蛋白酶抑制剂选择指南
蛋白酶抑制剂分类和应用
蛋白酶抑制剂分类和应用在分离蛋白时，组织或细胞裂解液中充满了来自溶酶体的酶,而且原先无活性的蛋白酶原被充分激火,开始消化其周围的蛋白质. 为幸免此因素，蛋白酶抑制剂必需被加入在缓冲液内以阻止蛋白酶对细胞组织的消化作用. 来自哺乳类动物，植物, 霉菌或细菌的组织，蛋白酶成份是不同的, 并依照机体状态的进展也能够发生转变. 哺乳类动物组织分离时比细菌或其它组织分离时更需要应用蛋白酶抑制剂使组织细胞受到完全的爱惜.因此，在各类蛋白分离时，在各类蛋白电泳时蛋白酶抑制剂的适被选用就成了很重要的因素。
蛋白酶功能 :涉及到许多细胞内和细胞外的进程:o食物蛋白在消化道的消化o激活无活性酶原和多肽激素/神经转移介质的释放o调剂血凝物质和纤维素o内源性和外源性蛋白的细胞内消化o跨膜的蛋白转移o微生物对生物体解决,通过释放蛋白酶的致使毒性增加蛋白酶分类 :依照催化中心结构的不同蛋白酶可分为4类 :1. 丝氨酸蛋白酶在其活性中心含有丝氨酸和组氨酸，如: 糜蛋白酶, 弹性蛋白酶，血纤维蛋白溶酶，凝血酶，枯草杆菌蛋白酶，胰酶Chymotrypsin, Elastase, Plasmin, Subtilisin, Thrombin, Trypsin2. 半胱氨酸蛋白酶（别名 :硫醇或SH 蛋白酶）在其催化中心含有半胱氨酸，如 : Calpain, 组织蛋白酶 B,C 和L，和木瓜蛋白酶3 天(门)冬氨酸蛋白酶（羧基蛋白酶）在其活化中心含有天(门)冬氨酸，如 : 组织蛋白酶D, 木瓜蛋白酶, 肾素4. 金属蛋白酶含有金属离子，即 : 锌2+在其催化中心，如氨基肽酶，羧基蛋白酶A 和 B，嗜热菌蛋白酶机体避免蛋白酶破坏作用几种可能性 :•酶在特殊囊性小泡的分派 (溶酶体，包涵体)•内源性蛋白酶抑制剂（如 : Aprotinin，抗凝血酶，抗胰酶）SERVA 6种蛋白酶抑制剂鸡尾酒的作用:➢SERVA提供6种不同的蛋白酶抑制剂鸡尾酒，用于分离纯化各类组织的蛋白，多肽的最正确选择➢蛋白酶抑制剂混合物G含有5种水溶性的抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸- 和金属蛋白酶作用，而且是经常使用选择的鸡尾酒，应当幸免同时利用有机体溶剂➢蛋白酶抑制剂混合物H P含有4种水溶性抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸蛋白酶作用，而且有效地用于分离和提取重组蛋白，幸免金属螯合物。
常见蛋白酶抑制剂
当前位置：生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全日期：2012-06-13 来源：互联网标签：相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种经常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统广州赛诚生物基因表达调控专题蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种经常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。
由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。
经常使用抑制剂PMSF1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保管一年;4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步调中加入新鲜的PMSF。
EDTA1)抑制金属蛋白水解酶;2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;3)溶液在4℃稳定六个月以上;4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中;3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月;4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L)5)在水中不溶解。
蛋白酶抑制剂筛选模型
吸附或融合抑制剂筛选模型
将纯化的CD4或HIV一1 gpl20包被至ELISA 板上，在不同浓度药物存在的情况下，检 测另一种蛋白的结合量 特异识别HIVgp41六股a一螺旋束核心结构 空间构型的单克隆抗体，以该抗体建立夹 心ELISA方法
2 、抑制辅受体相互作用
趋化因子CCR5，为G蛋白偶联因子超家族（GPCR）成员的 细胞膜蛋白，是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一
1、HIV吸附或融合抑制剂：
HIV侵入T淋巴细胞的起始阶段是HIV吸附于细胞膜 表面，是由于HIV膜蛋白gp120与T细胞表面受体 CD4的高度特异性结合。
霉酚酸(MPA)
从Penicillium sp. FO28017培养液中分离得到的小分 子物质, 是一种次黄嘌呤核苷酸脱氢酶( IMPDH ) 抑制剂和抗H IV抑制剂 蛋白印迹分析MPA能减少H IV的gp120表达从而抑 制H IV的感染，其作用机制主要是通过减少H IV 表面膜蛋白gp 120的表达来抑制合胞体形成。
蛋白酶抑制剂筛选模型
HIV-1蛋白酶与短肽链（含Tyr-Pro键）反 应 通过对肽键的测定推算出HIV-1蛋白酶的活 力 以此为对照，在系统中加入待测样品
4、逆转录酶抑制剂： 逆转录酶由pol基因编码，功能为转录和复 制病毒基因组 逆转录酶是艾滋病选择性化疗的首选靶位 之一 quinoxapatin A和quinoxapatin B 由放线 菌产生,为非竟争性酶抑制剂,具有可逆性
7个微生物代谢产物类CCR5 抑制剂
3、蛋白酶抑制剂：
HIV蛋白酶由pol基因编码，功能为切割聚 合蛋白 gag基因编码聚合蛋白→基质蛋白（p17）、 核衣壳蛋白（p7、p9）、衣壳蛋白（p24）
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第 9 -11页
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蛋白酶抑制剂
蛋白酶抑制剂引言蛋白酶抑制剂是一类用于抑制酶活性的化合物，其中蛋白酶是一种催化蛋白质水解的酶。
蛋白酶在生物体中起着重要的调控作用，参与多种生物反应的调节和控制。
然而，在某些情况下，蛋白酶的过度活化可能导致疾病的发生和发展。
因此，研发蛋白酶抑制剂成为一种重要的医药研究方向。
本文将介绍蛋白酶抑制剂的基本分类、作用机制以及在药物研发中的应用。
分类根据蛋白酶抑制剂对酶活性的抑制方式，蛋白酶抑制剂可分为两大类：1.反式抑制剂：反式抑制剂与酶结合后形成稳定的酶-抑制剂复合物，从而阻止酶催化反应的进行。
典型的例子是蛋白酶抑制剂Aprotinin，它通过与蛋白酶结合形成稳定的复合物，从而抑制蛋白酶的活性。
2.逆式抑制剂：逆式抑制剂通过与酶催化中心结合，改变酶的构象和活性。
这类抑制剂通常是模拟酶底物的分子结构，与酶催化中心发生特异性的相互作用。
逆式抑制剂的典型例子是酶的底物类似物，如硫氰酸酰胺（p-Tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone，TPCK）可以选择性地抑制胰蛋白酶的活性。
作用机制蛋白酶抑制剂能够通过不同的机制来抑制蛋白酶的活性。
以下是几种常见的作用机制：1.受体拮抗作用：某些蛋白酶抑制剂能够与蛋白酶结合并阻断其与受体的相互作用，从而抑制了受体的活化。
这种机制在很多药物设计中都有重要的应用。
2.亲和力增强：一些蛋白酶抑制剂可以增强与酶的结合亲和力，从而阻止酶底物结合，进而抑制了酶的活性。
3.酶底物竞争：逆式抑制剂通过与酶催化中心竞争底物结合位点，从而阻断底物与酶的结合，进而抑制了酶活性的发生。
4.构象改变：某些蛋白酶抑制剂能够与酶发生特异性相互作用，改变酶的构象从而影响酶的活性。
应用蛋白酶抑制剂在医药领域有着广泛的应用。
以下是一些典型的应用示例：1.抗癌药物：蛋白酶在肿瘤细胞中起着重要的作用，因此蛋白酶抑制剂被广泛用于抗癌药物的研发。
例如，蛋白酶抑制剂Paclitaxel可以通过抑制肿瘤细胞内的蛋白酶活性来抑制细胞的增殖。
蛋白酶抑制剂
蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。
由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。
常用抑制剂PMSF PMSF即Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。
分子式为C7H7FO2S，分子量为174.19，纯度>99%。
常用生化试剂，用于抑制蛋白酶.【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成 1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。
如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。
一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。
凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。
应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。
PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。
pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
蛋白水解酶抑制剂啊实验室常用的啊主要用于组织匀浆时用!!1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保存一年;4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。
蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明
蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明转自:http://www.bioas/html/980.html在与蛋白相关的检测中，最关键的一步便是蛋白质的提取。
在提取的过程中，我们要经常加入以防止。
另外在磷酸化蛋白的研究过程中，也是必不可少的。
本文详细总结了常用的P MSF、 Leupep tin亮肽素、Aproti nin抑肽酶、Pepsta tin胃、EDTA-Na2等以及NaF氟化钠、Na3VO4原矾酸钠、Beta-glycer ophos phate甘油磷酸钠、Na2P2O4焦磷酸钠等的溶液配制、贮存液与工作液浓度及保存条件。
一、蛋白酶抑制剂PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶。
溶解性：溶于异丙醇、乙醇、甲醇和丙二醇里>10mg/ml。
在水溶液中不稳定。
在100%异丙醇，25℃时稳定至少9个月。
分子量：174.2使用：贮存浓度200mM，工作浓度1m MLeupep tin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶B。
溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。
4℃一周稳定，分成小份，冷冻在 -20℃至少6个月。
分子量：C20H38N6O4×1/2 H2SO4:475.6 C20H38N6O4x 1/2 H2SO4× H2O:493.6使用：贮存浓度1m g/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)。
Aproti nin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的高活性。
不抑制凝血酶或因子X。
溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如0.1M tris，pH8.0）。
蛋白酶抑制剂Cocktail使用说明书奥默生物
奥默生物电话：021-5096 7598 邮箱：techsupport@ 网站：产品简介：本产品是由6种独立的蛋白酶抑制剂（不含EDTA）按照优化的配比配置而成的蛋白酶抑制剂混合物。
其作用的靶点分别为丝氨酸蛋白酶，丝氨酸半胱氨酸蛋白酶，氨肽酶，半胱氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶等，广泛作用于各种蛋白酶，可称之为广谱蛋白酶抑制剂。
本产品应于-20℃环境下密封保存，产品有效期为2年。
使用时可短时间放置于常温或4℃中，用毕应立即放回-20℃中保存。
储存条件：蛋白酶抑制剂Cocktail (不含EDTA，100X DMSO储液)蛋白酶抑制剂Cocktail 使用说明书蛋白酶抑制剂通过抑制蛋白酶的活性，减少蛋白酶对蛋白的分解，从而有效地提高蛋白质得出率，而且不使细胞及组织本身的性质发生改变。
作用原理：产品组成：成分MTT法CCK法 AEBSFAprotininBestatinE-64LeupeptinPepstatin A Cysteine proteases Serine proteases Aminopeptidases Serine proteases Serine and cysteine proteases Aspartic proteases Irreversible Reversible Reversible ReversibleReversible Irreversible 靶点靶点类型运输条件： 蓝冰运输。
奥默生物使用说明：1. 本产品适用于哺乳动物细胞及组织的蛋白质提取及纯化，蛋白免疫印迹（WesternBlot）,免疫共沉淀（Co-IP），免疫荧光（IF），免疫组织化学（IHC），激酶测定（kinaseassay）和抗体，酶诊断试剂盒（Dignose Kit）等。
2. 实验时，按照1:100的容积比，将Cocktail预先加入在已准备好的实验体系中，轻轻混合均匀。
注意事项：1. 本产品不含EDTA，为100×DMSO储存液形式。
蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明
蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明一、蛋白酶抑制剂PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶。
溶解性：溶于异丙醇、乙醇、甲醇和丙二醇里>10mg/ml。
在水溶液中不稳定。
在100%异丙醇，25℃时稳定至少9个月。
分子量：174.2使用：贮存浓度200mM，工作浓度1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶B。
溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。
4℃一周稳定，分成小份，冷冻在-20℃至少6个月。
分子量：C20H38N6O4 ×1/2 H2SO4:475.6 C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 × H2O:493.6使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)。
Aprotinin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的高活性。
不抑制凝血酶或因子X。
溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如0.1M tris，pH8.0）。
pH约7~8的溶液在4℃可保存1周，分装保存在-20℃可至少保存6个月。
避免反复冻融, pH>12.8的碱性环境可使其灭活。
分子量：6,512使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.06~2.0 ug/ml(0.01~0.3 uM)。
Pepstatin胃蛋白酶抑制剂特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶、肾素、组织蛋白酶D、凝乳酶、许多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇约1mg/ml；可溶于乙醇，过夜溶解可达到1 mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml。
4℃稳定一周，分装储存于-20℃时可保存1个月。
分子量：685.9使用：贮存浓度1mg/ml，使用浓度0.7 μg/ml(1 μM)。
EDTA-Na2特性：金属蛋白酶抑制剂溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的条件下，4℃稳定至少6个月分子量：372.24使用：工作浓度0.2~0.5 mg/ml(0.5~1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH值调至8~9时再加入。
蛋白酶抑制剂成分
蛋白酶抑制剂成分蛋白酶抑制剂是一种可以抑制蛋白酶活性的化合物。
蛋白酶是一种酶类，它在细胞内起着非常重要的作用，可以分解蛋白质分子，使其成为更小的分子。
但是，在某些情况下，过多的蛋白酶活性会导致细胞内的蛋白质被分解得过快，从而对细胞造成伤害。
因此，蛋白酶抑制剂成分可以在一定程度上保护细胞免受蛋白酶的伤害。
目前，已经发现了很多种蛋白酶抑制剂成分，其中一些已经被广泛应用于医学和生物学领域。
以下是一些常见的蛋白酶抑制剂成分：1. 蛋白酶抑制剂-1（Protease Inhibitor-1）蛋白酶抑制剂-1是一种天然存在于人体中的蛋白质，它可以抑制多种蛋白酶的活性。
研究表明，蛋白酶抑制剂-1可以对多种疾病有治疗作用，如心血管疾病、肿瘤、炎症等。
2. 甲基硫代咪唑（Methylthioadenosine）甲基硫代咪唑是一种天然存在于人体中的化合物，它可以抑制多种蛋白酶的活性。
研究表明，甲基硫代咪唑可以对多种疾病有治疗作用，如肿瘤、炎症等。
3. 金黄色葡萄球菌蛋白酶抑制剂（Staphylococcus aureus Protease Inhibitor）金黄色葡萄球菌蛋白酶抑制剂是一种可以抑制金黄色葡萄球菌产生的多种蛋白酶的化合物。
这种化合物可以用于治疗金黄色葡萄球菌感染等疾病。
4. 蛋白酶抑制剂A（Protease Inhibitor A）蛋白酶抑制剂A是一种可以抑制多种蛋白酶活性的化合物。
研究表明，蛋白酶抑制剂A可以对多种疾病有治疗作用，如肿瘤、心血管疾病等。
5. 磷酸二酯酶抑制剂（Phosphodiesterase Inhibitor）磷酸二酯酶抑制剂是一种可以抑制多种磷酸二酯酶活性的化合物。
研究表明，磷酸二酯酶抑制剂可以对多种疾病有治疗作用，如心血管疾病、哮喘等。
总之，蛋白酶抑制剂成分具有广泛的应用前景，在医学和生物学领域都有着重要的作用。
未来，随着科学技术的不断发展，相信会有更多的蛋白酶抑制剂成分被发现，并用于治疗更多的疾病。
蛋白酶 磷酸酶抑制剂
常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度来源：原创，转载请注明发布时间：2009-10-20 查看次数：21在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。
蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。
另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotin in抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，N a3VO4 原矾酸钠，BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等。
对这些蛋白酶抑制剂的溶解配制，贮存液与工作液浓度，保存都做了详细的说明。
蛋白酶抑制剂PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面处理）。
溶解性：溶于异丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果>10mg/ml。
在水溶液中不稳定。
在100%异丙醇，+25℃时稳定至少9个月分子量：174.2使用：贮存浓度：200mM，工作浓度：1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纤溶酶，和组织蛋白酶B溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。
4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6使用：贮存浓度：1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)Aprotinin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶，激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。
不抑制凝血酶或因子X。
溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如，tris，0.1M，pH8.0）。
p H约7-8的溶液在4℃可保存1周，分装保存在-20℃可至少保存6个月。
常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度
常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。
蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。
另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，Na3VO4 原矾酸钠，BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等。
对这些蛋白酶抑制剂的溶解配制，贮存液与工作液浓度，保存都做了详细的说明。
蛋白酶抑制剂PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面处理）。
溶解性：溶于异丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果>10mg/ml。
在水溶液中不稳定。
在100%异丙醇，+25℃时稳定至少9个月分子量：174.2使用：贮存浓度：200mM，工作浓度：1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纤溶酶，和组织蛋白酶B 溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。
4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6使用：贮存浓度：1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)Aprotinin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶，激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。
不抑制凝血酶或因子X。
溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如，tris，0.1M，pH8.0）。
pH约7-8的溶液在4℃可保存1周，分装保存在-20℃可至少保存6个月。
避免反复冻融, pH>12.8的碱性环境可使其灭活。
蛋白酶抑制剂种类
蛋白酶抑制剂种类
蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白酶活性的物质，主要存在于某些植物、动物和一些微生物中。
以下是一些常见的蛋白酶抑制剂种类：
1.胰蛋白酶抑制剂：抑制胰蛋白酶活性的蛋白质，是植物中广泛存在的一类蛋白质。
它们可以抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧基肽酶等，从而影响这些酶所催化的蛋白质的水解。
2.丝氨酸蛋白酶抑制剂：这是蛋白质水解酶中的一大类，主要包括抑胃素、抑胰蛋白酶、抑糜蛋白酶等。
它们能可逆地与相应的丝氨酸蛋白酶形成共价键，因而能够阻断某些内肽酶催化蛋白质水解的能力。
3.天冬氨酸蛋白酶抑制剂：主要存在于豆科植物中，能够抑制枯草杆菌蛋白酶的活性。
4.半胱氨酸蛋白酶抑制剂：这种抑制剂可以与半胱氨酸蛋白酶形成共价键，因而能够抑制这些酶的活性。
5.金属蛋白酶抑制剂：这类抑制剂主要通过与金属蛋白酶的活性中心发生相互作用，从而抑制其活性。
这些抑制剂在生物体的生长、发育和防御等方面有着重要的作用。
同时，在食品工业和医药工业中，它们也有着广泛的应用。
例如，某些蛋白酶抑制剂可以作为防腐剂，用于延长食品的保质期；在医药方面，也可以利用这些抑制剂来研发新药或探索新的治疗手段。
此外，还有一种与蛋白酶抑制剂相似的物质叫做抗蛋白酶，其主要作用是抑制或灭活蛋白酶的活性，以避免食物中的蛋白质被过度分
解或破坏。
例如，胰凝乳蛋白酶抑制剂就是一种抗胰蛋白酶，能抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，从而保护消化道中的蛋白质。
如需获取更多有关蛋白酶抑制剂的信息，建议查阅相关文献或咨询生物学家获取帮助。
蛋白酶抑制剂
天天学营养
【分类】
蛋白酶抑制剂
● 蛋白类和天然小分子类蛋白酶抑制剂
● 蛋白类蛋白酶抑制剂
丝氨酸蛋白酶抑制剂 半胱氨酸蛋白白酶抑制剂
● 天然小分子类蛋白酶抑制剂
黄酮类、多酚类、其它天然小分子化合物
【食物来源】
●蛋白类蛋白酶抑制剂广泛存在于植物中，豆类、 谷类含量丰富
抗癌作用
●蛋白酶抑制剂对多种肿瘤具有抑制作用。
●作用机制：
✓抑 制 蛋 白 质 的 水 解 ， 限 制 肿 瘤 生 长 所 需 氨 基 酸 ✓抑制多种MMP及uPA， 阻止癌细胞的侵袭和转
移 ✓抑制肿瘤血管新生
保护心血管作用
●促进一氧化氮的释放 ●抑制炎症因子的产生 ●降低炎症相关蛋白酶的活性（如MMP） ●参与血液凝固及溶解 ●抗氧化
●黄酮类和多酚类在绿茶、果蔬、大豆、药食两 用植物等含量丰富
【摄入量】
●胰蛋白酶抑制剂每日约摄入300mg ●黄酮类化合物每日约摄入20～70 mg
【作用机制】
✓抑制蛋白酶活性
结合靶酶催化位点或活性中心附近区域
✓下调蛋白酶基因表达水平
蛋白类蛋白酶抑制剂：主要抑制蛋白酶活性 天然小分子类蛋白酶抑制剂：
感谢聆听
天天学营养
抑制蛋白酶活性 下调蛋白酶基因表达
【生物学作用】
● 抗病虫害侵袭 ● 免疫调节与抗炎作用 ● 抗氧化作用 ● 抗癌作用 ● 保护心血管作用
免疫调节与抗炎作用
●抑制免疫相关蛋白酶，干预抗原特异的T细胞 应答。
●下调T细胞增生性反应和巨噬细胞功能。 ●上调IFN一γ活化的巨噬细胞释放一氧化氮，
产生细胞毒作用。 ●阻断病毒复制周期的关键酶。 ●抑制与炎症有关的蛋白酶。
蛋白酶抑制剂总结
蛋白酶抑制剂
1.PMSF：
1)抑制丝氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（入木瓜蛋白
酶）
2)10mg/ml溶于异丙醇中
3)室温可保存半年
4)工作浓度：17-174μg/ml（0.1-1.0mM）
5)水溶液中不稳定，必须加新鲜的PMSF。
2.EDTA
1)抑制金属蛋白水解酶
2)0.5M水溶液，pH8-9
3)溶液在4℃稳定六个月以上
4)工作浓度：0.5-1.5mM（0.2-0.5mg/ml）
5)加入NaOH调节溶液的pH，否则EDTA不溶解
3.胃蛋白酶抑制剂pepastatin
1)抑制酸性蛋白酶，如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D
2)1mg/ml溶于甲醇
3)储备液在4℃一周内稳定，-20稳定六个月
4)工作浓度0.7μg/ml（1μM）
5)在水中不溶解
4.亮抑蛋白酶肽leupeptin
1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B
2)1mg/ml溶于水
3)储备液4℃稳定一周，-20稳定六个月
4)工作浓度0.5μg/ml
5.胰蛋白酶抑制剂aprotinin
1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶
2)10mg/ml溶于水，pH7-8
3)储备液4℃稳定一周，-20稳定六个月
4)工作浓度0.5mg/ml
6.NaF
1)针对pSer/Thr
2)溶于水
3)储备液5M
4)工作浓度10-20mM。
常用蛋白酶抑制剂
添加蛋白酶抑制剂是大多数细胞裂解和蛋白质提取的必要步骤。
蛋白质提取过程中，内源性蛋白酶会降解蛋白质，导致蛋白质产量的降低。
在裂解试剂中加入蛋白酶抑制剂，可防止提取蛋白的降解，确保在细胞裂解后获得蛋白质的产量。
蛋白酶抑制剂是生物或化学化合物，其作用是可逆或不可逆地结合蛋白酶。
大多数已知的蛋白酶属于四个进化上不同的酶家族之一，基于功能基团参与肽键的裂解。
一般情况下，蛋白提取过程中总是需要使用蛋白酶抑制剂。
大多数情况下，需使用几种不同抑制剂化合物的混合物（也称Cocktail,鸡尾酒），以确保蛋白质提取物在分析之前不会降解。
常见蛋白酶抑制剂
常见蛋白酶抑制剂活性组分
不可
常用蛋白酶抑制剂混合物组成
*EDTA影响蛋白活性时，需实验是否需要添加EDTA。
蛋白酶抑制剂技术原理和选择指南
蛋白酶抑制剂技术原理和选择指南当细胞破碎的时候，蛋白水解酶就会被释放出来或被激活，使电泳结果复杂化，影响最终结果分析。
为了避免这些情况的出现，建议在样品制备时尽可能在低温下进行。
此外，许多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris碱，碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能抑制蛋白水解。
但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性，此时应当使用蛋白酶抑制剂。
因此对于我们想要研究的蛋白来说，选择性和有效的抑制这些蛋白酶对于蛋白纯化路线设计来说显得尤为重要。
蛋白酶抑制剂与蛋白酶一样，都是纷繁复杂的，通常使用许多化学物质作为蛋白酶抑制剂，如PMSF 和leupeptin。
而且由于一种蛋白酶抑制剂只对某一类蛋白酶起作用，因此通常建议复合使用蛋白酶抑制剂，如广谱蛋白酶抑制剂“鸡尾酒”，见下表（来自《蛋白质电泳实验技术》）。
蛋白酶抑制剂有效抑制的酶PMSF(Pheylmethylsulfonylfluoride)是很常见的抑制剂，使用浓度为1mmol/L不可逆抑制丝氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶。
AEBSF 丝氨酸抑制剂，使用浓度为4mmol/L AEBSF的抑制活性与PMSF相近，但它更易溶于水而且毒性低EDTA，EGTA，使用浓度为1mmol/L 通过鳌合蛋白酶维持活性所必需的金属离子来抑制金属蛋白酶。
多肽蛋白酶抑制剂，使用浓度为2-20ug/ml 亮肽素（Leupeptin）能抑制多种丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶；抑肽素（pepstatin）抑制天冬氨酸蛋白酶；抑肽酶（aprotinin）能抑制许多丝氨酸蛋白酶；苯丁抑制剂（bestatin）能抑制氨基酸多肽酶TLCk，TPCK，使用浓度为0.1-0.5mmol/L不可逆的抑制丝氨酸和半胱氨酸的蛋白酶苄脒（Benzamidine）使用浓度为1-3mmol/L抑制丝氨酸蛋白酶但是这样配置溶液进行处理，有时也是颇为麻烦，而且效果可能并不好，目前有一些厂家试剂在简便操作，和抑制效果方面有不俗的表现，可以考虑在实验中选用，节约时间和便于结果分析。
蛋白酶及其抑制剂
Coagulation Factor alpha-XIIa
3,4-Dichlorocoumarin, alpha2-Plasmin Inhibitor
Collagenase I
EDTA,还原剂
Collagenase II
EDTA,还原剂
Collagenase III
Carboxypeptidase A
Amastatin, EDTA及其他Zn2+螯合剂, Cu2+, Fe2+, Pb2+, Oxalate
Carboxypeptidase B
EDTA及其他Zn2+螯合剂, epsilon-amino-n-caproic acid
Carboxypeptidase P
Aprotinin, DFP, Leupeptin, TLCK
Kallikrein
AEBSF, Aprotinin, 3,4-Dichlorocoumarin, Leupeptin
Papin
AEBSF, Antipain, Cystatin, E-64, Leupeptin, PMSF, TLCK, TPCK
冻干粉,各组份单独包装, -20oC保存,保质期三年
Endoproteinase Arg-C
DFP, alpha2-Macroglobulin, TLCK
Endoproteinase Asp-N
Aprotinin, DFP, Leupeptin, TLCK
Endoproteinase Glu-C
DFP, alpha2-Macroglobulin
Endoproteinase Lys-C
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蛋白酶抑制剂选择指南1 蛋白酶抑制剂选择指南抑制剂 工作浓度 分子量 抑制蛋白酶种类 稳定性AEBSF终浓度1mM MW:239.5不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制胰蛋白酶,糜蛋白酶,纤溶酶,凝血酶及激肽释放酶. 可溶于水,其pH7的水溶液在4o C可保持稳定1-2个月,在pH>8的情况下会发生缓慢水解Aprotinins 抑肽酶终浓度2ug/ ml MW:6512 可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制纤溶酶,激肽释放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶,但不抑制凝血酶和Factor Xa。
非常稳定,当pH>12.8时失去活性,可溶于水(10mg/ml),-20o C下可长期保存Bestatin终浓度10uM MW:308.4 可逆的丙氨酰-氨基肽酶抑制剂, 工作液可保存一天,1mM的甲醇贮存液在-20o C可保存至少一个月E-64 Protease Inhibitor终浓度10uM MW:357.4 不可逆的半胱氨酸酸蛋白酶抑制剂,抑制半胱氨酸酸蛋白酶而不会影响其他酶的半胱氨酸残基,与小分子量的巯基醇如beta-巯基乙醇不会产生反应,具有高度特异性。
工作液在正常pH值下可保持稳定数天,1mM的水溶液在-20o C可保存几个月EDTA, 4Na终浓度10mM MW:380.2 金属蛋白酶的可逆性螯合物,可能同时影响其他金属依赖性生物过程。
其水溶液很稳定,其贮存液(pH8.5的0.5M 水溶液)在4o C可保存数月Leupeptin, 半硫酸盐 亮抑酶肽（亮肽素） 终浓度100uM MW:493.6 可逆的丝氨酸及半胱氨酸蛋白酶制剂,可抑制胰蛋白酶样蛋白酶及一些半胱氨酸蛋白酶如:Lys-C内切蛋白酶,激肽释放酶,木瓜蛋白酶,凝血酶,Cathepsin B及胰蛋白酶。
工作液的稳定期为数小时,贮存液(10mM水溶液)在4o C时稳定期为一周,-20o C时稳定期为一个月Pepstatin A 终浓度1uM MW:685.9 可逆的天冬氨酸蛋白酶,可抑制胃蛋白酶,Cathepain B&L,血管紧张肽原酶(renin)及以1mg/ml溶于甲醇,搅拌过夜可以1mg/ml溶于乙醇,333mg/ml溶于6N的蛋白酶抑制剂选择指南2抑肽素A 很多细菌来源的天冬氨酸蛋白酶,与蛋白酶有微弱的结合。
乙酸,4o C 下可保存一周PMSF终浓度1mMMW:174.2不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制羧肽酶Y,糜蛋白酶,Factor Xa,木瓜蛋白酶,纤溶酶,蛋白酶K,枯草杆菌蛋白酶,凝血酶及胰蛋白酶。
有毒！请现配现用,并在样本处理过程中分批加入(勿一次性加入),在pH7.5时半衰期为一个小时,贮存液(200mM 的甲醇或乙醇溶液)在4o C 可保存9个月以上 Trypsin Inhibitor, Soybean 与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度 MW:20000 可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制Factor Xa 及胰蛋白酶。
在低pH 值情况下分解,其贮存液在-20o C 时相当稳定Acetyl-Pepstain 终浓度1uM MW:643.8 可逆的天冬氨酸蛋白酶抑制剂, 抑制HIV-1和2蛋白酶,溶于50%醋酸, 对于 HIV-1和2蛋白酶, 在pH4.7时其K i 值分别为20nM 和5nM Amastatin 终浓度10uMMW:474.6可逆的丙氨酰-氨基肽酶抑制剂,其水溶液只可保存一天,其1mM 的乙醇溶液在-20o C 可保存一个月Antipain, 2HCl终浓度100uM MW:677.6可逆的丝氨酸和半胱氨酸的蛋白酶抑制剂,可抑制木瓜蛋白酶及胰蛋白酶.对纤溶酶也有一定抑制作用.与Leupeptin 相比,它对木瓜蛋白酶和胰蛋白酶有更强的特异性.工作液稳定期仅为数小时,但其10mM 的水（或缓冲液）溶液贮存液在4o C 可保存一周,在-20o C 可保存一个月,还可溶于甲醇或DMSOAntithrombin III与蛋白酶等摩尔浓度的此抑制剂MW:65000 可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制凝血酶,Factor Xa,胰蛋白酶及其他胰蛋白酶样 丝氨酸蛋白酶,其水溶液在-20o C 非常稳定p-APMSF 终浓度100uM MW:252.7不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制 胰蛋白酶样 丝氨酸蛋白酶,对乙酸胆碱酯酶无影响。
工作液需现配现用,在pH7.0的缓冲体系中其半衰期为六分钟。
其50mM 的水溶液可在-20o C 长期存放Arphamenine A 终浓度1uM MW:387.4 高度特异性氨基肽酶B 抑制剂。
可溶于水,贮存液在-20o C 可保存一个月 Arphamenine B 终浓度1uMMW:387.4高度特异性的氨基肽酶B 抑制剂。
可溶于水,贮存液在-20o C 可保存一个月 Cathepsin Inhibitor I终浓度200uM MW:475.5,不可逆的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制Cathepsin B,L,S 及木瓜蛋白酶。
避光保存,在pH5-9的缓冲液中,30O C 下其半衰期为25小时,-20O C 下其半衰期为两蛋白酶抑制剂选择指南3 周Cathepsin Inhibitor II终浓度200uM MW:489.5 不可逆的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制Cathepsin B,L,S及木瓜蛋白酶。
避光保存,在pH5-9的缓冲液中,30O C下其半衰期为27小时,0O C下其半衰期为两周Cathepsin Inhibitor III终浓度200uM MW:505.5 不可逆的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制Cathepsin B,L,S及木瓜蛋白酶。
避光保存,在pH5-9的缓冲液中,30O C下其半衰期为37小时,0O C下其半衰期为两周Cathepsin/ Subtilisin Inhibitor 终浓度100uM MW:518.0 ,不可逆的半胱氨酸丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制Cathepsin L,枯草杆菌蛋白酶及Thermitase避光保存,在pH5-9的缓冲液中,30o C下其半衰期为2.5小时,0o C下其半衰期为40小时Chymostatin终浓度100uM MW:604.9 可逆的 半胱氨酸丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制糜蛋白酶样丝氨酸蛋白酶,包括lalpha-,beta-,gamma-及delta-糜蛋白酶Cystatin, Egg White与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度MW:12700 可逆的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制半胱氨酸蛋白酶,包括二肽酰肽酶I及III,木瓜蛋白酶,无花果蛋白酶及Cathepsin B。
非常稳定,热稳定性好,冷冻保存于20%的pH7.5的甘油溶液或其他缓冲液3,4- Dichloroisocoumarin 终浓度100uM MW:215.0 不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制多种丝氨酸蛋白酶,对beta-内酰胺酶无抑制作用。
工作液在pH7.5时半衰期为20分钟,10mM的DMF或DMSO贮存液在-20o C可保存几个月Dipeptidylpeptidase IV Inhibitor I 终浓度100uM MW:455.5 ,丝氨酸/脯氨酸特异性蛋白酶,抑制二肽酰肽酶IV。
其DMSO贮存液在20o C可保存六个月,其水溶液可保持稳定一天Dipeptidylpeptidase IV Inhibitor II 终浓度10uM MW:355.8 不可逆的 丝氨酸/脯氨酸特异性蛋白酶,二肽酰肽酶II和IV酰化抑制剂。
应避光保存,其工作液在pH7.6下,30o C半衰期为24小时EST (E-64d)终浓度50ug/ml MW:342.4 不可逆的半胱氨酸酸蛋白酶抑制剂,溶酶体半胱氨酸蛋白酶膜穿透性抑制剂,也是一种膜穿透性钙激活中性蛋白酶抑制剂。
贮存液在-20o C可保存六个月Ebelactone B,终浓度1uM MW:352.5 ,特异性的羧肽酶Y样外肽酶的抑制剂。
可溶于甲醇(200mg/ml),乙醇及氯仿。
溶液在4o C可保存一周,在-20o C可保存一个蛋白酶抑制剂选择指南4Streptomyces 月Ecotin终浓度1.5nMMW:32200,丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制多种丝氨酸蛋白酶,包括糜蛋白酶,弹性蛋白酶,Factor Xa 及XIIa,胰蛋白酶。
贮存液保存于-70o C,避免反复冻融Elastinal终浓度100uM MW:512.6可逆性丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制弹性蛋白酶及弹性蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。
工作液稳定期为数小时,贮存液(10mM 水溶液)在4o C 可保存一周,在-20o C 可保存数月Leuhistin终浓度2ug/ml MW:241.3 可逆的金属蛋白酶抑制剂, 氨基肽酶M 竞争性抑制剂。
可溶于水,乙醇及DMSO,贮存液应保存在-20o CAlpha2-Marcoglobulin,人血浆与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度MW:725000不可逆地抑制多种蛋白酶,包括菠萝蛋白酶,糜蛋白酶,弹性蛋白酶,Arg-C 内切蛋白酶,Glu-C 内切蛋白酶,无花果蛋白酶,胃蛋白酶,纤溶酶,枯草杆菌蛋白酶,嗜热菌蛋白酶,凝血酶及胰蛋白酶。
pH6-7.5的贮存液（水溶液）在-20o C 可保存六个月,对酸性环境敏感,当pH 值低于4.0时失去活性,勿与DTT 一起使用 NCO-700 终浓度100uM MW:1141.3半胱氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制钙激活中性蛋白酶(Calpain),Cathepsin B,L 及木瓜蛋白酶。
溶液请现用现配,常温下其水溶液稳定期为六个小时,其乙醇溶液的稳定性略高 Phosphoramidon, 终浓度10uMMW:579.6可逆的金属蛋白酶抑制剂,可抑制一些金属内肽酶,是嗜热菌蛋白酶的高特异性抑制剂。
贮存液(1mg/ml 水溶液)在-20o C 至少可保存一个月Subtilisin Inhibitor I 终浓度100uM MW:379.4 ,丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase 。
避光保存,其pH5-9的工作液在30o C 时稳定期为4小时,在0o C 时稳定期为60小时 Subtilisin Inhibitor II 终浓度100uM MW:475.5 丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase 。
避光保存,其pH5-9的工作液在30o C 时稳定期为4小时,在0o C 时稳定期为60小时 Subtilisin Inhibitor III 终浓度100uM MW:505.5 丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase 。
避光保存,其pH5-9的工作液在30o C 时稳定期为8小时,在0o C 时稳定期为120小时 Subtilisin Inhibitor IV终浓度100uM MW:516.0丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase 。