 全面提纯的，不存在其他内切核酸酶或 外切酶的污染
在长时间酶解时不出现识别序列特异性的下降 酶解的DNA片段连接后能重新被识别和切割等。
（二）DNA样品的纯度
DNA中的杂质如蛋白质、苯酚、氯仿、乙醇、 SDS、EDTA、NaCl等都会影响酶的活性。 一般采取 ①纯化DNA ②适当加大酶的用量， 1g DNA 用 10U 酶 ③适当延长保温时间 ④ 扩大反应体积（ >20l）
寄主控制的限制与修饰的作用:
一是保护自身的DNA不受限制； 二是破坏外源DNA使之迅速降解。 基因工程中，应采用缺少限制作用 的菌株作为受体。
二、限制性内切酶的类型 目前鉴定出三种不同类型的限制性内切酶。 I 型限制性内切酶
II 型限制性内切酶 III型限制性内切酶
1. I型限制性内切酶
首先由M. Meselson和R. Yuan在1968年从大肠杆菌 B株和 K株分离的。
GATCT-3’ A-5’ Bgl Ⅱ
BamH I
5’-GGATCT-3’ 3’-CCTAGA-5’ Sau 3A
Bgl Ⅱ
（6）限制酶的酶活性 限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一 定的温度、离子强度、pH等条件下才表 现最佳切割能力和位点的专一性。 所以一般使用专一的反应缓冲液。 ① 星号（*）活性 如果改变反应条件就会影响酶的专一性和
EcoR I 5’-GAATTC-3’ EcoR V 5’-GATATC-3’ 3’-CTTAAG-5’ 3’-CTATAG-5’ Pst I 5’-CTGCAG-3’ 3’-GACGTC-5’ 产生平齐末端 产生粘性末端
（3）粘性末端（sticky ends，cohensive ends） 含有几个核苷酸单链的末端。
EcoR I 37 ℃
5‘ … G-C-T-G-OH
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P
退火 4-7 ℃
OH P
P-A-A-T-T-C-G-A-G
OH-G-C-T-C
… 3’
… 5’
5‘ … G-C-T-G A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A G-C-T-C … 5’
1. 来源
主要是从原核生物中分离纯化出来。 内切酶。 即在核酸分子链的内部制造切口的酶。
2. 性质
3. 功能
帮助细菌限制外来DNA的入侵
细菌的限制和修饰系统（R/M体系）
限制/修饰系统 (R-M, Restriction-modification system)
B和K分别代表大肠杆菌的B和K菌株（引自Streips等, 2002）
限制性内切核酸酶的类型
基因工程中广泛使用
据限制性核酸内切酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰 酶活性，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型三类。
特性 I型
双功能酶 3种不同亚基
II 型
内切核酸酶和甲基转 移酶分开 单一亚基
III 型
双功能酶 两种不同亚基
限制和修饰活性 酶蛋白分子组成
限制作用所需辅助因 子
P OH
（3）粘性末端的意义
① 连接便利 i）不同的DNA双链： 只要粘性末端碱基互补就可以连接。 这比连接两个平齐末端容易的多。 ii）同一个DNA分子内连接： 通过两个相同的粘性末端可以连接成环形分子。
② 5’末端标记
凸出的5’末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P标记。
凸出的3’端可以通过末端转移酶添加几个多聚核苷 酸的尾巴（如AAA或TTT等）造成人工粘性末端。
P-C-T-G-G-A-G OH-G-A-C-C-T-C
… 3’
… 5’
（4）同裂酶 (Isoschizomers)
识别位点的序列相同的限制性内切酶。
① 完全同裂酶： 识别位点和切点完全相同。
如Hind Ⅲ 和Hsu I。
Hind Ⅲ
Hsu I
5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’ 5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’
切割效率，称为星号（*）活性。
使用的时候要特别注意！
EcoR I和BamH I等都有*活性。 EcoR I： GAATTC 在低盐、高pH（>8）时可识别和切割 GAATTA、AAATTC、GAGTTC等
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（7）Ⅱs型限制性内切酶
移动切割（shifted cleavage):
在离它的不对称识别位点一侧的特 定距离处切割DNA双链。 Hga I GACGCNNNNN 5’ 3’ CTGCGNNNNNNNNNN
（1）识别位点序列 未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列 （多数是回文序列）。
与DNA的来源无关。
识别序列
4-8个核苷酸序列
大部分呈旋转对称、反向重复 结构-----回文结构
切割位点
C-C-G-C-G-G G-G-C-G-C-C
切割位点
对称轴
（2）切割位点 识别位点处 切开双链DNA。形成粘性末端（sticky end）或平齐末端（blunt end）。如：
P OH
② 3’端凸出（如Pst I切点） 5’3’CTGCAG GACGTC -3’ -5’
5’3’-
CTGCA
G
G
ACGTC
-3’ -5’
Pst I等产生的3‘粘性末端
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
特异性识别位点 切割位点
ATP、Mg2+、S-腺 苷甲硫氨酸
非对称序列 在距识别位点至 1kb处随机切割 否 寄主特异性位点 能 无
Mg2+
回文对称结构 识别位点上
ATP、Mg2+、S-腺苷 甲硫氨酸
非对称序列 距识别位点 24～26bp处 是 寄主特异性位点 能 很少
序列特异性切割 甲基化作用的位点 识别未甲基化序列并 切割 分子克隆中应用
Pst I 37 ℃
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH
3‘ … C-G-A-G-P
退火 4-7 ℃
OH P
P-G-G-A-G
OH-A-C-G-T-C-C-T-C
… 3’
… 5’
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
③ 补平成平齐末端
粘性末端可以用DNA聚合酶补平成平齐末端。
Pvu II等产生的平头末端
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G … 3’
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C … 5’
Pvu II 37 ℃
5‘ … G-C-T-C-A-G-OH
3‘ … C-G-A-G-T-C-P
5’-TGATCA-3’ 3’-ACTAGT-5’
Bgl Ⅱ
5’-UGATCY-3’ Xho Ⅱ 3’-YCTAGU-5’
U代表嘌呤；Y代表嘧啶。
Sau 3A
5’-GATC----3’ 3’----CTAG-5’
同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新 位点一般不能再被原来的酶识别。
5’-G BamH I 3’-CCTAG
如 EcoB和 EcoK。
（1）识别位点序列
未甲基化修饰的特异序列。
EcoB： TGA(N)8TGCT
EcoK：AAC(N)6GTGC
（2）切割位点
在距离特异性识别位点约1000—1500 bp处 随机切开一条单链。
Recognize site
cut 1-1.5kb
（3）作用机理 需ATP、Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。
甲基化酶：甲基转移酶 ① Dam甲基化酶
GATC 腺嘌呤N6位置引入甲基
② Dcm甲基化酶
CCAGG或CCTGG 第二个C上C5位置上引入甲基
限制/修饰系统
各种细菌都能合
成一种或几种能够 切割双链DNA的内切 核酸酶，以此来限 制外源DNA的入侵
几乎所有的限制性内 切核酸酶都和能识别、 甲基化相同DNA位点的甲 基转移酶（MTase）共同 作用，一起构成限制-修 饰系统。
水解断裂RNA分子的叫做核糖核酸酶(RNase)，而特异水解断
裂DNA分子的则叫做脱氧核糖核酸酶(DNase)。 按水解断裂核酸分子的方式不同，可分为两种类型： 一类是从核酸分子的末端开始，一个一个核苷酸地消化降解多 核苷酸链，叫核酸外切酶(exonuclease)； 另一类是从核酸分子内部切割磷酸二酯键使之断裂形成小片段， 叫核酸内切酶(endonuclease)。
寄主控制的限制与修饰的机理 限制(restriction)：指一定类型的细菌可以通过限制 酶的作用，破坏入侵的噬菌体DNA，导致噬菌体受 到限制。维护宿主遗传稳定的保护机制。
寄主控制的限制与修饰机理 修饰(modification)：指寄主本身的DNA，由于 在合成后通过甲基化酶的作用得以甲基化，使 DNA得以修饰，从而免遭自身限制性酶的破坏。
是 寄主特异性位点 能 广泛
限制性内切酶的命名原则:
HindⅢ
属 种 菌株 序 Haemophilus influenzae d菌株 流感嗜血杆菌d菌株的第3种酶
① 第一个字母是细菌属名的第一个字母，要大写； ② 第2、3个字母是细菌种名的前两个字母，要小写； 上述字母都是用斜体。 ③ 接着是细菌菌株的第一个字母，用正体字母书写； ④ 如果同一菌株有不同的内切酶时，按发现次序分别 用罗马数字Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……表示。
2. III型限制性内切酶
在完全确定的位点切割 DNA ，但反应需要 ATP 、 Mg2+和SAM (S-腺苷蛋氨酸)的激活作用。 EcoP1: AGACC
EcoP15: CAGCAG 在基因工程操作中用途不大。
3. II型限制性内切酶
1970年，H.O. Smith和K.W. Wilcox首先 从流感嗜血杆菌d株中分离出来。 分离的第一个酶是Hind II，其次是 Hind III
（三）DNA的甲基化程度
原核生物细胞内存在限制-修饰系统，其中甲基转 移酶(Mtase)对DNA起修饰作用，从而使自身DNA不 受体内限制性内切核酸酶的切割。
甲基化作用直接影响限制性内切核酸酶的活性 为了克服甲基转移酶(Mtase)的影响，在基因克隆 中使用MTase缺失的菌株来制备质粒DNA。
基因工程的酶学基础
常见的基因工程工具酶及其应用
1. 使核酸降解的核酸酶类：
核酸内切酶、核酸外切酶
2. 催化核酸合成的酶类：
DNA连接酶、 DNA聚合酶、逆转录酶、 RNA聚合酶
3. 核酸修饰酶类；
甲基化酶、激酶、基团转移酶、 磷酸酶等
第一节 限制性核酸内切酶
一、基本概念及其生物功能
核酸酶：通过切割相邻的两个核苷酸残基之间的磷酸二酯键， 从而导致核酸分子多核酸链发生水解断裂的蛋白酶。其中专门
第一节 限制性核酸内切酶
一、基本概念及其生物功能 限制性核酸内切酶(Restriction endonuclease)是一类
能够识别双链 DNA 分子中的某种特定核苷酸序列 (48bp)，并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 据1994年美国出版的《分子生物学百科全书》统计， 仅II型限制性核酸内切酶就已从各种不同的微生物中 分离出了 2300 种以上，可识别 230 种不同的 DNA 序列。
限制性内切酶的命名原则:
Escherichia Coli Ry13
EcoR I
属名 种名 株系 编号
• 若种名头2个字母相同则可用种名的
第一和第三个字母。
影响限制性内切核酸酶活性的因素
1 3 2
酶的纯度 DNA样品的纯度
DNA的甲基化程度 酶切反应的温度
5 6 3 7
DNA分子的构型 反应缓冲液