一种高效扩增活化自体NK细胞的方法研究及其在治疗卵巢癌中的应用_马佳佳

载一些非肿瘤疾病抗原肽（比如哮喘）所产生的特异性的CTL的体内外活性，这些CTLs都显示专一性地杀伤各自靶细胞的活性，结果是令人鼓舞的。

因此，这种用果蝇人工抗原提呈细胞结合特异的抗原肽刺激CD8 T细胞产生专一性的CTL的技术将是一个很好的技术平台，在疾病的免疫治疗方面发挥重要作用。

关键词:过继细胞治疗；CD8 T细胞；抗原肽；肿瘤
肿瘤的非特异免疫细胞治疗新技术研究
吴长顺,史习仪,张建强,徐荻
上海宇研生物技术有限公司
非特异性免疫细胞是人体清除肿瘤细胞的第一道防线,也是唯一对肿瘤干细胞有杀伤活性的抗肿瘤治疗方法。

我们公司研发制备的DCCIK细胞具有高比例的NKT细胞，已在临床应用并对部分晚期肿瘤患者有明显的疗效。

但是鉴于NKT细胞对肿瘤细胞的识别机制，仍有部分患者体内突变的癌细胞不能被识别，或经一段时间的治疗后发生突变而产生免疫逃逸，因此增强扩大DCCIK细胞对肿瘤细胞的识别能力、增强DCCIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性研究具有重要的意义。

我们用抗CD3单抗与肿瘤抗体药物抗Her2进行偶联,使之成为具有特异性结合T细胞和Her2阳性肿瘤细胞能力的双特异抗体。

将抗CD3-Her2双特异抗体与DCCIK细胞孵育后，检测DCCIK细胞对不同肿瘤细胞的杀伤活性，发现极低剂量的双特异抗体可以使DCCIK细胞对多株肺癌及肝癌细胞（Her2阳性）的杀伤活性明显增强。

同时我们还偶联了抗CD3单抗与多种抗肿瘤抗体药物的双特异抗体，以期靶向DCCIK细胞到不同的肿瘤细胞并增强其杀肿瘤活性，从而提高DCCIK细胞的临床应用范围和治疗效果。

我们通过将痘苗病毒破坏其TK酶基因等基因修饰方法,构建成靶向肿瘤细胞的痘苗融瘤病毒，将此病毒与DCCIK细胞共培养后，发现该病毒能在淋巴细胞中扩增而不影响DCCIK的增殖，但是感染痘苗融瘤病毒的DCCIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤活性增强了150倍以上。

鉴于DCCIK细胞以及融瘤病毒对肿瘤细胞的非特异杀伤特性，其对其它多种肿瘤尤其是肝癌、胰腺癌等难治性肿瘤的治疗也有极大的应用前景，目前我们正在研究之中。

关键词: 肿瘤 细胞免疫治疗 融瘤病毒 双特异抗体
一种高效扩增活化自体NK细胞的方法研究及其在治疗卵巢癌中的应用
马佳佳, 康文瑶, 郭雨刚，肖卫华，田志刚
中国科学技术大学生命学院,合肥 230022
背景：NK细胞是机体免疫系统杀伤肿瘤的一个重要组成部分，且因为NK细胞不依赖于抗原刺激，就可以杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，具有广谱抗肿瘤细胞作用。

因此获得高纯度、高杀伤活性的NK细胞是细胞治疗领域的一个亟待解决的难题。

目的：建立从PBMC中体外高效扩增高纯度NK细胞的技术方法。

方法：采用抗体及细胞因子联合刺激和诱导PBMC，高效扩增NK细胞；流式细胞术分析表面活化型和抑制性受体的表达情况、及杀伤活性相关的细胞因子分泌情况；51Cr释放实验检测对肿瘤细胞的体外杀伤活性；小鼠卵巢癌嵌合模型评估NK细胞体内回输及抗肿瘤治疗效果。

结果：从50 ml健康志愿者外周血中分离出PBMC，经由NK扩增混合试剂的刺激和诱导，体外培养14~21 d，NK细胞可平均扩增500倍左右，纯度60%~80%，数量达1.5×109。

扩增得到的NK细胞高表达NKG2D、NKp30、NKp46等活化性受体，及IFN-γ、GranzymeB、Perforin等杀伤因子，提示扩增得到的NK细胞具有较强的活性。

51Cr释
放体外杀伤实验结果显示，NK细胞对白血病细胞系K562和卵巢癌细胞系Ho8910有极高的杀伤活性。

采用人鼠卵巢癌嵌合模型对其体内抗肿瘤治疗效果研究显示，治疗组的小鼠生存期与对照组相比显著延长。

结论：本研究建立了一种可高效体外扩增高纯度、高杀伤活性的NK细胞体外扩增方法，获得的NK细胞具有显著的抗卵巢癌作用。

关键词: NK细胞; 体外扩增; 杀伤活性;卵巢癌；细胞治疗
TAMs为靶向的抗肿瘤纳米药物
丁枫1, 周玉美2, 韩新荣3, 吕璐1, 王小茜1, 王彩霞1, 郑源强1, 石艳春1
1内蒙古医科大学自治区分子生物学重点实验室，内蒙古呼和浩特 010058；
2北京中医药大学基础医学院，北京 100028；
3内蒙古医科大学护理学院，内蒙古呼和浩特 010058
化疗药物广泛用于肿瘤治疗，但如何才能提高药物的抗肿瘤效应并降低毒副作用呢？靶向药物是一种重要策略。

以往的肿瘤靶向药物主要针对肿瘤细胞本身，通过抑制或破坏细胞生长达到治疗肿瘤的目的，但许多动物试验所取得的良好疗效并未在临床上获得成功。

实体瘤中的肿瘤细胞通常被肿瘤基质包裹。

以肿瘤基质为靶向的药物传输新策略有望能够提高实体瘤局部药物的浓度。

Löhr等将紫杉醇包裹到阳离子脂质体中以实现对肿瘤内皮细胞的靶向给药，在II期临床试验中可提高局部和转移性胰腺癌患者生存率并延长存活期。

癌周星形细胞高表达骨黏连蛋白（能与白蛋白结合），将化疗药物与白蛋白结合后即可提高肿瘤局部药物浓度。

2013年FDA已批准纳米化白蛋白结合紫杉醇药物（nab-paclitaxel [Abraxane®]）用于治疗转移性胰腺癌、非小细胞肺癌和转移性乳腺癌。

巨噬细胞是浸润到肿瘤基质中数量最多的免疫细胞（M2型为主），可达肿瘤总质量的一半。

肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）主要位于肿瘤基质，可促进肿瘤细胞生长和血管生成，抑制适应性免疫应答，对肿瘤发展具有重要的作用。

TAMs表面高表达的甘露糖受体、清道夫受体和叶酸受体-β等都可能成为靶向药物的新靶点。

吉西他滨（Gemcitabine, Gem）是一种脱氧胞苷类食物，广泛用于治疗卵巢癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌等实体瘤。

Gem主要通过核苷酸协同运输途径进入细胞，在DNA合成酶α的作用下干扰DNA合成并诱导细胞凋亡。

根据上述Gem进入细胞的方式，Cui zhengrong等利用纳米颗粒构建了新的药物传输系统。

他们将Gem衍生物（4-(N)-stearoyl gemcitabine，GemC18）包裹到以TAMs表面甘露糖受体为靶向的酸敏感性纳米颗粒中，显著提高了药物在肿瘤组织的浓度，而在肝脏、脾脏等正常组织几乎没有分布。

这种传输方式既借助实体肿瘤的EPR效应，还可利用肿瘤内部pH6.8的偏弱酸环境实现GemC18在肿瘤内部的富集。

由此可见，根据药物进入细胞的途径设计一定大小的颗粒，不仅可以实现药物向肿瘤局部的富集，而且有望克服肿瘤细胞的耐药性，从而提高药物的治疗效果。

总之，以TAMs为靶向的药物传输方式是一种非常有前景的治疗策略。

关键词: 肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）；靶向药物；纳米药物；肿瘤治疗
胃癌个体化免疫治疗新趋势——个体化肽疫苗
杜娟，苏舒，邹征云，邵洁，孟凡岩，陈仿军，钱晓萍，刘宝瑞
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心，江苏南京 210008
摘要：胃癌是恶性肿瘤中的常见病种，其肿瘤相关的死亡率占全世界第二位。

在大多数情况下胃癌患者确诊时已是中晚期，经传统手术及放化疗治疗后胃癌的生存率仍然很低。

生物免疫治疗中肿瘤疫苗的研究在近几年取得了重大进步。

2011年的诺贝尔医学奖颁给了在树突状细胞研究方面做出了突出贡献的科学家，美国FDA也在2010年批准了用于内分泌治疗无效的晚期前列腺癌的树突状细胞疫苗，这些都更加坚定了人们在肿瘤疫苗治疗领域的信心。

根据肿瘤患者的个体遗传基因结构或蛋白表达的不同，选择个体化的肿瘤疫苗可以进一步提高治疗效果。

本文介绍了个体化肽疫苗在胃癌领域的临床研究进展及其与化疗、放疗。