大鼠肝硬化模型制备的改良_向贤宏

1.3 实验准备 将C C l4（分析纯，浓度为浓度99.5%)与金龙鱼色拉油溶液 混合配制成50%的比例(即5份C C14+5份色拉油溶液，混匀，灭 菌后备用)；大鼠购回后在新环境中适应性饲养3d，充足供应食 物和饮水，每笼内饲养大鼠5只。 二 实验方法 2.1 构建肝硬化模型 以0.5m l／100g剂量予以皮下多点注射50％C C l4的色拉油 溶液，每周注射2次并称量其体重，同时以10%乙醇溶液(由上 述食用白酒加蒸馏水配制，下同)为其唯一饮用水源；体重降低 大于或等于10g以上时，暂停给药，并改用自来水为饮用水源， 直到称量（每周称量一次）体重恢复到下降少于10g后继续上述 方案；保证每只大鼠累积注射C C l4及酒精喂养时间达10周（不 包括暂停时间）；成功制备肝硬化大鼠模型周期约为14周，制 模成功后10天内开始实验。 2.2 成模标准 肝脏肉眼观察有弥漫性大小不等的结节和塌陷区；肝脏组 织病理切片有假小叶的形成。 结果 一 肝硬化大鼠模型成模基本情况 100只W i s t a r大鼠在注射50％C C l4的色拉油溶液+饮用10% 乙醇溶液14周后，死亡14只，成模86只，成模率为86%。 二 成模大鼠肝脏大体形态
基
[Abstract] Objective To improve the existing model of hepatic cirrhosis on rats,and reduce the mortality rate in modeling process, provide
础
animal models for related experiments. Material and Methods 100 Wistar female rats, CCl4 (analytically pure, density 99.5%), edible white liquor
大，注射位置易发生浸润性脓肿、溃疡或淋巴结肿大，见图
5。死亡率可高达30%～40%。总之，C C l4诱导C M，机制明 确、效果肯定、重复性佳、剂量可控性强，常用于模拟暴发
性肝功能衰竭、肝细胞脂肪样变所致的肝硬化，然而较高的
死亡率和多器官毒副反应限制了其在肝纤维化和慢性肝硬化 病理发展机制研究中的应用。
三 成模大鼠肝脏镜下观
摄入，从而可减少营养摄入不均对实验结果的影响[3]。然而由于
正常肝小叶结构消失或破坏而被假小叶所取代；部分假小 肝硬化大鼠模型与肝硬化病人在病因、病程和转归上的差异，
叶由几个不完整的肝小叶构成，内含二、三个中央静脉或一个
偏在边缘部的中央静脉，甚至没有中央静脉；有的假小叶则由
再生肝细胞结节构成，肝细胞的排列和血窦的分布极不规则；
图3 肝硬化大鼠模型肝脏大体观 ×10
图4 肝硬化大鼠模型肝脏镜下观 ×200
纤维化及肝硬化的发生。目前，C C l4诱导制备C M多采用30% ～60% CCl4油剂皮下注射的方法，剂量为3～5ml/kg，每周 2次，通常12～15周即可成模。该方法虽操作简便，但C C l4 经皮下注射很快即被机体吸收进入循环系统，脑、肾毒性较
材料与方法 一 材料 1.1 实验动物 100只W i s t a r雌性大鼠，年龄3～4月，体重250～300g， 均购于中山大学实验动物中心（实验动物质量合格证书编号： 0036227）。所有的动物均饲养在21℃的环境中（S P F级），普 通大鼠饲料喂养，昼夜照明时间每天12小时，自由饮水。 1.2 实验试剂 C C l4 (分析纯，浓度99.5%)购自广州市嘉伟达化工有限公 司，市售食用白酒(乙醇体积分数为53%)及金龙鱼食用色拉油若 干。
模型多表现为小结节性肝硬化，见图6、图7。能更好的模拟肝 炎后肝硬化。
先，我们充分利用了C C l4和酒精对肝脏的损伤作用，即首先形 成脂肪肝，随后形成肝炎、再形成肝纤维化及肝硬化这一病理
基金项目：广东省自然科学基金项目，编号05300765； 国家自然科学基金项目，编号30600156,30870692 作者单位：广东 510080 中山大学附属第一医院介入放射科（向贤宏 李家平 谭国胜 陈伟 杨建勇 李鹤平） 510100 广东省人民医院检验 科（陈柳琴） 通讯作者：李鹤平 E-mail: jxgdhp@
图5 CCl4经皮下注射后注射部位淋巴结肿大
另一个重要的单因素诱导模型是酒精性肝硬化模型
(Alcoholic cirrhosis model,ACM)。肝脏是酒精在机体内代谢
的主要场所，通常慢性酒精中毒可引起肝脏的4种序贯性损伤：
脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。研究
发现酒精在肝内代谢过程中，肝细胞内N A D H/N A D+比率增
研 究
weeks later after injection, all of the remained rats became into models, the achievment rate is 86%.Conclusion The improved program of cirrhotic
modeling methods can increase the success rate of models, and can form a small nodular liver cirrhosis model from chronic hepatitis.
当代医学 2009年12月第15卷第35期 中国介入放射学专题 2009年12月第3卷第6期
大鼠肝硬化模型制备的改良
向贤宏 李家平 陈柳琴 谭国胜 陈伟 杨建勇 李鹤平
[摘要] 目的 对现有肝硬化大鼠造模方法进行改良，构建出稳定的肝硬化大鼠模型并降低制模过程中大鼠的死亡率，为相关的实验提供稳定 可靠的疾病模型。材料与方法 100只Wistar雌性大鼠，按0.5ml／100g剂量予以皮下多点注射50％CCl4的色拉油溶液，每周注射2次并称量其体重，同 时以10%乙醇溶液为其惟一饮用水源；体重降低大于或等于10g以上时，暂停给药，并改用自来水为饮用水源，直到体重恢复到下降少于10g时继续 上述方案。结果 100只Wistar大鼠14周后，死亡14只，成模86只。结论 经过改良的肝硬化大鼠制模方案可增加建模的成功率，并可形成由慢性肝 炎转化而来的小结节性肝硬化模型。
(C C l3-)，C C l3-通过攻击肝细胞膜的磷脂引起脂质过氧化从而 破坏膜性结构，CCl3-还可与蛋白质共价结合，损害线粒体导致 还原性辅酶A(NADH)和三磷酸腺苷(ATP)在肝内生成减少，进
而抑制脂肪酸氧化和三羧酸循环。此外，由于内质网受损可导
致脂蛋白合成障碍，使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积， 形成脂肪变性。因此，低浓度的C C l4反复应用，可使大鼠的 肝组织受到损害—修复—损害的循环破坏作用，最终导致肝
[关键词] 大鼠；CCl4；酒精；肝硬化
The improvement of hepatic cirrhosis model on rat XIANG Xian-Hong, LI Jia-Ping, CHEN Liu-Qing, TAN Guo-Sheng, CHEN Wei,YANG Jian-Yong, LI He-Ping Department of Interventional Radiology, the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou Guangdong 510080, P.R.China
[Key words] Rat; CCL4; Alcohol; Cirrhosis
Experiment Research
中国是乙型病毒性肝炎的“重灾区”，目前全国乙肝病毒 感染人群占总人口的10%以上，乙肝病毒携带者高达1.2亿，每 年还有近百万的新发病例，这些病人约20％将发展为肝纤维化 /肝硬化[1]。乙型肝炎的广泛流行导致我国肝硬化的发病率居高 不下，有鉴于此，构建一种稳定、可复制、模拟性强的肝炎后 肝硬化模型(Cirrhotic model,CM)是进行此类研究的前提。
假小叶内肝细胞常有不同程度的浊肿变性、脂肪浸润，以及坏
死和再生；汇管区因结缔组织增生而显著增宽，胆汁郁积明显
（图4），与正常肝脏形成鲜明的对比（图2）。
讨论
各种原因引起的肝硬化是威胁人类健康的重要疾病之一，
基
础
目前对此类疾病的研究及相关药理学实验主要建立在肝硬化模
与
型(Cirrhotic model,CM) 的基础上，因此构建一种稳定、可
结节样增生，直径约为3～5m m，最大者直径不超过10m m，纤 验动物和实验技术要求较高，且费用昂贵，很难推广应用；后者
维间隔较细，假小叶大小亦一致（图3），与正常肝脏形成鲜明 是让实验动物自主饮用一定浓度的酒精饮料，同样可以复制出酒
的对比（图1）。
精性肝损伤的各阶段病理改变，此模型特点是能主动控制能量
实
靠、模拟性强的肝硬化大鼠模型是进行此类研究的前提条件。
图1 正常大鼠肝脏大体观×10
验பைடு நூலகம்
当前主要有两大类C M建模方案，单因素诱导建模及复合多因
研 究
素诱导建模，单因素建模中，其中最为主要的是C C l4诱导成模
及酒精诱导成模。
图2 正常大鼠肝脏镜下观×100
C C l4是最常用的诱导C M的化学物质，C C l4进入机体后， 首先经肝细胞微粒体细胞色素P450激活生成活性三氯甲基
高、自由基大量产生、活性氧簇系统高度活化、脂质过氧化及
脂肪积蓄，这些生化改变可引起肝细胞的脂肪变性、坏死等， 最终导致纤维组织大量增生以及肝硬化的发生[2]。目前国际上
公认的酒精性肝损伤模型主要有两种，即Tsukamoto-French
模型和Lieber-DeCarli模型。前者通过在大鼠胃内放置导管，
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当代医学 2009年12月第15卷第35期 中国介入放射学专题 2009年12月第3卷第6期
Experiment Research
肝脏变形，质地变硬、重量减轻、外观呈棕黄色、右叶和 然后持续注入一定浓度的酒精代替饮水，可复制出酒精性肝损伤
中叶不同程度的萎缩，尾状叶增大，表面弥漫分布大小均一的 各个阶段的病理改变，成功率和重复性都较理想，但该模型对实
验
suspended giving the medicine, and changed tap water as source of drinking water, restored until the weighing-in after dropping below 10g continued to give the medicine according to the above plan. Results Of 100 Wistar rats with the injection 50% CCl4 +10% ethanol solution, 14 rats died 14
图6 模型肝脏大体观（膈面）×10
图7 模型肝脏大体观（脏面）×10
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当代医学 2009年12月第15卷第35期 中国介入放射学专题 2009年12月第3卷第6期
CM的构建尚需根据研究对象的不同进一步完善和改良。
肝硬化多为慢性肝炎后肝硬化的国情。我们制备的肝硬化大鼠
本研究中我们采用C C l4联合酒精喂养制模的方法，根据大 鼠的体重变化调整给药的剂量和时机，取得了良好的效果。首
与
and edible salad oil, gave the hypodermic multi-spots according to the 0.5ml/100g dosage to inject 50% CCl4 salad oil solution, every week injected
实
2 times and weighed its body weight, simultaneously take 10% alcohol solution as its only source of drinking water;The body weight reduced to10g,