大肠菌群MPN计数方案

大肠菌群检测(MPN法)

大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。

本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。

一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。

在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。

1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。

缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。

2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。

该方法已被最可能数(MPN)法所替代。

3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。

在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。

三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。

一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。

2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。

例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。

3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。

mpn法检测大肠菌群的原理

mpn法检测大肠菌群的原理1. 什么是MPN法？大家好，今天咱们聊聊MPN法，也就是最可能数法，这可是检测水中大肠菌群的“神器”呢！MPN法的英文全名是“Most Probable Number”，翻译过来就是“最可能数”。

听起来是不是很神秘？其实它就是一种通过统计学的方法来估算水里大肠菌群的数量，通俗点说，就是看水中藏着多少小“坏蛋”。

首先，MPN法听起来有点复杂，其实它的工作原理还挺简单的。

咱们可以把它理解成一种通过“打样”的方法来找出水中的大肠菌群到底有多少。

这就好比我们去商场逛街，看到一件漂亮的衣服，试穿了几件差不多款式的，最终决定了买哪一件。

MPN法也是这样，它通过一系列的实验，来估算大肠菌群的数量。

要知道，大肠菌群这家伙可是影响水质的重要因素，所以咱们得好好了解一下它们的情况。

2. MPN法的基本步骤2.1 采样和稀释说到MPN法，首先要做的就是采样。

就像咱们去商场挑衣服一样，第一步是挑选你想要的样品。

这里咱们的样品是水，特别是那些咱们平时喝的水，或者用来洗菜、做饭的水。

这些水可得小心处理，不然大肠菌群的数量会被弄得不准确。

采样之后，我们需要把水样进行稀释。

稀释的目的是为了减少水中大肠菌群的浓度，使得后续的实验更容易操作。

这个过程就像是调配饮料时，加水稀释一样。

稀释得越多，水样中的细菌浓度就越低。

这样做是为了确保在实验时，能准确地找出大肠菌群的数量。

2.2 培养和观察接下来，我们把稀释后的水样放到培养基里去培养。

培养基是一种特殊的营养液，可以让细菌在里面繁殖。

就像给植物提供土壤一样，培养基给细菌提供了生长的环境。

这个过程需要一点时间，一般来说，细菌在培养基里待24到48小时，就可以看到结果了。

观察结果的时候，我们需要注意培养基的变化。

如果水样中有大肠菌群，它们会在培养基中产生一些气体或者改变颜色，这就像是植物长出了新芽一样。

通过观察这些变化，我们可以判断水样中是否有大肠菌群存在。

如果培养基的颜色发生了变化，那就意味着水中有大肠菌群，咱们可以进一步计算它们的数量。

大肠杆菌的检测MPN计数法

大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。

MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。

一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。

它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。

二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。

2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。

每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。

3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。

这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。

4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。

每个试管中接种的样品量为10ml。

5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。

根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。

6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。

三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。

2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。

3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。

局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。

因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。

2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。

MPN大肠菌群大肠杆菌原理

MPN大肠菌群大肠杆菌原理MPN的全称是Most Probable Number，即最有可能数目。

MPN是一种用于测定微生物数量的方法。

在微生物学中，常常需要知道一个环境样品中微生物的数量，这对于病原微生物的检测、食品与饮用水质量的检验等具有重要意义。

MPN方法的原理基于一种统计学的原则，即当样品中存在微生物时，根据样本连续稀释后的阳性结果的比率可以估算样品中微生物的数量。

首先，将样品连续稀释，然后分别将稀释液接种到不同的培养基中，根据不同培养基的阳性结果来估算微生物数量。

大肠菌群是人类消化系统中的一类细菌。

它们主要分布在人体肠道的大肠中，经常与人体共生共存。

通常情况下，大肠细菌对人体有很多益处，如帮助消化食物、合成维生素等。

然而，有些大肠细菌可能是致病菌，会导致人体感染。

因此，对大肠菌群的检测对于维护人体健康具有重要意义。

大肠杆菌（Escherichia coli）是大肠菌群中的一种细菌，是最常见的肠道细菌之一、大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌，通常呈杆状且单株分离。

它们在肠道中发挥着重要的生理功能，如参与食物消化、产生维生素和促进免疫系统的功能。

此外，大肠杆菌在医学和微生物学中也经常被用作实验模型。

大肠杆菌的检测原理一般采用培养方法。

首先，将样品中的细菌进行传代培养，为了区分大肠杆菌和其他微生物，通常会在培养基中加入选择性抑制剂。

在培养基中生长的细菌经过一段时间后会形成典型的大肠杆菌形态，如菌落大小、形状和颜色等。

此外，还可用生化试剂进行进一步检测，如糖发酵试验和气体产生试验等，以确定细菌是否为大肠杆菌。

总结起来，MPN是一种用于估算样品中微生物数量的方法，大肠菌群是人体肠道中的一类细菌，而大肠杆菌则是大肠菌群中的一种最常见细菌。

大肠杆菌的检测一般采用培养方法，通过培养基中细菌的生长和形态特征以及生化试剂的反应来确定是否为大肠杆菌。

这些检测方法对于保障人体健康和食品安全具有重要作用。

大肠菌群计数含MPN表

大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。

一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。

例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。

活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。

若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。

从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。

然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。

虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表正反应试管数MPN/ml （ g ）95% 信赖界线下限上限000< 30013< 590103< 513020---1004< 5201017121110712311111336120113362009136201143372101534421120789220214472212810150230---30023412030139713030264153803104372103117514230312120303803209315380321153044032221035470330240361,300331460712,4003321,1001504,800333> 1,100> 150> 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中，， ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml （g）。

大肠杆菌mpn标准范围

大肠杆菌mpn标准范围大肠杆菌(MPN)是一种广泛存在于环境中的细菌，人们常用来作为水质检测的指标菌。

MPN检测是水质监测中的一种重要方法，其标准范围被广泛采用作为衡量水质好坏的依据。

MPN检测的基本原理是根据菌落计数的方法，将大肠杆菌的数量定量，进而对水质进行评估。

目前，国际上普遍认可的MPN标准分为三个级别：100ml、1000ml和10000ml。

其中，标准100ml是指在每100毫升水样中，检测到大肠杆菌的数量应少于1个，否则将会对人体健康造成潜在的危害。

对于不同类型的水源而言，其MPN标准范围也有所不同。

例如，对于饮用水而言，其标准范围应该在10 MPN/100 ml以内；对于游泳水而言，标准范围可适当放宽；而对于河流、湖泊等自然水源的标准范围则相对较高，一般为100 MPN/100 ml。

当水质超过MPN标准范围时，可能会对人造成潜在的健康影响。

例如，如果饮用水中MPN超过标准范围，可能会引起腹泻、恶心、呕吐、腹痛等症状，还会增加感染传染病的风险。

因此，对于水质的检测和评估非常重要。

值得注意的是，MPN检测并非完全可靠，可能会受到环境和其他因素的影响。

因此，在实际应用中，还需要结合其他水质检测指标来进行综合评估。

此外，MPN检测也有一定的局限性，不适用于所有类型的细菌，甚至可能忽略掉某些真菌和病毒。

总的来说，大肠杆菌MPN标准范围是衡量水质好坏的重要参数之一。

随着水资源的日益紧缺和环境污染的日益加重，对于水质检测和管理的需求也越来越迫切。

未来，有必要进一步完善MPN标准范围，并结合更加精准、全面的水质检测指标，为人们提供更加清洁、安全的水资源。

大肠杆菌的检测(MPN计数法)

食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MPN计数法）院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名: 张花学号: 114031431组长: 张军玲成员：张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petrifilm测试片计数法摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段,而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一.根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。

Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。

该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。

关键词大肠杆菌Petrifilm测试法1设备和材料1。

1恒温培养箱:36±1℃。

1.2冰箱2～5℃。

1.3恒温水浴箱 :44。

5±0。

2℃。

1.4天平:感量0。

1g.1.5均质器1.6振荡器。

1.7无菌吸管：lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0。

1mL刻度）或微量移液器及吸头。

1.8无菌锥形瓶：容量500mL。

1。

9 玻璃珠:直径约5mm。

1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸1。

11试管架.2. 培养基和试剂2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。

2.2EC肉汤.2。

3蛋白胨水.2。

4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP—VP实验用）。

2。

5磷酸盐缓冲液。

2。

6无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

2。

71mol/L氢氧化钠（NaOH ）：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。

2.81mol/L 盐酸（HCI ）：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml。

3检验程序4.样品稀释4。

1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。

大肠菌群检验原始记录-MPN法

大肠菌群检验原始记录（MPN法，2016版）
检验单位
xxxx公司检验室
检验员
张xx
检验日期
2022-xx-xx至2022-xx-xx
环境条件
温度xx℃，相对湿度（RH）xx%
检验依据
GB4789.2-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第一法
检验编号
20220606xxx
样品名称
xxxx
样品批次
2022xxxx
仪器设备及耗材：
天平：(xxxx)洁净工作台: (xxxx)培养箱:ຫໍສະໝຸດ (xxxx)培养基及试剂：
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）：xxxx配制日期2022/xx/xx
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）：xxxx配制日期2022/xx/xx
磷酸盐缓冲液：xxxx配制日期2022/xx/xx
-
阴性
报告人
报告日期
复核人
复核日期
将以上 LST置于 36.0 ±1℃，培养24h±2h（2022/xx/xxxx时~2022/xx/xxxx时），观察导气管内是否有气泡产生。如产气，进行证实实验，如未产气继续培养至48h±2h（2022/xx/xxxx时~2022/xx/xxxx时），产气，进行复发酵实验，不产气报告结果为阴性。
4.证实试验（接种BGLB）
实验过程：
1.样品处理和稀释：
1.1如需要，使用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸将样品调整pH在6.5~7.5之间。
1.2 制备样品稀释液
无菌操作，称取/吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌磷酸盐缓冲液中均质（混匀），制成 1:10 样品匀液。吸取1:10样品匀液1mL，沿试管壁注入盛有9mL无菌磷酸盐缓冲液的试管中，涡旋混匀，制成1:100的样品匀液。根据对样品污染情况的估计，按上述操作将样品稀释至所需浓度。

mpn测试方法

mpn测试方法MPN测试方法MPN测试方法是一种常用于微生物检测的技术，MPN全称为Most Probable Number，即最可能数。

该方法主要用于对水样、食品等样品中微生物的数量进行估算。

本文将详细介绍MPN测试方法的原理、步骤以及应用范围。

一、原理MPN测试方法是基于统计学原理的一种间接计数方法。

其基本思想是通过观察样品中微生物的生长情况，根据生长的阳性与阴性结果的比例，利用MPN表格推测出微生物的数量。

该方法适用于微生物数量较低的样品，如水质检测中的大肠菌群检测。

二、步骤1. 样品准备：将待测样品进行适当稀释，以获得合适的浓度范围。

2. 培养基选择：根据待测微生物的特性选择适当的培养基。

常用的培养基有大肠杆菌选择性培养基、营养琼脂培养基等。

3. 分装：将稀释后的样品分装到多个培养基含量相同的试管中。

4. 培养：将试管置于适当的温度和时间下进行培养，促使微生物生长。

5. 观察结果：观察培养后试管中是否有微生物生长，根据阳性与阴性的试管数量比例确定MPN值。

6. MPN值计算：利用MPN表格，根据阳性与阴性的比例找到对应的MPN值。

三、应用范围MPN测试方法广泛应用于食品安全、环境卫生等领域。

在食品安全领域，MPN测试常用于检测食品中的致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌等。

在环境卫生领域，MPN测试常用于水质检测，以评估水源的安全性。

MPN测试方法的优点是相对简单、快速，并且能够在没有仪器设备的情况下进行。

但其也存在一些限制，如对待测物种的选择性较强，不适用于所有微生物的检测；同时，MPN测试方法的准确性也受到多种因素的影响，如样品的预处理、培养条件等。

MPN测试方法是一种常用的微生物检测方法，通过观察样品中微生物的生长情况，利用统计学原理推测微生物的数量。

该方法在食品安全和环境卫生等领域具有重要应用价值。

然而，为了提高测试结果的准确性，需要在实际操作中严格控制各种因素，并结合其他检测方法进行综合评估。

大肠菌群计数含MPN表

大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。

一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。

例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及0.1ml的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。

活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。

若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。

从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。

然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。

虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表3 3 1 460 71 2,4003 3 2 1,100 150 4,8003 3 3 > 1,100 > 150 > 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中0.1，0.01，0.001 ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml（g）。

若稀释倍数为原液，10，100倍(即每ml LST中含1，0.1，0.01ml之检体而EC接种之正反应试管数亦为3-1-0，则该检体大肠杆菌MPN数为43÷10=4.3/ml。

大肠菌群计数检验步骤

大肠菌群计数检验步骤第一法大肠菌群MPN 计数操作步骤6.1、样品的稀释6.1.1、固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。

6.1.2、液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。

6.1.3、样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间，必要时分别用1mol/L 氢氧化钠（NaOH ）或1 mol/L 盐酸（HCI ）调节。

6.1.4、用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1ml，沿管壁缓缓注人9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。

6.1.5、根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10 倍递增系列稀释样品匀液。

每递增稀释1 次，换用1 支1ml无菌吸管或吸头。

从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。

6.2、初发酵试验每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（如接种量超过1ml，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃培养24h±Zh ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。

记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。

未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。

6.3、复发酵试验用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种于煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃培养48h±2h ，观察产气情况。

mpn法检测大肠菌群的原理

mpn法检测大肠菌群的原理1. 什么是MPN法？大家都知道，大肠菌群对我们的健康可有着举足轻重的影响。

咱们今天要聊的是一种检测它们的好方法——MPN法。

MPN法，全名叫做“最可能数法”（Most Probable Number），听起来是不是挺高大上的？其实，这就是一种用来估算水或食品中大肠菌群数量的方法，简单说就是“猜个数”法，当然这不是随便猜的哦，背后可是有科学依据的。

2. MPN法的基本原理2.1 检测过程的初步了解首先，这个MPN法就像玩“猜谜游戏”。

你要先把你的样本，譬如水或食物，分成几份，放到不同的培养基里。

培养基就是一种特别的“营养液”，它可以帮助大肠菌群生长。

接着，你要观察这些培养基里的变化。

特别注意的是，如果有大肠菌群存在，它们会产生气体，气体会让液体变成泡泡状。

2.2 数据分析和结果估算然后，你会看到这些泡泡的数量，根据这些泡泡的多寡，你就可以用统计学的方法，估算样本中大肠菌群的数量。

是不是有点像把一篮水果分成几堆，然后根据每堆的水果数量来估算整篮水果的数目？这就是MPN法的“智慧”所在，通过这种方法，我们可以粗略估算出大肠菌群的数量，尽管这种估算是“最可能数”，但却很有帮助。

3. 为什么选择MPN法？3.1 MPN法的优势说到为什么用MPN法，其实这有点像在菜市场挑选水果，MPN法就像是用比较简单的工具来确定水果的新鲜程度。

它不仅简单易用，而且对于某些检测条件下，MPN法比其他方法要方便得多。

尤其是当你面对大量的样本时，它就显得特别得心应手。

你只需要简单的试剂和培养基，就能完成检测，省时省力。

3.2 MPN法的局限性不过，任何方法都有它的“短板”，MPN法也不例外。

虽然它方便，但它的结果只是一个“估计值”，而不是一个精准值。

就像你估算一桌子菜的分量，不可能每次都做到百分百准确，对吧？MPN法同样如此，它给出的结果只能算是一个“最可能”的数值，实际情况可能会有所不同。

4. 实际应用中的MPN法4.1 在水质检测中的应用在实际应用中，MPN法广泛用于水质检测。

大肠菌群MPN法的设计原理

大肠菌群MPN法的设计原理
大肠菌群MPN法是一种用于检测环境水样和食品样品中大肠菌群数量的方法。

它的设计原理基于以下几个方面：
1. 大肠菌群指标：大肠菌群是一类广泛存在于环境中的微生物，其中包括了多种大肠杆菌和其他肠道细菌。

大肠菌群可以作为一种指标，用来评估水质和食品中的细菌污染程度。

2. MPN法：MPN（Most Probable Number，最可能数）法是一种常用的微生物计数方法。

它通过对不同稀释度的样品进行对比培养，观察细菌生长情况，从而推测出细菌的数量。

3. MPN法的流程：大肠菌群MPN法的流程一般包括以下几个步骤：首先，将样品进行预处理，如加入适当的培养基和抑制剂，以排除其他非目标菌的影响；然后，将样品分成若干个不同稀释度的试管；接下来，将试管中的样品逐渐转移到培养基中进行培养；最后，观察培养基中的生长情况，根据特定的生长特征，确定大肠菌群的MPN值。

4. 数据分析：根据大肠菌群MPN法的设计原理，可以使用统计学的方法对实验结果进行分析和计算，得出大肠菌群的数量。

通过与相关标准进行比较，可以评估环境水样或食品样品是否符合卫生标准。

总而言之，大肠菌群MPN法通过稀释样品、对比培养和数据分析等步骤，可以量化环境水样和食品样品中大肠菌群的数量，从而评估细菌污染程度。

大肠菌群MPN计数法

大肠菌群MPN计数法大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。

图1 大肠菌群MPN计数法检验程序 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品,放入盛有225mL缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225mL缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液。

6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

6.1.3 样品匀液的PH值应在6.5～7.5之间，须要时分离用1mol/L NaOH或1mol/LHCl 调整。

6.1.4 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁徐徐注入9mL缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注重吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合匀称，制成1:100的样品匀液。

6.1.5 按照对样品污染情况的估量，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。

每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。

从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

6.2 初发酵实验每个样品，挑选3个相宜的延续稀释度的样品匀液(液体样品可以挑选原液)，每个稀释度接种3管B(LST)肉汤，每管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料LST肉汤)，36℃±1℃培养24h±2h,观看倒管内是否有气泡产生，24h ±2h产气者举行复发酵实验，如未产气则继续培养至48h±2h,产气者举行复发酵实验。

未产气者为大肠菌群阴性。

6.3 复发酵实验用接种环从产气的LST肉汤管中分离取培养物1环,移种于肉汤(BGLB)管中，36℃±1℃培养48h±2h,观看产气状况。

大肠菌群测定步骤

食品大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测步骤一、培养基制备1、生理盐水氯化钠 8.5g蒸馏水 1000.0ml将氯化钠溶于蒸馏水中，搅拌均匀后用量筒量取225ml分装到各个广口瓶中，1210C高压灭菌15min，备用。

2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤称取37克放入烧杯，将各成分溶解于1000ml蒸馏水中，放电炉子上加热并搅拌均匀，分装于装有倒立发酵管的试管中，每管10ml，装完盖帽，1210C高压灭菌15min，双料培养基除蒸馏水不变外，其余成分加倍。

3、样品制备（在无菌室中进行）（1）固体或半固体样品无菌操作称取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分振摇、混匀，制成1：10的样品稀释液备用。

（2）液体样品以无菌吸管吸取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分混匀，制成1：10的样品稀释液备用。

4、样品稀释用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀，制成1：100的样品匀液。

按照该操作程序，可制备1：1000，1：10000。

等10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。

根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

二、大肠菌群的测定（MPN法）1、选取适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml。

360C+10C培养24h-48h后，观察倒管内是否有气泡产生，并记录24h和48h内产气的LST肉汤管数。

对未产气的试管，可以轻敲试管壁的方式观察是否有较细小的气泡从管底逸出，如果所有LST肉汤管均未产气，可按。

报告结果；如果LST管有产气，则按下面步骤作证实试验。

食品中大肠菌群的测定(MPN法)

五、实验步骤
检样稀释
大肠菌群检验程图（新国标MPN法）
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
产气煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
报告
1、样品处理：
❖ 固体和半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225 mL生理盐水的三角瓶中，充分振荡，制成 1:10样品匀液无菌均质杯或无菌均质袋内，于8000 r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液。
四、实验器材
1、培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤
2、仪器或其他用具：电子天平（感量0.1g）、无菌不锈钢勺、无菌称量纸、无菌吸管（1 mL和25 mL）、试管、三角瓶、无菌生理盐水（9mL/管，225mL/三角瓶内含适量玻璃珠）、无菌1 mol/L NaOH、无菌1 mol/L HCl、 75%酒精棉球、广口瓶、灭菌剪刀、灭菌镊子、酒精灯、精密pH 试纸、恒温培养箱、高压灭菌锅、均质器、振荡器、接种环等。
1、样品处理：
❖ 液体食品：以无菌吸管吸取样品 25mL 放入装有 225mL生理盐水的无菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，以30cm幅度、于7s内振摇25次（或以机械振荡器振摇）,制成1:10的样品匀液。
2、样品稀释：
1ml
1ml 1ml
生理盐水
1:10
25g/m
1:100 1:1000 1:10000
l样品
注意：吸管尖端不要触及稀释液面，每递增稀释1
次，用1 支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至

大肠菌群计数MPN法

粪大肠菌群（Fecal colifoms）
一群在44.5 ℃发酵乳糖、产酸产气、IMViC生化试验为++--或-+--的革兰氏阴性无芽孢杆菌。分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。O抗原（菌体抗原，150个） K抗原（荚膜抗原，90个） H抗原（鞭毛抗原，50个）
月桂基磺酸盐胰蛋白胨（LST）
归纳总结
培养基主要成分作用
①胆盐可抑制革兰氏阳性菌。②煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。③乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。④发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
归纳总结
注意事项
目前很多产品大肠菌群标准要求单位为MPN/100mL（g），同2010版检测结果单位MPN/100mL（g）不一致。中华人民共和国卫生部公告 2009第16号正式公告：现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》（GB/T 4789.3-2003）进行检测；以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/克或CFU/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》（GB/T 4789.3-2008）进行检测。
大肠菌群（Coliforms）
指在44.5℃培养24-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”，如NMKL。与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。