Agilent 1200系列高效液相色谱仪操作规程
Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程
Agilent_1200型高效液相色谱仪标准操作规程1 目的建立Agilent 1200高效液相色谱仪的操作规程，保证其正确使用。
2 范围Agilent 1200高效液相色谱仪的操作与维护。
3 职责操作人员和责任人员对本规程的实施负责。
4 内容4.1 组成G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B自动进样器恒温器、G1315B可变波长检测器（DAD）、GB16A 柱温箱和一套Agilent 1200 CHEMSTATIONS 软件（软件光盘与说明书原件由工程部保存），打印机。
4.2 在线清洗若实验的流动相中含有的缓冲盐和离子对等试剂干后会留下固体印迹的物质时，必须要进行在线清洗过程。
首先配制好10%异丙醇溶液，经0.45μm有机膜抽滤后，装入已用滤过的10%异丙醇溶液洗过三遍的洁净玻璃瓶内，调整流量为2～3滴/分钟，10%异丙醇溶液必须每周更新。
4.3 开机接通电源，打开计算机，等计算机启动成功后，含四元泵的Agilent 1200高效液相色谱仪系统：从上到下，依次打开脱气机、泵、进样器、进样器恒温器、柱温箱和多波长检测器。
约30秒钟后，各部件自检完毕，进入待机状态，指示灯为黄色或无色。
双击桌面上的Instrument 1 Online，计算机进入工作站的Method and Run Control操作界面。
画面如下所示。
4.4 色谱条件的设定4.4.1 方法的编辑●在method and run control 状态下，单击“method”选择“edit entire method”，请先在复选框中选择method中需要编辑的项目。
●进入method information 在method comments 中输入方法的名称及相关描述，参数设置完毕后单击OK。
●进入泵参数设置画面，设置泵流速（ml/min），流动相组成，冲洗梯度，停针时间等，参数设置完毕后单击OK。
Agilent 1200 HPLC操作
Agilent 1200 HPLC 操作流程1、开机1.1 启动计算机，进入Windows系统，等待通讯连接完毕。
1.2 按以下次序打开仪器开关：脱气机——压力泵——进样器——馏分收集器——检测器，等待仪器自检完毕。
1.3 启动Chemstation Online工作站，进入联机状态。
1.4 检查流动相储液瓶液面高度，及时添加流动相，并更改仪器显示的参数。
2．分析/制备2.1 安装合适的色谱柱，注意连接处的螺旋头不要拧得太紧，以免损坏。
也不要过度拉拽塑料管道，以免照成六通阀漏液。
2.2 打开位于压力泵上的Purge阀，分别用流动相冲洗待用的管道，5 ml/min，10 min即可，以免管道中的气泡进入色谱柱，影响分析。
2.3 设置/调用待用的分析方法并保存，包括流速、流动相比例、进样量、检测波长。
2.4 关闭Purge阀，使待用流动相充分平衡色谱柱约20 min，以压力和吸收值基线平稳为准。
注意检查柱压是否异常，色谱柱两端连接处是否漏液。
2.5 将样品瓶放入进样盒的合适位置，设置好数据存放的路径，进样分析。
2.6 使用自动收集器时，点击收集器——Set up Fraction Collector——选中“Use Timetable”——点击“Fraction Preview”——点击“Load Signal” ：调出用制备方法跑的数据，调整TimeTable 里面的收集时间，点击“Refresh”即可看到可视化的接收情况，直至设置完所有需要接收的peak；点击“OK”，然后保存方法即可。
3. 关机3.1 分析结束后，用100%甲醇冲洗色谱柱至少30min以上，可使用Chemstation Schedule设置停止冲洗的时间。
注意：若流动相加酸／碱，先用高比例的水（90%水-10%甲醇or乙腈）冲洗30min以上，再切换到高比例有机相冲洗25分钟以上。
3.2 在Chemstation Online工作界面单击off，关闭高压泵和检测器，退出Chemstation Online。
Agilent1200高效液相色谱仪操作程序
1 目的：建立Agilent1200高效液相色谱仪标准操作程序，规范Agilent1200高效液相色谱仪的使用和操作。
2 范围：Agilent1200高效液相色谱仪。
3 责任者：QC仪器分析人员。
4 程序：4.1 仪器组成本套仪器由脱气机、低压四元梯度泵、柱温箱、可变波长紫外检测器和Agilent 1200色谱工作站组成。
4.2 基本操作4.2.1 准备工作4.2.1.1 按照SOP操作标准配置相应的流动相，用0.45µm的膜过滤并冷却至室温待用，流动相名称和容器序号必须对应，以及在流动过程中检查是否有气泡。
4.2.1.2 色谱柱准备：选择与被测物质匹配的色谱柱，并安装好。
4.2.1.3 预热分析天平5～10分钟，调节水平，确保称量准确。
调节操作环境的温湿度使其达到规定的要求。
4.2.1.4 测试液、对照液的准备：使用品种项下规定的测试液、对照液并按操作规程临用前配置。
4.2.2 接通电源并打开Agilent1200仪器和与之配套的计算机。
4.2.3 双击电脑桌面上的Agilent1200在线工作站（Instrument 1 online）4.2.4 参数设置测试条件和显示条件一致，则无需重新设置。
否则按检测条件设置操作参数。
（如：进样量、柱温箱温度、流量、波长、流动相比例、分析时间等），启动仪器测绘基线并观其状态。
4.2.5 分析操作当以上所有设置参数达到相应的设定值并且基线处于稳定状态时，窗口状态显绿，此时系统显示Ready，放采样瓶于相应位置，按Start键开始采样分析，工作站自动进行数据采集，采样完毕，自动进行数据处理并存盘。
分析前填写被测样品以及工作人员的详细资料，以便查阅。
4.2.6 报告的预览与打印等采样结束直接预览并打印或者双击桌面上的离线工作站（Instrument 1 offline）。
选择“打开”项，按进样信息打开需要的谱图，单击“预览”按钮，显示预览报告，有必要时可以对谱图进行修改，确认无误后，单击“打印”按钮，即可进行报告打印并保存图谱。
Agilent1200高效液相色谱仪操作规程
Agilent1200高效液相色谱仪操作规程一、Agilent1200化学工作站开机顺序(LAN卡联接)1、将待测样品按要求前处理,准备HPLC 所需流动相,检查线路是否连接完好,废液瓶是否够用等2、打开计算机,进入Bootp;3、打开主机各模块电源(不分先后),等待Bootp接收,等待各模块就绪后, 再双击工作站图标,进入化学工作站;4、调出一个分析方法,检查各参数的设置;5、旋开泵上的排气阀,将工作站中的泵流量设到5ml/min,溶剂A设到100%;6、在工作站中打开泵,排出管线中的气体数分钟;7、依此切换到B、C、D溶剂分别排气;8、将工作站中的泵流量设到1ml/min,多元泵则再设定溶剂配比,如A=80%, B=20%;9、关闭排气阀,检查柱前压力;10、待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况;二、数据采集方法编辑1 由运行控制进入样品信息,设定操作者姓名,样品数据文件名等。
2自动进样器参数设定:1)选择合适的进样方式, “Standard Injection”----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。
“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置,“UnRegistered”--此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。
“Use injectorprogram”---可以点击“Edit ”键进行进样程序编辑。
2)单击确定进入下一画面。
3 泵参数设定:(四元泵)1)在流量(Flow)处输入流量,如 1.5ml/min,在溶剂B处输入70.0,(A=100-B-C-D) ,也可插入一行时间列表(Timetable) ,编辑梯度。
在最大压力极限处(Pressure LimitsMax)输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
2)单击确定进入下一画面。
4 柱温箱参数设定:1)在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多键,选中与左侧一致,使柱温箱的温度左右一致。
安捷伦1200LC标准操作规程
安捷伦1200高效液相操作规程一目的规范检测仪器、设备的管理，确保仪器、设备的正常使用。
二范围适用于安捷伦1200高效液相色谱仪（自动进样）的使用和维护管理。
三职责研究所分析人员。
四内容1 仪器组成及开机1.1 本仪器由G1322A在线脱气机、G1312A泵、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315D 检测器、和Chem32工作站组成。
1.2 将电源插头分别插入插座后，依次打开脱气机、泵、柱温箱、自动进样器、检测器（从上到下）的电源开关。
开始自检后双击打开仪器1 联机图标，进入化学工作站。
1.3 旋开泵上的排气阀，将工作站中溶剂A设到100%，泵流量设到5ml/min，在工作站中打开泵，排出管线中的气体几分钟（不低于5min）。
切换到B溶剂排气。
1.4 将工作站中的泵流量设到1ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=10%，B=90%1.5 关闭排气阀，检查柱前压力1.6 配制90%水+10%异丙醇，每20分钟冲洗0.5分钟进行seal-wash，每三天更换一次溶剂。
1.7 用90%有机溶剂冲洗柱子和系统0.5小时，再用90%水冲0.5-1小时，待换成流动相且柱前压力基本稳定后，打开检测器，观察基线情况。
2 方法编辑2.1 进样器设置单击进样器图标，选择设置进样器，设置进样量。
2.2 二元泵设置单击二元泵图标，选择设置泵，设置流速、溶剂比例、泵停止时间（即采集时间），也可插入一行时间列表，编辑梯度；选择控制，设置定期清洗泵。
单击溶剂瓶图标，选择溶剂瓶填充量，设置溶剂瓶中溶液体积。
2.3 柱温箱设置单击柱温箱图标，选择设置柱温箱，设置柱温。
2.4 VWD检测器设置单击检测器图标，选择设置DAD信号，设置检测波长。
系统更换为流动相后，单击图标，选择控制，打开紫外灯。
2.5 方法保存在联机页面右下角LC参数窗口检查各参数设置正确后，在方法菜单下拉选项下单击方法另存为，设置方法名和保存路径。
Agilent 1200 型高效液相色谱仪操作规程
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1 开机1.1 从上至下依次打开 1200 LC 各模块电源，打开电脑主机。
1.2 待各模块自检完成后双击桌面上的“仪器1（联机）”图标，化学工作站自动与1200LC工作站连接。
1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 单击“视图”菜单中的“系统视图”、“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
2 脱气2.1 把流动相放入溶剂瓶中2.2 打开冲洗阀2.3 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
2.4 设“流量”为 5mL/min ，单击“确定”。
2.5 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“启动”，单击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止, 切换通道继续冲洗直到所有要用通道无气泡为止。
2.6 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“关闭”，单击“确定”关泵，关闭冲洗阀。
2.7 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“设置泵”选项，进入参数编辑画面，设流速为1.0mL/min。
2.8 单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入停泵的体积，单击确定。
3 数据采集方法编辑3.1 从”方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，点击除“数据分析”外的三项，单击“确定”。
3.2 样品信息从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，在对话框中输入“操作者名称”。
“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”（区别: “手动”每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。
“前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀,在“计数器”框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名。
3.3 方法信息在方法菜单中选择“方法信息”选项，在“方法注释”中加入方法的信息（如测试方法等），单击“确定”。
3.4 泵参数设定在桌面上点击泵图标，从选项菜单中点击“泵设置”，在对话框中“流速”处输入流量,如1mL/min ，在各通道“溶剂”处输入需要的比例 ,也可“插入”一行“时间表”，编辑梯度,在“压力限”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子 ,单击“确定”。
Agilent 1200液相色谱仪操作规程
Agilent 1200液相色谱仪操作规程一、准备工作：1、开启计算机系统电源进入Windows XP界面。
1、依次开启在线脱气机、泵、检测器电源开关，等待自检完毕。
2、待网络连接成功后，双击桌面上仪器1（联机） ,启动化学工作站，显示主机各单元图标画面。
3、单击泵图标→Setup Pump（1）设置泵参数：5ml/min（2）打开Purge阀（逆时针2—3圈）排气泡，平时常用此仪器需2—3分钟，不常用时需时间稍长些。
（3）开泵：单击泵图标，在图标上选Control→Pump→On，击OK，观察无气泡止。
（4）降流量=1ml/min（5）关闭Purge阀（顺时针）二、方法编辑：1、在Method and Run Control界面下，单击Method→Edit Entire Method,在该界面下四项都选中，击OK。
（1）在Method Comments下面方框中输入方法描述（如：This Method is for trainning）,击OK。
（2）在泵参数设置（Setup Pump）界面输入泵参数，单击OK。
（3）在检测器参数设置（VWD Signal）界面输入波长及响应时间。
2、在Signal Details: Instrument 1编辑界面击OK。
3、在积分参数设置（Edit Integration Events）界面击OK。
4、在Specify Report界面击OK。
5、在Instrument Curves界面击OK。
6、在Run Time Checklist 编辑界面选Data Acquisition和Standard Data Analysis 击OK。
7、方法保存：击Method→Save Method As 输入存盘方法文件名（扩展名为“ .m”）→确定→OK。
三、运行样品：1、打开Purge阀。
2、运行Instrument菜单下的System On。
3、待废液管中无气泡流出，关闭Purge阀。
Agilent 1200高效液相色谱仪(四原泵)操作规程
Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）操作规程1.目的建立高效液相色谱仪（四原泵）使用维护保养标准操作规程，确保测量结果准确、可靠。
2.适用范围本SOP适用于Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）的使用。
3.责任者化验员应严格遵照该操作规程，管理方负责监督本规程的实施。
4.定义无5.规程5.1准备在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相、供试品及对照品。
流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液面以下，供试品溶液和对照品溶液均用0.45μm的膜过滤。
5.2开机5.2.1打开电脑；5.2.2打开1200各模块电源；5.2.3等待各模块就绪后，双击桌面上的工作站图标，进入化学工作站；5.2.4旋开泵上的purge阀（逆时针转动，旋松即可，不要转动太多。
），将流速设置为5.0ml/min，将准备排气的管道的流量设置为100%（如：流路A比例则是100%-B-C-D），在工作站中打开泵，则开始排除管路中的气泡（时间约为5min）；其他通道同理操作。
5.2.5排气完成后，关闭purge阀（顺时针旋转，旋紧即可，不必旋的太紧。
）。
5.2.6连接色谱柱，用适宜的流动相冲洗色谱柱。
如果使用有盐的流动相，要先用80%的水过渡。
5.2.7更换方法规定的流动相。
冲洗约30分钟。
5.3设置方法5.3.1设置新方法5.3.1.1（自动进样器参数设定：单击工作站中“进样针”图标，选择“设置进样器”（一般选择洗针进样，清洗瓶位置一般为100位），单击“确定”按钮即可；5.3.1.2泵参数设定（四元泵）：单击工作站中“泵”图标，选择“设置泵”。
①在“流速”处输入流速（如1.0ml/min）；②在“停止时间”处设定所需采集时间；③在时间表中插入时间列表，编辑梯度；④在压力限处可设定最大耐高压，以保护色谱柱，单击“确定”按钮即可；5.3.1.3检测器参数的设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如280nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min（2s）。
Agilent 1200型自动进样高效液相色谱仪操作规程
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1目的规范Agilent 1200型高效液相色谱仪的操作，确保使用本仪器的检验结果准确可靠。
2实验步骤2.1开机2.1.1准备好流动相并安装色谱柱。
2.1.2依次打开仪器各部件电源开关(在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器或荧光检测器等)，约5 min后，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应无色或呈黄色。
2.1.3打开电脑，点击亿【Instrument 1 online】，约30s后，计算机进入工作站2.2色谱条件的设定2.2.1直接设定在操作页面的右下部——色谱工作参数中设定。
将鼠标移至要设定的参数，如进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等，单击一下，即可显示该参数的设置页面，键入设定值后，单击【OK】，即完成。
2.2.2调用已设置好的文件在命令栏【Method】下，选择【Load Method】，或直接单击快捷操作的【Load Method】图标，选定文件名，单击【OK】，此时，工作站即调用所选用文件中设定的参数。
如欲进行修改，则可同“4.2.1”项下，在色谱工作参数中做修改；也可以在命令栏【Method】选择【Edit Entire Method】，随后工作站即按顺序出现一系列参数设置页面，在每个页面中键人设定值，单击【OK】，即完成。
2.2.3编辑新文件先在命令栏【Method】下，选择【New Method】，然后再在命令栏【Method】下，选择【Edit Entire Method】，在每个参数设置页面下输入设定值，完成后，在命令栏【Method】下，选择【Save Method】，给新文件命名，单击【OK】，即完成。
2.3 仪器的运行当色谱参数设置完成后，单击工作站流程图右下角的【ON】，仪器开始运行。
此时，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的Not Ready变为绿色的Ready，表明可以进行分析。
液相色谱仪操作规程
液相色谱仪操作规程1. 开机准备：1.1启动计算机：打开计算机电源，登陆windows 操作系统1.2启动液相：打开Agilent 1200 各模块电源。
待Agilent 1200 各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，双击“仪器 1 联机”图标，或者“开始->所有程序->Agilent Chemstation->仪器 1 联机”1.3开启工作站：工作站打开，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”。
打开仪器控制视图：选择“视图->系统视图”，即可显示仪器控制视图，选择“视图->样品视图”，即可显示样品信息视图1.4 配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中。
设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上单击鼠标左键，出现图形，点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积1.5冲洗流动相管路：旋开溶液排空阀。
左键单击泵图标，点击“设置泵”，设置“流速”为5ml/min，分别将A,B,C,D 四个通道设置“溶剂”为100%(点击中灰色按钮，即可开启“%”设置框，输入需要设置的数值百分比后，单击右侧的空白框，A 相即可自动配置为100%-(%B+%C+%D)的百分比)，冲洗；对于G1312A/B(二元泵)，冲洗A、B 两个通道；对于G1310A(单元泵)，冲洗一个通道即可1.6 开启模块：单击每个模块右下角的按钮，可以单独启动模块，或者单击检测器按钮灯未点亮，检测器图形为黄色或者单击“启动”按钮，启动全部模块，检测器灯也将点亮1.7 监视基线：点击按钮或者“视图->在线信号”打开“在线图谱”。
点击“改变”按钮，选择“可选信号”中需要监视的信号，“添加”到“选定信号中”。
调整“窗口”中“X 范围”，如需要画“0”点基线，请选择“画零线”。
调整Y 轴“Y 轴范围”与“偏移量”或者选择“Y 轴自动调整”来选择合适的监视图形1.8平衡色谱柱、进样分析：关闭溶液排空阀(确认泵流量为1ml/min)，监视压力基线等待平稳后，可以进样采集分析2.样品分析1.1新建完整方法：选择“方法->新建方法”后，点击“方法->编辑完整方法”编辑新方法分别设置自动进样器参数，泵参数，检测器参数，柱温箱参数保存方法：选择“方法->保存方法/方法另存为”保存即时改变的方法：通过在线改变数据采集或者在线/离线改变数据分析参数而变更方法，可以通过选择“方法->保存方法/方法另存为”或者保存新的参数到现在的方法中或者另存为新方法调用方法：通过选择“方法->调用方法”或者调用已有的方法。
Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程
1.目的（Purpose）：规范Agilent1200型高效液相色谱仪的使用和维护，确保仪器正常运转。
2.范围（Scope）：适用于公司QC部Agilent1200型高效液相色谱仪的使用和维护。
3.职责（Responsibility）：QC仪器操作人员对本仪器的使用和维护负责。
4.定义（Definition）4.1高效液相色谱仪：用高效液相色谱法对物质进行定性、定量分析的仪器。
4.2紫外检测器是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器，其工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动性不吸收光，则吸光度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。
物理上测得物质的透光率，然后取负对数得到吸光度。
4.3示差折光检测器（RID）利用纯流动相和含有组分的洗脱液二者折光率之间的差别进行检验。
由于折光率随温度变化，检测器要求有一恒温小空间，使温度稳定，最好能控制在±0.001℃以内。
依据反射定律，在玻璃-液体界面，反射光的程度与入射角和玻璃与液体的折光率有关。
折光率改变时，反射光的强度也发生变化，在光电管中产生的信号被放大和记录下来。
5.安全注意事项（Safety Precaution）5.1流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
5.2在流动相配制好后，一定要进行脱气，除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。
5.3如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇/乙腈中。
6.程序（Procedure）：6.1仪器组成及电源6.1.1仪器组成本仪器由四元泵（G1311A）、标准自动进样器（G1329A）、柱温箱（G1316A）、VWD检测器（G1314B）、示差检测器（G1362A）、脱气系统（G1322A），各部件电源插头。
Agilent HPLC仪器组成及基本操作步骤
Agilent 1200 HPLC仪器组成及基本操作步骤Agilent 1200 HPLC 结构图高效液相色谱法（HPLC）：是在经典液相色谱法的基础上，以高压输送流动相，采用高效固定相及高灵敏度检测器，发展而成的现代液相色谱分析方法。
它具有分离效率高、选择性好、分析速度快、检测灵敏度高、操作自动化和应用范围广的特点。
一.溶剂瓶装置溶剂使用棕色玻璃瓶会避免藻类的生长；所用的水为重蒸水；溶剂选用色谱纯，使用前要用0.22 μm的过滤膜过滤；使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或盐缓冲液，建议不超过两天；避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。
避免使用下述可腐蚀钢铁的溶剂：碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)；高浓度无机酸，如硝酸、硫酸；可能含有过氧化物的色谱醇醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)。
这些在使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物；含强络合剂的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)；四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液。
二.在线脱气装置在线脱气机工作原理四元泵真空脱气机由一个四通道（有四个管状塑料膜）真空箱和一个真空泵构成。
打开真空脱气机的电源开关后，控制电路即开启真空泵，真空泵运行使真空箱内产生部分真空。
真空度由压力传感测定，根据传感器信号，真空脱气机通过运行或关闭真空泵来维持真空度。
溶剂瓶中的溶剂在LC泵的抽动下流过真空箱内的特殊管状塑料膜。
当溶剂经过真空管时，溶剂中溶解的气体将渗透过塑料膜进入真空箱，到达真空脱气机出口时，溶剂几乎被完全脱气而不含有任何气体。
三.Agilent 1200 四元泵当盐溶液和有机溶剂混合时，盐溶液可能与有机溶剂完全混溶，而不会出现沉淀。
但是在梯度阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来。
通常，阀的A通道用于水相/盐溶液，而泵的B通道用于有机溶剂。
如果使用的是这样的配置，盐将落回到盐溶液中，并被溶解。
A:水相 B:甲醇 C:乙腈 D:缓冲盐●当泵头安装有冲洗附件时，由于该附件中也有密封垫，这样就会增加活塞杆运动时的阻力。
Agilent 1200高效液相色谱仪操作规程(四元泵)
Agilent 1200(四元泵)高效液相色谱仪的标准操作规程（美国安捷伦公司）一、准备工作1．更换纯净水，冲洗色谱柱的纯净水需每天更换，以免长菌。
各溶剂瓶需明确标明瓶内所装液体。
2．打开液相色谱仪柱温箱，按照色谱柱上标示的方向，连接试验所需色谱柱，连接色谱柱时切勿装反。
3．依次打开色谱仪各模块电源，待各模块自检完成后，双击“HPLC联机”图标，化学工作站自动与1200 LC通讯，进入工作站。
4．将要使用的各通道上的滤头放入已经0.45um滤膜过滤、脱气（约10分钟）的水相或流动相中，点击“Methood and Run Control”界面中的“启动”图标，操作界面被激活，由灰色变为绿色；同时调出检测样品所需的方法。
5．打开Purge阀，点击泵图标，在Setup pump选项中设置流速和比例来排气泡。
若使用A、B两通道，则应分别以5ml/min的流速、100%的比例各排液5min。
（脱气机的内腔体积一般为12ml，故排液时间要长，以便能保证各通道管路中充满检测样品所需的水相和有机相）purge结束后，将泵的流速调为0，旋紧purge阀（切勿在5ml/min流速时旋紧purge阀）。
将流速设为1ml/min，以10%的甲醇水（或乙腈水），冲洗色谱柱30min。
6．点击泵的图标，改变所需通道（已purge完）的比例，已达到检测样品所需的流动相条件，平衡色谱柱。
同时按各溶剂瓶中液体的真实体积，设定溶剂瓶体积。
二、数据采集1．点击左上角样品瓶图标，选择样品信息，更改文件保存路径、样品名称、样品位置等信息按要求填写，确认无误后点击确定。
2．点击自动进样器图标，选择设置进样器，设定进样体积。
选择进样方式，一般选择洗针进样方式，洗针瓶位置一般设为样品托盘的第91位，洗针液体一般为50%的甲醇水溶液。
3．点击检测器图标，更改自己所需的检测波长，参比波长（如无需参比波长请关闭），打开紫外灯。
如为DAD检测器时，光谱信息储存请选择全部，以便为图谱处理时提供所需依据。
Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明-1ppt.
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● 进入时间编辑，在data acquisition 和standard data analy。。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
● 在method and run control 状态下，单击method，选择save method as 选项，编辑方法名存储。 4.2 进样操作 4.2.1 调用方法 进入method and run control 状态下，单击选择method 选项，单击 load method 选择所要使用的方法。此时系统将根据所选择的方法进行 相应的设置。开始前请根据方法对相应的参数例如：泵参数、自动进样 器参数、自动进样器恒温器参数设定、柱温箱参数设定、检测波长设定 等进行验证是否与方法设置中的一致。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
● 进入column thermostatted method 编辑状态，选择柱温箱温度， 设置完毕单击OK。 ● 进入VWD编辑状态，选择方法中所需波长、峰宽、响应时间等， 参数设置好单击OK。 ● 进入signal details 编辑画面，选择下拉菜单中的VWDIA 进行参 数设定，点击“DAD”图标，点击“Setup DAD Signals”，在 “Signals”下方的空白处输入所需的检测波长，并在前面的方框里 画“√”设置完毕单击OK。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
画面如下所示。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
4 色谱条件的设定 4.1 方法的编辑
Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明-2ppt.
Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的 参数，在命令栏“Integration”下，选择“Integrate”或单击快捷操作的 “Integrate Current Chromatogram”图标（左边有∫，右边两个峰），仪 器即按照新设定的积分参数重新积分，完成后，单击积分参数表上方 “Exit and save events to method”的快捷图标（右下角带勾），保存所 作的参数修改并退出。
6 打印报告
在命令栏“Report”下，选择“specify Report”或单击最右侧快捷操作的 “Specify Report Calculation and Print Style” 图标（右下角带叉的报告），根 据实际要求选择报告的格式和输出形式等，单击“OK”，即完成。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
8.5.1 流动相使用前请必须脱气、过滤。
8.5.2 使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash选项。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
8.5.3 关机前，用 100%的乙腈冲洗系统20分钟，然后关泵，（适于反 相色谱柱，正相色谱柱用适当的溶剂冲洗）。 8.5.4 及时更换Purge Valve内的过滤芯。（当打开Purge Valve时，压 力高于10bar，表明过滤芯已堵）。 8.5.5 使用合适的密封圈。 8.6 使用梯度比例时要注意事项：
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7. 关机 关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。 关闭Agilent 1200各模块电源开关。 8 . Agilent 1200 LC维护保养
安捷伦标准操作规程
安捷伦标准操作规程集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]Agilent 1200液相色谱仪操作规程设备组成：G1311A（四元泵）、G1329A（标准型自动进样器）、G1316A（柱温箱）、 G1314B（VWD检测器）、G1315D（DAD检测器）。
基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机，进入Windows XP画面。
（IP 地址由Bootp Service 程序写入）2、打开 1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击“仪器 1 联机”图标，或（点击屏幕左下角的“开始”，选择“程序”，选择“Agilent Chemstation”，选择“仪器 1 联机”）化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 点击“系统视图”，“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、手动旋开冲洗阀。
7、点击“泵”图标，点击“设置泵”选项，进入泵编辑画面。
8、设流速：3-5ml/min，点击“确定”。
9、点击“泵” 图标，点击“控制”选项，选中“启动”，点击“确定” ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
若使用缓冲盐，要加入泵头冲洗（seal-wash），点击“泵” 图标，点击“控制”选项，选择“用于泵密封垫清洗的泵”，开启清洗泵前要配制90%水+10%异丙醇，溶剂不能干涸。
10、点击“泵” 图标，点击“控制”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，手动旋紧冲洗阀。
11、点击“泵”图标，点击“设置泵选项”，设流速：min。
12、点击泵下面的瓶图标，选择“溶剂瓶添充量”如下图所示（以四元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积，点击“确定”。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，如下图所示选中除“数据分析”外的三项，点击“确定”，进入下一画面。
Agilent 1200型自动进样高效液相色谱仪操作规程
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1目的规范Agilent 1200型高效液相色谱仪的操作，确保使用本仪器的检验结果准确可靠。
2实验步骤2.1开机2.1.1准备好流动相并安装色谱柱。
2.1.2依次打开仪器各部件电源开关(在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器或荧光检测器等)，约5 min后，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应无色或呈黄色。
2.1.3打开电脑，点击亿【Instrument 1 online】，约30s后，计算机进入工作站2.2色谱条件的设定2.2.1直接设定在操作页面的右下部——色谱工作参数中设定。
将鼠标移至要设定的参数，如进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等，单击一下，即可显示该参数的设置页面，键入设定值后，单击【OK】，即完成。
2.2.2调用已设置好的文件在命令栏【Method】下，选择【Load Method】，或直接单击快捷操作的【Load Method】图标，选定文件名，单击【OK】，此时，工作站即调用所选用文件中设定的参数。
如欲进行修改，则可同“4.2.1”项下，在色谱工作参数中做修改；也可以在命令栏【Method】选择【Edit Entire Method】，随后工作站即按顺序出现一系列参数设置页面，在每个页面中键人设定值，单击【OK】，即完成。
2.2.3编辑新文件先在命令栏【Method】下，选择【New Method】，然后再在命令栏【Method】下，选择【Edit Entire Method】，在每个参数设置页面下输入设定值，完成后，在命令栏【Method】下，选择【Save Method】，给新文件命名，单击【OK】，即完成。
2.3 仪器的运行当色谱参数设置完成后，单击工作站流程图右下角的【ON】，仪器开始运行。
此时，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的Not Ready变为绿色的Ready，表明可以进行分析。
Agilent 1200HPLC操作方法步骤
Agilent1200具体操作方法1 准备工作1.1 流动相的处理将需要使用的流动相用真空泵过滤，有机相(甲醇、乙腈)只能用有机膜(红色)，水相最好用水膜(绿色)，也可以用有机膜。
过滤时先要将瓶子润洗，膜也要润湿。
水过滤两遍，有机相过滤一遍，过滤完后装入流动相瓶中。
1.2 机器准备首先打开电脑，再依次打开液相机器的各个模块电源。
模块电源打开顺序是从上到下或者从下到上。
开机以后显示本地连接，然后打开仪器联机软件，此时弹出CAG窗口，此窗口不用关。
2 冲系统(1) 打开冲洗阀，逆时针旋转松了即可。
(2) 单击泵图标，出现参数设定菜单，单击设置泵选项，进入泵编辑画面。
设置流速5ml/min，确定。
分别用水和甲醇，将ABCD四个通道全部塞到含水的溶剂瓶中，将四个通道比例分别设置为25%，开始冲洗系统，此时可以用温水，约为40~50摄氏度。
15min后，将四个通道塞到甲醇中，依同法操作。
启动泵即开始冲洗系统。
冲洗结束后，流速设为0ml/min，结束，确定。
(3) A通道：水，B通道：甲醇，C通道：乙腈，D通道：缓冲盐。
(4) 此时不要开紫外氘灯。
3 流动相脱气(1)拧开冲洗阀，逆时针旋转。
(2)主要是为了除去流动相中的气泡。
(3)设置泵，设置参数，设置溶剂瓶中流动相的填充量。
流动相流速5ml/min。
按照先脱水再脱盐再脱水再脱有机溶剂。
每个流动相脱气5min。
每个通道脱气时都是100%的比例。
(4)流动相脱完气后，拧上冲洗阀。
(5)此时不需要开灯。
4 平衡色谱柱(1)此时冲洗阀是关闭的。
(2)先用90%甲醇、10%水冲洗30min，流速1ml/min，或者甲醇浓度按照梯度递减。
(3)接着用所需测定样品的流动相冲洗柱子约30min左右，这时流动相比例不是自己设定的，而是直接调用方法中运行的。
冲洗到色谱基线基本上趋于平稳后，大约在正负0.2范围能波动，即可以结束平衡柱操作。
期间如果基线波动范围较大可以点击平衡按钮进行调整。
Agilent 1200高效液相色谱仪标准操作程序
Agilent 1200高效液相色谱仪标准操作程序1.目的使操作人员的操作步骤规范化。
2.适用范围适用于仪器安装、调试、校准后正常状态下进行的操作。
3.责任者质控科仪器分析员对此规程负责。
4.规程4.1清洗液、流动相、封柱液预处理4.1.1所有清洗液、流动相、封柱液在使用前均需过滤、脱气以及混合均匀。
4.1.2甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）、超净水、乙腈均需存放在棕色溶剂瓶中。
4.1.3含有乙腈的溶液以及不含乙腈但含有较高比例的其他有机溶剂的溶液在过滤时需使用有机相微孔滤膜，其它溶液在过滤时需使用水相微孔滤膜。
4.1.4存放清洗液、流动相、封柱液的溶剂瓶在每次装入溶液前需用少量过滤好的该溶液清洗数次。
4.2接通电源,开启连机电脑,再接通仪器电源,仪器自检完毕，处于准备进行状态。
双击桌面图标“仪器1联机”，打开Agilent 1200化学工作站，在左上角下拉框中选择“方法与运行控制”界面。
显示如下图标：注意：一定要先双击“仪器1联机”图标，进入联机状态，方可双击“仪器1脱机”图标，同时进入脱机界面。
否则，将无法联机。
4.2泵4.2.1 准备清洗液并装入溶剂瓶中，将吸滤器放入瓶内。
安装所需用柱子。
4.2.3 将吹扫阀（即“Purge”阀）打开，单击泵图标，选择“设置泵”，将“流速”设置为3.00ml/min。
选择清洗液所在通道（建议为A通道），单击“确定”，在“系统视图”中单击“启动”运行泵，泵运行10分钟后，观察压力，应小于10bar，若大于此压力，应更换purge阀滤芯，调节流速1.00ml/min。
4.2.4关闭purge阀，观察柱压是否正常。
4.2.5选择“控制”，在“用于泵密封垫清洗的泵”（Seal Wash）中选择“定期清洗”，“周期”设置为5min，“持续”设置为0.1min，同时观察试剂架中10%异丙醇是否充足，相应的废液瓶是否有充足空间。
4.2.6 根据“柱使用记录中所规定的方法”清洗柱子约30分钟后，在“控制”组中的“泵”选项中选择“待机”，待系统压力降到10bar以下后，更换流动相，在“控制”组中的“泵”选项中选择“启动”改用流动相平衡柱子，约30分钟后柱子处于平衡状态。
Agilent高效液相色谱仪技术手册1.3
编号：部门：质量控制室版本：1.3起草：审核：替代：1.0Q A审核：批准：执行日期：1 目的建立Agilent1100/1200高效液相色谱仪技术手册，规范Agilent1100/1200高效液相色谱仪的使用、维护行为。
2 范围海正药业成品药质量控制室和研发稳定性对Agilent1100/1200高效液相色谱仪的使用、维护。
3 职责质量控制室、研发稳定性、计量中心4 规程4.1操作规程4.1.1开机4.1.1.1 打开计算机，进入WindowsXP（或Windows 2000）画面，并运行Bootp Server程序。
4.1.1.2 打开 1100/1200 LC 各模块电源。
4.1.1.3 待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100/1200LC 通讯，进入的工作站画面如下所示。
编号：部门：质量控制室版本：1.3起草：审核：替代：1.0Q A审核：批准：执行日期：4.1.1.4 从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面，单击“View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”，“Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
4.1.1.5 把流动相放入溶剂瓶中。
4.1.1.6 打开Purge阀。
4.1.1.7 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
4.1.1.8 设Flow：5ml/min，单击OK。
4.1.1.9 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
4.1.1.10 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge Valve。
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Agilent 1200系列高效液相色谱仪操作规程
一、开机
1.按顺序开启显示器、计算机主机，依次打开仪器各部件电源开关，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应呈黄色；
2.双击桌面“仪器1联机”，约30s后，进入工作站操作界面；
3.调出一个分析方法，检查各参数的设置；
4.用100%分析纯甲醇冲洗柱子和系统30min后，再用95%水冲0.5-1h，待换成流动相且柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
二、数据采集方法编辑
（一）直接设定：
1 由“运行控制”进入样品信息。
设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2 泵参数设定：（以二元泵为例）
（1）在流量处输入流量,如1ml/min，在溶剂B处输入70.0,(A=100-B) ,也可插入一行时间列表,编辑梯度。
在最大压力极限处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
（2）单击确定进入下一画面。
3 柱温箱参数设定:
（1）在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多>>键,选中与左侧一致，使柱温箱的温度左右一致。
（2）点击确定进入下一画面。
4 VWD检测器参数设定:
（1）在波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在峰宽(响应时间)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
（2）在时间列表中可以插入一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。
（3）点击确定进入下一画面。
5 单击方法菜单，选中保存方法，输入一方法名，如“test”，单击确定。
（二）调用已设置好的方法文件：在命令栏“方法”下选择“调用方法”，选定“方法文件”，单击确定即完成。
（三）编辑新方法：在命令栏选择“编辑完整方法”，然后在每个参数设置页界面下输入设定值，完成后在命令栏“方法”下选择“另存为”进行保存。
三、数据采集
1.由主菜单上的序列进入序列参数，设定操作者姓名、数据文件路径等。
2.由主菜单上的序列进入序列表，设定样品瓶位置、样品名、方法名称、进样次数等，设置好后点击确定。
3.单击样品信息栏上方绿色的“开始”，自动进样器即按照设置的程序分析，如欲终止分析，可单击样品信息栏上方红色的“结束”，否则仪器将运行至色谱参数设置中所设定的分析停止时间方结束分析。
四、数据处理
1.双击“仪器1脱机”，打开脱机工作站。
2.调用色谱图：在命令栏“文件”下，选择“调用信号”，选择色谱图文件名，单击确定，画面中即出现调用的色谱图。
3.积分：先调用所要分析的色谱图，在命令栏“积分”下，选择“积分”，此时仪器按照内置的积分参数给出积分结果。
如欲对其中某些参数进行修改，可在“积分”下，选择“积分事件”，此时在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际需要输入修改的参数如斜率、峰宽、最小峰面积、最小峰高等，单击“积分当前色谱图”，仪器则按照新设定的积分参数重新积分。
4.报告设置：在命令栏“报告”下选择“设定报告”，在定量结果栏中，选择计算（面积百分比，外标法，内标法等）；在目标栏，选打印机打印，或屏幕打印，单击确定。
五、关机
1.关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流速0.5-1ml/min，再用100%分析纯甲醇冲0.5小时，然后关泵。
2.退出化学工作站及其它窗口，关闭计算机、Agilent 1200各电源开关。
六、注意事项：
1.氘灯是易耗品，应在换流动相之后开灯，长时间（>）不分析样品即关灯；
2.开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力>10bar，则应更换排气阀内滤芯。
3.流动相使用前必须过滤，不要使用2日存放的蒸馏水（易长菌）。
4.配制90%水+10%异丙醇，以每分钟2-3滴的速度虹吸排出，进行seal-wash清洗泵。
5.色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满甲醇，两端封死。
6.流动相溶剂不能干涸，需浸没滤头。
制定人：李沉纹
制定日期：二〇一二年三月十四日。