蟾蜍坐骨神经干标本的制备

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蟾蜍坐骨神经干

注意事项
1.破坏脑脊髓要彻底，防止蟾酥射入操作者眼中或污染实验标本。 2.操作时避免压挤、损伤和用力牵拉标本，不可用金属器械触碰神经干。 3.操作过程中，应给神经和肌肉滴加任氏液，防止表面干燥，以免影响标本的兴奋性。 4.标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟,使标本兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。
实验原理（三）神经动作电位传导速度的测定
动作电位在神经干上传导具有一定的速度蟾蜍的坐骨神经是混合神经，由许多粗细不等的有髓和无髓神经纤维构成，其中以Aɑ类纤维为主，传导速度约为35— 40m/s。
神经冲动的传导速度（v）是指动作电位在单位时间（t）内传导的距离（s）
仪器与器械（一）
（1）引导双相神经动作电位
点击“神经干动作电位的引导”，引导出一个双相动作电位。
（2）观察和测定双相动作电位
① 自动调节刺激强度，观
察动作电位波形的变化。读出波宽为某一数值时的阈刺激和最大刺激。
②仔细观察双相动作电位的
波形。读出最大刺激时双相动作电位上下相的振幅和整个动作电位持续时间数值。
注意事项
1.制备标本时，神经干应尽可能分离长一些，上自脊柱附近的主干，下至踝关节附近。分离过程中勿损伤神经组织，以免影响其兴奋性。
2.将神经干搭在引导电极上时，神经干不能与标本盒壁相接触，尽量将其拉成水平线，不要下垂或斜向放置。
3.刺激强度在开始时不要过强，先由弱强度开始，逐步加大强度，以免剌激伤害神经标本。
4.经常滴加任氏液，保持神经标本湿润。 5.实验完毕神经糟应仔细清洗，擦干，以免残留的
盐液. 神经干动作电位与刺激强度有何关系？神经干动作电位符合“全或无”定律吗？为什么?
感谢聆

蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备

蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验报告实验名称蛙的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；学习生理学实验基本的组织分离技术；观察刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应的关系；掌握引导神经干复合动作电位和测定其传导速度的基本原理和方法。

实验材料，仪器，试剂蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针等）、烧杯、培养皿、纱布、棉线、粗剪刀、蛙板、污物缸、滴管、生理信号采集系统、张力传感器、铁架台、计算机、任氏液等。

实验原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。

任氏液是—种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。

腓肠肌由许多的纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不应期肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。

而能引起肌肉发生收缩的最小刺激强度，为阈刺激，但全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。

这时，即使再加大刺激强度，肌肉的收缩强度也不会随之而增大。

可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激。

肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速地收缩反应，即单收缩。

单收缩的过程分为三个时期，潜伏期、收缩期、舒张期。

刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。

在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。

若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。

实验一蟾蜍坐骨神经

实验一蟾蜍坐骨神经--腓肠肌标本的制备〔目的要求〕1、学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2、学习并掌握坐骨神经--腓肠肌标本的制备。

〔动物与器材〕蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃解剖针、咬骨钳）、蜡盘、蛙板、玻璃板、蛙钉、铜锌弓、培养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。

〔方法与步骤〕1、双毁髓方法：左手握蟾蜍，让蟾蜍趴在左手掌内，用食指按压其头部前端，拇指压住躯干背部，使头前俯；右手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后划触及两耳后腺间的凹陷处即枕骨大孔的位置。

将毁髓针垂直刺入，即进入枕骨大孔。

然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，捣毁脑组织。

此时的动物为单毁髓动物。

再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，捣毁脊髓。

此时动物四肢瘫软，为双毁髓动物。

如动物仍表现为四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新捣毁。

2、剥制后肢标本：将双毁髓的蟾蜍背面向上放入蜡盘内。

左手捏住背部的脊柱，右手持手术剪横向剪断脊柱。

左手持手术镊提起断开的脊柱后端，右手用手术剪沿脊柱两侧剪开体壁，再剪断下腹壁肌肉，自基部剪断内脏。

然后用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手向后方撕剥皮肤。

将剥干净的后肢放入盛有任氏液的培养皿中。

清洗手术器械。

3、分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上放于玻璃板上，左手固定，右手持手术剪剪开耻骨联合。

将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。

4、分离坐骨神经：将一侧后肢标本的腹面向上，趾端向外侧反转，使足底向上，用固定针将标本固定在玻璃板下面的蛙板上。

用玻璃解剖针沿脊神经向后分离坐骨神经。

股部在股二头肌和半膜肌之间的裂缝找出坐骨神经。

坐骨神经基部有梨状肌盖住，用玻璃解剖针轻轻挑起此肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。

剪断梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。

用玻璃解剖针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的分支，将坐骨神经分离至腘窝处。

用剪刀剪去脊柱骨及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。

浙江大学生理学实验坐骨神经

蟾蜍坐骨神经干复合动作电位特性目的：应用微机生物信号采集处理系统记录蟾蜍坐骨神经干复合动作电位（compound action potention，CAP），观察刺激、神经损伤、药物对神经兴奋性、兴奋传导的影响并探讨其机制。

1.材料和方法(materials and methods)1.1 实验动物：蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad）1.2 药品：任氏液、3 mol/L 氯化钾1.3器材：RM6240微机生物信号处理系统（成都仪器厂）、神经干标本盒、包括器械方盘、蛙板等实验器械材料一套。

1.4 坐骨神经干制备：蟾蜍毁脑脊髓，去上肢和内脏，下肢剥皮浸于任氏液中。

蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。

标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。

坐骨神经标本置任氏液中备用。

1.5 仪器连接和参数：神经干标本盒两对引导电极分别接微机生物信号处理系统1、2通道。

仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、灵敏度5mV，采样频率：100KHz，扫描速度：0.2ms/div。

单刺激激方式，刺激幅度1.0V，刺激波宽0.1ms，延迟2ms，同步触发。

1.6 动作电位引导：神经干标本置于标本盒的电极上，神经与电极接触良好，调节刺激电压，记录动作电位。

2.观察（observations）2.1 中枢端引导的双向动作电位（biphasic action potential，BAP）：用1.0V电压，波宽0.1ms方波刺激神经干末梢端，观察动作电位波形。

2.2 测定末梢端引导的双向动作电位：用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波刺激神经干中枢端，测定动作电位正、负向振幅和时程。

2.3 兴奋传导速度测定：用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波激刺激神经干中枢端，测定第1和第2对引导电极引导CAP起点的时间差Δt ，根据υ＝S R1- R2- / Δt 计算出AP的传导速度。

生理实验：实验三蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本制备及骨骼肌收缩性质观察

雄蟾
实验材料
1、实验动物（laboratory animal) • 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad）
2、药品(drug) • 任氏液
• 任氏液由无机盐和蒸馏水配置而成，每升溶液含NaCl 6.5g、KCl 0.14g、CaCl2 0.12g,、NaHCO3 0.20g、NaH2PO4 0.01g。任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。可用于蛙的组织、器官润湿和营养。
动作电位以局部电流的形式传导
实验原理
-动作电位传导速度的测定
刺激器
输入通道
+－
R1- Rr1+ R2- R2+
S
Δt
传导速度测定 υ= SAC
Δt
实验步骤
1、制备坐骨神经干
1
• 蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去
尾椎；
• 标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱
两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，
剪断神经；
• 将神经干从腹面移向背面。标本背面
刺激神经使神经细胞产生兴奋兴奋延神经纤维传到通过神经肌接头的化学传递使肌肉终板膜上产生终板电位终板电位可引起肌肉产生兴奋即动作电位传遍整个肌纤维再通过兴奋收缩偶联使肌纤维中粗细肌丝产生相对滑动宏观上表现为肌肉收缩
实验三蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本制备及骨骼肌收
缩性质观察
实验目的
• 掌握制备具有正常收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本的基本操作技术。掌握蛙类手术器械的使用方法，制备完好的坐骨神经-腓肠肌标本。
向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。坐骨神经标本置任氏液中备用。
2
3
实验步骤
2、仪器连接和参数
• 神经干标本盒两对引导电极分别接微机生物信号处理系统1、 2通道。开机，选择实验-肌肉神经-神经干兴奋传导速度测定。仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、灵敏度5mV，采样频率：100KHz，扫描速度：0.2ms/div。单刺激激方式，刺激幅度1.0V，刺激波宽0.1ms，延迟1ms，同步触发。

蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备缝匠肌神经标本制备

实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理4、掌握离体标本的制备及手术训练5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。

离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。

置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。

例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。

在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。

例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。

急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。

但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。

慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。

实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。

例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。

生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备(干货)

生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备坐骨神经腓肠肌标本的制备和神经干动作电位的观察与传导速度的测定一、实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2。

学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本的制备方法。

3。

观察蛙坐骨神经干复合动作电位的基本波形，并了解其产生的原理。

4.学习蛙和蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度的方法和原理。

二、实验材料:1．实验对象：蟾蜍2.实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。

三、实验原理：神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位，标志着神经发生兴奋.如果在离体神经干的一段施加刺激,从另一端引导传来的神兴奋冲动，可以记录出双相电位，加入在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损伤，阻断其兴奋传导能力，这时候记录出的动作电位就成为单相电位.神经细胞的动作电位是以全或无的方式产生的.但是，复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的增加而增大的。

......感谢聆听如果在远离刺激点的不同距离处分别引导离体神经干动作电位,两引导点之间的距离为m,在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为s。

即可按照公式v=m／s来计算出兴奋的传导速度。

蛙类的坐骨神经干属于混合性神经，其中包含有粗细不等的各种纤维，其直径一般为３-29um,其中直径最粗的有髓纤维为A类纤维,传导速度在正常室温下为35-40 ｍ／s。

......感谢聆听神经每兴奋一次极其在兴奋以后的回复过程中，其兴奋性都要经历一次周期性的变化，其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期4个时期.为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生的周期性变化，首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋，然后在前一兴奋及其恢复过程不同时相再施加一个测试性刺激，用于检查神经的兴奋阈值和所引起的动作电位的幅度，以判定神经兴奋性的变化。

神经干动作实验报告

一、实验目的1. 了解神经干动作电位的基本原理和传导过程；2. 掌握神经干动作电位传导速度和不应期的测定方法；3. 分析神经干动作电位在不同条件下的变化规律。

二、实验原理神经干动作电位是指神经纤维在受到刺激时，产生的一系列电生理现象。

当神经纤维膜电位达到一定阈值时，钠离子内流，产生动作电位，进而引起邻近神经纤维的兴奋和传导。

本实验通过观察和测量神经干动作电位，了解其传导速度和不应期等参数。

三、实验材料1. 实验动物：蟾蜍；2. 实验器材：坐骨神经干标本、任氏液、刺激器、示波器、记录仪、玻璃分针、粗剪刀、眼科剪、眼科镊、培养皿、烧杯、滴管、蛙毁髓探针、BL-420N系统；3. 实验药品：2%普鲁卡因。

四、实验方法1. 制备坐骨神经干标本：将蟾蜍麻醉后，解剖出坐骨神经干，置于任氏液中，用玻璃分针轻轻挑起，去除周围组织；2. 安装电极：将刺激电极和记录电极分别固定在坐骨神经干的两端，连接BL-420N系统；3. 刺激和记录：启动刺激器，给予坐骨神经干一定强度的刺激，观察示波器上的波形，记录动作电位传导速度和不应期；4. 重复实验：改变刺激强度，重复实验，观察动作电位传导速度和不应期的变化规律。

五、实验结果1. 动作电位传导速度：在实验条件下，坐骨神经干动作电位传导速度约为15.2 m/s；2. 不应期：在实验条件下，坐骨神经干动作电位不应期约为0.5 ms；3. 刺激强度与传导速度的关系：随着刺激强度的增加，动作电位传导速度逐渐增加，但增加幅度逐渐减小；4. 刺激强度与不应期的关系：随着刺激强度的增加，动作电位不应期逐渐延长。

六、实验讨论1. 神经干动作电位传导速度的测定原理：神经干动作电位传导速度的测定原理是，通过测量动作电位在神经干上的传播距离和时间，计算出传导速度；2. 不应期的产生原因：神经干动作电位不应期的产生原因是，神经纤维在兴奋时，膜电位处于超极化状态，此时钠离子内流受到抑制，导致动作电位不能立即产生；3. 刺激强度与传导速度、不应期的关系：刺激强度与传导速度呈正相关，但并非线性关系；刺激强度与不应期呈正相关。

神经干动作电位的测定讲课讲稿

溶液的滤纸片贴附在引导电极处的神经干上。观
察动作电位的波形有何变化，并测量动作电位的幅度和持续时间。
【思考题】
1．说明单相和双相动作电位的产生原理。 2．解释在一定范围内神经干动作电位的振幅
随刺激强度而改变，是否与单个神经纤维动作电位的“全或无”定律相矛盾。 4．改变神经干的方向后，动作电位的波形发生了什么变化，为什么？
（3）调节示波器“触发电平”旋钮，使示波器的扫描与刺激器输出同步。调节刺ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ器“延迟” 旋钮，使刺激伪迹落于适当位置。
4．用滤纸片吸去神经标本上过多的任氏液。用手术镊夹持标本两端的结扎线，将标本移至神经屏蔽盒内。盒内装有两对电极和一根接地线电极。其中一对为刺激电极，接刺激隔离器输出端，一对为引导电极，连示波器输入端，两对电极之间为一根接地电极。神经标本必须与5根电极良好地接触。神经标本的放置方向是中枢端接触刺激电极，外周端接触引导电极。注意：神经屏蔽盒内需滴加少量水分，以防神经干燥
2．连接实验装置按图2-14连接电子刺激器、刺激隔离器、神经屏蔽盒和示波器。注意：各仪器应妥善接地，各仪器的连接应接触良好。
3．仪器的调试（1）电子刺激器刺激方式取“连续”档，频率为2—4次/s，刺激强度为0—5v，波宽为0.1— 0.2ms。
（2）示波器输入选择置“AC”的“AB”档，灵敏度为1—3mV/cm，扫描速度1mm/cm，“触发选择”置“外AC”。
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•5．调节刺激器“强度”旋钮，使其从0逐渐增加。当强度达到一定数值时，即可出现双相动作电位（图2-15）。仔细观察其波形，并测量其阈刺激、阈上刺激和最大刺激强度的幅值以及最大刺激强度时整个动作电位的持续时间及幅度。

蛙或蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备

【实验方法和步骤】
1. 破坏脑脊髓取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔（图 1-1），左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松软，呼吸消失。
5. 游离坐骨神经和剪断股骨认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位（图），用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上，沿膝关节的周围将大腿的所有肌腱剪断，并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉，在股骨上三分之一处剪去上段股骨及所附的肌肉，这样制成的称为坐骨神经下腿标本（图 1-4）。
图 1-1 破坏蟾蜍脑脊髓
图 1-2 剪除躯干和内脏
图 1-3 剥除后肢皮肤
4. 分离两腿用玻璃分针沿脊柱两侧游离出两条坐骨神经，并于近脊柱处各扎一细线，然后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿上，左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。捏着两侧骼骨向反方向分离，使耻骨联合脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条置于浸有任氏液的玻璃板上。
6. 游离腓肠肌在坐骨神经下腿标本的基础上，用剪刀将跟腱的下端剪断，在跟腱与肌肉交界处扎一条细线，左手提线，右手用剪刀游离腓肠肌，直到膝关节。最后用粗剪刀在膝关节下将小腿剪去，留下的即为坐骨神经腓肠肌标本（图 1-5）。做好的标肌立即收缩，表示标本的兴奋性良好，然后将标本放入任氏液中，待其兴奋性稳定后再进行实验。
实验 1 蛙或蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备

坐骨神经腓肠肌标本制备步骤

坐骨神经腓肠肌标本制备步骤《坐骨神经腓肠肌标本制备步骤坐骨神经腓肠肌标本制备步骤》嘿，朋友！今天咱们来聊聊坐骨神经腓肠肌标本的制备步骤。

这事儿啊，说起来还挺有趣的，您可得听我慢慢道来。

呢，咱们得准备好一些工具和材料。

像是蛙类动物，常用的是蟾蜍，还有一些手术器械，像解剖刀、镊子、剪刀之类的，当然还少不了一些生理盐水，这可是保持标本活性的关键哦。

准备好这些，咱们就可以开始动手啦！把蟾蜍捉来，先得让它安静下来。

这时候可以给它来一下“温柔的抚摸”，让它放松放松。

然后，用大头针把蟾蜍的四肢固定在解剖盘上。

这一步可得小心点，别弄疼了它。

找到脊柱后，在它的两侧找到坐骨神经，这两条神经就像是藏在深处的宝贝，得仔细找才能发现。

找到后，用镊子轻轻把周围的组织清理干净，让坐骨神经完全暴露出来。

然后，顺着坐骨神经往下，就能找到腓肠肌。

这腓肠肌就像是一个小肌肉块，连着坐骨神经。

用剪刀把坐骨神经和腓肠肌周围的其他组织剪掉，但要注意，千万别把神经和肌肉剪断了，这可需要点耐心和细心。

不过，还没完呢！把取下的标本放在盛有生理盐水的培养皿里，让它好好泡个澡，保持湿润和活力。

经过这一系列的操作，咱们的坐骨神经腓肠肌标本就制备好啦！是不是感觉还挺有意思的？这当中每一步都需要咱们小心谨慎，就像对待一件珍贵的宝贝一样。

朋友，您要是自己动手做这个标本，一定要按照这些步骤慢慢来，相信您一定能成功的！。

山东大学人体机能学报告之蟾蜍神经干

山东大学人体机能学实验报告【实验名称】蟾蜍坐骨神经干动作电位传导速度和兴奋性不应期的测定【实验目的】加深理解兴奋传导的概念，掌握测定神经干动作电位传导速度的方法。

熟悉仪器设备的操作。

【实验对象】蟾蜍【实验药品和器材】蛙类手术器械，BL-410生物信号记录分析系统，神经屏蔽盒，任氏液等。

【实验步骤及方法】（详见书P57.P58）1.坐骨神经—腓神经标本的制备。

2.将标本放入神经屏蔽盒，（注意刺激电极端为神经干的中枢端）。

3.仪器连接。

4.BL-410的操作。

【实验结果】1.神经干动作电位的引导2.坐骨神经干动作电位传导速度V=(S2-S1)/(t2-t1)实验测得两对引导电极之间的距离为1.6cm，两个通道的动作电位波峰间的时间差为0.60ms。

计算得到传导速度V=26.7m/s3.二次刺激在兴奋周期之后相对不应期受到二次刺激绝对不应期受到二次刺激二次刺激没有出现相应的动作电位。

【实验结论】实验测得两对引导电极之间的距离为1.6cm，两个通道的动作电位波峰间的时间差为0.60ms。

计算得到传导速度V=26.7m/s【讨论与分析】1.神经干不能太干也不能太湿，剥离完整后在任氏液体中稳定15分钟左右，取出用滤纸吸干周围的任氏液。

2.神经干放置在引导电极上时，尽量拉直，不能使它下垂或斜向放置，以免影响神经干长度测量准确性。

3.神经干要尽可能长，两个引导电极之间的距离越远，测量的传导速度就越准确。

一、实验目的要求1．学习蟾蜍坐骨神经干标本的制备方法。

2．观察蛙坐骨神经干复合动作电位的波形，并了解其产生的基本原理。

二、实验原理1、神经干受到有效刺激后，可以产生动作电位，在另一端可以引导出双相的动作电位，如果在两个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的动作电位即为单相动作电位。

2、坐骨神经干是以由很多不同类型的神经纤维组成的，所以，神经干的动作电位是复合动作电位。

复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的变化而变化的。

实验三蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备

2、剪除躯干上部及内脏：在腋部用铁剪刀剪断脊柱，将头、前肢和内脏一并弃去，仅保存一段脊柱和后肢。脊柱的两旁可见坐骨神经丛。
用蛙针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，再向前伸入颅腔，捣毁脑；
向44、、后有有插时时入标标椎住本本管兴兴，断奋奋3捣性性、端毁过过脊去边高高髓，，皮。缘可可放放：皮置置先２２肤００剪，mmiinn去向待待其其肛下稳稳门定定剥后后周掉再再围全皮部肤后，肢然皮后肤用。左标手本捏放住入脊盛柱有断林端格，液右的手小捏烧两2、栖剪类除手躯术杯干器上械中部，及，培内养将脏皿：，手在任腋及氏部液用用，铁棉过剪刀的剪断器脊械柱，、将头蛙、板前肢洗和内净脏，一并以弃去免，皮仅保肤存一分段泌脊柱物和后污肢染。神经-肌肉标本。 5、游离坐骨神经：用玻璃分针在半膜肌和股二头肌之间分离出坐骨神经。熟神悉经并干掌，握又蟾要蜍避4坐免、骨金神属分经器离－械腓对标肠神肌经本标的为本不的必两制要备触部碰分。：沿脊柱正中线将标本均匀地分成左右两半，神肉经，干防，止又干分要燥避。别免作金属进器械一对步神经剥的不制必。要触碰。 322、、、避游游免离离蟾神神神蜍经经皮时时经肤，，5分切切、。泌勿勿游注物用用和玻玻离意血璃璃液分分坐分等针针骨污逆逆离染向向神时标剥剥本离离经要，，，：也以以仔不防防用细能损损用伤伤玻用璃剪分刀针剪在断半坐膜骨肌神和经股的二分头支肌，之勿间伤分神离经出干坐，骨前 4蛙、类有一时些标基面本本兴生分奋命性离活过动至高和，生脊可理放柱功置能２坐与０恒骨m温in神动待物其经相稳似定丛，后基其再离部体组，织向器官下所需分的离生活至条件膝比关较简节单，。并保且易留于控与制坐和掌骨握，神因经此在相生理试
线，玻璃分针，解剖盘，剪刀
2或、把剪铁除剪躯刀干插上入部6口及、裂内，分脏沿：离两在眼腋腓后部缘肠用剪铁肌去剪头刀：，剪再在断以脊跟蛙柱针，腱捣将毁上头脊、扎髓前。肢牢和一内脏线一并，弃提去，起仅保结存线一段，脊柱剪和断后肢结。扎线外的跟 1、破坏脑腱脊髓，：左游手离持蛙腓，用肠食指肌下至压吻膝端，关拇节指按处压背，部将，使膝蛙头关前节俯；以下小腿其余部分全部剪去。至此，标本制成。 3、去皮：先剪去肛门周围皮肤，然后用左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤。

影响蟾蜍坐骨神经冲动传导速度的因素

影响蟾蜍坐骨神经冲动传导速度的因素【目的要求】1.学习测定蟾蜍离体坐骨神经干上神经冲动传导速度的方法和原理。

2.观察温度（37℃）、3%KCl、5%NaCl、2%普鲁卡因对蟾蜍离体坐骨神经冲动传导速度的影响。

【基本原理】神经干在受到有效刺激后可以产生复合动作电位，标志着神经发生了兴奋。

如果在离体神经干的一端施加刺激，从另一端引导传来的兴奋，可以记录到双相动作电位。

如果在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损坏，阻断兴奋的传导，这时记录到的动作电位就是单相动作电位。

单个神经细胞的动作电位是以“全或无”方式发生的，而神经干复合动作电位的幅值在一定的刺激强度下是随刺激强度的增加而增大的。

如果在原理刺激点的不同距离处分别引导离体神经干动作电位，两引导点之间的距离为m，在两引导点分别引导出的动作电位的时差为s，即可按照公式v=m/s来计算兴奋的传导速度。

神经兴奋的发生和传导有赖于细胞膜上Na＋内流。

其客观指标是神经兴奋时产生的动作电位。

普鲁卡因等局麻醉药可阻滞Na离子内流，从而抵制神经冲动的发生与传导速度的减慢。

神经纤维的静息电位接近K离子的平衡电位，故细胞外液K离子浓度升高可使细胞膜内外浓度差减小，K离子平衡电位减小，膜发生去极化。

在此基础上，由于Na离子通道受到抑制，神经干传导速度降低；当细胞外夜Na离子内流减弱，也可以使神经干传导速度减慢。

【实验对象及器材】实验对象：蟾蜍实验器材：常用手术器械（手术剪，手术镊，手术刀，金冠剪，眼科剪、镊，毁髓针，玻璃分针）、娃板、纱布（卫生纸）、粗棉线、恒温箱、3%KCl、5%NaCl、2%普鲁卡因、PC机、信号采集处理系统、电子刺激器、神经屏蔽盒、Ringer’s液【方法与步骤】1.蟾蜍坐骨神经干的标本制备取蟾蜍1只，双毁髓后在尚难部用粗剪将脊柱剪短，撕下皮肤和内脏。

将带有部分脊柱、后肢的标本用任氏液洗净，置于娃解剖盘上。

在神经出脊柱处，用粗棉线结扎一侧坐骨神经，并于结扎点与脊柱之间将神经剪断。

蟾蜍坐骨神经

蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制作以及神经动作电位观察及传导速度测定一：实验目的1、掌握蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法2、掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备3、掌握测定神经动作电位传导速度的原理与方法二：实验材料1、材料：蟾蜍2、器材：常用手术器械（毁髓针、手术镊、手术剪、骨钳、玻璃分针、图钉、蛙板、不锈钢盘）、污物缸、信号采集处理系统、神经屏蔽盒3、试剂：任氏液三：实验方法与步骤1、蟾蜍的双毁髓一只手握住蟾蜍，拇指按住其背部，食指压住其头部；另一只手捏住其嘴部将其头部上下轻轻扳动，找到第一道折痕，其中部即为枕骨大孔，用毁髓针垂直插入枕骨大孔；然后将针尖向前刺入颅腔并搅动以捣毁脑组织，此时的蛙为单毁髓动物；再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方与脊柱平行刺入椎管，捣毁脊髓，彻底捣毁脊髓时可看到蟾蜍的后肢突然蹬直而后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。

注意：a、若毁髓后蟾蜍的四肢肌肉紧张或活动自如，需重新毁髓；b、操作要快、准，且操作过程中不要挤压到蟾蜍的耳后腺，避免其分泌蟾酥。

2、坐骨神经-腓肠肌标本的制作（1）剥离后肢标本。

将蟾蜍背面向上置于蛙板上，用手术镊轻轻提起两前肢间的背部皮肤，用手术剪横向环形剪开皮肤，将蟾蜍身体下半部的皮肤剥离。

将蟾蜍剖腹，内脏向头部方向掀起，用骨钳在其第三节脊椎骨处剪断脊柱，然后用手术剪剪断相连的肌肉组织。

（2）分离两后肢。

用左手托起标本，拇指和食指固定住两后肢的肌肉，右手持骨钳剪断耻骨，手术剪剪开肌肉连接；纵向剪开脊柱使两后肢完全分离。

一只放入任氏液中备用，另一只用于继续下一步操作。

注意：在分离两后肢时需谨慎，不要使剪刀偏离中线太远以免损伤神经。

（3）分离坐骨神经。

将后置的脊柱端腹面向上，趾端想外侧翻转，使其足底向上，用图钉将其固定在蛙板上。

用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。

股部沿肱二头肌和半膜肌之间的裂缝找到坐骨神经，用镊子和手术剪仔细去除半膜肌和肱二头肌，使神经暴露出来。

用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪断支配腓肠肌之外的分支，并去除神经上的其它组织。

坐骨神经-腓肠肌标本的制备

2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

二、实验原理：1.蟾蜍处死：将蟾蜍的脑和脊髓用毁髓针捣毁后，蟾蜍即死亡。

捣毁脑是为了将蟾蜍的感觉和运动中枢破坏，同时也使蟾蜍的意识消失，既避免解剖过程中蟾蜍感到痛苦，也避免蟾蜍有意识的反应；捣毁脊髓是为了破坏蟾蜍的周围神经系统，避免蟾蜍自然的非意识的反应（乱动）。

总之，双毁髓就是为了是蟾蜍在之后的解剖过程中无任何干扰实验的反应。

2.坐骨神经-腓肠肌标本的制备：坐骨神经直接支配着腓肠肌的反应，刺激坐骨神经的神经干，腓肠肌会产生收缩反应。

一次阈上刺激，腓肠肌会产生一个周期的收缩舒张过程，从而可以被信号采集系统采集，并通过计算机和相关软件转化成可视的收缩舒张曲线。

便于研究神经和肌肉的信号、反应关系和规律。

三、实验器材与试剂：（一）实验动物及器材：蟾蜍、常用蛙类手术器械（如：毁髓针、剪刀、解剖刀等）、蛙板、玻璃划针、固定针、培养皿、滴管、棉花、粗棉线等。

（二）实验试剂：任氏液（近似两栖动物内环境液，配制因子很多，不同于生理盐水）四、实验方法与步骤：1、蟾蜍处死，损毁脑和脊髓：a.学会持拿蟾蜍的方法：一般用左手持拿蟾蜍，用小指和无名指夹住蟾蜍两后腿，中指自然搭在蟾蜍腹部，食指和拇指可自由活动。

处死时，一般用拇指按住蟾蜍背部，食指将蟾蜍头鼻下压，以便使下针处清晰易找。

b.处死：按上述方法持拿，用毁髓针沿头部中线从鼻尖轻轻向后滑过，约在双眼连线中点后方某点，可感到有一下陷小窝，用针轻按，蟾蜍一般会有明显反应。

在此处下针。

将毁髓针垂直插入，会感觉到颅骨破碎的声音，立即将毁髓针向后放倒，将针尖从破碎处，并旋转捣毁脑部；然后将毁髓针拔出少许，向前放倒，向后插入同样旋转捣毁脊髓。

蟾蜍即被处死。

2、去除躯干上部及内脏：将蟾蜍腹部朝上放在蛙板上，将四肢用固定针固定。

生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备

坐骨神经腓肠肌标本得制备与神经干动作电位得观察与传导速度得测定一、实验目得:1.学习蛙类动物双毁髓得实验方法、2。

学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本得制备方法。

3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位得基本波形,并了解其产生得原理。

4.学习蛙与蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度得方法与原理、二、实验材料:1.实验对象:蟾蜍2、实验器材:常规手术器械(粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊)蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。

三、实验原理:神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位,标志着神经发生兴奋。

如果在离体神经干得一段施加刺激,从另一端引导传来得神兴奋冲动,可以记录出双相电位,加入在引导得两个电极之间将神经干麻醉或损伤,阻断其兴奋传导能力,这时候记录出得动作电位就成为单相电位、神经细胞得动作电位就是以全或无得方式产生得。

但就是,复合动作电位得幅值在一定刺激强度下就是随刺激强度得增加而增大得。

如果在远离刺激点得不同距离处分别引导离体神经干动作电位,两引导点之间得距离为m,在两引导点分别引导出得动作电位得时相差为ｓ。

即可按照公式ｖ=m/s来计算出兴奋得传导速度、蛙类得坐骨神经干属于混合性神经,其中包含有粗细不等得各种纤维,其直径一般为3-29um,其中直径最粗得有髓纤维为A类纤维,传导速度在正常室温下为35－4０ m/ｓ。

神经每兴奋一次极其在兴奋以后得回复过程中,其兴奋性都要经历一次周期性得变化,其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期与低常期４个时期。

为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生得周期性变化,首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋,然后在前一兴奋及其恢复过程不同时相再施加一个测试性刺激,用于检查神经得兴奋阈值与所引起得动作电位得幅度,以判定神经兴奋性得变化。

四、实验方法及步骤:1、坐骨神经干标本制备(1) 破坏脑与脊髓:取蛙一只,用自来水冲洗干净,左手持蛙,用食指下压其吻部,拇指按压在其骶髂关节下方,使其头尽量前俯,右手持探针沿两眼之间中线向后方轻划,至触及头颈部正中得凹陷处,即为枕骨大孔得位置。

坐骨神经标本制备

蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本制备（一）目的要求学习并掌握蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的制备。

利用此标本做神经肌肉的一些实验。

（二）实验原理蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物近似，而其离体组织器官的生活条件较为简单，可以在事温条件下，于一定时间内保持其功能。

因此在生理实验中常用蛙类的坐骨神经-腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程的一些规律及骨肌的收缩特性。

（三）实验材料1.动物：蟾蜍或蛙2.药品：任氏液3.器械：蛙板、探针、粗剪刀、细剪刀、尖镊子、玻璃分针、大头针、培养皿、滴管、瓷碗、锌铜弓或铝银电极。

（四）实验方法与步骤1．毁脑脊髓取蟾蜍一只，用左手握住，以示指压其头部前端使其尽量前俯（图5-1），右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，捣毁脊髓。

此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一毁脑脊髓的蟾蜍（pithed toad）。

否则须按上法再行捣毁。

2.剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱（图5-2）。

左手握住蟾蜍脊柱，右手将粗剪刀沿两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。

此时躯干上部及内脏即全部下垂（图5-3）。

剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于瓷碗内。

3.剥皮避开神经，用左手持圆头镊子夹住脊柱，右手捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤（图5-4）。

拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。

将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。

4.洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤。

5．完成坐骨神经腓肠肌标本方法1：（1）分离两腿：避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开（为保证两侧坐骨神经完整，应避免剪时偏向一侧）。

将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。

（2）游离坐骨神经：取腿一条，先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后用大头针将标本背位固定于干净蛙板上。

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蟾蜍坐骨神经干标本的制备
121140066 许克波 B3
一、实验目的
1、离体标本实验（与在体标本实验的区别）
2、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理
3、掌握离体标本的制备及手术训练
4、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义
二、实验原理
1、锌铜弓的作用及原理
锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。

由铜片和锌片两种金属制成。

锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。

通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。

而在Zn的里面则形成负离子。

Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。

如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。

当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。

这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。

神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。

2、蟾蜍的毁髓及单毁髓和双毁髓及双毁髓的意义
蟾蜍破坏脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。

右手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，中指、无名指捏住两前腿，无名指以及小指捏住两后腿，左手持针，当触及到两耳中间的凹陷处时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。

左手持针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。

若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。

单毁髓：如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。

双毁髓：再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。

彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉。

双毁髓的意义：这个实验主要是探讨神经纤维冲动产生、兴奋传递和肌肉收缩之间的关系，与神经中枢无关。

为了制备这个标本需要首先处死青蛙，双毁髓的意义就在于此，这种双毁髓的处死方法，简单易行，关键是相对比较人道。

3、坐骨神经干标本的制备和缝匠肌神经标本制备
坐骨神经干标本的制备：蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。