紫外-可见分光光度计
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程一、仪器准备1.打开紫外可见分光光度计，等待它进行自检。
2.检查仪器是否正常，包括光源、检测器、单色器等。
如有故障，请及时修复或更换。
3.将样品室清洁干净，并检查透射池是否干净。
如有污染，请用纯水和无尘纸擦拭。
二、仪器校准1.对紫外可见分光光度计进行校准。
校准包括零点校准和波长校准。
2.零点校准：使用纯溶剂（例如纯水或纯乙醇）进行零点校准。
在选定的波长下，将溶剂放入透射池中，点击“零点校准”按钮进行校准。
3.波长校准：使用已知浓度且吸收峰位清晰的标准品进行波长校准。
在选定的波长下，将标准品放入透射池中，点击“波长校准”按钮进行校准。
三、样品测试1.取出已经准备好的样品，在样品室中放入透射池。
2.选择合适的波长范围和波长值。
根据样品的吸收峰位和浓度范围，选择一个适当的波长范围。
四、测量样品吸光度1.点击“开始”按钮进行测量。
仪器将在选定的波长下自动扫描，显示吸光度曲线。
2.观察吸光度曲线，确定样品的吸收峰位和吸光度值。
五、数据处理和结果记录1.根据吸光度曲线，确定样品的吸光度值。
可以选择峰值吸光度或在特定波长下的吸光度值。
2.如果需要，可以进行数据处理，例如计算吸光度差、构建标准曲线等。
3.记录测量结果，包括样品名称、浓度、波长范围、吸光度值等信息。
六、仪器维护1.测量完毕后，及时清洁透射池和样品室，避免样品残留。
2.关闭紫外可见分光光度计，并将仪器盖上，以防尘埃进入。
3.定期维护仪器，例如清洁光源、调整灯泡亮度等。
七、注意事项1.在操作过程中，避免直接接触光源和检测器，以免引起损坏。
2.使用纯净溶剂进行校准，避免杂质对测量结果的影响。
3.在进行波长校准时，选择已知浓度且吸收峰位清晰的标准品，以确保测量结果的准确性。
4.在清洁透射池时，使用纯净水和无尘纸进行擦拭，避免使用有机溶剂和粗糙材质。
5.操作过程中避免碰撞和震动仪器，以免影响测量结果。
6.长时间不使用时，及时关闭仪器，以延长仪器寿命。
(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。
基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。
色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。
现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。
基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。
色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。
现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
紫外-可见光分光光度计
紫外-可见光分光光度法一、技术原理紫外-可见分光光度法是在190〜800mn波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。
当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。
因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。
从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmix。
物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。
因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。
用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。
二、浓度测定基本原理朗伯一比尔（Lambert - Beer）定律是分光光度法的基本原理。
当一束单色光通过一均匀的溶液时，一部分被吸收，一部分透过，设入射光的强度为I0，透射光强度为I，则I/I0为透光度，用T表示。
当溶液的液层厚度不变时，溶液的浓度越大，对光的吸收程度越大，则透光度越小。
即：-lgT=a1*c（式中a1为常数，c为浓度）当溶液浓度不变时，溶液的液层厚度越大，对光的吸收程度越大，则透光度越小。
即：- lgT=a2*b（b为液层厚度）将以上两式合并可用下式表示：lgT=a*b*c研究表明：溶液对光的吸收程度即吸光度（A）又称消光度（E）或光密度（OD）与透光度（T）呈负对数关系，即：A=-lgT故A=a3*b*c（a3为吸光系数）。
上式为朗伯比尔定律，其意义为：当一束单色光通过一均匀溶液时，溶液对单色光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
三、仪器的矫正和检定1.波长矫正常使用高氣酸钦溶液校正双光束仪器，以10%高氯酸溶液为溶剂，配制含氧化钬（Ho2O3 ) 4 % 的溶液，该溶液的吸收峰波长为241. 13nm，278. 10nm，287. 18nm，333. 44nm，345. 47nm，361. 31nm，416. 28nm，451. 30nm，485. 29nm，536. 64nm和640. 52nm。
紫外可见分光光度计范围
紫外可见分光光度计范围紫外可见分光光度计是一种常用的光谱分析仪器，用于测量物质在紫外可见光波段的吸收和透过性质。
它能够提供物质吸收光谱的信息，帮助我们了解物质的组成和结构。
本文将介绍紫外可见分光光度计的基本原理、应用范围以及其在科学研究和工业生产中的重要意义。
一、紫外可见分光光度计的基本原理紫外可见分光光度计的基本原理是利用物质对特定波长光的吸收和透过性质来测量其浓度或含量。
它通过光源产生的连续光束，经过样品后，被光电传感器接收并转换为电信号。
根据样品的吸收特性，我们可以得到样品的吸光度，从而推算出其浓度或含量。
二、紫外可见分光光度计的应用范围紫外可见分光光度计广泛应用于医药、化学、生物、环境科学等领域。
它可以用于测定药品的纯度和含量，监测水质和空气质量，分析生物样品中的成分等。
以下是几个具体的应用范例：1.药物分析：紫外可见分光光度计可用于测定药物的纯度、含量和稳定性。
通过测量药物在特定波长下的吸收光谱，我们可以判断药物的质量，并及时调整生产工艺，确保药品的安全性和有效性。
2.环境监测：紫外可见分光光度计可用于监测水体和大气中的污染物含量。
例如，我们可以通过测量水体中溶解有机物的吸光度来评估水质状况，或者通过测量大气中气体的吸光度来监测空气污染物的浓度。
3.生物分析：紫外可见分光光度计可用于测定生物样品中的蛋白质、核酸和其他生物分子的浓度。
通过测量这些分子在紫外可见光波段的吸收光谱，我们可以了解其结构和功能，并进一步研究生物过程和疾病机制。
4.食品安全：紫外可见分光光度计可用于检测食品中的添加剂、污染物和有害物质。
例如，我们可以通过测量食品中色素的吸光度来判断其是否合格，或者通过测量食品中残留农药的吸光度来评估其安全性。
三、紫外可见分光光度计的重要意义紫外可见分光光度计在科学研究和工业生产中具有重要的意义。
它不仅为我们提供了分析物质的工具，还为我们研究物质的性质和反应机制提供了重要的信息。
以下是紫外可见分光光度计的几个重要意义：1.质量控制：紫外可见分光光度计可以用于药品、食品、化妆品等产品的质量控制。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程
《紫外可见分光光度计操作规程》
一、工作准备
1. 开机前检查：清洁光栅、检查光源和探测器是否正常。
2. 准备标准溶液：根据实验需要准备好待测溶液和标准溶液并进行标定。
3. 准备样品：将待测溶液转移至透明的玻璃试管或石英比色皿中。
二、仪器调节
1. 打开光度计：按照仪器说明书操作，打开光度计，等待仪器预热。
2. 调节参比通道：选择适当的参比波长，并将参比通道调至零点。
3. 调节样品通道：选择待测波长，并将样品通道调至零点。
三、测量操作
1. 测量样品：将待测溶液装入样品比色皿中，放入光度计样品槽内。
2. 执行测量：按照操作说明，进行测量并记录数据。
3. 清洗仪器：测量完成后，及时清洗样品比色皿和样品槽。
四、数据处理
1. 计算浓度：根据测量数据和标定曲线，计算样品的浓度。
2. 记录结果：将浓度及测量数据记录在实验记录表中。
五、仪器关闭
1. 关闭光度计：根据操作说明，正确关闭光度计。
2. 清洁仪器：清洁光度计表面和槽口，保持仪器干净整洁。
通过以上操作规程，能够正确、准确地操作紫外可见分光光度计，为实验数据的获取和分析提供可靠的支持。
同时，也能够保护和延长仪器的使用寿命。
1-紫外可见分光光度计简介
单机模式
单片机软件平台
PC联机模式
UVWin软件工作站 190～1100nm ±0.3nm（开机自动校准） 0.2nm
单机模式/PC联机模式
单机 UVWin软件工作站
＜0.2％T（220nm，Nal；340nm，N确度
透过率，吸光度，能量
－0.3～3Abs ±0.002Abs（0～0.5A） ±0.004Abs（0.5～1A） ±0.3％T（0～100％T） 0.001Abs（0～0.5A）
按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光 光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光 光度法。
紫外-可见分光光度法的特点： 1 与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作 都比较简单，费用少，分析速度快; 2 灵敏度高;
3
4 5
选择性好;
精密度和准确度较高; 用途广泛。
2、紫外-可见分光光度计
I.
单机模式/PC联机模式 单机/UVWIN5
波长范围 波长准确度 波长重复性
190～1100nm ±0.3nm（开机自动校准） 0.2nm ＜0.3％T（220nm，Nal；340nm，NaNo2） 透过率，吸光度，能量 －0.3～3Abs ±0.002Abs（0～0.5A）
杂散光
光度方式 光度范围
光度准确度
2、中档紫外可见分光光度计18系列
181系列（准双光束）/188系列（双光束）
1998年推出的18系列紫外可见分光光度计， 满足了中低档紫外系列产品用户的需要。
18系列的产品又分为两大类：181和188。 其中：181为准双光束 188为双光束
双光束比例监测系统（准双光束）性能指标
仪器代号 光谱带宽 工作模式 软件支持 2nm(固定狭 缝) 单机模式 单片机软件平台 S 0.5、1、2、5nm(可 变狭缝) PC SPC APC 2nm(固定 狭缝) ASPC 0.5、1、2、5nm(可 变狭缝) 2nm(固定狭缝) 0.5、1、2、5nm(可 变狭缝) PC联机模式 UVWin软件工作站
紫外可见分光光度计
临床分析 色彩測定 环境分析
生物化学分析
有机化学分析
无机化学分析 光学测定
有机化学分析 无机化学分析 光学测定 生物化学分析 环境分析 色彩測定 临床分析
紫外/可见分光光度计的基本结构
光源 单色器 样品室 检测器 控制放大电路 显示器
比色皿 单色光
光电管（或光电池） 放大器
显示器
斩光器 单色光
阳光是复合光的事实。
分光光度法
❖ 1859年德国物理学家本生(R．W．Bunsen)和基尔 霍夫(G．R．Kirchhoff)发现由食盐发出的黄色谱线 的波长和“夫琅和费线”中的D线波长完全一致， 才知道一种物质所发射光的波长(或频率)，与它所能 吸收的波长(或频率)是一致的。
分光光度法
❖ 朗伯(J．H．Lambert)早在1760年就发现物质对光 的吸收与物质的厚度成正比，后被人们称之为朗伯 定律；比耳(A.Beer)在1852年又发现物质对光的吸 收与物质的浓度成正比，后被人们称之为比耳定律。 在应用中．人们把朗伯定律和比耳定律结合起来， 称之为朗伯—比耳定律。随后，人们开始重视研究 物质对光的吸收，并试图在物质的定性、定量分析 方面予以使用。因此，许多科学家开始研究以朗 伯—比耳定律为理论基础的仪器装置。
对其分别进行光度测定。
ABS (%T)
ABS (%T)
时间
时间
（二）定性分析
一、利用标准物质定性 在相同条件下，用光谱扫描法测定未知物的吸收光谱，与所推断化合物的标
准物的吸收光谱进行比较，如果两吸收光谱的形状和吸收峰的数目、位置、拐点 等完全一致，就可初步判定未知物与标准物是同一种物质。但要注意，物质不同 但光谱相似的特殊情况。
波长
紫外-可见分光光度法概述(中药制剂检验课件)
含量（W/W%）=（C供×D供×V供）/（100×W供） 本法测定时无需对照品，方法简便。
-18-
必备知识
吸收系数法测定含量
含量计算公式有两种：
1)含量（mg/丸）=
壹 基础知识
贰 必备知识
精诚制药 本草济民
叁 拓展知识
-1-
基础知识
定义：紫外-可见分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry） 系指通过测定被测物质在紫外-可见光区(200～760nm)对光的吸光度或发光强度， 进行物质定性定量分析的方法。
特点：设备简单、操作简便、灵敏度和准确度较高等。 适用范围：中药制剂定性鉴别、杂质检查及含量测定。
-21-
拓展知识
紫外-可见分光光度计的校正
杂散光的检查
试剂名称 碘化钠 亚硝酸钠
杂散光的检查
试剂浓（g/100ml） 测定用波长（nm）
1.00
220
5.00
340
透光率（%） <0.8 <0.8
-22-
拓展知识
紫外-可见分光光度计的校正
吸收池的校正 分别在两个洁净的统一规格、同一材料的吸收池中装入同一溶剂（一般可用水
式中，A为吸光度；K为吸收系数；C为溶液浓度；L为液层厚度。 吸收系数是指吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度。 吸收系数K ：百分吸收系数、摩尔吸收系数。《中国药典》采用百分吸收系数。 定量方法有吸收系数法、对照品法、标准曲线法。
-17-
必备知识
吸收系数法测定含量
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见（UV-Visible）分光光度计是用于测量物质在紫外和可见光区域的吸收和透射特性的仪器。
以下是使用紫外可见分光光度计的一般步骤：
1. 打开紫外可见分光光度计的电源，并保证仪器充分预热。
2. 设置光源和检测器。
选择合适的波长范围（紫外或可见光谱），以及光源和检测器的位置。
3. 使用背景校准。
将空白试剂槽放入样品槽中（样品槽通常是一个透明的玻璃或石英池），然后选择背景校准选项。
这将记录光通过样品槽的基线吸收。
4. 准备样品。
将待测样品溶液放入样品槽中。
确保样品槽没有气泡或污渍，以免影响结果。
注意，为了比较样品结果，可以将每个样品的浓度保持相对一致。
5. 设置波长。
选择测量波长，并调整仪器以使其与待测样品的最大吸收光谱相匹配。
某些仪器还允许选择多个波长以进行多重波长读数。
6. 开始测量。
按下“开始”或“测量”按钮，仪器将测量样品吸收光谱。
读数时间通常很短，大约为几秒到几分钟不等。
7. 记录结果。
读取仪器显示屏上的吸收值，并将其记录下来。
注意，部分仪器可以直接将结果导出到计算机或打印机上。
8. 清洁和关闭仪器。
在使用完毕后，使用适当的清洁溶液清洁样品槽，以防止残留污渍。
最后，将仪器关闭。
需要根据具体仪器的操作手册来设置和操作紫外可见分光光度计，因为不同的仪器可能有不同的步骤和功能。
紫外-可见分光光度计的正确使用方法
紫外-可见分光光度计的正确使用方法
紫外-可见分光光度计是一种常见的实验室仪器，用于测量化学物质在紫外和可见光区域的吸收光谱。
正确使用该仪器需要以下步骤：
一、仪器准备
1. 打开仪器电源，等待仪器自检完成。
2. 打开仪器软件，选择合适的测量模式。
3. 准备好样品，将其转移到透明的石英或玻璃比色皿中。
二、样品测量
1. 将比色皿放入样品室中，调整样品室的位置，使其与光路对齐。
2. 选择合适的波长范围和波长，调整仪器的光路，使其与样品室中的样品对齐。
3. 点击“开始测量”按钮，仪器会自动扫描样品的吸收光谱，并将结果显示在屏幕上。
4. 根据需要，可以保存测量结果或者进行数据处理。
三、仪器维护
1. 每次使用后，应该清洗样品室和比色皿，以防止样品残留影响下次测量。
2. 定期校准仪器，以保证测量结果的准确性。
3. 保持仪器干燥、清洁和安全，防止损坏和事故发生。
以上是紫外-可见分光光度计的正确使用方法，希望对您有所帮助。
紫外-可见分光光度计
8
玻璃可吸收紫外光，玻璃棱镜只能用于350 ~ 3200 nm的 波长范围，即只能用于可见光域内。 石英棱镜可使用的波长范围较宽，可从185 ~ 4000nm， 即可用于紫外、可见和近红外三 个光域。
9
光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，可用于紫外、 可见及红外光域 在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力。 具有色散波长范围宽、分辨本领高、成本低、便于保存 和易于制备等优点。 缺点： 各级光谱会重叠而产生干扰。
30
特点： 可测多组份试样、混浊试样、而且可作成导数光谱、 不需参比液(消除了由于参比池的不同和制备空白溶液 等产生的误差)。 克服了电源不稳而产生的误差，灵敏度高。
缺点：
仪器需要装备两个单色器，价格较高，体积较大。
用微机装备的单波长仪器能实现上述双波长仪器的功能。
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32
双波长光度计光路示意图
19
光电管：紫外-可见分光光度计上应用较为广泛。
光电倍增管：检测微弱光最常用的光电元件
特点：灵敏度比一般的光电管要高200倍，因此可使 用较窄的单色器狭缝，对光谱的精细结构有较好的 分辨能力。
缺点：强光照射会引起不可逆损害，不适用于检测
高能量。
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（五）信号指示系统 作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。 常用的信号指示装置有直读检流计、电位调节指零装置 以及数字显示或自动记录装置等。 很多型号的分光光度计装配有微处理机，一方面可对分 光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。
①入射狭缝：光源的光由此进入单色器 狭缝在决定单色器性能上起重要作用。狭缝的大小直接 影响单色光纯度，但过小的狭缝又会减弱光强。 ②准直装置：透镜或反射镜，使入射光成为平行光束
6
紫外可见分光光度计基本常识与使用
检查仪器的光源、单色器、检测器等部件是 否正常工作。
参数设置与校准
根据实验需求，设置波长范围、 扫描速度、狭缝宽度等参数。
进行波长校准，确保波长准确。
进行吸光度或透过率校准，使用 标准物质进行校准，确保测试结
果的准确性。
样品处理与测试
将样品放入比色皿或石英 池中，注意擦拭干净比色 皿或石英池的外表面。
波长准确度与重复性
高准确度和重复性的波长定位是保证测量准 确的关键。
样品室与检测系统
01
02
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样品室设计
可容纳不同类型的样品池， 如石英比色皿、微量池等。
检测器类型
常用硅光电池、光电倍增 管等作为检测器，具有高 灵敏度和宽线性范围。
背景校正
采用双光束设计，自动扣 除背景干扰，提高测量精 度。
数据处理与显示系统
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紫外可见分光光度计基本构造
光源系统
光源类型
通常使用氘灯和钨灯作为紫外和 可见光区的光源，具有稳定、连 续的光谱输出。
光源寿命
光源寿命有限，需要定期更换， 以保证测量准确性和稳定性。
单色器系统
单色器类型
采用棱镜或光栅作为分光元件，将复合光分 解为单色光。
波长范围
覆盖紫外和可见光区，可根据需求选择不同 的波长范围。
副产品监控
某些生产过程中会产生副产品，通 过对其吸收光谱的测量，可以监控 副产品的生成情况，以便及时采取 措施。
新产品开发与研究
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新材料研究
紫外可见分光光度计可用于研究新材料的光学性 能，如吸收、反射、透射等，为新材料开发提供 数据支持。
配方优化
在产品配方开发过程中，通过测量不同配方的吸 收光谱，可以优化配方组成，提高产品性能。
第一章 紫外-可见分光光度计
第一节紫外-可见分光光度计的基本结构一、紫外-可见分光光度计的分类紫外-可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是量度介质对紫外、可见光区波长的单色光吸收程度的分析仪器，按不同的分类标准所做的分类如表1-1目前，国际上一般按紫外-可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、准双光束、双光束和双波长四类。
本节将对这四者之间的主要区别、各自的特点进行简单介绍。
（一）单光束紫外-可见分光光度计1945年美国Beckman公司推出的世界上第一台成熟的紫外-可见分光光度计商品仪器，就是单光束紫外-可见分光光度计。
顾名思义，单光束紫外-可见分光光度计只有一束单色光，一只比色皿，一只光电转换器（又称光接收器）。
其光电转换器通常采用硅光电池、光敏三极管或光电管，其结构简单、价格便宜，但因其杂散光、光源波动、电子学的噪声等都不能抵消，故单光束紫外-可见分光光度计的光度准确度差。
国外的DU70、PU8700等及我国生产的721、722、723、727、751、752、753、754等紫外-可见分光光度计都是单光束仪器，它们属于低档仪器。
单光束紫外-可见分光光度计的技术指标比较差，特别是杂散光、光度噪声、光谱带宽等主要技术指标比较差，分析误差较大，在使用上收到限制。
一般来讲，要求较高的制药行业、质量检验行业、科研行业等不宜使用单光束紫外-可见分光光度计。
单光束紫外-可见分光光度计的组成如图1-1所示。
（二）准双光束紫外-可见分光光度计所谓准双光束紫外-可见分光光度计，就是有两束光，但只有一只比色皿的紫外-可见分光光度计。
其中，一束光通过比色皿，另一束光不通过比色皿。
不通过比色皿的那束光，主要起抵消光源波动对分析误差影响的作用。
准双光束紫外-可见分光光度计有两种类型：一种是两束单色光，一只比色皿，两只光电转换器；另一种是一束单色光，一束复合光，一只比色皿，两只光电转换器。
1.两束单色光的准双光束紫外-可见分光光度计这种准双光束紫外-可见分光光度计比较多，目前国内外市场上或用户正在使用的准双光束紫外-可见分光光度计，基本上都是这种类型的仪器，它属于普及型的常规仪器。
紫外可见分光光度计的操作和使用
紫外可见分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、药物等领域的实验仪器，它可以用来测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而得到样品的吸光度和浓度等重要参数。
在科研实验室和生产现场中，紫外可见分光光度计的操作和使用技巧非常重要，正确的操作可以确保实验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍紫外可见分光光度计的操作和使用方法：一、准备工作1.1 样品的制备：首先要准备好需要测量的样品，确保样品的制备符合实验要求，并且样品溶液的浓度和透明度在光度计测量范围内。
1.2 仪器的准备：打开紫外可见分光光度计的电源，将仪器预热至稳定的工作温度，同时检查仪器的灯泡和光栅等部件是否正常。
二、测量操作2.1 校准仪器：在进行测量之前，必须对仪器进行校准，保证测量结果的准确性。
2.2 装样品：将样品溶液分别加入光度计的比色皿或石英比色皿中，注意不要留下气泡或杂质。
2.3 设定参数：根据样品的特性和测量要求，设定光度计的波长、光程和测量范围等参数。
2.4 测量数据：开始测量之后，观察样品的吸光度变化曲线，并记录下稳定的吸光度数值。
三、数据处理3.1 计算浓度：根据测得的吸光度数值，使用比色法或标样法计算出样品的浓度。
3.2 分析结果：根据测得的数据，分析样品的吸收特性和浓度变化规律，得出实验结论。
四、仪器维护4.1 清洁保养：每次使用完毕后，要及时清洁光度计的仪器和光学部件，确保仪器的稳定性和精度。
4.2 故障排除：如果在使用过程中发现仪器出现故障或异常，及时进行故障排除和维修处理。
五、注意事项5.1 防止污染：在操作过程中要注意避免样品污染或交叉污染，确保测量结果的准确性。
5.2 安全操作：使用化学药品和致癌物质时，要做好个人防护，避免对身体造成伤害。
通过以上对紫外可见分光光度计的操作和使用方法的介绍，相信大家对这一实验仪器有了更加深入的了解。
正确的操作和使用方法可以帮助科研人员和实验人员获得准确可靠的实验数据，为科学研究和生产实践提供有力支持。
紫外-可见分光光度计
双波长分光光度计是一种新型的分光光度计， 能把同一光源发出的光通过一个特别的单色 器，把光调成两束不同波长的光，经过切光 器，使其交替通过样品池，再至检测器，可 以测出样品与参比的吸光值，从而计算出被 测组分的浓度。这类仪器优点是可以消除人 工配制的空白溶液与样品基体之间的差别而 引起的误差，还能测定混合物溶液。
三、常用的紫外－可见分光光度计的使用 视频录像 四、分光光度计的检验及维护保养（自学）
三、紫外－可见分光光度计
一、基本组成：
1．光源： 作用是提供入射光
（1）可见光光源：钨丝灯 可提供 325～ 2500nm的光
（2）紫外光光源：氢灯、氘灯、氙灯等 可提供 185～375nm的光
可见分光光度计使用可见光光源，而紫外分 光光度计一般又上述两个光源。
2．单色器（分光元件）： 作用是将光源发射的连 续光谱分解为单一波长的单色光。
4．检测器： 作用是将透过溶液的光信号转ห้องสมุดไป่ตู้换为电信号。
（1）光电池：接受光信号后产生电流，但 长时间照射易疲劳
（2）光电管：比光电池灵敏度高、不易疲 劳产生电流需要放大
（3）光电倍增管：具有自身信号放大作用
5．信号显示器 （1）检流计、微安表 （2）数字显示器、自动记录仪
二、紫外－可见分光光度计的类型 1．紫外－可见分光光度计分类： （1）按使用波长分为： 可见分光光度计（400～780nm） 紫外可见分光光度计（200～1000nm） （2）按光路分为：单光束型和双光束型 （3）按提供的波长数分为：单波长型和双
分光元件有：
（1）棱镜：普通玻璃或石英玻璃制成 利用的是光 的折射原理达到分光目的
（2）光栅：在平滑的金属表面 刻上锯齿状平行的 划痕 利用的是光的衍射和干涉原理达到分光目的。
紫外可见分光光度计介绍
紫外可见分光光度 计可以用于定性分 析，确定物质是否 存在或含量多少。
定性分析可以帮助 研究人员了解物质 的性质、结构、组 成等信息。
定性分析可以应用于 化学、生物、医学、 环境等领域，对物质 进行定性分析。
定性分析还可以用 于检测物质的纯度、 杂质等，确保产品 质量和安全。
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定量分析
电信号经过放大和处理，得 到样品的吸光度。
吸光度与样品浓度之间存在 一定的关系，通过标准曲线
可以计算出样品的浓度。
光路结构
光源：提供紫外可见光 单色器：将光源分解为单色光 样品池：放置待测样品 检测器：接收样品吸收后的光信号 信号处理：将检测到的信号转换为吸光度或透光率 显示与记录：显示测量结果，记录数据
测量方法
光源：提供紫外可 见光，激发样品中
的分子或原子
检测器：检测样品 吸收光后的强度变 化，转化为电信号
单色器：将光源发 出的光分解成单色
光
样品池：放置样品， 吸收单色光
数据处理：将电信 号转化为吸收光谱，
进行分析和计算
结果输出：显示样 品的紫外可见吸收 光谱，提供定量和
定性分析结果
定性分析
定量分析：
1 通过测量吸 光度值，计 算样品浓度
应用领域：
2 化学、生物、 医学、环境 等领域
定量分析方法：
3 标准曲线法、 标准加入法、 内标法等
定量分析特
4 点：准确、 快速、灵敏、 稳定
应用领域
01
化学分析：用于分析化学物质，如蛋 02
环境监测：用于监测水质、大气、土
白质、核酸、氨基酸等
壤等环境因素
光源故障：检查光源是否正常， 必要时更换光源
紫外分光光度计的组成
紫外-可见分光光度计的组成
1 光源 要求能发出在使用波长范围内具有足够强度的连 续辐射光,并在一定时间内保持稳定。
在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射 光源和气体放电光源
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电 光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
紫外光源---氘灯(185-375 nm)
紫外分光光度计的组 成
组成结构Βιβλιοθήκη 光源单色器吸收池 检测器 信号显示系统
紫外-可见分光光度计的工作原理
由光源发出的连续光,经单色器分光后获得一 定波长单色光，照射到试样溶液上组分被吸收, 透射的光则照在检测器上并被转换为电信号, 经信号指示系统调制放大后,显示出吸光度A或 透射比T,从而完成测定。
常用的检测器有光电池、光电管及光电倍增管。
光电池 光电倍增管
光电管
紫外-可见分光光度计的组成
5 信号处理和显示系统
该系统的作用是放大信号并以 适当的方式显示或记录下来。
常用的信号显示装置有直读 检流计，电位调节指零装置，以及 自动记录和数字显示装置等。
谢谢!
主要有石英吸收池和玻璃吸 收池两种。 在紫外区须采用石英吸收池， 可见区一般用吸收玻璃池。
主要规格0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm和5.0cm
紫外-可见分光光度计的组成
4 检测器
检测器的作用是检测光信号，并将光信号转 变为电信号。测量吸光度时,并非直接测量透过吸收池 的光强度,而是将光强度转换成电流进行测量,这种光 电转换器件称为检测器(又称接受器)。因此要求检测 器对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应,最重要 的是产生的光电流应与照射在检测器上的光强度成正 比。
光栅单色器
➢ 一系列等宽、等距离的平行狭缝 ➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础 ➢常用的光栅单色器为反射光栅单色器，它又分为平面反射光栅和凹面 反射光栅两种，其中最常用的是平面反射光栅。 ➢紫外-可见分光光度计大多采用光栅作为色散元件。
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紫外-可见分光光度计
紫外-可见分光光度法是基于分子内电子跃迁产生的吸收光谱进行分析的一种常用的光谱分析法。
下面从基本原理和仪器的结构进行描述。
紫外-可见分光光度计的基本原理为吸收定律也叫朗伯-比尔定律
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即
A= κbc
运用条件：单色光
均匀的介质
吸收物质不发生作用
式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度，物质的性质等因素有关。
c为吸光物质浓度，b为透光液层厚度。
朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。
紫外-可见分光光度计包括五大部分：光源、单色器、吸收池、检测器以及信号显示系统
有光源发出的光，经单色器获得一定波长单色光照射到样品溶液，被吸收后，经检测器将光强度变化转变为电信号变化，经信号指示系统调制放大后，显示或打印出吸光度A（透射比），完成测定
光源的作用是提供激发能,使待测分子产生吸收。
要求能够提供足够强的连续光谱、有良好的稳定性、较长的使用寿命,且辐射能量随波长无明显变化
单色器的作用是使光源发出的光变成所需要的单色光。
通常由入射狭缝、准直镜、色散元件、物镜和出射狭缝。
构成单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。
色散元件常用棱镜和光栅。
吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，用于盛放试液。
石英材质的比色皿用于紫外-可见区的测量，玻璃材质的比色皿只用于可见区。
检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。
现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器
信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。