小鼠IL10免疫组化试剂盒
三种小鼠全身炎症模型的制作流程
全身炎症三种小鼠模型的制作流程一、方法总结：通过脂多糖（LPS）给药、腹腔污染和感染（PCI）或盲肠结扎穿孔（CLP）对C57BL/6N小鼠治疗诱导全身性炎症反应。
在炎症诱导后0, 2, 4、6, 12, 24、48和72小时评估血糖和循环细胞因子水平。
此外，还测定了各器官的氧化应激和肝脏的生物转化能力。
通过免疫组化法检测肝、脾组织中氧化应激、凋亡、浸润性免疫细胞及细胞因子表达模式。
二、对比结果：用LPS给药和PCI诱导的小鼠炎症反应非常相似。
然而，LPS给药能引起更强的反应。
在两种模型中，血清促炎细胞因子水平迅速升高，而血糖下降。
器官显示氧化应激的早期迹象，脾细胞凋亡增加。
此外，肝脏的生物转化能力降低，肝和脾有明显的免疫细胞浸润。
暴露于LPS或PCI的小鼠在72小时后恢复，相反，CLP诱导的炎症反应相对较少，但炎症反应更为持久。
三、方法比较结论：当研究急性炎症的新疗法时，全身炎症反应的LPS模型显示最合适。
当使用CLP模型模拟人体脓毒症时，给药应采用较长的疗程，因为给药可导致全身炎症的迟发性发展。
四、动物和实验方法：1.实验动物：成年雄性C57BL/6小鼠（12周龄，体重25–30 g），动物被安置在标准条件下的塑料笼子（光暗周期12 / 12小时，温度22±2°C，湿度50±10%，颗粒饲料自由饮水）。
2.实验操作：2.1脂多糖（LPS）给药：小鼠用脂多糖LPS处理。
大肠杆菌，5毫克/公斤体重，溶解在PBS中腹腔给药体积0.1毫升/10克小鼠体重）。
2, 4, 6、12, 24, 48和72小时后所描述的处死动物。
在实验开始时（T＝0），每治疗组处死四只对照小鼠。
这些老鼠没有接受任何治疗。
在前几次（试验）研究中确定了最合适的非致死性LPS剂量。
2.2腹腔污染和感染（PCI）：小鼠取1.5g的大便，溶于PBS腹腔内给予0.1毫升/ 10克体重，代表非致死剂量。
2.3盲肠结扎穿孔[CLP]：异氟醚诱导麻醉和沿腹白线正中切口切开腹腔，暴露盲肠，在远端与盲肠底之间用不可吸收缝线结扎。
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
详细实验方法•小鼠组织切片免疫组化实验步骤实验材料•小鼠试剂、试剂盒•二甲苯•无水乙醇•95%乙醇•EDTA抗原修复工作液•TBS•DAB显色液仪器、耗材•石蜡•烘箱•电炉材料二甲苯酒精（100％，95％）EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用）0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀释10倍使用）DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。
方法1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜2. 二甲苯中脱蜡，梯度酒精入水(无水乙醇，95％酒精)，浸泡于蒸馏水中待用3. 抗原修复取500mlEDTA抗原修复工作液于1000ml烧杯中，在小功率电炉上加热，至似沸微沸（为了防止脱片）。
将组织切片缓慢放入烧杯。
继续加热，保持液体在微沸状态20分钟。
将烧杯移开火源，室温下自然冷却后取出切片，蒸馏水洗1次3分钟，TBS洗2次每次3分钟。
4. 每张切片加一滴或50ul 3％过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性。
TBS冲洗3次，每次3min。
5. 除去TBS液，加一滴或50ul 一抗（灭活PLB免疫小鼠所得到的多抗，1:3000稀释），阴性对照采用普通血清，室温下孵育2小时，或4℃过夜。
6. TBS洗3次，每次5min，除去TBS液，每张切片加一滴或50ul poly mer enhancer（试剂A），室温下孵育20min，TBS冲洗3次，每次3min。
7. 除去TBS液，每张切片加一滴或50ul 过氧化物酶标记的抗鼠/兔聚合物（试剂B），室温下孵育30min，TBS洗3次，每次3min。
腺病毒介导的鼠IL-10基因对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞的保护作用
Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｙ ａ ｈ ． ｙ ａ ｎ ， Ｚ Ｈ Ａ ＮＧ Ｆ ａ ｎ ｇ － ｐ ｉ ｎ ｇ ， Ｓ Ｏ Ｎ Ｇ Ｑ ， Ｑ Ｉ Ａ Ｏ Ｌ ｉ ｎ ｇ — ｙ ａ ｎ ， Ｌ Ｉ Ｕ Ｄ ｏ ｎ ｇ ，Ｔ Ｉ Ａ Ｎ Ｆ ｅ ｉ ， ｘ ｕ Ａ ｉ ｑ ｉ ｎ ｇ ，Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｚ ｍ Ｌ ， 其他组给予等量 生理 盐水 。每周 检测 小 鼠体质量 、 血糖 。３周 后处 死小 鼠 ， 留取小 鼠血清 标本 ， 采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法测定血清 Ｃ肽 、 Ｉ Ｆ Ｎ － 、 Ｉ Ｌ － ４及 Ｉ Ｌ 一 １ ０水平 ； 制作胰腺标本 ， 免疫组化 法观察小 鼠胰腺炎症浸润程度和 ｒ Ｊ Ｌ 一 １ ０ 局部表达情况 。结果 与生理盐水对 照组相 比， 成模后其他组血糖水平 、 体质量 变化有 明显差 异（ Ｐ均 ＜０ ． ０ ５ ） ， 血 Ａ ｄ — ｒ ｌ Ｌ 一 １ ０基 因对 Ｎ Ｏ Ｄ
Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ａ ｄ ｅ ｎ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｍｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｎ ｔ ｅ ｒ ｌ ｅ ｕ ｋ ｉ ｎ １ ０ ｇ ｅ ｎ ｅ ｏ ｎ ｉ ｓ ｌ ｅ ｔ ｂ ｅ ｔ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｏ ｆ ＮＯＤ ｍｉ ｃ ｅ
Ｂ细胞的保护作用 。方法
对照组 １ ２只、 Ａ ｄ － ｒ ｌ Ｌ 一 １ ０组 １ ２只。除生理盐水对照组外 ， 其他组腹腔注射环磷酰胺诱 导糖 尿病早期 模型。成模后 ，
Ａ ｄ — ｒ ｌ Ｌ 一 １ ０组立 即给予腹腔注射含 Ａ ｄ ． ｒ ｌ Ｌ 一 １ ０的重组腺病毒液 ０ ． １ ｍ Ｌ 、 空载体对照组给予含 Ａ ｄ — ｅ Ｇ Ｆ Ｐ的重组腺病毒
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ２ — ２ ６ ６ Ｘ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ５ ． ０ ０ ３
二步法抗兔、鼠通用型免疫组化检测试剂盒
⼆步法抗兔、⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒FOR RESEARCH USE ONLY.Code No:GK500705Storage: Store vial at 2-8.℃Intended UseChemMate? EnVision? Detection Kit, Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse, is intended for use inimmunocytochemistry together with the TechMate? and Autostainer Instruments. The kit is employed in atwo-step procedure where the first step is incubation of the tissue with an optimally diluted primary rabbit ormouse antibody, and the second step is incubation with the ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse(ENV) reagent of the kit. This reagent is a peroxidase-conjugated polymer, which also carries antibodies torabbit and mouse immunoglobulins. The reaction is visualized by the ChemMate? DAB+ Chromogen alsoincluded in the kit.Reagents Materials providedBottle A ChemMate? DAKO EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV)5 mL, ready-to-useDextran coupled with peroxidase molecules and goat secondary antibody molecules against rabbit andmouse immunoglobulins. In buffered solution containing stabilizing protein and preservative.Bottle B ChemMate? Substrate Buffer2*6.25 mLBuffered solution containing hydrogen peroxide and preservative.Bottle C ChemMate? DAB+ Chromogen1*0.25mL, 50 x concentrated3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride in organic solvent. The colour of this reagent may vary from strongviolet to colourless without having any influence on the performance of the kit.Precautions ：1. Bottle A , ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV), contains material of animal origin and it cannot be excluded that trace amounts of human material could be present due to manufacturing procedures. As with any product derived from biological sources, proper handling should be used.2. Do not expose Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen or the Substrate Working Solution (CHROM) to strong light.3. Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen contains 1.5% 3,3’-diaminobenzidine tetrahydrochloride, and is labelled: Harmful.Storage ：Store the kit at 2-8 . The prepared Subs ℃trate Working Solution (CHROM) should be stored at 2-8 and used℃within 5 days.Quality Control ： Each staining run should include a known positive control specimen to ascertain a proper performance of all the applied reagents. If the positive control specimen fails to demonstrate positive staining, labelling of test specimens should be considered invalid. A negative control reagent should be used with each specimen to identify any non-specific staining. If non-specific staining cannot be clearly differentiated from the specific staining, the labelling of the test specimen should be considered invalid.Please contact us for more information about this product.EnVision? Detection Kit,Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse⼆步法抗兔/⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒剂型：⼯作液编号：GK500705适⽤：⼀抗为兔抗或⼩⿏抗的免疫组化检测储存：2-8℃该试剂盒是⼀个特别敏感的⼆步法免疫组化试剂盒，适合与兔抗抗体或⼩⿏抗抗体配⽤。
白介素10__人白介素10-IL-10使用说明书
GMP级重组人白介素10（冻干粉）Recombinant Human IL-10作用机理：白细胞介素-10(IL-10)是多种哺乳动物细胞类型产生的免疫抑制细胞因子，包括巨噬细胞、单核细胞、T细胞、B 细胞和角质形成细胞。
IL-10 抑制 IL-1 和 TNF-α等促炎细胞因子的表达.和 IL-4 一样，IL-10 增强了体液免疫反应，减弱了细胞介导的免疫反应.人白细胞介素-10 对小鼠细胞具有活性，而小鼠白细胞介素-10 对人细胞无活性。
规格参数：货号：TL-639 规格：50ug产品信息：表达宿主：人HEK293细胞同源名称：B-TCGF, CSIF, TGIF ,IL-10,IL10A ,GVHDS,MGC126450,MGC126451,RP11-262N9.1,Interleukin-10 蛋白序列：DNA 序列编码人 IL-10（NP_000563.1）表达带有 His 标签在 C 末端分子量：IL-10 包含 166 个氨基酸，预测分子量为 19.5kd纯度：≥95%采用 SDS-PAGE 凝胶和高效液相色谱分析内毒素：≤0.01EU/ug（凝胶法）生物活性：确定通过剂量依赖性作用，与人白细胞介素 4(IL-4)共同刺激 MC/9 细胞，ED 50为≤2.0ng/mL，对应的特异性活性为≥5×105 IU/mg纯化方式：层析纯化性状：白色疏松体保存温度：2-8℃有效期：24 个月生产厂家：同立海源生物使用说明：稳定性和储存：冻干的样本的可以在4℃保存 24 个月，溶解后的液体可以于-20℃保存 6-12 个月，并且避免反复冻融相关产品：Human IL-2、Human IL-15、Human IL-12、Human IL-6、Human IL-18、Human IL-21、Human IFN-γ、Human GM-CSF、Human EGF、NK细胞培养试剂盒。
人白介素10(IL-10)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人白介素10（IL-10）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：12.5pg/ml-800pg/ml,最低检测限：3pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-10，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-10含量。
说明?试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
?浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
?中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
?刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述：白细胞介素10（IL-10）是近几年新发现的细胞因子，又称细胞素合成抑制因子，为含178个氨基酸残基的单肽链糖蛋白（其中Ｎ端18个氨基酸信号肽序列）。
IL-10分子量35-40kDa，通常为二聚体，其基因为单拷贝基因。
人的IL-10基因定位于第1号染色体上，限制性内切图谱提示该基因至少含3个间隔序列，同其他已知细胞因子基因的核苷酸序列货对应的蛋白质序列比较，IL-10与这些细胞因子无明显的顺序同源性。
IL-10主要由Th2细胞产生，但Tho 细胞、Th细胞、CD8+T细胞、活化的B细胞、单核-巨噬细胞、kupffer细胞、肝细胞、角化细胞等也可产生。
IL-10是具有多向性生物学活性的强免疫抑制因子，能改变机体的免疫应答和MHCⅡ类抗原的表达，并介导Th1和Th2两类细胞之间的相互调节。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-10抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-10抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的IL-10呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
免疫显色试剂说明书
免疫显色试剂说明书【产品名称】免疫显色试剂【包装规格】【预期用途】在免疫组化反应或原位杂交反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。
【检测原理】免疫显色试剂是二步法免疫组化试剂盒，适合与兔或鼠源一抗配用。
其主要过程为，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物与抗原抗体复合物中的一抗结合，再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）在抗原部位形成棕色显色。
由于该系统不含生物素和链亲和素，所以不受内源性生物素干扰，染色背景非常清晰。
【主要组成成分】其他需要但未提供的材料：PBST缓冲液（pH7.2-7.4）、纯化水、酒精、脱蜡液、苏木素染色液、中性树胶、塑料湿盒、染色缸、染色架等。
【储存条件及有效期】储存条件：2-8℃，有效期18个月。
请在开瓶3个月内使用。
生产日期、有效期至：见标签。
【样本要求】常规经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片。
【检测方法】常规脱蜡水化：石蜡切片经常规脱蜡和水化。
抗原热修复：参照一抗说明书进行抗原修复。
DAB工作液的配制：按每毫升DAB缓冲液（试剂D）中加入50μL DAB色原（试剂C）（约1滴）的比例配制DAB工作液，DAB工作液应现配现用。
配制好的DAB 工作液需在2小时内使用，如出现沉淀，使用前先混匀。
操作步骤：1）抗原修复完毕后自然冷却的切片，用自来水清洗。
2）除去切片上组织周围的液体，用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织区域并放入PBST缓冲液中。
3）取出切片，除去PBST缓冲液，滴加内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上孵育10分钟，用PBST清洗切片。
4）除去PBST缓冲液，滴加100μL左右一抗工作液（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上进行孵育（按照各自一抗说明书操作）。
一抗孵育完毕，用PBST清洗切片。
5）除去PBST缓冲液，每张切片加酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（试剂B）100μL左右（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），室温下孵育30分钟。
小鼠TNFTNF----αααα免疫组化试剂盒免疫组化试剂盒
小鼠TNF TNF--α免疫组化试剂盒免疫组化试剂盒该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性TNF-α抗原。
该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。
在所用的TNF-α一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂试剂盒所含试剂：：试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型TNF-α一抗（2.5ml） 试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1支（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml 试剂E HRP-SA 复合物1支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL 试剂F DAB 显色液 5ml用户自备试剂用户自备试剂：：1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mL TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）EDTA·2H2O 186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml3. 缓冲甘油封固剂10 mL4. Tween 20 5 mL石蜡包埋组织切片免疫染色石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤实验步骤（（建议方案建议方案）：）：石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。
小鼠试剂盒,小鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1CD54)酶联免疫检测ELISA试剂盒使用说明书
小鼠试剂盒,小鼠细胞间粘附分子1（ICAM-1/CD54）酶联免疫检测ELISA试剂盒使用说明书国内权威的科研试剂供应商，乔羽生物专业经营进口分装和原装、国产的Elisa试剂盒，品质保证，技术严格，无效果退款退货。
Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆ICAM-1/CD54试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ICAM-1/CD54浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将ICAM-1/CD54和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中ICAM-1/CD54的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制96孔配置48孔配置配制试剂盒成份（2-8℃保存）96/48小鼠份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗ICAM-1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型1/CD54抗体亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
常用免疫组化试剂介绍完整版
常用免疫组化试剂介绍完整版免疫组化试剂是一类用于检测细胞和组织中特定分子的试剂。
它们能够与目标分子发生特异性的结合反应，通过显色、荧光等方式实现目标分子的定位和检测。
常用的免疫组化试剂有抗体、底物、荧光染料等。
下面将详细介绍常用的免疫组化试剂。
一、抗体单克隆抗体：单克隆抗体是由单个克隆的B细胞分泌的抗体组成。
它们具有更高的特异性和一致性，适用于特定的免疫组化实验。
单克隆抗体一般通过酶联免疫吸附试验或杂交瘤技术获得。
二、底物底物是一种被特定酶催化后能够产生染色或荧光信号的化学物质。
在免疫组化实验中，常用的底物有DAB、VIP、AP、HRP等。
DAB：DAB（3,3'-二氨基联吡啶）是一种常用的免疫组化染色底物。
当DAB与过氧化物酶结合后，在特定条件下会产生棕色沉淀物，用于检测目标分子的位置。
VIP：VIP（维珍纳胶体阳离子）是一种特殊的底物，其在经过过氧化物酶催化后，形成带有阳离子电荷的胶体颗粒。
VIP用于染色后，可以形成黑色沉淀物。
AP：AP（碱性磷酸酶）是一种常用的底物，可以和特定基质反应生成可见或荧光信号。
AP基质有两种常用的类型，一种是快速红色溶液（Fast Red），另一种是紫色溶液。
HRP：HRP（过氧化物酶）是一种广泛使用的底物，在过氧化物酶的作用下可以产生明亮的荧光或染色信号。
HRP染色通常呈现为褐色或黑色。
三、荧光染料荧光染料是一种通过吸收特定波长的光线并在另一个波长下发射荧光的化合物。
免疫组化实验中常用的荧光染料有FITC、TRITC、Cy3、Cy5等。
FITC：FITC（荧光异硫氰酸酯或荧光同硫氰酸酯）是一种常用的绿色荧光染料，其在激发波长为488nm的波长下产生绿色荧光。
TRITC：TRITC（荧光异硫氰酸酯）是一种常用的红色荧光染料，其在激发波长为568nm的波长下产生红色荧光。
Cy3：Cy3是一种荧光发色团，其在激发波长为550nm的波长下产生黄绿色荧光。
Cy5：Cy5是一种荧光发色团，其在激发波长为650nm的波长下产生红色荧光。
免疫组化实验步骤、常见问题及解决方案
免疫组化实验步骤、常见问题及解决方案免疫组化实验虽然看上去非常简单，然而做起来却容易“花样百出”，让实验人员的精神备受摧残。
因此，今天小编在这里跟大家详细介绍一下免疫组化实验的步骤以及常见问题和解决方案，让大家的免疫组化实验更加顺畅。
免疫组化实验主要包括石蜡切片的免疫组化技术(IHC-P)和冰冻切片的免疫组化技术(IHC-F)，今天主要讲的是IHC-P。
实验步骤详解：1，取材颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取所需的组织，切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透。
注意取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化，切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。
2，切片制备(1)固定将切好的组织(<5mm3)用生理盐水组织洗一下，立即投入4%多聚甲醛(PFA)或10%中性福尔马林(NBF)中固定，根据组织大小和松密程度室温4-48h。
若取材是小鼠大脑或神经组织，可以采用灌流的方式进行固定。
(2)洗涤材料经固定后,水或酒精(若采用含有苦味酸的固定剂bouin，就用酒精洗涤)冲洗，数小时或过夜，目的是去除组织内固定液及结晶沉淀。
(3)脱水目的是因为透明剂多是苯类，苯和水不互溶，用到的材料是酒精，将组织依次经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95%、100%各2次，每次20min。
(4)透明由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。
当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。
一般是用纯酒精、二甲苯等量混合液浸润材料1-2h，再换纯透明剂(二甲苯、苯、氯仿、正丁醇)。
(5)浸蜡和包埋透蜡的目的是除去组织中的透明剂(如二甲苯等)，使石蜡渗浸到组织内部达到饱和程度以便包埋。
先放入二甲苯和石蜡各半的混合液，再放入熔化的石蜡中浸润，透蜡时间根据组织大小而定。
浸蜡之后放入包埋盒用石蜡进行包埋。
大鼠白介素10 ELISA试剂盒
大鼠白介素10ELISA试剂盒产品编号：SEKR-0006适用于大鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本仅供研究，不用于临床诊断目录背景介绍 (01)检测原理 (01)注意事项 (02)安全提示 (02)试剂盒组成及储存 (03)自备实验器材 (03)样品收集及储存 (03)试剂准备 (04)检测步骤 (06)结果判断 (06)参数表征 (07)参考文献 (09)常见问题分析及解决办法 (10)背景介绍：IL-10是一种多效性细胞因子，是α-螺旋细胞因子IL-10家族成员。
小鼠、大鼠和人IL-10cDNA序列均含178个氨基酸残基，内有18氨基酸信号肽序列。
成熟IL-10分子为160氨基酸残基，小鼠和人IL-10分子中分别含5个和4个半胱氨酸残基，分子量为35～40kDa。
在氨基酸水平上，大鼠IL-10与人和小鼠IL-10分别有85％和74％的同源性。
IL-10为调控病毒感染、过敏反应、自身免疫炎症的关键分子，促进吞噬摄取和Th2应答，但抑制抗原提呈和促炎症反应应答。
IL-10的单核细胞可有效调节单核/巨噬细胞功能。
能抑制前列腺素E2和产炎性细胞因子包括TNF- ,IL-1,IL-6和IL-8的产生等。
检测原理：本ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。
将抗大鼠IL-10单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的大鼠IL-10会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗大鼠IL-10抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的大鼠IL-10发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的大鼠IL-10，则HRP会使无色TMB变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；最后，在λmax=450nm（OD=450nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的大鼠浓度与OD成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中大鼠的浓度。
小鼠蛋白激酶 G（PKG）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书
小鼠蛋白激酶G（PKG）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织等样本中蛋白激酶G（PKG）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠蛋白激酶G（PKG）水平。
用纯化的小鼠蛋白激酶G（PKG）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠蛋白激酶G（PKG），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠蛋白激酶G（PKG）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠蛋白激酶G（PKG）含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
TGF-β对衰老小鼠肠道功能作用的初步研究
·论著·TGF-对衰老小鼠肠道功能作用的初步研究**TGF-ββ对衰老小鼠肠道功能作用的初步研究呼峰李珊珊周伟伟胡磊夏登胜【摘要】目的：通过检测衰老小鼠小肠组织形态学和炎症因子水平变化，研究细胞因子对衰老小鼠肠道功能的影响。
方法：2、6、18月龄SPF级雄性C57小鼠各10只，常规饲养1周观察粪便性状，腹腔麻醉后取小肠上皮组织，HE染色，倒置显微镜下观察组织形态。
取2月龄（年轻小鼠）和18月龄（衰老小鼠）C57小鼠小肠上皮组织上清液，CBA法流式检测细胞因子水平，ELISA进行验证；免疫组化测定TGF-β在小鼠肠上皮中的表达水平变化。
18月龄C57小鼠腹腔注射TGF-β1个月，观察小鼠粪便性状，麻醉后取小肠上皮HE染色镜下观察，测定小肠上皮中TGF-β的水平。
结果：小鼠随着年龄增长，小肠上皮逐渐萎缩，粪便变软、不成型；衰老小鼠组织上清液中TGF-β表达水平出现明显下降（P<0.05），TNF-α、IL-4和IL-6表达水平升高，和年轻小鼠相比，差异有显著性（P<0.05），IL-2、IL-10、IL-17和INF-γ的表达水平升高，但没有显著性差异（P>0.05）。
免疫组化结果显示衰老后小鼠肠上皮内的TGF-β表达显著降低。
衰老小鼠腹腔注射TGF-β后，小肠组织中TGF-β的表达水平明显高于对照组（P<0.05），小肠上皮萎缩较对照组有明显改善，粪便基本恢复正常。
结论：TGF-β在衰老小鼠肠道功能退化中有重要作用，补充TGF-β可改善衰老小鼠小肠吸收功能。
关键词：衰老；TGF-β；上皮；细胞因子［中国图书分类号］R780.2［文献标识码］A DOI:10.19748/.kqxf.1009-3761.2020.06.001Preliminary study of TGF-βon the intestinal function of aging miceHU Feng1,LI Shan-shan2,ZHOU Wei-wei1,HU Lei3,XIA Deng-sheng1.(1.Department of Emergency and General Den-tistry,Capital Medical University School of Stomatology,Beijing100050,China；2.Department of Endodontics,Capital Medical University School of Stomatology,Beijing100050，China；3.Department of Prosthodontics,Capital Medical University School of Stomatology,Beijing100050,China)【Abstract】Objective：Through detecting changes in the morphology of the small intestine of aging mice and the level of inflammatory factors,the effect of cytokines on aging of the intestinal function of mice was studied.Methods：2,6,and 18-month-old SPF male C57mice,10mice in each group,were fed for1week to observe the characteristics of feces.After abdominal anesthesia,the intestinal epithelium was taken and stained with HE.The histological morphology was observed under inverted microscope.The levels of cytokines were detected by CBA flow cytometry and proved by ELISA,and the expression of TGF-βin the intestinal epithelium of C57mice was analyzedby immunohistochemistry.Eighteen months old C57mice were intraperitoneally injected with TGF-βfor one month.The fecal characteristics of mice were observed.After anesthesia,the small intestinal epithelium was observed under HE staining microscope to determine the level of TGF-βin small intestinal epithelium.Results：The expression levels of TGF-β,TNF-α,IL-4and IL-6in the supernatant of aging mice were significantly decreased(P<0.05),and the expression levels of IL-2,IL-10, IL-17and INF-γwere increased,but there was no significant difference(P>0.05).Immunohistochemical results showed that the expression of TGF-βin intestinal epithelium of aging mice decreased significantly.After intraperitoneal injection of TGF-β,the expression level of TGF-βin small intestine of aging mice was significantly higher than that of基金项目：：北京市医院管理局“青苗”人才计划（项目编号：QML20191504）基金项目北京市优秀人才项目（项目编号：2018000021469G285）呼峰首都医科大学口腔医学院急诊综合诊疗中心医师北京100050李珊珊首都医科大学口腔医学院牙体牙髓科硕士生北京100050周伟伟首都医科大学口腔医学院急诊综合诊疗中心主治医师北京100050胡磊首都医科大学口腔医学院修复科主治医师北京100050夏登胜通讯作者首都医科大学口腔医学院急诊综合诊疗中心主任医师北京100050control group(P<0.05),intestinal epithelial atrophy was significantly improved,and feces returned to normal. Conclusion：TGF-βplays an important role in the degradation of intestinal function in aging mice.Supplementation of TGF-βcan improve the intestinal absorption function of aging mice.Key words：aging；TGF‑β；epithelium；cytokines随着人口老龄化的到来，我国已开始步入老龄化社会。
皮肤创伤修复中il-10、il-4时序性表达的实验性的分析
皮肤创伤修复中ＩＬ一１０、Ｉｋ－４时序性表达的实验性研究华中科技大学同济医学院法医学系研究生：张慧导师：秦启生教授吴焕明教授摘要ＴＥ确推断损伤时问在法医学检案中具有重要的司法鉴定意义。
由于机体对损伤的反应受多种因素的影响，加之检测方法和“标志物”等原因限制，损伤时间推断至今仍为法医学界关注的热点及难题。
目前资料表明，创伤局部的细胞因子在创伤修复过程中表达多有一定变化，不同细胞因子表达的时序和峰值也各不相同。
由于这种动态变化规律与损伤时间相关，因而可考虑作为推断损伤时间的参数。
近来研究发现，抗炎症细胞因子ＩＬ—１０、ＩＬ一４、ＴＧＦ等具有抑制促炎症细胞因子的产生、影响单核细胞的功能和激活结缔组织细胞等生物活性，在创伤修复的不同时程发挥作用，保证创伤修复的顺利进行。
为了解抗炎症细胞因子在创伤修复过程中的表达变化与损伤时问的关系，本研究对小鼠皮肤切创愈合过程中ＩＬ一１０和ＩＬ一４的表达变化进行了探讨。
本课题选用成年清洁级昆明小鼠，建立小鼠臀背部皮肤切创动物模型，应用常规病理组织切片和免疫组织化学ＳＡＢＣ法，观察实验小鼠不同时程的生前伤（０．５—１６８小时）及死后伤（１～６小时）皮肤切创局部的ＩＬ－１０和１Ｌ４表达情况：并结合计算机图像分析技术对ＩＬ－１０和ＩＬ４表年中科技土学弼湃ｔ学盹挂区学蠢删－碛士舛宽ｔ牛＾格文摹，直杀嚣ｉ达变化的规律与皮肤损伤时间的关系进行定量分析。
生前损伤组动物在臀背部的脊柱旁做一纵行的皮肤全层切口。
分别于伤后不同存活时间点处死，取创缘及周围的皮肤组进行观察。
死后伤组于动物处死后按照上述方法造创，在死后不同时间点取材。
对照组不做任何手术处理直接处死动物，在与损伤组臀背部相同部位取材。
标本经ＨＥ染色和免疫组化染色观察，对创伤局部皮肤整体表达ＩＬ一１０和ＩＬ一４免疫组化染色结果进行计算机图像分析；同时，皮肤切创组织中ＩＬ—ｌＯ不同部位（表皮细胞及表皮下组织的浸润细胞）的表达变化分别进行定量分析，实验所得数据经统计学分析处理。
小鼠运动造模实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种常见的神经退行性疾病，其主要特征是黑质多巴胺能神经元变性死亡，导致纹状体内多巴胺含量显著减少。
PD的临床症状主要包括静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势平衡障碍等。
为了研究PD的发病机制和治疗方法，本研究采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的小鼠模型进行实验研究。
二、实验目的1. 通过MPTP诱导建立帕金森病小鼠模型。
2. 观察小鼠的运动行为变化，评估造模效果。
3. 为后续PD的病理机制研究和治疗方法提供实验基础。
三、实验材料1. 实验动物：SPF级C57BL/6雄性小鼠50只，8周龄，体重（252）g，购自上海斯莱克实验动物有限公司。
2. 试剂：1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）、生理盐水、苯巴比妥钠等。
3. 仪器：动物行为观察箱、电子秤、显微镜、组织切片机等。
四、实验方法1. 实验分组：将50只小鼠随机分为实验组和对照组，每组25只。
2. 造模方法：实验组小鼠腹腔注射MPTP，剂量为15mg/kg，每天一次，连续5天；对照组小鼠给予等体积的生理盐水。
3. 行为观察：在造模前后及造模后不同时间点，观察小鼠的运动行为变化，包括活动量、姿势、步态等。
4. 组织学检查：取小鼠脑组织，进行HE染色和免疫组化染色，观察神经元形态和数量变化。
五、实验结果1. 行为观察：实验组小鼠在造模后表现出明显的运动迟缓、姿势异常、步态不稳等症状，与对照组相比，运动量明显减少，姿势异常率显著增加（P<0.05）。
2. 组织学检查：实验组小鼠脑组织HE染色结果显示，神经元形态不规则、核固缩、细胞质减少，神经元数量显著减少（P<0.05）。
免疫组化染色结果显示，实验组小鼠脑组织中多巴胺能神经元表达降低，与对照组相比差异显著（P<0.05）。
六、实验结论1. 成功建立了MPTP诱导的帕金森病小鼠模型。
肿瘤患者高IL10水平的预后预测及临床意义
肿瘤患者高IL10水平的预后预测及临床意义肿瘤是世界范围内的健康问题，在预后和治疗方面仍然存在挑战。
因此，研究人员对预测肿瘤患者预后的因素进行了广泛的研究，其中包括免疫因素。
IL10（白细胞介素10）作为一种关键的免疫调节因子，被发现在多种类型的肿瘤中具有重要的生物学意义。
首先，我们需要了解IL10在肿瘤中的作用机制。
IL10是一种免疫抑制因子，它在调节免疫反应和控制炎症反应方面起着重要的作用。
在肿瘤中，IL10的高水平表达与较差的预后相关联。
这是因为IL10能够抑制细胞免疫应答和免疫细胞介导的抗肿瘤免疫效应，从而促进肿瘤的发展和转移。
其次，我们需要考虑如何预测肿瘤患者的预后。
IL10的高水平表达可以通过多种方法进行检测，包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组化和定量聚合酶链式反应（qPCR）。
通过对肿瘤患者的IL10水平进行测定，可以初步预测患者的预后。
高IL10水平与肿瘤患者的预后相关性的确切临床意义是一个重要的问题。
一些研究表明，IL10的高表达与更糟糕的生存率和疾病进展相关。
例如，在乳腺癌、结肠癌和恶性黑色素瘤等肿瘤中，高IL10水平被认为是一个独立的预后不良因素。
另外，高IL10水平还与肿瘤的耐药性以及治疗效果不佳有关。
虽然高IL10水平在肿瘤患者预后预测中有重要意义，但还需要进一步研究来完善这一领域的认识。
首先，我们需要更多的临床研究数据来验证高IL10水平与预后的关联。
其次，我们需要深入了解高IL10水平的产生机制，以便开发针对IL10的靶向治疗策略。
最后，我们需要进一步研究高IL10水平与其他临床和分子特征之间的相互关系，以便为肿瘤患者的个体化治疗提供更准确的信息。
综上所述，肿瘤患者高IL10水平在预后预测和临床意义方面具有重要的价值。
IL10作为一种免疫抑制因子，其高水平表达与预后不良相关。
通过检测IL10水平，我们可以初步预测肿瘤患者的预后。
然而，我们仍然需要进一步的研究来完善对高IL10水平的理解，并开发相关的治疗策略，以改善肿瘤患者的预后。
小鼠血清IL-10测定实验步骤
小鼠血清IL-10测定实验步骤小鼠血清IL-10测定实验步骤一、试剂的准备：浓缩的缓冲液应该在实验前拿到室温下并且在实验开始前进行稀释。
如果缓冲液中有沉淀，可以缓慢的加温直到沉淀完全溶解。
1、Wash buffer：20倍的wash buffer concentrate 用蒸馏水稀释成1倍的，溶质：溶剂=1:19轻柔混匀，避免产生泡沫。
PH值7.4,储存在2~25℃，有效期30天。
2、Assay buffer：20倍的assay buffer concentrate 用蒸馏水稀释成1倍的，溶质：溶剂=1:19轻柔混匀，避免产生泡沫。
储存在2~8℃，有效期30天3、Biotin-conjugate:（注意Biotin-conjugate应该在稀释后的30分钟内使用完）用已经配好的1倍的assay buffer 把Biotin-conjugate 稀释100倍，溶质：溶剂=1:99Biotin-conjugate.颜色标记为绿色：1ml assay buffer（1×）加10μl Green-Dye4、Streptavidin-HRP:（注意Streptavidin-HRP应该在稀释后的30分钟内使用完）用已经配好的1倍的assay buffer 把Streptavidin-HRP 稀释200倍，溶质：溶剂=1:199Streptavidin-HRP.颜色标记为红色：1ml assay buffer（1×）加4μl Red-Dye5、Mouse IL-10 standard标准品的稀释可以直接在微孔板上进行，共7个孔标记为S1—S7,S1---S7放标准品，最后一孔做空白对照，具体操作见后面步骤4。
Mouse IL-10 standard.颜色标记为蓝色：1ml Sample Diluent 加4μl Blue-Dye二、实验操作过程1、计算使用微孔的数量，包括要检测的样品、标准品、对照所用的微孔，每一个样品、标准品、空白对照应该做两个孔，一式两份。
本试剂盒用于定量检测小鼠血清或血浆中的IL-10的浓度
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。
任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
贮藏于2-8°C。
在此检测中，可使用血清、血浆样品。
1. 浓缩洗涤液(50X)用双蒸水稀释成1X（至350ml）。
2. 配制1x HRP：HRP用酶联物稀释液稀释60倍，即1份浓缩HRP加入59份HRP稀释液。
即50ul HRP 加入2950ul HRP 稀释液。
3. 标本应稀释50000倍，即10ul 血清/血浆加入5ml 生理盐水中，混匀（1:500）；然后将混匀液10ul 加入1000ul 样品稀释液中（1: 100），混匀；这样总共稀释50000倍。
标准品已经稀释，不用再稀释。
试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。
取出所需反应板。
1. 加入100ul标准品(Standards)、100ul已稀释标本于相应反应板孔中。
2. 轻轻混匀30秒，20-25°C温育20分钟。
3. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。
4. 每孔加入100ul Biotin anti rat IL-10。
轻轻混匀30秒，20-25°C温育20分钟5. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。
6. 每孔加入100ul 1x HRP。
轻轻混匀30秒，20-25°C温育10分钟7. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。
大鼠白细胞介素10(IL-10)
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大鼠白细胞介素10（IL-10）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠白细胞介素10（IL-10）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠白细胞介素10（IL-10）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品（50 pg/ml）0.6mL 0.6mL 按说明书进行稀释标准品稀释液6mL 3mL 无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625pg/mL. 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
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小鼠IL-10 免疫组化试剂盒
该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性IL-10抗原。
该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。
在所用的IL-10一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）
试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL
试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型IL-10一抗（2.5ml）
试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1支
（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA复合物1支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL
试剂F DAB显色液 5ml
用户自备试剂：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羟基氨基甲烷1.21g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，最后定容至1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，最后定容至1000mL
或：0.5M EDTA修复液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700mL，用10mM NaOH调pH值至8.0，最后定容至1000Ml
3. 缓冲甘油封固剂10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；
2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；
4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。
5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；
8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；
9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；
11.封闭：滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
12.加HRP-SA：滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37℃湿盒中孵育30 min；
13.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min），TBS洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像：显微镜下观察成像。
注意事项：
1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。
3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会影响结果观察。
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。
附1：
抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01M pH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或高档继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。
因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。
此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8 min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。
此方法适用于较难检测或核抗原的修复。