《分析化学》16经典液相色谱法jdyx

(六)定性与定量分析
定性分析——日光,紫外光, 定性分析——日光,紫外光,显色 定量分析——洗脱法, 定量分析——洗脱法,薄层扫描法
四,纸色谱法
将固定相放在纸上,以纸做载体进行点样,展开, 将固定相放在纸上,以纸做载体进行点样,展开, 定性,和定量的液定性,和定量的液-液分配色谱法 固定相:纸纤维吸附的水 流动相:与水不互溶的有机溶剂(饱和正丁醇) 流动相:与水不互溶的有机溶剂(饱和正丁醇) 分离机制:同液分离机制:同液-液分配色谱 1 定性参数: R = f 1+ K VS Vm 讨论: 与组分性质, 讨论:Rf与组分性质,流动相及溶解度有关 极性组分→易保留, 极性组分→易保留,Rf 小(流动相极性↑, Rf ↑) 流动相极性↑ 非极性组分→易流出, 非极性组分→易流出,Rf大(流动相极性↑,Rf ↓) 流动相极性↑
续前
4. 三者关系图示: 三者关系图示: 组分wenku.baidu.com吸附剂 极性 活性小 非(弱)极性 活性大
流动相 极性 非极性或弱极性
二,薄层色谱法
(一)概述 (二)定性参数 (三)吸附剂的选择 (四)展开剂的选择 (五)薄层板的制备 (六)定性与定量分析
(一)概述
1.定义:将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上, 定义:将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上, 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2.操作过程:见图示 操作过程:见图示 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 定位(定性)/洗脱(定量) 3 . 分离机制: 吸附 ( 分配 , 离子交换, 空间排阻 ) 分离机制:吸附 分配, 离子交换 , 空间排阻) 吸附( 4.特点:分析快速,灵敏,显色方便 特点:分析快速,灵敏, 5.应用:药物杂质检查,纯度测定 next 应用:药物杂质检查,
VS 1 又Q =1+ K R' Vm
L0 L 1 K VS Vm = L 1
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Vm 1 Rf = R' = = 1+ K VS Vm Vm + K Vs
K ↑ Rf ↓
讨论 Rf与K有关,即与组分性质(溶解度)以及薄层板 有关,即与组分性质(溶解度) 和展开剂的性质有关 色谱条件一定, 只与组分性质有关, 色谱条件一定,Rf只与组分性质有关,是薄层色谱 基本定性参数, 基本定性参数,说明组分的色谱保留行为
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(三)吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂 (四)展开剂的选择(同液固吸附色谱流动相的选择) 同液固吸附色谱流动相的选择) 根据被测组分,吸附剂和展开剂本身的极性
(五)薄层板的制备
定性分析——窄条 定性分析——窄条 定量分析——10×20cm 定量分析——10×20cm 硅胶G——自含粘和剂 硅胶G——自含粘和剂 硅胶H——不含粘和剂,铺板时另加入CMC 硅胶H——不含粘和剂,铺板时另加入CMC 硅胶FH254——含荧光剂,254nm紫外光照发绿光 硅胶FH254——含荧光剂,254nm紫外光照发绿光 硅胶FH365——含荧光剂,365nm紫外光照发光 硅胶FH365——含荧光剂,365nm紫外光照发光
(一)分离原理
各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离
(二)常用吸附剂:多孔,微粒状物质 常用吸附剂:多孔,
1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺
1. 硅胶(SiO2H2O) 硅胶(
结构: 结构:内部——硅氧交联结构→多孔结构
表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
2. 氧化铝
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性,中性物质 适于分析碱性, 中性氧化铝 pH>7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 pH> 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性,中性物质 适于分析酸性,
3. 聚酰胺
氢键作用 氢键能力↑ 氢键能力↑强,组分越后出柱
(三)吸附剂和流动相的选择: 吸附剂和流动相的选择:
图示
图示
L0 L2 L1
(二)定性参数
1. 比移值Rf 比移值R
设R' 为单位时间内一个分子在展开剂中出现的几率 设 R' 1 为单位时间内一个分子在固定相中出现的几率
定 展 保 比 时 开 留
uR L1 t L1 R' = = = u0 L0 t L0
(R' ≤ 1)
原点到组分斑点质量中 心的距离 L Rf = = 1 原点到溶剂前沿的距离 L0
特性: 特性:
1)与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑,吸附能力↑→强极性吸附中心,不易洗脱 吸附活性次序:活泼型>束缚型>游离型 2)吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失,无吸附力
适用: 适用:分析酸性或中性物质
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1)K↑大,Rf↓小 K↑大 2)薄层板一定,对于极性组分 薄层板一定, 展开剂极性↑ 展开剂极性↑大,Rf↑大(容易洗脱) 容易洗脱) 展开剂极性↓ 展开剂极性↓小,Rf↓小 (不容易洗脱) 不容易洗脱) 范围:0 3)Rf范围:0< Rf <1 (组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离) 组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离) Rf = 0.2——0.8(常用) ——0 常用) 0.3——0.5(最佳) ——0 最佳)
第四节
经典液相色谱法
液相色谱法:以液体为流动相的色谱法称～. 液相色谱法:以液体为流动相的色谱法称～. 经典液相色谱:固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱:固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短
一,液-固吸附色谱
(一)分离原理 (二)常用吸附剂 (三)吸附剂和流动相的选择
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2. 相对比移值Rs 相对比移值R
原点到组分斑点质量中 心的距离 L1 Rs = = = Rf(参) 原点到参考物斑点质量 中心的距离 L2
讨论
Rf(组)
参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差, 可以消除系统误差,大大提高重现性和可靠性; 参考物可以是后加入纯物质, 参考物可以是后加入纯物质,也可是样品中已知组分 相对比移值R 与组分,参考物性质及色谱条件有关, 相对比移值Rs与组分,参考物性质及色谱条件有关, 范围可以大于或小于1 范围可以大于或小于1
依据被测组分,吸附剂和流动相的性质 1. 被测组分性质(极性大小): 被测组分性质(极性大小) 烃< - - - - - - - - <羧酸,醇 羧酸, 2. 吸附剂的活性: 吸附剂的活性: 吸附剂的活性↑ 吸附剂的活性↑大,对被测组分的吸附能力↑强 对被测组分的吸附能力↑ 强极性物质—— ——选择弱吸附剂 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 3. 流动相的极性: 流动相的极性: 流动相极性↑ 流动相极性↑大,对被测组分的洗脱能力↑大 对被测组分的洗脱能力↑ 相似相溶" 根据组分性质, "相似相溶"原则 :根据组分性质,吸附剂的活 性, 选择适当极性的流动相