生化实验技巧-来源网络
生物化学实验技巧分享
生物化学实验技巧分享生物化学实验是理解生物分子结构和生物化学反应的重要途径。
为了确保实验结果的准确性和可靠性，掌握一些实验技巧是必不可少的。
本文将分享一些在生物化学实验中应用的技巧和注意事项，以帮助实验人员提高实验效果。
实验前的准备工作在进行生物化学实验之前，需要做好充分的准备工作，以确保实验的顺利进行。
1. 选择合适的试剂和仪器根据实验的要求，选择适当的试剂和仪器。
确保试剂的纯度和仪器的功能良好，以避免对实验结果产生干扰。
2. 仔细阅读实验操作步骤在进行实验之前，仔细阅读实验操作步骤，并理解每个步骤的目的和操作方法。
如果有不清楚的地方，可以向实验指导老师咨询或查询相关文献。
3. 准备好实验所需的试剂和设备按照实验操作步骤的要求，准备好实验所需的试剂和设备。
保持实验环境的整洁和有序，避免试剂污染和交叉污染。
技巧一：正确使用实验仪器在生物化学实验中，使用合适的仪器是非常重要的。
以下是一些常见的实验仪器以及其正确使用的技巧。
1. 均质机在使用均质机时，首先将待均质的溶液注入均质机的容器中，然后关闭均质机的盖子。
慢慢地将均质机调至适当的速度，并在均质过程中观察溶液的均匀程度。
均质结束后，及时清洁均质机的容器和刀片。
2. 离心机在使用离心机时，首先将待离心的溶液倒入离心管中，并确保离心管内液面平衡。
将离心管放入离心机的转盘上，尽量保持离心管的平衡。
选择合适的离心速度和时间，离心结束后，小心取出离心管，避免破坏离心沉降的沉淀或分层。
3. 分光光度计在使用分光光度计时，首先调节仪器的参数，如波长和参比光强。
然后，在样品室中放入不含待测溶液的参比液，并对仪器进行基线校准。
将待测溶液置于样品室中，记录吸光度读数，并与基线进行比较。
技巧二：正确处理实验样品在生物化学实验中，正确处理样品可以预防实验误差和污染，从而得到准确的实验结果。
1. 样品保存对于需要保存的样品，应选择合适的保存条件和存储方法。
例如，某些生物样品需要在低温下保存，可以选择冷冻保存或使用干冰。
生化实验操作方法
生化实验操作方法生化实验操作方法是进行生化实验的步骤和操作流程的总称。
生化实验通常用于研究生物体内的生物大分子结构、组成、功能以及生物反应等方面的变化。
下面我将详细介绍生化实验的操作方法。
首先，实验前要做好准备工作。
包括准备实验所需的试剂和仪器设备，并检查仪器设备的工作情况。
同时，要进行实验场地的清洁和消毒，以确保实验的严密性和安全性。
接下来，进行实验前的样品处理。
样品可以是生物体的组织、细胞或者生物体内的某种物质。
样品处理的目的是提取和纯化所需的生物大分子或物质，使其达到实验所需的浓度和纯度要求。
常用的样品处理方法有离心、超声波破碎、酶解等。
然后，进行实验的具体操作。
根据实验的目的和要求，选择相应的实验方法和技术进行操作。
常见的生化实验方法包括蛋白质分离与纯化、核酸提取与分析、酶活性分析、分子克隆、酶联免疫吸附实验等。
在实验操作过程中，要严格按照实验方法和步骤进行操作，掌握好技术细节。
操作时要注意消毒、洗手、穿戴实验服和手套等个人防护措施，确保实验过程的安全。
实验中要保持实验器皿和工作台的清洁，并避免交叉污染。
实验后，要进行实验数据的记录和分析。
实验结果一般通过测定生物大分子的浓度、活性或者结构等指标来进行评价。
实验数据的记录可以通过手动记录、仪器记录或电脑记录等方式进行，同时要对实验数据进行统计和分析，以得到科学可靠的结论。
最后，进行实验材料和实验场地的清理工作。
彻底清洗和消毒实验器皿和设备，将废液和废弃物妥善处理。
同时对实验室进行清洁，保持环境整洁。
总结起来，生化实验操作方法包括实验准备、样品处理、实验操作、数据记录与分析以及实验清理等步骤。
准确掌握操作方法，合理选用适当的实验技术，严格遵循实验操作的规范和安全要求，才能获得可靠的实验结果，并为科研工作或医药领域的应用提供有力的支持。
如何进行生化检验
如何进行生化检验生化检验是一项重要的医学检验方法，主要用于检测人体内各种生物分子的含量和分布情况，以揭示疾病的发生和发展状况。
这项检验对于现代医学的诊断和治疗起着至关重要的作用。
以下将详细介绍如何进行生化检验。
一、选择适当的生物样本生化检验通常涉及到多种不同类型的生物样本，包括血液、尿液、唾液、毛发等。
这些样本中所含有不同种类的生物分子，如蛋白质、酶、代谢产物等，可以被生化方法分析出来。
在选择生物样本时需要根据具体疾病和检测目的选择适当的样本进行检测分析。
二、收集样本在进行生化检验之前，需要先收集所需的生物样本。
对于血液、尿液等样本，可以通过采血管和尿采集器等器具进行采集。
对于唾液和毛发等样本，则需要经过特别的处理方式，如使用唾液采集器或化学分解等方法来进行处理。
在收集样本时需要在保持样本稳定的情况下，最大限度的减少检验过程对样本的影响，以保证检验结果的准确性。
三、样本处理将采集到的生物样本加入样品杯中，对样本进行加热、冷却、离心、萃取、过滤等样本处理方法，以消除样品中的杂质，并得到足够的生化分析物质测定。
样本处理过程中需要控制样本的温度、时间、加盐量等因素，以保证样品的质量和稳定性。
四、分离和纯化这是生化检验的核心过程之一，该过程需要将样品中的目标生物分子从其他成分中分离出来，并纯化出所需的生物分子。
目前用来分离和纯化目标生物分子最多的方法包括色谱法、电泳法、南方杂交等方法。
在分离和纯化过程中需要严格控制实验室环境的卫生等条件，以免影响检验结果的准确性。
五、生化分析分离和纯化后得到的生物分子需要进行定量的生化分析。
这是生化检验过程中最关键的环节之一。
目前主要采用的生化分析方法有光学法、放射性同位素法、荧光法、化学发光法等方法。
在进行生化分析时，需要严格控制实验室环境的温度、湿度、反应时间等因素，同时要注意实验室设备的卫生和维护。
总之，生化检验是现代医学中不可缺少的检验方法之一。
在进行生化检验时需要掌握一定的专业知识和实验技术，并严格按照标准程序进行操作，以保证检验结果的准确性和可靠性。
临床生化检验基本技能 移液
临床生化检验基本技能移液临床生化检验是医疗中重要的辅助诊断手段之一，而移液是临床生化检验中常用的基本技能。
下面我将详细介绍移液的基本原理、操作步骤以及注意事项。
一、移液的基本原理移液是将一定量的液体从一个容器转移到另一个容器中，目的是为了进行溶液的混合、定量稀释、样品制备等操作。
常见的移液器有手动移液器和电子移液器两种，手动移液器常用的有脱脂棉头、吸球、各种容量的移液管等。
而电子移液器通常具有自动吸液、排液、排气等功能，能够更为方便、快捷和精确地进行移液操作。
二、操作步骤1. 准备工作：确认所需要的移液器型号、量程、容量等参数，确保移液器干净、无气泡、无液滴。
将待移液体样品准备好，并将试剂瓶摆放在平稳的位置上，确保移液操作的准确性和安全性。
2. 吸取液体：将移液管的吸头浸入液体中，使用手指轻轻按压移液器顶端，使其腔体内产生一个较低的压力，然后放开手指，移液器便能吸取适量的液体。
注意吸取液体时保持移液管与试剂瓶底部之间有一定的垂直距离。
3. 吐出液体：将被吸取的液体移至目标容器内，按压移液器顶端，使其腔体内压力上升，使液体从移液管的出口处缓慢释放。
4. 清洗移液器：使用去离子水或纯水进行反复冲洗移液器，避免不同试剂之间的污染，同时也可以防止不同液体之间的反应。
5. 结束操作：将使用完毕的移液器放置在规定的位置上，清洁、消毒并妥善保存，确保下次使用时的准确性和安全性。
三、注意事项1. 注意移液器的重量和容量的选择，确保所需移液的液体量在移液器的量程范围内。
2. 操作时要注意避免气泡的产生和残留，以免影响移液的准确性。
3. 移液管的吸头在吸液和排液时避免接触其他物品，以免造成污染和交叉感染。
4. 操作时要注意移液的排气，即吐出液体之后，再轻轻按压移液器顶端进行一次排气，避免液滴残留。
5. 移液操作要快速、准确，并尽量避免振荡移液管，以确保结果的准确性。
总结：移液是临床生化检验中不可或缺的基本技能之一，操作正确与否直接影响结果的准确性。
生化基本操作方法
生化基本操作方法生化学作为一门重要的科学，广泛应用于医学、生物学、化学等领域。
生化基本操作方法是生化学研究中必不可少的一部分，其正确性和可靠性对于实验结果的准确性和科学性有着决定性的影响。
本文将介绍生化基本操作方法。
一. 实验前的准备在进行生化实验之前，首先需要进行实验前的准备工作。
这包括实验室的准备和实验物品的准备。
实验室的准备：实验室应该是整洁、干净和有序的，以防止实验过程中出现误差。
实验室应该要有充足的安全设施，例如事故处理设施和防护设施，以预防任何实验失误而导致的伤害。
实验物品的准备：实验物品是生化实验中必不可少的物品，包括试剂、器材、培养基等。
在准备实验物品时，需要考虑物品的纯度、存储条件和到期日等因素，并按照实验的需要正确选取和配制所需的物品，以确保实验的准确性和稳定性。
二. 实验操作的步骤1. 分配试样将待测试的样品分配到适当的量的试管或反应器中，这是生化实验的第一步。
2. 预处理样品为了得到准确的测试结果，通常需要对试样进行预处理。
例如，对于生化酶的活性测定，通常需要通过离心或超滤等步骤分离和浓缩酶的样品。
3. 装载试剂将所需的试剂和溶液配制好，并按照一定的比例加入到待测试的试样中。
为确保测试结果的准确性，必须严格控制每种试剂和溶液的质量和分量。
4. 开始测试开始测试前，首先需要对测试仪器进行预热和校准。
一旦测试仪器准备就绪，就可以将试样装入测试器中，开始进行测试。
在进行生化测试时，必须严格按照测试步骤和时间表的要求进行操作。
例如，在生化酶活性测定中，必须在恰当的时间内准确的读取试样的吸光度。
5. 结果分析在测试完成后，需要对结果进行分析和处理。
根据不同的实验要求和目的，分析和处理方法也有所不同。
例如，在酶活性测定中，可以使用Michaelis-Menten 方程式计算酶的动力学参数，如Km值和Vmax值，从而了解酶的性质和功能等。
三. 实验过程中的注意事项在进行生化实验时，需要特别注意以下几点：1. 实验操作过程中应保持实验室干净、整洁和有序，避免实验失误。
生物化学实验技巧
生物化学实验技巧实验室中的生物化学实验是在探究生物体的化学成分、代谢途径以及分子结构方面的重要手段。
在进行这些实验时，掌握一些实验技巧是至关重要的。
本文将介绍一些常用的生物化学实验技巧，希望对您的实验工作有所帮助。
一、样品准备在进行生物化学实验之前，正确准备好样品是必不可少的。
样品的选择和处理方式将直接影响实验结果的准确性和可靠性。
首先，选择适合的生物组织或细胞，确保其纯度和活力。
其次，在样品的处理过程中要注意防止污染和损伤的发生，例如在提取过程中使用无菌技术和合适的实验仪器。
二、实验室安全实验室安全是进行任何实验工作的首要考虑因素。
在生物化学实验中，应注意以下几个方面：首先，佩戴适当的防护设备，如实验手套、护目镜和实验室外套。
其次，合理安排实验室布局，确保通风良好，防止有害气体的积聚。
另外，正确处理实验废弃物，如化学品残留、生物废料和实验器具的清洗等。
三、实验仪器和试剂的选择在生物化学实验中，选择适当的仪器和试剂对于实验结果至关重要。
例如，在进行光谱分析时，应选择合适的分光光度计或光谱仪。
在进行某些酶促反应时，应选择适当的底物和抑制剂。
此外，要注意对试剂的储存和保存，以保持其活性和纯度。
四、技巧要点1. 精确称量：在进行溶液配制或药物稀释时，精确称量试剂是非常重要的。
使用准确的天平和清洁的瓶子或容器，并遵循称量方法和规范，以确保准确性和可重复性。
2. pH调节：在某些实验中，调节试剂或反应溶液的pH值是必要的。
使用合适的酸碱溶液和pH计来准确测量和调节pH值。
3. 温度控制：很多生物化学反应对于温度的敏感度很高。
在进行实验时，应注意使用恒温器、水浴或热盘等设备来精确控制反应的温度。
4. 混合均匀：在进行溶液混合或反应时，应充分搅拌使各组分均匀混合。
对于某些反应，使用磁力搅拌器或振荡器可以提高效果。
5. 光谱测定：在进行分光光度法测定时，要注意样品的制备和操作要规范。
注意校准仪器、避免杂质干扰和使用合适的光程等因素。
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
生化实验基本操作技术
生化实验基本操作技术一：玻璃仪器的洗涤及干燥：（一）意义：去除干扰物，提高实验结果的准确性。
（二）常用洗涤剂：1．洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。
2．强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。
3．铬酸洗液------见附2。
4．水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。
（三）洗涤方法：* 洗涤程序：泡→洗（→泡）→冲→漱1．新仪器的洗涤：2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
2．非定量敞口仪器的洗涤（试管、烧杯等）用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
注意：检查毛刷顶部是否裸露，洗刷时用力不可过猛，以免戳破玻璃仪器。
3．窄口仪器的洗涤（容量瓶、试剂瓶）使用后立即在洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→洗涤剂溶液倒入容器内（约1/4）→小心转动或摇动仪器→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
4．刻度吸管的洗涤使用后立即用大量自来水冲洗（切勿使样品干在管内，否则难以洗净）→干燥后放入铬酸洗液中浸泡过夜→取出，在特制的容器中用自来水冲洗30 分钟→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
（四）判断洗净的标准：洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润后，管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。
（五）干燥方法1、晾干：仪器倒立放在特制架子上，自然晾干。
2、烘干：尽量倒净仪器内部的水，将其倒立放在托盘上，放入烘箱烘干。
普通仪器用80-100℃，容量分析仪器用37-40℃。
3、有机溶剂干燥：体积小的容器急需干燥时，可用此法。
洗净的仪器先用少量酒精洗一次，再用少量丙酮或乙醚洗涤，吹干（不必加热）。
二：吸管和微量移液器的使用及注意事项：（一）刻度吸管：1．作用：用于准确移取一定体积的溶液。
博士生生物化学实验技巧知识点归纳总结
博士生生物化学实验技巧知识点归纳总结在博士生的研究工作中，生物化学实验技巧是非常重要的一环。
掌握一些实验技巧能够提高实验效率、减少实验误差，并且为研究工作提供可靠的数据支持。
本文将对博士生生物化学实验技巧的一些重要知识点进行归纳总结。
一、样品制备技巧在生物化学实验中，样品的制备对实验结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
以下是一些样品制备技巧的要点：1. 样品的采集与保存：对于不同类型的样品，采集和保存的方法有所不同。
一般来说，要注意样品的采集时间和方式，以避免污染和降解；同时，合适的保存方法（如低温保存、添加保护剂等）也能有效延长样品的寿命。
2. 样品的预处理：对于某些复杂的样品，在进行实验分析之前需要进行预处理。
比如，可以进行样品的筛选、过滤、离心等操作，去除其中的杂质或者分离出需要的组分。
3. 样品浓度的调整：有些实验需要样品的浓度在一定范围内，因此在实验前可能需要对样品进行稀释或者浓缩，确保实验结果的有效性。
二、实验仪器操作技巧在博士生的研究工作中，生物化学实验常常需要使用一些仪器设备，掌握正确的操作技巧对实验结果至关重要。
以下是一些常见实验仪器的操作技巧要点：1. 使用分光光度计：在使用分光光度计时，应注意正确设置波长和样品量，并保证样品室干净，以避免附着物的干扰。
2. 培养基制备与使用：在进行细胞培养实验时，培养基的制备和使用要非常严谨。
应按照配方准确称取各种物质，使用无菌技术制备，以确保培养基的质量和无菌状态。
3. 凝胶电泳技巧：凝胶电泳是生物化学中常用的分离和检测方法。
正确制备凝胶、使用适当的电压和运行时间，以及正确染色和图像处理等步骤都是保证凝胶电泳结果准确可靠的关键。
三、数据分析和结果解读生物化学实验的结果需要进行数据分析和解读，以得出科学结论。
以下是一些数据分析和结果解读的技巧和要点：1. 使用统计学方法分析数据：在进行数据分析时，可以运用统计学方法（如t检验、方差分析等）进行数据的比较和处理，以验证实验结果的显著性和可靠性。
检验科生化实验操作指南
检验科生化实验操作指南一、实验目的本实验操作指南旨在为检验科工作人员提供详细的生化实验操作指导，确保实验过程的准确和安全。
二、实验准备1. 准备所需实验材料和试剂。
2. 检查实验仪器和设备的完好性和正常工作状态。
3. 穿戴实验室个人防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜。
三、实验步骤1. 将待测样本进行标识，并按照实验要求进行适当的处理和预处理。
2. 根据实验方案和操作要求，准确称取所需的试剂和溶液。
3. 按照实验要求，将试剂和样本进行混合或反应，注意搅拌均匀。
4. 使用实验仪器对混合液进行必要的测试和分析。
5. 记录实验数据和观察结果，保留实验样本和残留物。
6. 根据实验要求，对实验结果进行分析和解释。
四、实验注意事项1. 严格按照实验方案和操作要求进行操作，避免任意更改实验步骤。
2. 注意使用安全防护装备，保护自己和他人的安全。
3. 在实验过程中保持实验台面整洁，避免交叉污染。
4. 注意正确使用实验仪器和设备，避免人为破坏。
5. 注意实验材料和试剂的保存和管理，避免损坏和过期使用。
五、实验结果与分析根据实验数据和观察结果，结合实验要求和参考标准，对实验结果进行分析和解释。
目的是得出准确的结论并提供相关建议。
六、实验总结与改进根据实验过程和实验结果，总结实验的优点和不足之处，并提出改进的建议。
目的是提高实验的准确性和效率。
结束语此生化实验操作指南为检验科工作人员提供了详细的操作步骤和注意事项，帮助他们完成实验工作，确保实验结果的准确和可靠。
在实验过程中，工作人员要严格按照操作规程进行操作，并时刻关注实验安全。
通过实验结果的分析和总结，进一步优化实验方法，提高工作效率和准确性。
常用的生物化学实验方法
常用的生物化学实验方法
一、蛋白质实验：
1、放射免疫分析：是一种应用放射性标记物，用易位法来研究物质在生物体中的含量或位置的分析技术。
2、免疫结合的沉淀反应：通过将靶蛋白质与抗原特异性抗体结合并沉淀，在溶解液中分离和定量靶蛋白质的重要方法。
3、Blood-Brain Barriers Permeability：使用半乳糖或单糖的报告系统检测血脑屏障的渗透性，可以预测视网膜色素上皮毛细血管的渗透性调节作用。
4、 Western blotting：通过将细胞中表达的蛋白质组分整合到一起，电泳后标记抗原，并通过免疫检测来检测其表达情况和定量的技术。
5、 Northern blotting：使用报告物和抗体来检测RNA分子在细胞中分布，并用于检测RNA的表达水平及分析调控机制的重要技术。
二、细胞实验：
1、细胞培养：将活细胞从器官细胞中分离，学习细胞的结构、功能及调控原理的一种重要实验方法。
2、细胞归性实验：通过把特定细胞分离并重新植入到胚胎中，分析器官结构中各细胞归性状态，研究细胞及组织的发育调控机制的实验。
3、生物因子实验：一种研究因子介导的细胞凋亡和细胞分化、细胞迁移的行为的生物实验技术。
4、细胞膜荧光素酶报告系统：结合细胞膜转运蛋白的荧光素酶报告系统，可以在实验条件下测定细胞的膜质电位和其余两类离子通道。
5、FACS 实验：通过测定细胞表面抗原，进行一个抗原一个细胞的分类，从而对细胞作出正确评估和定位，分析细胞状态变化及其相关表型的技术。
自然科学实验中的生化指标测量技巧
自然科学实验中的生化指标测量技巧自然科学实验中，生化指标的测量技巧对于研究生物体的生理状态和疾病诊断具有重要意义。
本文将介绍一些常见的生化指标测量技巧，并探讨其应用和局限性。
一、酶活性测量技巧酶是生物体内参与代谢反应的重要催化剂，其活性的测量对于了解生物体的代谢状态具有重要意义。
常见的酶活性测量技巧包括光度法、比色法和荧光法等。
其中，光度法是最常用的方法之一，通过测量酶催化反应产生的光吸收或光发射来确定酶活性。
比色法则是通过测量酶催化反应后产生的色素的吸光度来确定酶活性。
荧光法则是利用酶催化反应产生的荧光信号来测量酶活性。
这些方法在生化实验中得到了广泛应用，但需要注意的是，不同酶对于测量条件的要求不同，因此在实验设计和操作过程中需要谨慎选择。
二、蛋白质含量测量技巧蛋白质是生物体内重要的生物大分子，其含量的测量对于了解生物体的营养状况和代谢活性具有重要意义。
常见的蛋白质含量测量技巧包括比色法、荧光法和免疫测定法等。
比色法是最常用的方法之一，通过测量蛋白质与染料结合后产生的吸光度来确定蛋白质含量。
荧光法则是利用蛋白质与荧光探针结合后产生的荧光信号来测量蛋白质含量。
免疫测定法则是利用特异性抗体与目标蛋白质结合后产生的信号来测量蛋白质含量。
这些方法在生化实验中得到了广泛应用，但需要注意的是，不同方法的选择应根据实验需要和样品特性进行合理选择。
三、基因表达水平测量技巧基因表达水平的测量对于了解生物体的遗传信息传递和基因调控具有重要意义。
常见的基因表达水平测量技巧包括实时荧光定量PCR（qPCR）、Northern blot和Western blot等。
qPCR是一种高灵敏度的技术，通过测量目标基因的DNA扩增产物的荧光信号来确定基因表达水平。
Northern blot则是通过将RNA样品转移到膜上并与特异性探针杂交来测量目标基因的表达水平。
Western blot则是通过将蛋白质样品转移到膜上并与特异性抗体结合来测量目标基因的表达水平。
生物化学检验常用技术
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酶电极
将生物酶涂布在离子选择性电极或其它传感器的敏感膜上，通过酶催化作 用，使待测物质产生能在该电极上响应的离子或化合物，间接测定该物质。
脲酶催化分解尿素产生NH3、CO2， 溶于水可得到不同产物NH3、CO2、 NH4+、HCO3-等，可用相应的离子选 择性电极来检测它们，间接得到尿 素的含量。
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可用电极测定的气体
CO2 + H2O === HCO3- + H+ NH3 + H2O === NH4+ + OHSO2 + H2O === HSO3- + H+ 2NO2 + H2O === NO3- + NO2- + H+ H2S + H2O === HS- + H3O+ HCN + H2O === H3O+ + CNHF + H2O === H3O+ + F-
荧光分光光度法
利用物质吸收较短波长的光能后发 射较长波长特征光谱的性质，对物 质定性或定量分析的方法。
分析测定蛋白质、核酸、维生素等; 对某些激素及其代谢产物的测定;
当化合物含量太少,一般分析方法灵敏度不够时,使用荧光分析技术就能解决测定问题。
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ห้องสมุดไป่ตู้
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三、散射光谱分析法
光的散射
用单色光照射透明溶液时，大部分按原来 方向透射，而一小部分则按不同的角度散
生化实验原理方法
⽣化实验原理⽅法实验⼀猪⾎中超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及活⼒测定、同⼯酶电泳⼀、原理超氧化物岐化酶SOD⼴泛存在于⽣物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的⾦属类酶。
它作为⽣物体内重要的⾃由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴离⼦，在防御⽣物体氧化损伤⽅⾯起着重要作⽤。
SOD是⼀种酸性蛋⽩，对热、pH和蛋⽩酶的⽔解较⼀般酶稳定。
根据⾦属辅基的不同，它可以分为四类，分别为Mn-SOD、Cu-Zn-SOD、Fe-SOD、Ni-SOD，其中最常见是(CuZn-SOD)，主要存在于真核细胞的细胞质中。
CuZn-S0D酶蛋⽩的分⼦量约为3.2×104，每个酶分⼦由2个亚基通过⾮共价键的疏⽔基相互作⽤缔合成⼆聚体，每个亚基(肽链)含有铜、锌原⼦各⼀个，活性中⼼的核⼼是铜。
SOD作为机体内最重要的抗氧化酶体之⼀，可以直接清除过量的超氧⾃由基，阻⽌机体的过氧化，对机体有较⾼的防护作⽤及保健价值。
本实验采⽤有机溶剂沉淀法以新鲜猪⾎为原料，从中提取SOD硬进⾏纯化。
酶活⼒测定可⽤以下⽅法：黄嘌呤氧化酶法、细胞⾊素C法、肾上腺素⾃氧化法亚硝酸法、NBT光还原法、化学发光法以及邻苯三酚⾃氧化法等。
⽽该实验SOD 酶活性采⽤邻苯三酚⾃氧化法测定。
酶活性单位定义为:在1ml的反应液中，每分钟抑制邻苯三酚⾃氧化速率达50%时的酶量定义为⼀个活⼒单位。
SOD同⼯酶奠定采⽤不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离鉴定。
⽤“负”显⾊法显⽰。
由于SOD能够抑制O2-的作⽤，因此，电泳分离SOD后，凝胶上⽆SOD 处显⽰为蓝⾊，⼜SOD处为⽆⾊透明，由此可以鉴定SOD同⼯酶酶谱。
⼆、操作步骤1、SOD提取取新鲜猪⾎，加⼊到檬酸三钠抗凝液中，新鲜猪⾎与抗凝液的⽐例为3：1，轻轻搅拌均匀，4 000r/min离⼼10min，收集红⾎球。
然后⽤2倍体积⽣理盐⽔洗涤，4 000r/min离⼼10min，弃上清液；重复2次，得洗净的⾎红球浓稠液。
生化试验小技巧
生化试验小技巧——根据丁香园中一贴子整理而得，兼为经验。
SDS-PAGE1.SDS-PAGE配制过程中，浓缩胶与分离胶可预先配好大体积（如100ml）预制胶，储存在4度冰箱（注：10% APS，TEMED不加），每次配置时只需吸取所需体积的预制胶加入相应体积APS，TEMED即可，预制胶可储存半年以上，能节省很多时间，更重要的是，可大大减少与丙稀酰胺的接触，减少中毒。
2.胶配好后，若过夜使用，待凝聚后不要拔下梳子，把含胶玻璃板从制胶槽取下，注意玻璃板上下两边缘会有气体，所以需要加一点电泳缓冲液以避免胶内水分蒸发，用保鲜膜包上，然后放4度过夜，第二天在电泳槽内直接拔下梳子即可使用。
3.配置分离胶时因胶凝时收缩常导致加样孔变浅，可以将加剩的胶放入4℃以降低凝聚速度，而将凝胶放入37度促聚，并随时用4℃加剩的胶补充下降的胶面；另外将胶横放与水平面成10度角也可以减少收缩的影响。
4.丙烯酰胺放置时间过长（超过一年），会吸水潮解，导致胶不凝。
5.凝胶时温度高凝胶快，但过高时，会影响交连物的孔径大小，25℃为宜。
6.氧气是胶凝固的终止剂，所以尽量避免胶中气泡出现。
7.大肠表达检测时，一般要煮样，但煮出来时常较稠，用8M尿素重悬细胞后再煮效果较好。
8.配好的10×TBE经过高压灭菌后，不会形成沉淀，可以用很长时间，而且跑出的条带也很漂亮。
9.上样时，最后保证上样量一样，包括体积，当体积不同时，可以加缓冲液补全，这样跑出的胶较为一致。
所有的加样孔都加样，可以防止边缘的样品拖尾，如样品不多，其余的孔均用上样缓冲液加满，防止影响条带扩散。
10.跑胶时，因为低电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形，所以低电压泳道会比高电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。
11.跑胶过程中，为节省时间，可以提高电压，但得注意散热，可以冰浴跑胶，将电泳槽放入盛有冰水的盆中，或是冰箱中，节省的时间的同时，效果也较好。
生化实验室必备技能
生化实验室必备技能生化实验室必备技能生化工程研究室实验技能系列讲座（一）主讲人：贾老师协理：谭老师整理：穆彩云一、玻璃仪器的洗涤为了排除生物实验中外来因素的干扰，提高实验结果的准确性和可信性，必须对实验中的干扰因素进行消除。
其中实验中常用的玻璃仪器的洗涤就是消除干扰的一个重要组成部分。
应当根据实验的要求，污物的性质和沾污的程度来选择。
一般有下列几种洗涤方法。
1.用水刷洗：此法既可洗去溶于水的物质，又可使附着在仪器上的尘土和不溶性物质脱落下来，但对油污效果并不好。
洗刷时，且要选用合适的刷子，如用试管刷去洗烧杯，就不合适。
因为试管刷太细，不易将烧杯底洗净。
若刷子顶端无毛，则不宜使用，易损坏玻璃器皿。
2.用洗衣粉或合成洗涤剂刷洗：对于一般油污及不溶物沾附较牢的器皿的可以采用此方法刷洗。
现将仪器在洗衣粉中浸泡一段时间，再用合适的刷子洗涤。
洗后的器皿必须要用自来水将残存的洗衣粉或合成洗涤剂冲洗干净才能使用。
3.采用洗液洗涤适宜于一些对洁净程度要求较高的定量器皿（如滴定管、容量瓶、移液管等），以及一些形状特殊、不能用刷子刷洗的仪器。
使用洗液前先用水洗，把水倒净后注入少量洗液，慢慢转动仪器，使器壁上全部被洗液润湿后，再把洗液倒回原来的瓶内，然后用水冲洗掉残留的洗液。
如果用洗液把仪器浸泡一段时间后，或用热的洗液洗涤，则效果更好。
值得注意的是，色谱质谱联用的样品需要相对洁净度更高，所以经水洗、酸浸泡，水洗等诸多步骤，因为玻璃去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生，表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次。
4.超声洗涤洗普通的玻璃仪器可以放在超声波里加上洗涤剂超半个小时，拿出来用水冲干净，然后再用蒸馏水冲洗2-3次，就可以放在烘箱里烘干了，一定要记住要用蒸馏水冲一下，否则干燥出来的瓶子会有洗衣粉的痕迹。
但用超声波洗涤玻璃器皿，时间长了会使玻璃表面受损剥落的。
生物化学与分子生物学：生化实验基本操作技术
溶液的混匀技术
• 甩动混匀适用于试管内液量不多的溶液混匀。 • 弹打混匀适用于锥形离心管、小试管和小塑料离心管等内容物的混匀。 • 旋转混匀适用于未盛满溶液的锥形瓶、试管和小口容器等内容物的混匀。 • 倒转混匀适用于具塞容器，如容量瓶、具塞量筒和具塞离心管等内容物的混匀。 • 玻棒搅拌混匀适用于烧杯内容物的混匀。 • 吸管混匀适用于样品不同浓度等级稀释的混匀。 • 旋涡振荡器混匀适用于锥形离心管、小试管和小塑料离心管等内容物混匀。 • 电磁搅拌混匀适用于酸碱自动滴定、pH梯度滴定等。
洗涤、干燥原则与判断方法
玻璃器皿洗涤原则：
对不同玻璃器皿，采用不同的洗涤方法。根据器皿污 染源的不同选择合适的洗涤液。
玻璃器皿干燥原则：
量器自然凉干，容器烘干备用。
器皿清洁的判断方法：
洗涤后倒置容器，其内壁无挂珠；干燥后器壁内外干 净、无污物痕迹。
2012年秋季学期
生物化学与分子生物学实验教学中心
立即清洗→晾干→铬酸洗液浸泡4～6h→自来水冲洗→蒸馏水冲洗
比色杯洗涤
自来水冲洗→蒸馏水冲洗 （洗不净可用3.5mol/L HNO3溶液或（0.3～0.6）mol/L HCl冲洗，
禁用毛刷或强氧化剂或超声波洗涤）
干燥—自然干燥、烘烤干燥
量器自然凉干，容器烘干备用。
生物化学与分子生物学实验教学中心
新购置的玻璃器皿洗涤
2%盐酸浸泡数小时→自来水冲洗→常规洗涤
血清堵塞刻度吸管洗涤
7.5mol/L尿素清洗→常规洗涤
油污烧杯试管洗涤
去油脂→常规洗涤 （去油脂方法：将量器倒放于具有强吸水力的几层厚纸上，置 100℃烤箱中烘烤半小时，使油脂溶化由厚纸吸收，再置碱性溶 液中煮沸趁热洗刷，即可除去油脂）。
生化实验的基本操作注意事项
生化实验的基本操作注意事项（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。
配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。
2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。
3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。
不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。
4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。
5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。
倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。
6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。
7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。
手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。
还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。
8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。
9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。
一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。
10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。
（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。
2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。
而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。
滤纸越致密，过滤就越慢。
3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。
沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。
最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。
4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。
折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。
放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。
撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。
生化实验五大技术
生化实验五大技术一.分光光度技术1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。
而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。
2.基本原理:（图1-1光吸收示意）透光度T=It/lo吸光度A=lg(lo/ I1)朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLcK 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度(mol/L)]摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为I.cm 的吸光度。
c=A/ε3. 定量分析:(1)标准曲线(工作曲线)法(2) 对比法元-KCLCxS SX X S X S X S X C A A C C C L KC L KC A A *,===即(3)计算法: e=A/ε(4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀)(5) 多组分湖合物测定4.技术分类分子吸收法&原子吸收法:可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法；5.应用方向有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法二电脉技术1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行脉动。
使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。
2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。
v=Q/6xrη3.影响电泳迁移率的因素:电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗4:技术分类:自由电泳(无支持体)区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等5. 电泳分析常用方法及其特点:小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳⑴醋酸纤维素薄膜电泳①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象②分离理应快，电泳时间短③样品用最少:④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球蛋白)⑵玻脂糖凝胶电泳①琼脂糖凝胶孔径较大，对般蛋白质不起分子筛作用②琼脂糖凝胶弹性差，不适含管状电泳------用于等电液鱼、免疫电话、血清脂蛋白等蛋白质电脉，以及DNA、RNA、核苷酸的分析(3)聚丙烯肤胶凝胶电泳①可调节孔径大小②机械强度好，有弹性③分辨率高，用途广④无电涉----------用于不同分子量蛋白质的电泳分离⑶ SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳该种电泳使蛋白分子相对迁移率R的大小完全取决于分子量的高低，因此可从已知分子a的标准蛋白的对数和相对迁移所作的标准曲线中求出供试品的分子量----------最常用定性分析蛋白质的电脉方法，特别用于蛋白质纯度检测&分子量制定⑷等电聚焦电泳技术利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质---------由于其分辨率可达 0.01pH单位，因此特别适合于分离分子相近而等电点不同的蛋白质组分。
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平时实验没有做成功，不一定是设计方案有问题，而往往是由于操作上面的不认真，或是一些小小的细节没有注意到。
以下是集各路朋友的一些经验，与大家分享（注意：实验需要靠自己摸索，下面的经验如果对你有启发的，切记先小试验证）：1. 提取质粒的时候，最后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。
所以这一步尽量挥发长一点时间，最好是空调吹热风，或是37度温箱放长一点的时间，我试过室温过夜，酶切很好。
2. 有关缓冲液和培养基配置1）将缓冲液配方中的成分分别以10－100倍配成母液储存，需要的时候只需将相应的母液混合，补加水稀释即可2）配培养基时通常会忘记各成分的量，如配LB时的三个成分不记得到底哪个是5g，哪个要10个，因此可以在常用的试剂瓶的标签上注明所需的量，如配LB时，在NaCl瓶外注明10g/L,yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很方便，不需要每次配之前临时翻书。
3. 有关PCR主反应液配置:在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行PCR鉴定，每次配置PCR反应液很繁琐，可以将其配置类似kit的形式，按你需要的反应体系列表，然后放大100倍配置100×主反应液（100次反应），其中含buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和Taq酶，然后可以10×分装或一管储存在－20度，在需要的时候拿出融开，然后按所需的PCR反应个数吸取相应的倍数，再补加相应反应倍数的Taq和引物，混匀后分装，这样做的好处如下：1）可极大的节省宝贵的时间，可早点收工，看球2）避免每次反应加样不均的可能3）大大减少PCR假阳性的产生4. 有关酶切反应液的配置:在做酶切时，也可以像PCR一样配置主反应液，每次反应前先列好反应的体系，算好需要的反应数，然后按所需反应的体系按所需反应数放大，加入buffer、酶、水；质粒栏空缺，然后混合后按除质粒DNA的体积分装，然后再在每管中加入相应体积的质粒DNA酶切，这样做的好处如下，特别是当同时有10几个阳性克隆需要鉴定时尤为明显：1）各反应成分均一2）可大大减少限制型内切酶的使用3）节省时间5. 做大肠表达时确定蛋白是否表达一般要煮样做诱前诱后检测,但很多时候煮出来的很黏影响跑胶效果.我发现如果先用8MUrea重悬细菌再煮效果会有极大改善.注:不能用Gu-HCl代替6. 超滤最合适用于蛋白的浓缩，更换缓冲液和除盐，对于按照分子量进行初分离的效果不是很好，理论和现实是有很大差别的^_^7. 我们有时要沉淀东西时，由于沉淀量很少，离心完之后不知道到底有没沉淀下来东西，所以离心时建议按特定的方向放置离心管（比如EP管盖放同一方向），这样你就可以在离心之前确定沉淀的大致部位。
另外看沉淀时可以对光看，这样就是颗粒状的细小沉淀也能看见的。
8. 大家都知道PMSF有剧毒，以前都是知道浓度和要配的体积的基础上,算出要称多少毫克的PMSF,其实也可以先称PMSF,称多少算多少,再调整异丙醇的体积，到达你所要的浓度。
这样就避免了你长时间和它接触。
（就是说让你改变溶剂体积，配合质量，使最终浓度不变）9. 在用酶标板加样的时候，蛋白样品常常会产生很多气泡，如果做荧光实验，由于灵敏度非常高，一点点微小的气泡都会影响很大，常常又不可能加消泡剂，我就用卫生纸，撕下来一小条，搓成小针，碰一碰气泡就破了，很好使。
（管家哥提示也可以准备一个小针头，打火机稍微加热，碰一下气泡即破，一般一次加热可以搓好几个。
如果体系可以离心，就瞬间离心下最好）10. 酶切或者PCR体系混合好以后，大家都会用手指轻弹EP管的底部来混匀溶液，常常出现很多气泡。
这时候轻弹液面上方的管壁，消除气泡就轻而易举了。
千万别弹液面下方的，气泡会越来越多。
11. 磁珠回收时，不要贪多，收集上层即可，太过影响DNA的纯度和质量，对链接、转化有影响。
12. 各种buffer都要完全融化后才能用，而且不管什么药品，如果只剩下最后一点底子了，最好放弃，因为可能会影响你的实验。
13. 动手前，一定要思路清晰，尽量把要做的事情列出来。
14. 做前一定要在笔记上写上1、2、3.....，在按照笔记一步一步做，否则容易出错。
（管家哥想说这点师弟师妹应该做的很好的吧，哈哈）15. 要加的酶阿，dNTP，水啊之类的能分装的话最好分装好一点，万一污染的话就全完了。
（管家哥提醒这点非常重要）16. 制备好了一批感受态，最好马上转化一种已知质粒，与此同时，取一点感受态接种到含抗性的固/液体培养基培养来做对照。
这样第二天即可以知道这批感受态是否还有外源质粒，又可以知道这批感受态转化效率的高低。
如果合格，那以后就可以放心使用！17. 做克隆挑斑时，我们可以在将沾有菌体的牙签丢到试管前，在一块相应抗性的平板上点一下，标注清楚，培养时间稍长一点，待长成较大菌落后收取。
以后需要哪一个菌,就在平板上挑取。
这样既方便快捷，又可以保证菌的一致。
18. 抽提质粒时，加入SloutionII和III后要求轻柔混匀。
我个人觉得不用这样，只要不是非常剧烈，可以快速混匀。
尤其可以运用在一次抽提多管质粒的时候，这样可以快速，而且效果一点也不差。
19. 抽提质粒时，用无水乙醇沉淀的时间可以由实验操作者来决定，如果时间充裕可以30min，否则8-10min也可以。
至于温度，个人觉得-20度好于常温。
如果加入可醋酸钠，会较容易形成盐类杂质，所以时间短一些更好！20. 不知道大家都是怎么做酶切的，我的体会是，酶切质粒时，两个酶分别单酶切比直接双酶切效果要好很多（管家哥提醒这个要视不同体系而定）。
我有一次双酶切两次都没连出来，后来分步单酶切，连接效率几乎100%。
可以第一个酶切完后直接把体系热失活，（根据酶说明书上一般是65度20min）然后直接向里面补第二个酶或者第一个切完后用氯仿抽提，把蛋白提出或者中间做一次回收，这个就要考虑回收效率和损失的问题了，但是这样除蛋白最彻底21. 任何试剂反复冻融对其效率都有很大地影响。
所以买来的试剂第一次使用时要注意按每次实验用量分装保存。
提取的模板或纯化的样品也最好分装保存，以备不测。
在大家的留言中，涉及最多的就是关于蛋白电泳方面（爱之深责之切啊），管家哥单独列出来：1. 跑page胶的时候，小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。
低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。
2. 做WESTERNBLOT 的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。
其实完全没有必要这样。
一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，保存起来，用的时候取出一块，没有任何影响。
这对于摸索条件的战友来说，节约了大量的时间。
3. 可将SDS－PAGE的积层胶，分离胶预先配好大体积如100ml储存在4度冰箱（注：10％AP，TEMED不加，切记！！！），每次配置时只需吸取相应体积的预制胶加入AP，TEMED即可，没必要每次制胶时候翻分子克隆，特别方便，而且，这样的预制胶可储存半年以上，不失为偷懒的绝佳方法；更关键的是可大大减少与丙稀酰胺的接触，因此大大减少中毒的机会。
4. 电泳时虽然小电泳分离效果要好一些，但2小时以上的等待的时间实在是痛苦，因此可以提高电泳至150V，但需要将整个电泳槽放在放满冰水的脸盆里散热，这样跑出来的胶分离效果丝毫不比低电压来的差，关键是时间大大节省，不需1h即可看结果了。
5. 做SDS-PAGE的时候，除了蛋白量上样一致，最好体积也一致，这样跑出来的胶各个泳道之间的band能做到一样宽，方便后面的比较，特别是WB。
做法就是拿1X的上样缓冲补全要加的样做到体积一致，否则跑出来会有的宽有的窄，特别是上样体积相差较大的。
6. 在把蛋白胶做成干胶时，很多时候会因为有气泡使胶裂掉，我的经验是在做胶时加上层膜前在胶上多加些水就不容易进气泡了，还有就是高温烘胶（管家哥提醒慎用），我喜欢放到60度烘箱里烘，这样水分蒸发速度快，即使有一些小的气泡也不会有影响，呵呵，这是经验之谈，我从来都没失手过，大家可以试试。
7. 做SDS-PAGE跑胶通常都是现配现用,但配胶要>1h,所以如果想第二天睡个懒觉而又不耽误跑胶可以于前一天晚上做好浓缩胶和分离胶,待凝聚后不要拔下梳子,把含胶玻璃板从制胶槽取下,用保鲜膜包上,注意玻璃板上下两边缘会有气体,所以需要加一点电泳缓冲液以避免胶内水分蒸发.然后放4度过夜.第二天直接拔下梳子行后续.国外好多公司出售脚既是如此,可以保存上星期。
8. 配置分离胶或者非变性胶时因胶凝时收缩可导致加样孔变浅.可以将加剩的胶放入4度以降低凝聚速度,而将凝胶放入37度促聚,并随时用4度加剩的胶补充下降的胶面。
9. 做westernblotting 转膜时，胶放在转膜缓冲液中一段时间，待胶在含有甲醇的缓冲夜中缩小的差不多后装好转膜装置，我的经验是把膜印在胶上直接在膜上画出预染maker条带，方便的很。
因为很多时候跑电泳时胶上的预染maker很清楚，等转膜后就不是分辨的很清楚了。
不过要注意画好预染maker后就不要使胶和膜发生对位移动了，以防maker失去参照价值。
10. 器具的清洁非常重要，开始做前，为了安全，尤其是装胶的厚薄玻璃板，可以先用中性洗涤剂和自来水反复冲洗，确保无洗涤残液后用蒸馏水冲洗2－3遍，然后用去离子水冲洗一遍。
最后用95％酒精再擦一遍后晾干备用。
11. 配胶最好现用现配，先配下层胶（分离胶），后配上层胶（浓缩胶或积层胶），而且在临灌胶前加APS并迅速混匀，即用移液枪抽吸与注入1－2次即可。
（管家哥提醒，有条件最好现配现用，如果是配好板子的，也最好尽快在2天内使用，同时保鲜膜注意密封好。
）12. 跑蛋白page的时候，一开始用加样针，太麻烦，发现用20ul枪+普通小白枪头点样，非常省事。
另外，点样时有可能看不清孔在哪，看远离你的那面胶，孔有反光的。
点样也点你对面的那块胶，省的总低头，干咱这行的容易得颈椎呀，爱惜自己。
13. 垂直电泳时，可在电泳糟中放入青霉素小瓶等，可自然使液面提高而不影响电泳，又很节约电泳缓冲液。
（管家哥没试过，慎用）14. 配胶时不要反复用枪混，稍微摇混就可以了，用枪混多次会导致胶凝不好影响电泳图的分辨率。
15. AP分装成500微升一管保存放-20度，避免AP用太久失效。
16. 倒胶时把玻璃板中的水用滤纸尽量吸干，因为微量的水存在会影响配的胶浓度。
17. 电泳完撬胶时根本不需要用撬胶板，在一平皿里装好水，把有胶一面的放在水中晃动几次胶很容易就脱落下来，一点没有问题，方便的很。
18. 点样时样品别忘了离心这步，因为上样含有固体沉淀会影响电泳图分辨效果。