鸡胚的结构及尿囊腔接毒
鸡胚1、尿囊腔接种2、绒毛尿囊膜接种 3、卵黄囊等接种方式资料
室端 3）用钢锥在气室中央锥 一 小孔
4） 用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小
孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。
5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，
每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。
方法二：
1）2）同一 3）将卵横放在卵座上， 胚胎位置向下。在卵长 径的1/2处用碘酊和酒 精消毒。 4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm， 注入病毒液0.1-0.5ml 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上， 冻死胚胎，防止出血。 根据接种途径的不同，收获相应的材料
1、绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜
2、尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml）
3、卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体
4、羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入
0.1-0.2ml接种物
5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻
卵并检卵一次，24h内死亡者废弃。
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
材料
1、鸡胚 10日龄
2、病毒 鸡新城疫病毒（NDV） 3、照蛋灯 4、打孔器 5、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球
鸡胚的选择
最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 受精卵的壳最好是白色的
受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
鸡胚1、尿囊腔接种2、绒毛尿囊膜接种 3、卵黄囊等接种方式
2、用碘酊和酒精消毒后，
小心用刀尖撬起卵壳，造
成卵窗。
3、在气室端中央钻一个 小孔。
4、用针尖挑破卵窗中心
的壳膜，切勿损伤其下的
绒毛尿囊膜，滴加生理盐
水于刺破处。
5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造 成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷 而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理 盐水迅速渗入。 6、用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。
鸡胚接种方法
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低， 病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途 径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒。
鸡胚的结构与功能
卵壳 壳膜 气室 绒毛尿囊膜 尿囊腔 羊膜与羊膜腔 卵黄 卵白
羊膜腔
卵壳
卵白 尿囊腔
卵壳膜 气室
绒毛尿囊膜
卵壳 上有细孔，进行气体交换 壳膜 使气体分子和液体分子在内外两方 面进行交换。
卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
材料
1、鸡胚 10日龄
2、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球
鸡胚的选择
最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 受精卵的壳最好是白色的
受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
孵育
孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ 相对湿度：50%-60%
必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵
化5-6天以后
从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。
检卵
自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。
孵育4-5日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育
情况。
室端 3）用钢锥在气室中央锥 一 小孔
病毒的鸡胚接种技术
病毒的鸡胚接种技术目的要求掌握鸡胚培养病毒的接毒和收毒方法，明确鸡胚培养病毒的应用。
仪器及材料受精卵、恒温箱、照蛋器、接种箱、蛋架、一次性注射器（1～5ml）、中号镊子、眼科剪和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、锉、煮沸消毒器、消毒剂（5%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸或3%来苏儿）、新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗。
方法与步骤（尿囊接种为例）1．选择9～12日龄的健康鸡胚，最好是SPF鸡胚。
为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。
选好后用孵化箱孵化，要注意温度、湿度和翻蛋。
孵化最低温度为36℃，一般为37.5℃，相对湿度为60%。
每日最少翻蛋3次。
健康鸡胚：照蛋时可见清晰的气室、血管及鸡胚的活动。
2．病毒材料的处理怀疑污染细菌的液体材料：加抗生素（青霉素1000IU和链霉素1000μg/ml）置室温1h或4℃冰箱12～24h→高速离心，取上清液→细菌滤器滤过除菌若用新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗，则无菌操作用生理盐水将其稀释100倍。
3．照蛋以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置，标明胚龄及日期气室朝上立于蛋架上。
4．消毒先碘酊后酒精，由内向外呈同心圆状消毒5．打孔用灭菌小锥子在在气室中心或远离胚胎侧气室边缘，避开大血管进行打孔，孔径以1ml注射器针头容量刺入为宜。
6．注入病毒材料用一次性1ml注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插入气室，刺入尿囊，向尿囊腔内注入0.1～0.3ml。
7．封孔并继续孵化注射后，用熔化的石蜡封孔，置温箱中直立孵化3～7d。
孵化期间，每6h照蛋一次，观察胚胎存活情况。
弃去接种后24h内死亡的鸡胚，24h以后死亡的鸡胚应置0～4℃冰箱中冷藏4h或过夜（气室朝上直立），一定时间内不能致死的鸡胚也放冰箱冻死。
8．收毒收毒原则：（1）先冷藏再收毒。
（2）接种什么部位，收集什么部位。
（3）固液分开收集。
（4）无菌收集。
（5）冷冻保存。
收毒方法：无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳及壳膜，用灭菌镊子夹起并撕开或剪开气室中央的绒毛尿囊膜，然后用灭菌吸管从破口处吸取尿囊液，注入灭菌青霉素瓶或试管内。
鸡胚接种方法
3.绒毛尿囊膜接种 绒毛尿囊膜接种常常用于分离和繁殖在绒毛 尿囊膜上产生斑和痘的病毒，如牛痘、天花、 单纯疱疹和鸟痘病毒。可在绒毛尿囊膜上滴 定这些病毒，因为感染性病毒颗粒的量可以 通过产生的斑和痘的数目来计算。还可用于 抗体滴定试验，因为斑和痘的个数减少的程 度与抗体浓度有关。
卵窗
定位：将胎盘部分
鸡胚的孵育
受精鸡卵孵育时不要擦洗，以免受细菌污染。最 好用能自动调节温度、湿度、气流及翻卵的孵卵 箱孵育。如没有，也可用普通恒温箱，但要在温 箱中放一盛满水的方盘，以保持适当的湿度。孵 育应在 37℃－ 39℃、40%―70%的相对湿度下 进行。湿度太高会使气室发育过度，而湿度过低 又会导致气室发育不良，甚至造成鸡胚死亡。通 气也很重要，如果空气不流通，也可造成鸡胚死 亡。为了避免胚胎膜粘连和胚胎发育不均匀，应 每隔一段时间转动一次受精鸡卵。
第12天胚长357cm胚重507g身躯覆盖绒毛肾肠开始有功能开始用喙吞食蛋白第13天胚长434cm胚重737g头部和身体大部分覆盖绒毛胫趾出现角质鳞片原基蛋白通过浆羊膜道迅速进入羊膜腔眼睑头发亮部分随胚龄增加而逐渐减少第14天胚长47cm胚重974g胚胎全身覆胚胎开始改变为横着的位置逐渐与蛋长横平行二接种途径1
第5天
胚长1.0cm，胚重 0.13g，生殖腺已性 分化，组织学上可确 定胚的公母，胚极度 弯曲，整个胚胎成 “C”形，可见指（趾） 原基，眼的黑色素大 量沉着，照蛋时可明 显看到黑色的眼点， 俗称单珠或黑眼；
第6天
胚长1.38cm，胚重0.29g， 尿囊已达蛋壳膜内表面， 卵黄囊分布在蛋黄表面 的1/2以上，由于羊膜壁 上的平滑肌收缩，胚胎 有规律运动，蛋黄由于 蛋白水分的渗入而达到 最大重量，由约占蛋重 的30.01%增至65.48%， 喙原基出现，躯干部增 长，翅脚已可区分，照 蛋时，可见头部和增大 的躯干部两个小圆团， 俗称双珠；
病毒接种鸡胚步骤
流感病毒鸡胚接种材料：9-11龄鸡胚、孵蛋箱、照蛋器、开卵钻、石蜡、注射器、碘酒、70%酒精、镊子、二级生物安全柜等。
方法：1 照蛋：⑴避开鸡胚及主动脉，找寻两血管间隙划线（最佳点）⑵划线在血管之间⑶标记蛋时不要太靠近气室处，因后面去壳时可能敲掉，导致标记不见2 开孔：⑴开孔前先用75%酒精擦一下，由下而上或由上至下一遍即可，不可反复擦⑵开孔勿太大（太大不易封住，且易染菌）3 注射：⑴针头45度斜插入孔中，至针头尾部到达蛋壳⑵注射后不要用力过大，抽出时不要过快⑶一针插入鸡胚，不要在里面搅拌注：⑴握病毒管时不要握底部，易使病毒失活，融化时最好冰上融化，或流水冲洗⑵吸取液体时先混匀尿囊腔接种：照检后画出气室边界和胎位，在胚胎面与气室交界处边缘约1mm处并避开血管做一标记，此即为注射点。
在点及周围用75%酒精消毒，并用钻蛋机钻开一个约2mm长小口，勿损伤壳膜。
用注射器注入流感病毒0.1-0.2ml，然后用石蜡溶化封口，置33-35度孵箱培养。
每日照检鸡胚一次，于接种后24h 内死亡者为非特异性死亡应弃去。
甲型流感一般培养44-48h收获，而乙型流感病毒培养72h后进行收获。
如病毒用冷冻干燥标本进行传代，无论甲型还是乙型均培养72h后才进行收获收获前鸡胚须置4度冰箱6h或过夜，但不能置时间过长，过长会引起散黄。
如急于收获亦可置-20度冰箱1h左右，但不能过长，过长会引起鸡胚结冰，再融化时卵黄膜就破碎，卵黄就流出。
预冷的目的是：将鸡胚冻死使血液凝固，避免收获时流出红细胞并同尿液或羊水里的病毒发生凝集，造成病毒滴度下降。
收获时，用75%酒精消毒气室部卵壳，用消毒镊子轻轻敲碎气室部卵壳并取走之，再用另一无菌镊子撕去气室部壳膜，然后用无菌吸管通过绒毛尿囊膜进入尿囊腔，吸取尿囊液，置试管内4度或低温保存待用。
P3规范：⑴做有毒物需穿两件衣，⑵物从物流走，人从人流过，⑶所有沾毒东西都装2层塑料袋，密封，灭菌。
鸡胚发育图解
照蛋时卵黄不易
转动，胚与卵黄
囊血管形似蜘蛛，
俗称“小蜘蛛”。
尿囊是一个很小
的水泡，眼睛开
始沉积黑色素。
精选ppt
8
鸡胚孵化图片
第5天 胚胎被已 围在一个透明的
水泡（羊膜）中，
羊膜内充满羊水，
胚体弯曲，眼睛
黑色素大量沉积，
卵黄囊已包围
1/2的卵黄，照 蛋时可见到眼睛
的影子，俗称
“单珠”或“黑
眼”。肉眼可见
精选ppt
2
鸡胚孵化图片
未受精蛋 种蛋中
通常被称为“卵
黄”的部分，实
际上只是一个细
胞，即雌性生殖
细胞或卵子。卵
黄绝大部分是营
养物质，细胞核
和大部分细胞质
集中为一个不规
则的小白点，浮
于卵黄上面和卵
黄膜下面，如图
中箭头所示。这
个蛋随经孵化不
能发育，称未受
精选ppt
3
精蛋。
鸡胚孵化图片
受精蛋 鸡的卵子
胎儿开始大量
吞食蛋白羊水。
精选ppt
17
鸡胚孵化图片
第14天 尿囊血管
充分发育并紧贴
壳膜，通过内外
壳膜，蛋壳排除
二氧化碳和水蒸
气，吸进氧气；
尿囊液增加，主
要集中于羊膜周
围，新陈代谢旺
盛，胎儿增重迅
速，解剖胚蛋时
尿囊血管很容易
破裂。
精选ppt
18
鸡胚孵化图片
第15天 尿
囊所包
围的蛋
白减少，
照视胚
蛋，小
天增大了一倍，
几乎包围了卵黄
囊，从第4天到第
8天是尿囊发育的
实验一 鸡胚接种
造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊
膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳
膜上的生理盐水迅速渗入。
6、用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊
膜上。
7、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖 于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气 室中央的小孔用石蜡密封。
8、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵
窗向上。
（三） 尿囊腔接种 主要用于正粘V和副粘V，如流感V、新城 疫V的分离和增殖。
三、实验材料
1、鸡胚 9-11日龄
2、病毒 新城疫病毒
3、照蛋灯
4、打孔器
5、石蜡
6、注射器
7、蛋座
8、酒精棉球、碘酊棉球
四、鸡胚接种方法
实验前准备
1、用检卵灯检查鸡胚活力。 2、用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在 将要接种的部位做好记号。 3、对鸡胚进行消毒。
（一）卵黄囊接种法
主要用于虫媒披膜病毒以及 鹦鹉热衣原体和立克次氏体等 的分离和增殖。 方法一： 1）取6-8日龄鸡胚，用检卵灯 照视画出气室和胚胎位置后， 垂直放置在卵座上(大头向上) 2）用碘酊和酒精消毒气室端 3）用钢锥在气室中央锥一小孔 4）用注射器吸取病毒悬液，沿 气室端所穿小孔垂直刺入3cm， 注入0.1-0.5ml病毒液。 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵 箱内继续孵育，每天翻卵1-2次， 24h内死亡者废弃。
5、尿囊腔
胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，
初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿
囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13
天后，尿囊液开始变得混浊。
6、羊膜与羊膜腔 其中盛有羊水，胎体浸泡于
其中
7、卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
8、卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
鸡胚培养和细胞培养
第一节鸡胚接种一、鸡胚的结构鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人类和动物病毒的生长增殖，是常用的病毒分离培养方法之一（衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚）。
目前，鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒，尤其在禽类病毒的研究上应用较多。
可用于病毒的分离、鉴定，抗原和疫苗制备，以及病毒性质的研究等。
虽然随着组织培养技术的不断发展，不少病毒已不再用鸡胚来分离培养，但对某些病毒来说，鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。
鸡胚培养的优点是，来源充足，价格低廉，操作简单，无需特殊设备或条件，易感病毒谱较广，对接种的病毒不产生抗体等。
当然，鸡胚培养也有其缺点，即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外，多需用第二试验系统来测定病毒存在与否；非SPF鸡胚，亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。
因此，用鸡胚分离培养病毒时，必须考虑这些问题。
原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚，最好用SPF鸡胚。
一般说来，孵育至8-14天的鸡胚最有利于病毒的生长，因为此阶段鸡胚发育日趋完善，各种脏器均已形成，已能经受接种物的适当刺激，同时胚胎细胞幼嫩，骨胳不健全，还未长出羽毛，很利于病毒在胚胎中增殖，同时也有利于收获高滴度的病毒，14天以后，胚胎骨骼硬化，胚皮表面羽毛渐生，已不便感染病毒，特别是已不利于收获病毒材料。
在操作鸡胚时）一定要注意到这一点。
孵育至21天左右，羊水和尿囊液已全部被胚胎吸收，一部分卵黄陷入胚胎腹部，另一部分则仍留在体外，胚胎已发育成小鸡，破壳而出。
鸡胚的基本结构如图，从图中可以看出，鸡胚的最外层为石灰质的卵壳，上有气孔供气体交换，卵壳之下为壳膜，很易与卵壳分离，其功能是使气体分子与胚胎内的液体分子在内外进行交换，因此在孵育时需要有一定的湿度和空气。
如果湿度太低，鸡胚就容易脱水、引起鸡胚死亡。
气流不通，鸡胚缺氧，同样会造成鸡胚死亡。
鸡胚的钝头（俗称“大头”），是气室，其功能是呼吸和调节胚内压力。
病毒接种、收获尿囊液操作步骤
病毒接种1.选胚：首先，在照蛋间挑选出血管模糊，没有生命迹象的鸡胚。
2.标记注射点：接着用记号笔在气室上方约1mm处画线，在线的下方挑选注射点，在挑选注射点时应注意避开主血管，避开鸡头。
3.打孔：打孔前先用碘酊在气室部位消毒，用打孔器在气室线上方打孔。
注意：孔不宜过大，否则会导致封蜡不完全，甚至将蜡油流进鸡胚内部。
4.注射病毒：用注射枪向每个鸡蛋孔内注射0.2ml病毒稀释液，注射时针头朝向注射点方向，每次注射停留4~6s。
5.封蜡：注射完毕，用镊子夹取酒精棉沾上蜡油，进行鸡胚封蜡。
6.培养：将封蜡完成的鸡胚放入孵化箱中培养。
孵化箱温度设置33~35℃，湿度50%~70%，甲型流感病毒培养48~52小时，乙型流感病毒培养66~72小时。
需准备的仪器试剂：手电筒，记号笔，碘酊，棉签，量筒（稀释），酒精灯，废液瓶，打孔器，三脚架，蜡块，连续注射器，一次性注射器，移液枪，移液枪枪头，镊子，纱布，打火机，蓝盖瓶。
注意事项：（1）、前一天将病毒原液拿至4℃冷库；（2）、前一天准备好需要灭菌消毒的物品，高温高压灭菌，烘干；确定好参加实验人数，准备好无菌服；（3）、接种当天早上将接种所需生物安全柜开紫外杀菌；收获尿囊液1.鸡胚消毒:将培养好的鸡胚放入4℃冷库进行冷胚6h以上；首先，用0.1%的新洁而灭溶液将鸡胚进行消毒，每次消毒1~2分钟。
接着，在鸡胚的气室用碘酊消毒。
2.烙蛋：将经过消毒处理的鸡胚在烙蛋器上进行烙蛋。
3.收获：先用小镊子将壳膜撕破扒出气室，再用大镊子压住鸡头，同时用5ml移液枪吸取尿囊液。
收获的尿囊液应是澄清、微黄状。
4.保存：将收获的尿囊液放至6℃冷库保存。
需准备的仪器试剂：新洁而灭溶液，碘酊，棉签，烙蛋器，废液瓶，镊子，5ml移液枪，5ml移液枪枪头，蓝盖瓶（数量由病毒原液体积决定）。
注意事项：（1）、前一天准备好需要灭菌消毒的物品，高温高压灭菌，烘干；确定好参加实验人数，准备好无菌服；（2）、收获当天早上将收获所需生物安全柜开紫外杀菌；血凝滴度试验1.稀释病毒液：取一块洁净的“96”孔血凝板，横向摆放。
鸡胚接种技术
这些病毒被接种到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，
复制的病毒被释放到尿囊液中，因此，在尿囊液中喊 与大量的病毒。
鸡胚接种技术
——鸡胚的接种途径和方法
✪
卵黄囊接种：
这些大的病原体能在卵黄囊的内皮细胞中快速生长。
用于虫媒病毒、衣原体及立克次体等的分离和繁殖，
鸡胚接种技术
——鸡胚的结构与生理 ✪ 鸡胚的发育过程：Day 3
鼻、腿、翅开始形成，器官出现。 尿囊开始长出，胚胎的位置与蛋的长轴垂直。 胚胎与延伸的卵黄囊血管形似蚊子。
鸡胚接种技术
——鸡胚的结构与生理 ✪ 鸡胚的发育过程：Day 4
尿囊和羊膜腔形成。 卵黄体积继续增大，卵黄囊血管包围卵黄近1/3。 胚胎与卵黄囊血管形似蜘蛛。
主要用于分离和繁殖在绒毛尿囊膜上产生斑点状和痘 可在绒毛尿囊膜上滴定这些病毒，通过产生斑和痘的 数目来计算感染性病毒颗粒的数目。 还可用于抗体滴定，因为斑和痘数目减少的程度与抗 体浓度有关。
鸡胚接种技术
——鸡胚的接种途径和方法
✪
尿囊腔接种：
应和传代培养。
用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适
✪ 卵黄囊
主要营养的存储场所，在胚胎发育早期供给鸡胚营养
✪ 卵白
在胚胎发育晚期供给鸡胚营养
鸡胚接种技术
——鸡胚的孵育和检查
✪ 受精鸡卵的选择
接种病毒的受精鸡卵应未感染已知病毒或其它微生
物，最好来自无特定病原体(Specified Pathogen
Free, SPF)鸡群。 受精卵的壳最好是白色的，利于检卵灯观察鸡胚的 发育情况。 受精卵必须新鲜，保存在5~20℃不超过10天。
鸡胚接种技术
——鸡胚的孵育和检查
实验一 鸡新城疫疫苗(一)
尿囊膜贴在卵壳内壁上，用镊子夹住将其撕脱下来即
可。
胚胎：消毒、打开气室卵壳后，用镊子撕破卵壳膜和
绒毛尿囊膜，夹起胚胎，用剪刀剪断卵黄带，将胎儿
放灭菌容器内即可。
8.鸡胚接种注意事项
（1）接种材料一般都应按每毫升1000ＩＵ或μg加入 青、链霉素。
（2）接种位点应避开鸡胚、血管和胚头，以免针头 刺伤鸡胚而造成接种后的损伤性死亡。
实验一 鸡新城疫油乳剂灭活苗的制备技术（一）
新城疫病毒可以在鸡胚中大量增殖，收获的鸡胚
尿囊液中即含有新城疫活病毒，将收获的尿囊液经过
灭活，并加入佐剂，便制成了新城疫灭活疫苗。
目的和要求：
1.掌握鸡胚的孵化过程和鸡胚的接种途径、接 种方法； 2.掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔的增殖过程， 掌握接毒和收毒的方法。
头约1cm左右。
4.病料接种：
若用鸡胚分离、培养病毒，则应选9～12日龄之
间的发育鸡胚。许多病毒，特别是大多数禽病毒都能
在鸡胚或鸭胚中生长繁殖。接种时应先在照蛋器下检 查鸡胚是否健康、活泼，并划出气室和接种部位。然 后严格消毒接种部位和气室（先用碘酊消毒，再用 70%酒精消毒），用打孔器打孔后，每胚接种处理好
水瓶中，使两种抗生素在生理盐水中的含量均
达到1000-2000 IU(μg)/ml。将注射用生理盐
水3-4ml注入一瓶新城疫Ⅳ系弱毒疫苗中，稀释。
3.照蛋定位 ： 接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚 和弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室 位臵，再于胚胎侧画出接种位点（进针点）， 接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚
此法适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣
原体及立克次氏体的分离、培养。接种方法：
气室端蛋壳消毒后，在气室中央打一小孔，用
鸡胚接种技术
鸡胚接种技术
尿囊腔接种法
鸡胚接种技术
解剖与收获
接种后收获病毒的时间根据不同病毒而异，甲型流感病 毒一般培养44～48h，乙型流感病毒培养72h。
鸡胚接种技术
绒毛尿囊膜接种法
鸡胚接种技术
解剖与收获
用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下，放入 加有灭菌生理盐水的培养皿内，观察病 灶形状或用于传代，或用50％甘油保存。 同时作无菌培养。
鸡胚接种技术
（三）尿囊腔接种
广泛应用于流感病毒、流行性腮腺炎病 毒和新城疫病毒的适应和传代培养，这 些病毒被接种到尿囊腔后，可在内皮细 胞中复制，复制的病毒被释放到尿囊液 中，因此，在尿囊液中含有大量的病毒。
鸡胚接种技术
（二）绒毛尿囊膜接种
常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒 的分离，因为这些病毒在绒毛尿囊膜上可形 成肉眼可见的斑点状或痘疱状病灶。
另外，病毒可在绒毛尿囊膜上进行滴定，因 为感染性病毒颗粒的数目可以通过产生的斑 和痘的数目来计算。该方法还可用于抗病毒 血清的滴定试验，即在有抗体存在的情况下， 痘疱形成受到抑制。
鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。
鸡胚接种技术
第一节 鸡胚的结构与生理
鸡胚是由三个胚层发育起来的， 即外胚层、中胚层和内胚层， 它们构成胚胎的组织与器官。
（约10日龄鸡胚的结构见图）
鸡胚接种技术
鸡胚接种技术
卵壳与壳膜
卵壳位于最外层的坚硬壳层； 壳膜位于卵壳的下层，允许气体和液体分子 交换，因此培养鸡胚需一定的湿度和气体。
鸡胚接种技术
羊膜腔接种法
鸡胚接种技术