钙蛋白酶-周期蛋白E介导EGF诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移能力增强
Numb基因不同亚型对乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力的影响
Numb基因不同亚型对乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力的影响苏杭;王保垒;李华顺;朱晨光【摘要】[目的]探讨Numb基因的4种不同亚型对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响. [方法]应用转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)技术敲除乳腺癌细胞MCF-7中Numb基因,分别将p65, p66, p71和p72这4种Numb亚型的表达载体转染进Numb-KO MCF-7细胞,应用CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验、流式细胞术检测Numb基因及其4种亚型对MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响. [结果]利用TALEN技术可以有效敲除MCF-7细胞中Numb基因, Numb-KO MCF-7组细胞的增殖和侵袭能力明显高于正常MCF-7细胞, Numb亚型p72对Numb-KO MCF-7细胞的增殖有明显的抑制作用, Numb亚型p65, p66, p71和p72均对Numb-KO MCF-7细胞的迁移有明显抑制作用.%[Objective] This study explores the role of Numb isoforms in proliferation and migration of breast cancer cells. [Methods] TALEN technology was used to knock out Numb gene in MCF-7 cells, and then transfected p65, p66, p71 and p72 expression vec-tors into these Numb-KO MCF-7 cells. On this occasion, CCK-8 proliferation assay and wound scratch assay were used to detect MCF-7 cell proliferation and migration. [Results] The results show that transcription activator-like effector nuclease (TALEN) is effective in knocking out Numb gene. Compared with normal MCF-7 cells, proliferation and migration abilities of Numb-KO MCF-7 cells are significantly enhanced. Numb isoform p72inhibits proliferation of Numb-KO MCF-7 cells, and Numb isoforms p65,p66, p71 and p72 inhibit migration of Numb-KO MCF-7 cells.【期刊名称】《上海大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(024)003【总页数】10页(P476-485)【关键词】乳腺癌;Numb基因;亚型;增殖;迁移【作者】苏杭;王保垒;李华顺;朱晨光【作者单位】上海大学生命科学学院,上海200444;中国科学院上海高等研究院干细胞与纳米医学研究中心,上海201210;同济大学附属东方医院转化医学高等研究院,上海200085;中国科学院上海高等研究院干细胞与纳米医学研究中心,上海201210;同济大学附属东方医院转化医学高等研究院,上海200085;上海大学生命科学学院,上海200444【正文语种】中文【中图分类】R73Numb作为细胞不对称性分裂的决定分子,最早被发现参与神经系统的不对称分裂,近年来被发现与肿瘤的恶性程度密切相关[1].Numb的缺陷会导致肿瘤的恶性程度增大,Numb在抑制上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)中的作用也较受关注[2].然而Numb表达缺陷导致肿瘤恶性程度增大的机制尚不清楚.研究表明,Numb能够阻滞抑癌蛋白p53被泛素化和降解的过程,并且与Notch,Hedgehog等重要信号通路密切相关;同时,Numb还是一种调节细胞内吞的因子[3-8].据报道Numb有6种剪切形式,但是最为广泛关注的剪切体有4种,分别为膜联形式(p66和p72)和胞质形式(p65和p71),其分子及细胞内定位的多样性使研究Numb的功能机制变得更为复杂[9-12].过去的一项研究对321例乳腺癌样本Numb进行免疫组化分析,发现Numb阳性率越低,乳腺癌的恶性程度就会越大[5].但是,很多研究仅仅通过Numb表达的总量来对肿瘤恶性程度进行分类,很少有研究涉及到Numb蛋白不同亚型在肿瘤细胞中的作用,而Numb的不同蛋白亚型之间,不论是在发育的时空表达方面,还是在功能方面,都有明显差异.研究Numb的不同亚型在肿瘤中的表达和功能,是一项亟待解决的问题.区分Numb不同形式的拼接分子的不同功能,对进一步了解Numb的功能及其调控机制极为必要.基于前期的研究结果,本工作研究Numb在乳腺癌细胞发生过程中的作用,并着重探讨不同拼接形式的Numb亚型对乳腺癌细胞的作用及机制,尝试以Numb的不同亚型表达高低作为肿瘤恶性程度分型的标志,为癌症个性化治疗提供指导.1 材料与方法1.1 材料DMEM(dulbeceo’s modif i ed eagle medium)培养液(高糖)、胎牛血清、磷酸盐缓冲盐溶液(phosphate buあer saline,PBS)(Hyclone公司);胰蛋白酶-乙二胺四乙醇(ethylendiaminetetraacetic acid)(Life Technologies公司);转染试剂Megatran1.0(Origene公司);细胞系筛选抗生素嘌呤霉素(Puromycin)(Sigma公司);放射免疫沉淀实验(radio immunoprecipitation assay,RIPA)裂解液(强)(碧云天公司);蛋白酶抑制剂coctail(Roche公司);质粒小量提取试剂(Omega公司);质粒中量提取试剂(MN公司);基因组提取试剂(天根生物公司);转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like eあector nuclease,TALEN)试剂(斯丹赛公司);各种限制性内切酶BamHⅠ和PstⅠ(NEB公司);细胞增殖与活性检测试剂CCK-8(同仁化学公司);人乳腺细胞系MCF-7细胞和人胚肾上皮细胞系293T细胞(中国科学院上海生命科学院细胞库);兔抗人Numb多克隆抗体(Cell Signaling Technology 公司);大鼠抗小鼠E-cadherin抗体(Takara公司);小鼠来源β-actin内参抗体(金斯瑞公司);山羊抗兔IgG(H&L)Antibody IRDye800CW抗体和山羊抗小鼠IgG(H&L)Antibody IRDye800CW抗体(Rockland Immunochemicals公司);Numb剪切体表达载体p65,p66,p71和p72(同济大学附属东方医院王保垒老师构建).1.2 细胞培养乳腺癌细胞MCF-7和人胚肾上皮细胞系293T细胞均采用含10%胎牛血清高糖DMEM培养液,置于37°C、CO2体积分数为5%的培养箱中培养.1.3 TALEN打靶载体构建及验证人体Numb基因有23个转录本,选取23个转录本中共同的编程序列(coding sequencce,CDS)区TCCAGAGGCCAGTCGTCCACATCAGTGGCAGACAGATGAAGAAGGCGTTCGC 设计打靶位点组合.TALEN打靶载体的构建及验证参照斯丹赛公司提供的TALEN 试剂盒使用说明书.1.4 Numb敲除的MCF-7细胞系构建在成功构建Numb基因TALEN打靶载体后,利用细胞转染试剂Megatran 1.0按标准方法将载体转入MCF-7细胞,Megatran 1.0与载体比例为3µL:1µg.24 h后换成含2µg/mL Puromycin的筛选培养基,筛选培养3 d,3 d后去上清,用PBS洗3次,消化细胞并计数,利用有限稀释法接种在96孔板中,待单克隆细胞团长起,消化细胞,提取基因组,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增Numb 基因片段,送测序.Numb基因PCR引物序列(5’-3’):AGAGGTAGATGGGTAGGCAGA,CACTCCCTCAGCTTCACCAG.Numb 基因测序引物序列(5’-3’):GTTAGTATGGTAAT-CCAAAG.选取Numb基因发生突变的细胞系,经Western blot检测Numb蛋白表达情况,选取不表达蛋白的细胞系,作为Numb-KO稳定细胞系.1.5 Western blot实验Numb基因敲除和正常MCF-7细胞用胰酶消化,收集细胞,用冷的PBS洗3次,然后用蛋白裂解液RIPA(强)冰上裂解30 min,4°C 13 000 g离心15 min,取上清即为提取的总蛋白悬液;二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测量蛋白质量百分比,加入SDS上样缓冲液100°C煮5 min,冰上放置5 min,即可进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(polyacrylamide gel electroph-oresis,PAGE)电泳;完成电泳后转印到聚偏二氟乙烯(polyvinylidene f l uoride,PVDF)膜上,294 mA,1 h;用含5%脱脂奶粉的PBS封闭1 h;4°C一抗(1:1 000)过夜,然后用PBS洗3次,每次5 min;二抗(1:10 000)室温孵育1 h,然后用PBS洗3次,每次5 min,利用Odyssey双色红外荧光成像系统成像.1.6 Numb各亚型瞬时表达细胞系构建将p65,p66,p71,p72和EGPF这5种质粒表达载体转染进Numb-KO MCF-7细胞中,分别命名为p65组,p66组,p71组,p72组和增强绿色荧光蛋白(enhanced green f l uorescent protein,EGFP)组(阴性对照).使用的转染试剂为Megaran 1.0,于转染后24 h更换培养基,各瞬时表达细胞系用于以后的实验.1.7 细胞增殖曲线测定收集细胞,加细胞悬液100µL(5 000个细胞)到96孔板(边缘孔用无菌水或PBS填充).设置空白孔(有培养基,无细胞)和对照孔(正常MCF-7细胞),每组设定5个复孔.置37°C,5%CO2孵育过夜,倒置于显微镜下观察.每孔加入10µL CCK-8溶液,37°C 孵育1 h.测定450 nm各孔的吸光值.将各测试孔的光密度值(optical density,OD)值减去空白孔OD值,即为相对吸光度.1.8 细胞划痕实验测定迁移能力将Numb-KO MCF-7组、MCF-7组细胞接种于6孔板中(5×104个细胞/孔),待细胞呈现单层紧密贴壁生长时用黄色移液器吸头划痕,用PBS洗去悬浮细胞,用含2%胎牛血清的高糖DMEM培养基继续培养细胞.分别于划痕后0,24,48 h在光学显微镜下观察并拍照,并应用Image-Pro Plus 6.0软件测量划痕间的距离,计算细胞迁移率.1.9 PI染色检测细胞周期计数细胞,在流式管中加入1×106个细胞,用PBS洗涤1次(300 g离心5 min).用多聚甲醛固定细胞:去上清,加入500µL冷PBS,轻柔混匀.加入500µL的4°C的2%多聚甲醛,再次混匀.4°C孵育1 h.乙醇破膜:300 g离心5 min,去上清,再次用3 mL 冷PBS洗涤1次.逐滴加入1 mL 70%的乙醇(−20°C),边加边振荡混匀,4°C孵育过夜.PI染色:300 g离心5 min,去上清,加入RNAse工作液1 mL,室温放置30 min,300 g离心,去上清加入1 mL碘化丙啶(propidium iodide,PI)工作液,37°C避光孵育30 min,用40或70µm的滤网过滤掉团块.上机分析.1.10 流式细胞术检测细胞表面蛋白将单细胞悬液加入离心管中,离心,300 g,5 min,弃上清液.以冷PBS 1 mL离心洗涤,弃上清液.用PBS稀释的第一抗体200µL,对照管中加入对应于一抗的动物IgG,轻轻吹打混匀,4°C或置冰上孵育1.5～2.0 h.离心,弃上清.PBS 1 mL离心洗涤2次,以去除多余的未结合的特异性抗体.PBS适当稀释的荧光素标记的第二抗体200µL,吹打混匀,4°C或置冰上孵育30 min,避光.PBS 1 mL离心洗涤2次.将细胞重新悬浮于0.5 mL的PBS中,混匀,置流式管中,避光,4°C冰箱保存,4 h内上机检测.1.11 统计学方法本工作中的各项实验均重复3次.采用SPSS 18.0软件进行数据分析,用Student’s t-test分析2组间的差异,以p＜0.05表示差异具有统计学意义.2 结果2.1 利用TALEN技术建立Numb基因敲除体外模型构建的TALEN敲除载体转染MCF-7细胞后,经Puromycin抗性筛选,单克隆挑取,PCR扩增Numb靶点DNA序列,测序验证,选取Numb基因发生突变的单克隆细胞扩大培养.测序结果显示,Numb-KO MCF-7细胞Numb基因发生缺失7个碱基的突变(见图1).经Western blot检测,检测不到Numb蛋白的表达,故Numb敲除细胞模型成功建立(见图2).2.2 Numb基因敲除促进MCF-7细胞增殖CCK-8检测细胞增殖结果显示,从培养第3天起,Numb-KO MCF-7的细胞增殖速度明显高于对照组正常MCF-7细胞,说明Numb基因敲除能够明显促进MCF-7的增殖,提示Numb对乳腺癌发生发展具有抑制作用(见图3).PI染色检测细胞周期结果显示,在敲除Numb基因后,G0G1期细胞比例降低了9.28%,G2M期细胞比例增加了4.36%,S期细胞比例增加了4.92%,说明Numb可以抑制MCF7细胞由G0G1期往G2M期和S期转化,对MCF-7细胞的增殖起到抑制作用(见表1).图1 Numb-KO MCF-7细胞Numb基因测序结果(红框内:缺失的碱基)Fig.1 DNA sequencing of Numb in Numb-KO MCF-7 cells(Red box:deleted bases) 图2 MCF-7细胞和Numb-KO MCF-7细胞Numb表达Fig.2 Expression of Numb protein in MCF-7 and Numb-KO MCF-7 cells图3 CCK-8检测MCF-7细胞增殖Fig.3 MCF-7 cell proliferation assessed by CCK-8表1 PI染色及流式细胞术检测MCF-7和Numb-KO MCF-7的细胞周期Table 1 Detection for cell cycle of MCF-7 and Numb-KO MCF-7 cells by staining with PI and f l ow cytometry %类目 G0G1期 G2M期 S期MCF-767.43±0.26 6.71±0.23 25.85±0.16 Numb-KO MCF7 58.15±0.2411.07±0.57 30.77±0.402.3 Numb基因敲除促进MCF-7细胞迁移采用细胞划痕实验检测正常MCF-7细胞和Numb敲除后MCF-7细胞迁移能力的结果显示,在细胞划痕48 h后,Numb-KO MCF-7细胞迁移率比阴性对照组正常MCF-7细胞迁移率高出22%,提示Numb对MCF-7细胞的迁移能力有抑制作用(见图4).流式细胞术检测上皮细胞表面钙粘蛋白(E-cadherin)结果显示,Numb敲除后的MCF-7细胞细胞表面E-cadherin的表达量(平均荧光强度(median f l uoresence intensity,MFI))降低了20.28%,说明Numb敲除后MCF-7细胞间黏附能力减弱,细胞迁移能力增强(见图5).2.4 Numb基因各亚型转染效率观察Numb基因各亚型转染Numb-KO MCF-7细胞24 h后,在荧光显微镜下观察可见载体质粒上的绿色荧光蛋白表达,细胞发出绿色荧光,转染效率大于90%,说明载体基因得到充分表达(见图6).图6中,第1行图为在相差显微镜明场下观察,第2行图为暗场观察绿色荧光.图4 划痕实验检测细胞迁移能力Fig.4 Detection for the abilities of migration of MCF-7 cells by wound scratch assay图5 流式细胞术检测E-cadherin表达水平Fig.5 E-cadherin expression level detected by f l ow cytometry图6 Numb-KO MCF-7转染后荧光显微镜观察Fig.6 Fluorescent microscope observation of Numb-KO MCF-7 cells2.5 Numb基因的4个亚型对MCF-7细胞增殖的影响采用CCK-8细胞增殖实验结果绘制细胞增殖曲线(见图7(a)),发现在培养的第3天时,与阴性对照组(EGFP)相比,Numb基因的亚型P72转染组细胞增殖能力明显减弱.当培养第3天时各组细胞增殖情况可由图7(b)直观地看出.相对吸光值p72组比EGFP组降低16%,提示p72可以抑制Numb-KO MCF-7细胞的增殖.其他3种亚型p65,p66,p71对Numb-KO MCF-7细胞增殖无明显抑制作用(见图7).通过PI检测细胞周期实验结果发现,对Numb-KO MCF-7细胞增殖抑制最明显的仍为p72,p72转染后可将G0G1期细胞比例提高17.75%,S期细胞比例降低18.2%,对G2M期细胞比例没有影响,说明p72可以抑制细胞由G0G1往S期的转变,从而抑制细胞增殖(见表2).图7 CCK-8检测个亚型转染后Numb-KO MCF-7细胞增殖能力Fig.7 Numb-KO MCF-7 cell proliferation assessed by CCK-8 after transfection with Numb isoforms表2 PI染色及流式细胞术检测各亚型转染后Numb-KO MCF-7的细胞周期Table 2 Detection for cell cycle of Numb-KO MCF-7 cells after p65,p66,p71 and p72 expression vector transfecting by staining with PI and f l ow cytometry %类目 G0G1期 G2M期 S期EGFP 58.15±0.24 11.07±0.57 30.77±0.40 p65 61.5±0.54 5.38±0.31 33.03±0.23 p66 58.81±0.3710.03±0.25 31.16±0.41 p71 47.00±0.66 15.89±0.10 37.11±0.19 p72 75.9±0.39 11.53±0.46 12.57±0.112.6 Numb基因的4个亚型对MCF-7细胞侵袭能力的影响细胞划痕后于含2%FBS的高糖DMEM培养基中培养24 h,结果显示各亚型转染组迁移率与阴性对照EGFP组相比,迁移比率降低程度分别为p65组8.29%,p66组7.95%,p71组8.95%和p72组8.49%,这说明4种亚型均对Numb-KO MCF-7细胞迁移能力有抑制作用,但是抑制能力没有差异(见图8).用流式细胞术检测各亚型转染后Numb-KO MCF-7细胞表面E-cadherin的表达情况后发现,4种亚型转染组与EGFP(阴性对照)组相比,E-cadherin表达量(MFI)均有所提高,提高程度分别为p65组23.65%,p66组39.78%,p71组24.73%和p72组44.80%,说明4种亚型均对Numb-KO MCF7细胞的迁移能力起到抑制作用(见表3).图8 划痕实验检测Numb各亚型对Numb-KO MCF-7细胞迁移能力的影响Fig.8 Dection for the abilities of migration of Numb-KO MCF-7 cells by wound scratch assay表3 流式细胞术检测各亚型转染后Numb-KO MCF-7细胞表面E-cadherin表达水平Table 3 E-cadherin expression levels of Numb-KO MCF-7 cells after p65,p66,p71,p72 expression vector transfecting by f l ow cytometry类目EGFP p65 p66 p71 p72 MFI 279±13 345±7 390±11 348±19 404±63 讨论为探讨Numb不同亚型在乳腺癌发生中的作用,本工作利用TALEN技术构建了Numb敲除的MCF-7稳定细胞系Numb-KO MCF-7.首先,在Numb基因敲除后,MCF-7细胞增殖和迁移能力明显增强,进一步研究发现,Numb基因敲除后的MCF-7细胞S期和G2M期的比例增大,说明Numb可以阻滞MCF-7细胞由G0G1期往S期和G2M的转变,从而抑制MCF-7细胞的分裂.E-cadherin是一类介导同源细胞间粘附的钙离子依赖性跨膜糖蛋白,主要存在于人和动物上皮细胞中,对于维持上皮细胞形态和组织完整性发挥重要作用,同时抑制肿瘤的侵袭转移,影响原发肿瘤的早期生长和继发肿瘤的增殖生长.Numb敲除后的MCF-7细胞表面E-cadherin表达量降低,可能是肿瘤迁移能力增强的一个标志[13].Numb基因对MCF-7细胞的增殖和迁移的抑制,原因可能是由于Notch、Hedgehog等信号通路失去Numb蛋白的抑制从而被增强,p53稳定性和细胞内吞稳态平衡也可能受到影响,这与以往Numb基因在其他肿瘤细胞中的研究结果相吻合[14].Numb基因的4种亚型的产生,是由于哺乳动物Numb基因存在转录后的选择性剪切,在磷酸酪氨酸结合(phosphotyrosine-binding,PTB)和富含脯氨酸域(proline-rich region,PRR)结构域分别插入11个氨基酸(ERKFFKGFFGK)或48个氨基酸(ANGTDSAFHVLAKPAHTALAPVA MPVRETNPWAHAPDAANKEIAATCS),由此产生PTBSPRRS(p65),PTBLPRRS(p66),PTBSPRRL(p71)和PTBLPRRL(p72)[9-10,15]4种蛋白亚型.本工作通过4种Numb表达质粒载体p65,p66,p71和p72分别转染Numb-KO MCF-7细胞,发现PTBLPRRL(p72)能够将Numb-KO MCF-7细胞的细胞周期阻滞在G0G1期,从而对细胞的增殖有明显的抑制作用,4种Numb基因亚型均对Numb-KO MCF-7细胞迁移能力有抑制作用,而且这4种亚型转染后,均能提高Numb-KO MCF-7细胞表面E-cadherin的表达量.过去曾有学者在不同的系统中对Numb各亚型进行研究,发现在原代培养的小鼠神经前体细胞中,过表达PRRL将促进增殖,同时将不影响或抑制分化,而过表达PRRS 则促进分化,同时抑制或不影响增殖[16];在P19细胞系中,PRRS能促进分化,而PRRL则不能;在视黄酸的诱导下,PRRL将促进P19细胞的增殖,而PRRS则不能[9];在果蝇外视原基中,h-PTBSPRRL(h表示来自人)能促进神经上皮细胞增殖,同时不影响分化,h-PTBSPRRS则能促进神经上皮分化而抑制其增殖[17].本研究结果与之前的一些报道有些不同,究其原因可能是研究系统有差异,因为在不同的组织细胞中,不同的Numb蛋白亚型具有不同功能,这是Numb的一个主要特点.Numb蛋白发挥作用主要是通过PTB和PRR 2个结构域,这2个结构域使得Numb能够介导其他蛋白的连接,从而发挥多种生理功能[18-20].Numb蛋白亚型p72与其他亚型相比,最主要的特点是在PTB和PRR 2个结构域中都有插入序列.Numb蛋白亚型p72对乳腺癌细胞增殖能力的抑制,可能是发挥维持Notch,Hedgehog和TP53等信号通路平衡的作用,而这一作用可能需要PTB和PRR结构域中的2个插入序列.而p65,p66,p71和p72这4种亚型均对MCF-7细胞迁移起到抑制作用,与Numb 参与的细胞黏附、细胞迁移的功能有关[21],这一功能的发挥可能不需要PTB和PRR结构域中的2个插入序列.Numb基因的不同蛋白亚型之间,不论是在发育时空的表达上,还是在功能方面,都有明显的差异,这使得Numb蛋白的亚型研究非常复杂.在过去10多年里得到了一些有价值的结果,但由于各种研究采用的系统不同,无法得出一个统一的结论[22].这是由Numb蛋白本身的特点决定的:Numb作为一个衔接蛋白,能够介导不同蛋白之间的连接,这使得Numb细胞选择命运的一个工具在不同的发育时空背景下被反复使用.因此,对Numb蛋白不同亚型的研究,要精确到特定的发育阶段和细胞类型.本工作对乳腺癌细胞系MCF-7中的Numb亚型作用进行了初步研究,但Numb亚型在肿瘤中的表达情况及生物学功能、各个亚型与Notch,Hedgehog等信号通路是如何作用的,都还值得在今后作进一步研究.参考文献:[1]PECE S,CONFALONIERI S,RR P,et al.Numb-ing down cancer by more than just a Notch[J].Biochimica et Biophysica Acta,2011,1815(1):26-43. 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慢性缺氧应激可能通过EMT增强乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为
慢性缺氧应激可能通过EMT增强乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为陈坚;何咏竟;汪思应;胡敏【摘要】目的:探讨慢性缺氧应激对人乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的影响及可能机制.方法:将人乳腺癌MCF-7细胞分为缺氧组(1%O2、5%CO2和94%N2)和正常对照组(常氧)进行培养.利用MTT法、CCK-8实验、细胞直接计数法及细胞侵袭和迁移实验对MCF-7细胞活力、增殖及侵袭和迁移能力进行检测;用软琼脂集落形成实验及Matrigel 3D培养技术检测MCF-7细胞非锚定生长能力及极性改变情况;利用MCF-7细胞构建裸鼠皮下种植瘤模型,检测慢性缺氧应激对体内肿瘤生长及肺转移的影响;利用倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改变;Western blot检测低氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)和磷酸化的糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在缺氧环境下表达水平的改变,以及E-钙黏连蛋白(E-cadherin)、N-钙黏连蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、MMP-9等上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平.结果:与正常对照组相比较,慢性缺氧组MCF-7细胞活力、增殖能力及侵袭迁移能力增强,细胞非锚定生长能力提高且在3D培养系统更容易发生极性改变,呈现侵袭样生长,体内生长及转移能力增强;除了HIF-1被缺氧诱导表达升高外,GSK-3β呈现活化趋势,且上皮样标志物E-cadherin蛋白表达水平明显下降,而间充质样标志物N-cadherin、vimentin、MMP-3和MMP-9蛋白表达水平明显升高.结论:慢性缺氧应激促进了乳腺癌细胞恶性生物学行为,且其机制可能与EMT有关.%AIM:To investigate the effects of chronic hypoxia on the aggressiveness of MCF-7, a human breast cancer cell line , and the underlying mechanisms .METHODS: MCF-7 cellswere cultured under hypoxia ( 1% O2 , 5%CO2 and 94%N2 ) or control (95%O2 and 5%CO2 ) condition.The viability, proliferation, and invasion and migration abilities of the MCF-7 cells were determined by MTT assay , CCK-8 assay, cell counting, and cell invasion and migrationassays.Anchorage-independent growth and the alteration of cellular polarization of the MCF-7 cells were tested by soft agar colony formation assay and Matrigel-3D culture assay, respectively.The effects of chronic hypoxia on the growth and metas-tasis of MCF-7 cells in vivo were investigated by xenograft in nude mice .The morphological changes of the MCF-7 cells were observed under an inverted microscope .Hypoxia-induced alterations in the levels of hypoxia inducible factor-1 ( HIF-1 ) and phosphorylated glycogen synthase kinase-3β( p-GSK-3β) as well as epithelial-mesenchymal transition ( EMT) mol-ecules, such as E-cadherin, N-cadherin, vimentin, matrix metalloproteinase ( MMP)-3 and MMP-9, were determined by Western blot .RESULTS:Chronic hypoxia significantly increased the viability , proliferation , and invasion and migration abilities of MCF-7 cells in vitro, enhanced the anchorage-independent growth , facilitated cellular polarization alteration in Matrigel-3D culture, and promoted cancer metastasis in vivo.Hypoxia up-regulated HIF-1, activated GSK-3β, down-regu-lated E-cadherin and increased the protein levels of N-cadherin, vimentin, MMP-3 and MMP-9.CONCLUSION:Chronic hypoxia enhances the aggressiveness of breast cancer cells probably through EMT .【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(033)010【总页数】6页(P1831-1836)【关键词】乳腺癌;缺氧;肿瘤转移;肿瘤微环境;上皮-间充质转化【作者】陈坚;何咏竟;汪思应;胡敏【作者单位】安徽中医药大学,安徽合肥230038;厦门大学第一附属医院超声科,福建厦门361001;安徽医科大学,安徽合肥230032;安徽医科大学,安徽合肥230032;安徽中医药大学,安徽合肥230038【正文语种】中文【中图分类】R363.1;R737.9乳腺癌发病率在经济发达地区居于女性恶性肿瘤的首位[1]，以手术为主的综合治疗虽然取得较好的临床疗效，但浸润和转移仍旧是影响患者生存率和死亡率的主要因素[2]。
中期因子在肺癌中的研究进展
中期因子在肺癌中的研究进展栾兆吉诸兰艳【摘要】中期因子（ＭＫ）作为肝素结合生长因子家族的一员，参与调控细胞增殖、迁移和诱导细胞恶性转化，并在肿瘤的生长和血管生成等方面起着重要作用。
ＭＫ在肺癌组织中呈过表达．肺癌患者血清ＭＫ水平升高且与预后不良相关。
因此。
ＭＫ有望成为一种新的肿瘤标志物。
随着ＲＮＡ干扰及特异性启动子参与基因治疗等技术的发展，ＭＫ可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。
本文就ＭＫ与肿瘤特剐是肺癌的关系进行综述。
【关键词】中期因子；肝素结合生长因子；肿瘤标志物；基因治疗；肺癌ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｍｉｄｋｉｎｅｉｎｌｕｎｇｃｓｎｃｅｒＬＵＡＮＺｈａｏ－ｊｉ，ＺＨＵＬａｎ—ｙａｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００１１，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＵＬａｎ—ｙａｈ，Ｅｍａｉｌ：捌ｈｕｌａｎｙａｎ８８８８＠ｓｉｎａ．ｃ０１＂ｎ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｍｉｄｋｉｎｅ（ＭＫ）。
ａｈｅｐａｒｉｎｂｉｎｄｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．ｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ。
ａｎｄｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＭＫｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｓｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．ＴｈｅｓｅｒｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＭＫｉｓｈｉｇｈｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ。
ｗｈｉｃｈｉｓｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｉｔｍａｙｓｅｒｖｅａｓａｎｅｗｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒ．ＷｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅａｎｄｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｐｒｏｍｏｔｏｒ．ＭＫｍａｙｂｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｓａｎｅｗｔａｒｇｅｔｆｏｒｏｎｃｏｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＭＫａｎｄｔｕｍｏｒ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．［ＫｅｙＷｏｒｄｓ］Ｍｉｄｋｉｎｅ；Ｈｅｐａｒｉｎｂｉｎｄｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ；Ｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒ；Ｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ；Ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ中期因子（ｍｉｄｋｉｎｅ，ＭＫ）是肝素结合性生长因子家族中新发现的一类成员，是一种分泌型肝素结合生长因子，为低相对分子质量的蛋白质。
大黄酸药理作用的新进展
大黄酸药理作用的新进展郑舟琴【期刊名称】《《重庆医学》》【年(卷),期】2019(048)022【总页数】5页(P3897-3901)【关键词】大黄酸; 药理作用; 进展【作者】郑舟琴【作者单位】南方医科大学南京临床医学院/东部战区总医院内分泌科南京210002【正文语种】中文【中图分类】R961.1大黄酸是一种广泛存在于中草药如大黄、决明子、何首乌、芦荟等中的亲脂性蒽醌类化合物，在中国作为药物使用已超过1 000年。
人们一直都在积极探索其与人类健康相关的药理作用，然而，因其溶解性差、生物利用度低，很大程度上限制了它的临床用途。
随着近几年药物提取、分离技术的提高，大黄酸及其衍生物在临床上已经得到了广泛应用。
本文总结了近几年国内外对大黄酸药理作用的大量研究，对大黄酸的药理特性进行了详细阐述，进一步支持大黄酸在临床上的潜在用途。
1 抗炎作用近来有研究表明大黄酸(5、20 μmol/L)可减少白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α等促炎细胞因子的生成，同时抑制核因子(NF)-κB和核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症因子途径，显著减少免疫细胞迁移而发挥强大的抗炎作用[1-2]。
此外，大黄酸可显著逆转炎症中活化转录因子6(ATF6)、p66Shc及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基p22PHOX和GP91PHOX表达上调，抑制基质金属蛋白酶(MMP)-2及磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B(pAKT/Akt)比值增加而减轻炎性反应[3]。
内皮细胞黏附分子(ECAM)与炎症诱导的血管并发症密切相关。
研究发现大黄酸可通过减少ECAMs的转录和表达降低炎症引起的血管并发症[4]。
此外，大黄酸衍生物-赖氨大黄酸可显著减少炎性因子的产生并阻断TNF-α/NF-κB信号通路，从而抑制肾脏炎症进展[5]。
研究显示大黄酸能显著降低骨关节炎患者软骨细胞IL-1受体水平，从而有效地抑制软骨细胞中IL-1β的合成及这种细胞因子对软骨的破坏作用[6]。
Cyclin G_2表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞的作用
Ｃ Ａ Ｇ Ａ Ａ Ｇ Ｃ Ａ Ｔ Ｃ Ｇ ３ 。Ｒ —Ｃ 反应 按 Ａ Ｇ Ｃ Ｃ Ａ Ｇ ＴＡ Ａ Ａ 一 ＴＰ Ｒ
非传统意义的细胞周期蛋 白， 在人体多种正常组织 中有表达 ， 口腔鳞癌 、 在 胃癌 、 甲状腺癌等多种恶性 肿瘤 中表达显著下降 ， 推测其可能是一种抑癌基因， 在肿 瘤发 生 及 恶 化 进 程 中 具 有 重 要 作 用 。２０ ０７年
１２ １ Ｃ ｃｎ Ｇ Ｄ Ａ 克 隆 肾 小 管 上 皮 细 胞 ． ． ｙｌ ，ｃ Ｎ ｉ Ｈ － Ｋ２常规 培 养 ， 用 Ｔ Ｉ ｌ ｅｇｎ 提 取 总 Ｒ Ａ， 采 Ｒｚ ａｅｔ ｏＲ Ｎ 根据 Ｇ ｎａｋ记 录 的 Ｃｃｉ Ｇ （ Ｍ－０３４ ｃ Ｎ ｅｂｎ ｙｌ ２ Ｎ ０４５ ） Ｄ Ａ ｎ 序列 ， 由上 海生 工 设 计 相 应 引 物 并 加 Ｘ ｏＩ和 Ｂ ｍ ｈ ａ Ｈ Ｉ内切 酶位 点 ， 游 引 物 ５一Ｃ Ｃ Ｃ Ａ Ａ Ａ Ｇ 上 Ｃ Ｇ Ｔ Ｇ Ｇ Ａ Ｇ
文献标志码 ： Ｂ 文章编号 ：０ ２２６ ２ １ ） １ ０ ５ ２ １０ —６ Ｘ（０ １４ － ５ － ０ ０
成 功构建 了 ｐ ｓ ｅ２ Ｃｃｉ Ｇ Ｄ Ｒ ｄ－ ｙｌ ： ｎ
融合表达质粒 ， 转染 ＭＣ － Ｆ７细胞后散在分布于细胞质和细胞 ， 核转染重组质粒的 ＭＣ － Ｆ７细胞凋亡率明显增高 （ Ｐ＜ 关键词 ： 乳腺 肿瘤 ； 细胞周期蛋 白 Ｇ ； ： 真核表达载体 ； 凋亡
购 自上 海 生 物 工 程 公 司 ； 粒 提 取 试 剂 盒 购 于 质
ＴＡ Ｇ Ｎ公 司 ； ｗ ｔ Ｎ Ｃ ｉ 胶 回收试 剂 ＩＮ Ｅ Ｔ ｏＳｅ Ｒ Ａ Ｐ Ｒ Ｋｔ ｐ 、
乳腺癌细胞培养
MCF-7是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10- 15%的小牛血清就能长得很好。
一般两到三天传一代。
传代也很常规。
吸出培养基，加入0.25%的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。
再加入2ml胰酶(25ml 培养瓶)静置消化2—5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。
我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。
因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。
需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。
MDA-MB-231人乳腺癌细胞细胞中文名称人乳腺癌细胞细胞英文名称MDA-MB-231物种人细胞形态特征上皮样细胞生长特性贴壁生长细胞特种特性MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。
该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7BS基因培养基L15: Leibovitz Medium血清10%FBS细胞传代方法1:2~1:4 传代；每周2~3次细胞传代情况C5细胞冻存条件MDA-MB-231人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性说明培养基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%培养条件：37 C 5% CO2消化条件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA 溶液，消化5-10min传代的比例：1 : 2~1: 4换液时间：2~3天换液一次冻存液比例：85%培养基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO冻存密度：1-2 X 10 6/管，液氮保存MDA-MB-231人乳腺癌细胞复苏方法：取出冻存管后，投入37 C水浴中，震荡解冻2 min , 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入 5 ml 37 C预热的培养基，并清洗冻存管一次，将离心管离心( 1000 rpm , 5 min),弃去上清液，再加入2 ml培养■基，转入培养瓶中培养。
乳腺癌放疗抵抗机制的研究进展
- 172 -*基金项目：国家自然科学基金青年项目（81903119）；中山大学高校基本科研业务费青年教师培育项目（20ykpy52）①中山大学附属第一医院 广东 广州 510080通信作者：毕月乳腺癌放疗抵抗机制的研究进展*毕月① 【摘要】 放疗是鼻咽癌、乳腺癌及直肠癌等多种恶性肿瘤的重要治疗手段，不过部分患者会出现放疗抵抗的现象，造成转移及复发，从而降低患者生存率。
乳腺癌患者放疗抵抗的发生与多种因素有关，如肿瘤干细胞及肿瘤微环境等。
乳腺癌放疗患者的治疗效果与放疗抵抗密切相关，对放疗抵抗的产生机制进行研究有助于减少或者抑制放疗抵抗，提高放疗效果，改善患者预后。
本文从肿瘤干细胞、自噬性调节及DNA 损伤修复等多个方面做一综述，旨在为随后研究提供思路。
【关键词】 乳腺癌 放疗抵抗 肿瘤干细胞 自噬性调节 细胞周期调控 上皮间充质转化 DNA 损伤修复 Research Progress on the Mechanism of Radiotherapy Resistance in Breast Cancer/BI Yue. //Medical Innovation of China, 2023, 20(30): 172-176 [Abstract] Radiotherapy is an important treatment method for nasopharyngeal carcinoma, breast cancer, rectal cancer and other malignant tumors. However, some patients may experience resistance to radiotherapy, which may cause metastasis and recurrence, thus reducing the survival rate of patients. The occurrence of radiotherapy resistance in breast cancer patients is related to many factors, such as cancer stem cell and tumor microenvironment. The therapeutic effect of breast cancer patients undergoing radiotherapy is closely related to their resistance to radiotherapy. Studying the mechanism of resistance to radiotherapy can help reduce or inhibit resistance to radiotherapy, improve the effect of radiotherapy, and improve the prognosis of patients. This article reviews cancer stem cell, autophagy regulation, DNA damage repair and other aspects in order to provide ideas for subsequent research. [Key words] Breast cancer Radiotherapy resistance Cancer stem cell Autophagy regulation Cell cycle regulation Epithelial mesenchymal transformation DNA damage repair First-author's address: First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.30.040 乳腺癌是严重危害女性身心健康的一种恶性肿瘤。
miR-19影响人乳腺癌MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的研究
［ 摘 要】目的 探 讨 ｍ ｉ Ｒ —ｌ ９对 人乳 腺 痛 ＭＣ Ｆ ７细 胞 增 殖 、 迁 移 及侵 袭 的影 响 。 方 法 体 外 培 养人 乳 腺癌 ＭＣ Ｆ ７细
胞， 分 别转 染 ｐ ｒ ｅ — ｍｉ Ｒ —ｌ ９和 ｍｉ Ｒ —ｌ ９抑制 物 ， 然 后 应 盼 蓝 法检 测 ＭＣ Ｆ ７细 胞 活性 和增 殖 情 况 应 Ｌ ｝ ｛ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｗ ｅ Ｉ ｌ
小 审 法 测 定 ＭＣ Ｆ ７细 胞 迁 移 和 侵 袭 能 力 改 变 。 结 果 ｐ ｒ ｅ — ｎ ｉ ｆ Ｒ —ｌ ９转 染 组 的 ＭＣ Ｆ ７细 胞 生 长 抑 制 率 ＿ Ｆ降 细 胞 活
性 和增殖 能 力增强 ， 细胞 迁 移 侵袭 能 力增 强 ； ｍｉ Ｒ 一 １ ９抑 制物 转 染组 的 ＭＣ Ｆ ７细 胞 ， 卜 长 抑 制 率增 高 ， 细胞 活 性 和 增殖 能 力 降， 细 胞迁 移 侵袭 能 力减 弱 。 结论 仵 乳 腺 癌 的 发牛 发 展 过 稗 巾 ， ｍｉ Ｒ 一 １ ９发 扦 原 癌 基 ｌ 太 Ｉ 作州 ， 促 进
・
临床 研 究 ・
一 一
２ ０ １ ３ 年 １ ０ 月 第 ５ ｌ 卷 第 ３ ０ 期
ｍｉ Ｒ－ １ ９影响人乳腺癌 ＭＣ Ｆ ７细胞增殖 、 迁移及 侵 袭 的研 究
桃叶珊瑚苷对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制
桃叶珊瑚苷对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制Δ司运辉 1＊，蒋凯 2，钱立全 1，陈永顺 3，别会杰 1（1.商丘医学高等专科学校解剖与组胚教研室，河南 商丘 476000；2.商丘医学高等专科学校生理学教研室，河南 商丘 476000；3.商丘医学高等专科学校药理学教研室，河南 商丘 476000）中图分类号 R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）08-0918-07DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.08.04摘要 目的 探讨桃叶珊瑚苷（Auc ）调节周期蛋白依赖性激酶1（CDK 1）/周期蛋白B 1（CCNB 1）/Polo 样激酶1（PLK 1）信号通路对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响。
方法 以人乳腺癌细胞MCF-7为对象，将其分为对照组，Auc 低、中、高浓度组（Auc-L 、Auc-M 、Auc-H 组，20、40、80 μmol/L 的Auc ），Auc-H+pcDNA-NC 组（80 μmol/L 的Auc+转染pcDNA-NC 质粒），Auc-H+pcDNA-CDK 1组（80 μmol/L 的Auc+转染pcDNA-CDK 1质粒），检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移能力，凋亡情况及周期分布，凋亡、上皮-间充质转化（EMT ）、CDK 1/CCNB 1/PLK 1信号通路相关蛋白的表达情况。
以BALB/c 裸鼠为对象，通过皮下接种MCF-7细胞悬液建立移植瘤模型，并将其分为对照组和Auc 组（每组12只），检测各组裸鼠肿瘤体积、质量及肿瘤组织中CDK 1/CCNB 1/PLK 1信号通路相关蛋白的表达情况。
结果 与对照组细胞相比，Auc 各浓度组的细胞克隆形成数、增殖率、细胞侵袭数、划痕愈合率、G 1/G 0期和S 期细胞占比以及B 细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、神经钙黏素、纤维连接蛋白、CDK 1、CCNB 1、PLK 1蛋白的表达水平均显著降低（P ＜0.05），细胞凋亡率、G 2/M 期细胞占比以及Bcl-2相关X 蛋白、上皮钙黏素蛋白的表达水平均显著增加（P ＜0.05），呈浓度依赖性（P ＜0.05）；与Auc-H+pcDNA-NC 组细胞相比，Auc-H 组细胞上述指标的差异均无统计学意义（P ＞0.05），而Auc-H+pcDNA-CDK 1组细胞上述指标则显著逆转（P ＜0.05）。
上皮间质转化与乳腺癌的研究进展
上皮间质转化与乳腺癌的研究进展屈洪波【摘要】在肿瘤演进中,原发性肿瘤中的一些细胞再次激活调控胚胎发育被称之为上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的潜在途径,使得上皮细胞获得间质细胞特征,更易发生侵袭和转移.EMT的异常激活与高侵袭基底型乳腺癌相关,提高了细胞生存能力、获得干细胞潜能及增强其侵袭转移能力,EMT化的癌干细胞对常规治疗更具有抵抗性.本文总结了与EMT相关的调控因子及癌干细胞在乳腺癌进展中的作用.%During cancer progression, some cells within the primary tumor may reactivate a latent embryonic program known as epithelial-mesenchymal transition (EMT). Through EMT, epithelial cells can acquire the mesenchymal traits that seem to facilitate invasion and metastasis. Aberrant activation of EMT is associated with the highly aggressive basal-like breast cancer and confers increased cell survival, stem-like properties, and migratory and invasive capabilities. The cancer stem cells derived from EMT are more resistant to many conventional cancer therapies. The purpose of this review was to summarize the regulatory factors related to EMT, cancer stem cells in breast cancer progression, and therapy resistance.【期刊名称】《中国癌症杂志》【年(卷),期】2012(022)001【总页数】5页(P64-68)【关键词】上皮间质转化;癌干细胞;乳腺癌;侵袭转移;化疗抵抗性【作者】屈洪波【作者单位】重庆医科大学附属第一医院内分泌外科,重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R737.9上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT) 是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程。
抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强抗肿瘤药物的抑癌作用
药 物秋 水仙 碱 具 有 拮抗 作 用 （ Ｑ值 ＜１ 。结 论 ） 在 敲 除 乳腺 癌 细 胞 中人 凋 亡 抑 制蛋 白 一２功 能 的基 础 上 进 行 药物 化 疗 ， 能是 乳腺 癌 治 疗的 一 个 新 的 可行 方 向 。 可
一
氟 尿嘧 啶 合 用组 对 乳腺 癌 细胞 ＭＣ ７的 细 胞 增 殖 抑 制 率 均 明 显 提 高 ， 异 有 统 计 学 意 义 （ ０ Ｏ ） 但 与 秋 Ｆ一 差 Ｐ＜ ． １ ，
水仙碱合 用组对乳腺癌 细胞 ＭＣ 一７的细胞增殖抑制 率明显 降低 ， Ｆ 差异有统计 学意义（ ０ ０ ） 对靶 向 Ｄ Ａ药 Ｐ＜ ． １ ； Ｎ
采 用 Ｍ Ｔ 法 检 测 ｍ ６ ｈＡ １ｒ Ｕ ／ ｌＰ一２质 粒 与 多种 常规 肿 瘤 化 疗 药 物 对 乳 腺 癌 ＭＣ Ｆ一７细 胞 增 殖的 联 合 作 用 。
结果 比较 单 纯 化 疗 药 物作 用组 的各 相 应 浓 度 点 ，ｉＮ ｓ Ａ表 达 质 粒 ｍ ６ ｈＡ Ｒ Ｕ ／ Ｉ Ｐ一２与 化 疗 药 物 顺 铂 、 磷 酰 胺 或 ５ 环
【 关键词 】 ｈＡ ２； ｉＮ ｌ Ｐ一 ｓ Ａ表达质粒 ； Ｒ 抗肿瘤化疗药物 ； 联合作用 人 凋 亡 抑 制 蛋 白 一２ （ ｕ ｎ ｉｈｂｔｒｏ ｐ ｐｏｉ ｈ ｍａ ｎ ｉｉ ｆａ ｏ ｔｓ ｏ ｓ
酸 钙 法 ， 作 按 Ｐｏ ｅｔ ｎ哺乳 类 转 染 系 统试 剂 盒 说 明 操 ｒ ｃｏ Ｆ ｉ 书 进 行 。ｐ Ｇ Ｐ—Ｎ ＥＦ １和 ｍ ６ ｈＡ ２质 粒 以 １ ３的 Ｕ ／ ＩＰ一 ：
小干扰RNA的作用机制及其在肿瘤研究中的应用
肿瘤的发生发展是多阶段、多因素参与的长期而复杂的过程。
在肿瘤的发生发展各阶段，往往伴随着癌基因的异常失活或激活，随着肿瘤发生机制研究的不断深入，肿瘤的治疗也从以往单纯的手术、放化疗逐渐扩大到了分子水平的基因治疗，而小干扰技术也逐渐成为肿瘤基因治疗的热门领域。
小干扰技术是指用小干扰RNA 特异性的沉默肿瘤细胞中异常表达的基因，进而可以了解到异常表达基因沉默后对于肿瘤细胞增殖、分化、凋亡等生物学活动的影响。
近年来，人们对于小干扰RNA 研究的不断深入，尽管仍有其自身缺陷，相信其在未来的临床肿瘤治疗中定会发挥越来越重要的作用。
本文将就近年来小干扰RNA 关于肿瘤方面的研究及临床治疗进行总结。
1siRNA 的发现小干扰RNA ，即siRNA ，是具有特定长度（21~25bp ）和特定序列的小片段RNA ，是由生物宿主切割外源侵入基因表达的双链RNA 产生。
这些siRNA 可以诱导相应mRNA 降解，并且与外源基因表达的mRNA 以单链形式相结合［1］。
1998年菲尔等发现双链RNA 可以沉默秀丽隐杆线虫的基因表达［2］。
2001年埃尔巴特兰等使用siRNA 抑制了哺乳动物的同一个基因在几个不同细胞系中的特异性排列方式，开辟了干扰RNA 的领域［3］。
2010年开始有针对性地将siRNA 系统性的应用于实体瘤，对肿瘤患者进行纳米颗粒输送系统的Ⅰ期临床试验［4］。
目前siRNA 已成为肿瘤分子靶向治疗的研究焦点，siRNA 开始了快速发展的阶段。
2siRNA 的作用机制双链RNA 进入细胞，在存在细胞质中一种有特异性序列的核酸内切酶的作用下，切割成大小为21~22bp 的双链siRNA ；3’端有长度为2~3nt 的双链RNA 分子，这种双链RNA 称为siRNA ［5］。
siRNA 与Agonaute2等一些蛋白酶结合，形成RNA 介导的沉默复合物。
RISC 是一种RNA-蛋白质复合物，可以与目标mRNA 部分或完全的互补配对，发挥切割或者翻译抑制的作用。
中药对乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制研究进展
中药对乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制研究进展吴聪冲;陆一丹;吴青青;马芳笑;毛丹漪;刘晓谷【摘要】[目的]综述近5年来中药对乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制的研究进展.[方法]通过中国知网、万方、PubMed等数据库检索近5年来国内外关于乳腺癌MCF-7细胞的中药实验研究文献,总结近年来干预乳腺癌MCF-7细胞作用明显的多种中药对乳腺癌MCF-7作用机制研究概况.[结果]多种中药单体及复方可以通过:①调节生长周期蛋白抑制MCF-7细胞生长;②通过死亡受体及线粒体介导的两条经典凋亡路径促进其凋亡;③通过抑制EGFR信号通路及新生血管的形成抑制其转移;④通过下调P-gp蛋白表达逆转其耐药等途径作用于乳腺癌MCF-7细胞.[结论]中药复方及单体能多靶点、多方面作用于乳腺癌MCF-7细胞,作用显著.但目前仍缺乏对复方各组分的深入研究,有待于进一步的拓展,为传统中医治疗乳腺癌提供实验依据.%[Objective] Summarizing the research progress of traditional Chinese medicine in effect on breast cancer cell MCF-7 in recent five years.[Methods] By querying the nearly five years of the domestic and foreign literature about the effect of traditional Chinese medicine on breast cancer MCF-7 cells from CNKI,Wang Fang data,PubMed, etc, summarizing the advances in studies on various traditional Chinese medicine effective prevention and treatment for breast cancer MCF-7.[Results] Traditional Chinese medicine monomer and compound through the same or different ways play a role in breast cancer MCF-7 cells, for example, (1)adjusting the growth cycle protein to inhibit the growth of MCF-7 cells, (2)promoting the apoptosis through two classic pathways mediated by death receptor and mitochondrion, (3)inhibiting theformation of angiogenesis and the EGFR pathway, (4)reversing the multidrug resistance by reducing the expression of P-gp.[Conclusion] The traditional Chinese medicine monomer and compound play a significant role in breast cancer MCF-7 cells in many ways with the multi-target. However, there is still lack of in-depth studies on the components of the compound, which needs further expansion to provide an experimental basis for traditional Chinese medicine treatment of breast cancer.【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2017(041)005【总页数】4页(P437-440)【关键词】乳腺癌;MCF-7细胞;中药;机制;综述【作者】吴聪冲;陆一丹;吴青青;马芳笑;毛丹漪;刘晓谷【作者单位】浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学基础医学院;浙江中医药大学基础医学院【正文语种】中文【中图分类】R273乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据世界卫生组织下属的国际癌症研究所（IARC）发布的2012年全球癌症报告（Globocan 2012）数据显示：全球每年新发乳腺癌病例约167.1万，每年约52.2万死于乳腺癌[1]。
氯尼达明诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及机制
氯尼达明诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及机制邵芙蓉;王靓;储晓琴【摘要】Objective To investigate the effect of lonidamine on apoptosis of human breast carcinoma cells MCF-7 and the possible mechanisms. Methods MTT assay and colony-forming assay were used to evaluate the growth inhibition induced by lonidamine in breast cancer MCF-7 cells.PI/Annexin-V staining was used to detect the apoptotic cells. The ATP levels in the cells were detected using an ATP assay kit. The expression of glucose regulated protein 78 (GRP78), inhibitor of apoptosis protein (cIAP1) and caspase-8 were analyzed with Western blotting. Results MTT assay and colony-forming assay showed that 50-250 mmol/L lonidamine caused a time- and concentration-dependent inhibition of MCF-7 cell proliferation. Exposure to increased concentrations of lonidamine resulted in significantly increased apoptosis rate in MCF-7 cells. In MCF-7 cells treated with 50, 150 and 250 mmol/L lonidamine for 5 h, the intracellular ATP levels were lowered to 80.67%, 62.78%and 30.73%of the control level, respectively. Western blotting showed that lonidamine up-regulated the expression of GRP78, down-regulated the expression of cIAP1 and promoted caspase-8 activation as the treatment time extended. Conclusion Lonidamine can inhibit the proliferation and induce apoptosis in MCF-7 cells, and these effects are probably mediated by reducing ATP level, inducing endoplasmic reticulum stress response, down-regulating cIAP1, and promoting caspase-8 activation in the cells.%目的：探讨氯尼达明诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及其可能机制。
线粒体动力学障碍在癌症中的研究进展
能力较低ꎬ但 ＭＦＮ２ 与 Ｓｉｒｔｕｉｎ１( ＳＩＲＴ１) 被证明参与了
ｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｆｉｓｓｉｏｎ ｆａｃｔｏｒꎬ ＭＦＦ ) 、 线 粒 体 动 力 学 蛋 白
ＭＩＤ４９) 、线粒体动力学蛋白 ５１ｋＤａ ( ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙ￣
顺铂的耐药性ꎮ 尽管与 ＭＦＮ１ 相比ꎬＭＦＮ２ 的促融合
水平下调ꎬ导致 ＲＯＳ 的产生增多ꎬ导致线粒体分裂融
驱动剪切ꎮ ＤＲＰ１ 受体主要包括线粒体裂变因子( ｍｉ￣
合比增加ꎬ卵巢癌细胞株的顺铂耐药性增强ꎮ 随后ꎬ
Ｍｄｉｖｉ － １ 处理抑制线粒体分裂ꎬ抑制了两种细胞系对
４９ｋＤａ ( ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ４９ｋＤａꎬ
替循环ꎮ 面对内源性和外源性刺激ꎬ线粒体能够不断
ꎬ其功能与所有
调整其结构、分布及整体适应性ꎬ达到融合和裂变机制
其他细胞器密切相关ꎬ影响细胞基因表达、调节细胞周
之间的动态平衡ꎮ 例如ꎬ在营养缺乏过程中ꎬ线粒体融
细胞对生物能量需求
[１]
已经成为真核细胞的中心信号枢纽
[２]
期、维持 Ｃａ 稳态、参与细胞凋亡、调控细胞对环境不
能量需要区域移动ꎬ或有丝分裂后线粒体向子细胞均
胞的能量和生理需求ꎬ形成一个活跃的网络ꎬ提示其结
匀分布 [１０] ꎮ 因此ꎬ线粒体动力学调控的线粒体融合、
构的变化与功能的实现密不可分ꎮ 在细胞内ꎬ线粒体
分裂及二者的动态平衡ꎬ决定线粒体形状、丰度和质
不断进行分裂与融合ꎬ从而维持线粒体形态和网络结
量ꎮ
构稳定的动态平衡过程ꎬ被称为线粒体动力学ꎮ 近年
在嵴生物发生中的作用类似ꎬ将 Ｓ － ＯＰＡ１ 添加到反式
miR-7-5p靶向REGγ抑制人乳腺癌细胞增殖及促进细胞凋亡研究的开题报告
miR-7-5p靶向REGγ抑制人乳腺癌细胞增殖及促进
细胞凋亡研究的开题报告
题目：miR-7-5p靶向REGγ抑制人乳腺癌细胞增殖及促进细胞凋亡研究
研究背景：
乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤，也是世界范围内妇女死亡率最高的癌症之一。
过去几年来，微RNA (miRNA) 的作用机制已被提出，并引起了乳腺癌研究者的广泛关注。
miRNA通过靶向基因的调节，对细胞增殖和细胞凋亡起着重要的调控作用。
REGγ是一种重要的蛋白质，已被证明在乳腺癌的发展中发挥重要作用。
REGγ与乳腺癌的增殖、侵袭和化疗耐药性等方面均有关联。
miR-7-5p已被证明可以通过靶向REGγ抑制癌细胞增殖和增加细胞凋亡。
研究目的：
本研究旨在探究miR-7-5p对REGγ在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。
研究方法：
1、实验细胞系：使用MCF-7和MDA-MB-231细胞系，其中前者为激素受体阳性乳腺癌细胞，后者为激素受体阴性乳腺癌细胞。
2、转染miR-7-5p mimics和NC对实验组进行干预，采用qRT-PCR 检测miR-7-5p表达量的改变， Western blot检测REGγ表达量的改变。
3、采用CCK-8、colony formation、Transwell及flowcytometry等方法分别检测细胞增殖、侵袭程度和凋亡。
研究意义：
本研究将通过探讨miR-7-5p靶向REGγ对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响，对敲定乳腺癌治疗靶点提供参考。
这项研究有望为乳腺癌的靶向治疗提供新型的分子靶点。
甘草查耳酮A药理作用研究进展
甘草查耳酮A药理作用研究进展甘草查耳酮A（licochalcone A）为甘草中黄酮类化合物，近年来其药理活性倍受关注。
研究表明甘草查耳酮A有抗肿瘤，抗炎，抗菌，抗寄生虫，成骨活性等多种药理作用。
文章对甘草查耳酮A各种药理作用的国内外研究文献进行综述。
标签：甘草查耳酮A；药理作用；抗肿瘤甘草查耳酮A（licochalcone A）是从豆科植物甘草中提取的查耳酮类化合物，已有研究表明其具有较为广泛的药理活性，包括抗肿瘤，抗炎，抗菌，抗寄生虫等。
为深入研究甘草查耳酮A的作用机制，促进该化合物的进一步开发利用，本文结合国内外研究对其各方面的药理作用进行综述。
1 抗肿瘤作用1.1 诱导肿瘤细胞凋亡细胞凋亡（apoptosis）又称程序性细胞死亡（programmed cell death），是一种主动性的细胞自杀行为。
正常情况下，细胞的增殖与凋亡保持着一种平衡关系，一旦这种平衡关系遭到破坏，就可能导致肿瘤发生，肿瘤细胞能被化学药物诱导变异和凋亡。
甘草查耳酮A作用于人卵巢癌OVCAR-3及SK-OV-3细胞，可以下调Bid，Bcl-2，Bcl-xL和survivin 蛋白水平，上调Bax蛋白水平；能引起线粒体膜电位下降，促进细胞色素C释放，活化Caspases （-8，-9，-3）；促进PARP-1裂解；上调抑癌基因p53表达水平，从而促进细胞凋亡[1]。
类似的研究发现甘草查耳酮A可以通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，降低Bcl-2/Bax比率，促进PARP蛋白裂解，从而诱导人乳腺癌细胞系MCF-7细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞凋亡[2]；最近的研究也表明，甘草查耳酮A可以诱导胃癌细胞凋亡，机制可能与裂解PARP蛋白，下调Caspase-3，Bcl-2蛋白表达，上调Bax蛋白表达有关[3]。
体内实验表明，甘草查耳酮A可显著抑制皮下接种结直肠癌CT-26细胞BALB/c小鼠的肿瘤生成，免疫组织化学TUNEL染色发现，随甘草查耳酮A剂量增加，凋亡细胞比例逐渐增加[4]。
AnnexinA2、NF-kB 与妇科恶性肿瘤的关系及研究进展
AnnexinA2、NF-kB 与妇科恶性肿瘤的关系及研究进展刘慧敏;朱莉【摘要】妇科恶性肿瘤严重威胁着妇女健康，探索突破恶性肿瘤的发生机制是临床面临的一个重要问题。
AnnexinA2是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，广泛存在于胞膜、胞质及胞核中，生物学功能广泛。
且与多种疾病的发生发展关系密切，在恶性肿瘤中也有其参与，并促使肿瘤侵袭和转移。
NF-kB 是一种真核细胞转录因子，在免疫反应和炎症的调节中扮演重要角色，在肿瘤形成过程中也支持这个角色。
AnnexinA2可以通过 MAPK 信号通路刺激NF-kB 配体的受体活化表达，NF-kB 参与血管生成及肿瘤侵袭转移等相关基因的表达，促进肿瘤发展。
本文对Annexin A2、NF-kB、二者相关性及其与妇科恶性肿瘤关系进行阐述。
【期刊名称】《中国生育健康杂志》【年(卷),期】2016(027)002【总页数】3页(P199-201)【关键词】AnnexinA2;NF-kB;妇科恶性肿瘤【作者】刘慧敏;朱莉【作者单位】150000 黑龙江，哈尔滨医科大学附属第四医院妇产科;150000 黑龙江，哈尔滨医科大学附属第四医院妇产科【正文语种】中文随着医学的发展，妇科恶性肿瘤逐渐被重视，早期发现，早期治疗，死亡率逐渐下降，但是妇科恶性肿瘤仍然是威胁妇女生命、影响妇女生活质量的原因之一。
妇科恶性肿瘤细胞能侵犯破坏邻近组织和器官，并可经血液，淋巴系统转移或种植到其他器官形成新的肿瘤。
因此，及时发现并有效治疗是临床降低死亡率的重要问题，本文着重介绍妇科恶性肿瘤的最新进展，为妇科恶性肿瘤治疗提供新思路。
一、AnnexinA21.AnnexinA2分子结构与功能：AnnexinA2分子是Annexins家族成员之一，能与钙和脂类特异性结合，Annexins家族功能多样，参与抗炎、信号转导、细胞凋亡等多种生物学途径。
AnnexinA2广泛存在于细胞内外，参与细胞膜的构架、胞吐、内吞；细胞外参与纤溶酶的生成以及促进破骨细胞形成。
E-钙粘蛋白抗体对小鼠早期胚胎发育的影响
E-钙粘蛋白抗体对小鼠早期胚胎发育的影响吴兴龙;王棉娟;胡春超;王鹏博;李相运【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2012(043)008【摘要】旨在研究E-钙粘蛋白抗体(ECCD-1)对小鼠早期胚胎体内外发育的影响.在体外培养小鼠8-细胞胚胎的培养液中,分别添加不同浓度的ECCD-1,通过胚胎形态观察、碱性磷酸酶染色、多能性因子免疫染色、体外贴壁培养、嵌合体制备以及体内移植试验检测ECCD-1对小鼠胚胎发育能力的影响.结果表明,ECCD-1抗体延迟胚胎致密化和囊胚腔形成,但内细胞团并未受到影响,胚胎碱性磷酸酶和SSEA-1、Oct-4、Sox2、Nanog 4种多能性因子的免疫染色都呈阳性,此外,ECCD-1抗体也不影响胚胎的体外贴壁生长、体内移植着床以及嵌合体的制备.这些数据表明,ECCD-1抗体延迟胚胎致密化但并不影响胚胎的体内外发育能力.%To investigate the effects of E-cadherin antibody (ECCD-1) on mouse embryo development, ECCD-1 antibody with different concentrations was added into KSOM media when mouse 8-cell embryos were cultured in vitro, and then the developmental potential of ECCD-1-treated embryos were detected by morphology, alkaline phosphatase activity, pluripotent marker (SSEA-1, Oct-4, Sox-2, Nanog) immunostaining, attachment culture in vitro, implantation in vivo, and chimera production. The result showed that ECCD-1 significantly delayed embryo compaction and blastocoele formation. ECCD-1-treated embryos had obvious inner cell mass, positive alkaline phosphatase and pluripotent markers, normal attachment growthin vitro and implantation in vivo. In addition, the chimera production was also improved when 8-cell embryos injected by embryonic stem cells were treated with ECCD-1. The results indicated that compaction delay by ECCD-1 antibody did not affect embryo development potential.【总页数】8页(P1222-1229)【作者】吴兴龙;王棉娟;胡春超;王鹏博;李相运【作者单位】河北农业大学动物科技学院,保定071000;河北农业大学校医院,保定071000;河北农业大学动物科技学院,保定071000;河北农业大学动物科技学院,保定071000;河北农业大学动物科技学院,保定071000【正文语种】中文【中图分类】Q132.4【相关文献】1.缺氧对乳腺癌MCF-7细胞中LOXL2及E-钙粘蛋白表达的影响 [J], 曹宇勃;许崇安2.β-连环蛋白和E-钙粘蛋白在小鼠磨牙牙胚发育中的研究 [J], 王淑霞;刘大勇;刘士有3.sLex抗体对小鼠胚泡在E-选择素上黏附和扩展的影响 [J], 朱瑾;周剑萍;张炜;刘银坤;贺斌4.可溶性E－钙粘蛋白、糖类抗原125、人附睾蛋白4联合检测在卵巢癌早期诊断中的临床价值 [J], 汪靖园; 习文; 彭餠; 王斌5.清肾颗粒对慢性肾衰竭患者肾功能及血清α-平滑肌动蛋白和E-钙粘蛋白的影响[J], 张磊; 金华; 王亿平; 王东; 文艳; 刘珂因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｓ ａ ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ， Ｅ Ｇ Ｆ ， Ｃ ｈ ｅ ｌ ａ ｔ ｏ ｒ ｓ（ Ｂ Ａ Ｐ Ｔ Ａ）ａ ｎ ｄ Ｃ Ａ Ｎ Ｐ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｓ（ Ｃ ａ ｌ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｎ ／ Ａ Ｌ Ｌ Ｎ）ｗ ｅ ｒ ｅ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ
细胞迁 移中的介 导作 用 。方法 ：取对 数 生 长期 Ｍ Ｃ Ｆ － ７乳 腺 癌 细胞 系 为模 型 细 胞 ， 采用 Ｅ Ｇ Ｆ、 钙离 子 螯 合 剂
（ Ｂ Ａ Ｐ Ｔ Ａ） 、 钙 蛋 白酶抑制剂 （ Ｃ ａ ｌ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｎ ） 及 钙蛋 白酶抑制剂 Ｉ （ Ａ Ｌ Ｌ Ｎ ） 预处 理模型细 胞 ， 通 过伤 口愈 合实验 观察 细 胞 迁移能力 ， 通过 蛋白印迹 法观察蛋 白质剪切及分 子量 变化 ， 观察 Ｃ ａ ｌ ｐ ａ ｉ ｎ — Ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ信号通路对 Ｅ Ｇ Ｆ诱导 的 ＭＣ Ｆ 一 ７乳腺癌 细胞迁移 能力的影响。结果 ： Ｂ Ａ Ｐ Ｔ Ａ及 Ａ Ｌ Ｌ Ｎ能显著阻断 Ｅ Ｇ Ｆ诱导 的 Ｍ Ｃ Ｆ － ７乳 腺癌细胞迁移 ， Ｂ Ａ Ｐ Ｔ Ａ 组与 Ｃ ｏ ｎ组相 比 Ｐ＜ ０ ． ０ ｌ ， Ａ Ｌ Ｌ Ｎ组与 Ｅ Ｇ Ｆ组相 比 Ｐ＜ ０ ． ０ １ ， 差异具 有统计学 意义 ； Ｃ ａ ｌ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｎ能阻 断 Ｅ Ｇ Ｆ诱 导 的 细胞 Ｃ ａ ｌ ｐ ａ ｉ ｎ Ｉ、 Ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ蛋 白剪切 。结论 ：Ｃ ａ ｌ ｐ ａ ｉ ｎ — Ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ促进 Ｅ Ｇ Ｆ诱导 的 ＭＣ Ｆ － ７乳腺癌 细胞 的迁 移能力加 强 ，
［ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｃ ａ ｌ ｐ ａ ｉ ｎ ／ Ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ ｐ ａ ｔ ｈ ｗ ａ ｙ ｓ ｉ ｎ ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ
Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｈ ｕ ａ ｍｅ ｉ ， Ｌ Ｉ Ｚ ｈபைடு நூலகம்ｅ ｎ ｇ ， ＷＡ Ｎ Ｇ Ｘ ｕ ｄ ｏ ｎ ｇ ， ＷＡ Ｎ Ｇ Ｈ ｏ ｎ ｇ ｍｅ ｉ ， Ｑ Ｉ Ｎ Ｙ ｉ ｎ ａ ｎ ， Ｚ ＨＵ Ｚ ｈ ｕ ｘ ｉ ａ
（ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｐ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｇ ｕ ｉ ｙ ａ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｇ ｕ ｉ ｙ ａ ｎ ｇ ５ ５ ０ ０ ０ ４， Ｇ ｕ ￣ ｈ ｏ ｕ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ｐ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎｔ ｏ ｆ ｍｏ ｄｅ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ． Ｃｅ ｌ ｌ ｍｉ ｇ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｍ ｉ ｒ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ｗｏ ｕ ｎｄ ｈｅ ａ ｌ ｉ ｎｇ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ．Ｗ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ．Ｔ ｈｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｃａ ｌ ｐａ ｉ ｎ ／Ｃｙ ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ ｏ ｎ ＥＧＦ－ ｉ ｎ ｄ ｕｃ ｅ ｄ ｍｉ ｇ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｂ ｒ ｅ ａ ｓ ｔ ｃ ａ ｎｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗａ ｓ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｄ． Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ：ＢＡＰＴＡ ａ ｎ ｄ ＡＬＬＮ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ＥＧＦ— ｉ ｎ —
第４ ０卷 第 １ ２期 ２ ０ １ ５年 １ ２月
贵 阳 医 学 院 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵＩ ＹＡＮＧ Ｍ ＥＤＩ ＣＡＬ ＣＯＬＬ ＥＧＥ
Ｖｏ １ ． ４０ Ｎｏ．１ ２ ２ ０１ ５． １ ２
钙 蛋 白 酶 一周 期 蛋 白 Ｅ介 导 Ｅ Ｇ Ｆ诱 导 的 ＭＣ Ｆ 一 ７乳 腺 癌 细 胞 迁 移 能 力增 强 术
陈华妹 ，李 铮 ，王旭 东 ， 王红梅 ， 秦 奕男 ， 朱筑 霞 一
（ 贵州医科大学 生理 学教研 室，贵州 贵阳 ５ ５ ０ ０ ０ ４）
［ 摘 要 ］目的： 探讨钙蛋白酶 一 周期蛋白Ｅ （ Ｃ ａ ｌ ｐ ａ ｉ ｎ 。 Ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ ） 信号通路在表皮生长因子（ Ｅ Ｇ Ｆ ） 诱导的乳腺癌
Ｃａ ｌ ｐ ａ ｉ ｎ ／Ｃｙ ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ Ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ Ｅｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｓ Ｅｐ ｉ ｄ ｅ ｒ ｍａ ｌ Ｇｒ ｏ ｗｔ ｈ
Ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ Ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ Ｍｉ ｇ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｂｒ ｅ ａ ｓ ｔ Ｃａ ｎ ｃ ｅ ｒ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ
ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ（ Ｅ ＧＦ） 一 ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｍｉ ｇ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ＭＣ Ｆ － ７ ｂ ｒ ｅ ａ ｓ ｔ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：Ｕｓ ｉ ｎ ｇ ＭＣＦ － ７ ｂ ｒ ｅ ａ ｓ ｔ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ
可 能 在 乳 腺 癌 的浸 润 生 长 中发 挥 作 用 。
［ 关键 词 ］表皮生长因子； 钙蛋白酶 ； 周期蛋白Ｅ ； 乳腺肿瘤； 迁移 ［ 中图分 类号 ］Ｒ ７ ３ ７ ． ９ ［ 文献 标识 码 ］Ａ ［ 文章 编号 ］１ ０ ０ ０ － ２ ７ ０ ７ （ ２ ０ １ ５ ） １ ２ — １ ３ ４ ４ － ０ ４