啤酒酵母纯种分离
啤酒发酵酵母扩培学习资料
啤酒发酵酵母扩培学习资料啤酒厂获得接种酵母的方式有三种方式，其优缺点见图2.1：这三种方式是：购买酵母泥；购买纯种酵母；自己保存和培养纯种酵母。
图2.1 啤酒获得酵母的方式和其优缺点第一节纯种酵母的培养一、培养啤酒纯种酵母工艺原理酵母是一种兼性微生物，这就是说，细胞的新陈代谢和繁殖即可以在有氧的状态下也可以在无氧的状态下进行。
啤酒酵母菌的的繁殖过程分为四个阶段（见图2.7）：1．迟缓期：在此期间，虽有营养物质存在，但酵母基本不繁殖；2．对数生长期：此期间酵母繁殖最为迅速；3．稳定期：此时，代谢产物CO2和酒精的积累使酵母繁殖逐渐变慢，活菌数最高；4．衰亡期：营养物质耗尽和有毒代谢产物大量积累，酵母菌死亡率增加，活菌数减少。
酵母培养中，最重要的阶段是对数生长期，此时的营养、氧气供给及其他条件如：酵母细胞浓度和温度都必须达到最佳。
酵母由于不断地消耗氧气，必须连续通入足够的无菌空气。
因为氧气缺乏时，其中一部分酵母会进行发酵，从而产生CO2和酒精，而不是产生新细胞，这样生成的有活力的细胞数就减少了。
二、啤酒纯种酵母的分离培养啤酒酵母的分离培养就是利用特殊的分离技术，将优良强壮的单细胞酵母从原菌中分离出来，加以扩大培养，供生产使用。
分离培养的方法很多，工厂常用的是平板分离法或划线分离法。
获得原菌的方法：（1）从实验室保存的原菌种中分离，原菌种必须先经过几次培养活化的再行分离；（2）从生产中的酵母泥或主发酵液中分离。
1．平板分离培养法（又称稀释分离法，见图2.2）这种方法简单易行，适合于工厂现场使用。
先将盛有麦汁的琼脂试管培养基放在热水中融化，冷却至42～45℃，再将准备分离培养的酵母原菌用白金针移植到已融化的培养基内。
如分离培养发酵液的酵母，则先使之静置，倾出上部清液，留少量发酵液，混合均匀后接种。
如分离培养酵母泥，需加少量无无菌水或麦汁，稀释后再接种。
将分离培养的酵母移植于融化的培养基内后，充分振荡，使混合均匀，用白金针从该试管挑少许移植到第2支试管中，随即将第1支试管中的培养基倾注在已灭菌的培养皿中，均匀分布在培养皿底面，使之凝固。
底泥啤酒酵母分离纯化与发酵性能测定
蒸 馏水 １ Ｌ
将 马铃 薯去 皮 切块 ． 加 １ Ｌ蒸 馏水 ． 煮沸 １ Ｏ 一 ２ Ｏ
分钟 ． 用纱 布过滤 ． 补 加蒸 馏水 至 １ Ｌ ， 加 入葡 萄糖 和
摘
要： 以 生 产 型 实训 基 地 原 浆 啤 酒 底 泥 为 原 料 ． 从 中 分 离 筛选 出一 株 高 活 性 啤 酒 酵母 ． 并 对 其 进 行 啤 酒 发 酵
小试 ， 结果显示 ： 所 分 离酵 母 茵代 谢 旺 盛 ， 发 酵能力强 ， 成 酒 保 持 了本 实 训 室传 统 发 酵 啤 酒 的 风 味 ． 可以作为发 酵菌
酒 酵 母 泥在 ４ ０ — ８ ０ Ｌ左 右 ．其 中包 含着 大量 啤 酒酵
采 用无 菌 取样 技 术 ． 从 啤酒 发 酵罐 底 部 收集 发 酵过程 所产 生 的废弃 啤酒 酵母底 泥 。 置于 ４ ｑ Ｃ 备用 。
１ ． ２分 离培养 基 配制
分 离 啤酒 酵母 所用 培养 基 为 Ｐ Ｄ Ａｆ 马 铃薯 葡 萄 糖 琼脂 ） 培养 基 。
种 投 产
关键词 ： 啤 酒底 泥 ： 啤 酒 酵母 ： 发 酵 小 试 中 图分 类 号 ： Ｔ Ｓ ２ ６ ２ ． ５
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４ 一（ ） １ —０ ８
文 献标 识码 ： Ｂ
文章编号 ： １ ６ ７ １ ～ ９ １ ２ ３ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ １ １ ５ 一 Ｏ ４
菌 培养 皿 中 ． 静置 凝 固后备 用 ｄ ， 平板 分 离 将 酵母 底 泥经 过滤 除 杂 、 碱 洗水 洗 除 去表 面 吸 附和 夹 杂 的 啤酒 花 ． 蛋 白和 颗粒 杂 质 ， 剩余 酵母 经 稀 释后 制 备成 梯度 稀 释液 ． 选用 １ ０ － ６ 稀 释度 菌 液进
酿酒 分离
酿酒过程中的酵母分离是一个关键步骤，它确保了酿造过程中使用的是纯净且适合特定酒种的酵母菌株。
以下是一些酿酒酵母分离的基本步骤和注意事项：
1. 样品采集：酿酒酵母通常来源于发酵液、酒糟或酵母泥。
采集样品时，应确保工具的无菌操作，避免污染。
2. 分离纯化：将采集的样品进行适当的稀释，然后取一定量涂布于选择性培养基上，如YEPD培养基，这是一种常用的富集培养基。
在适当的温度（通常是28℃）下培养几天，以便酵母生长形成单菌落。
3. 单菌落挑选：在培养基上，挑选出不同的单菌落，这可以通过观察菌落的颜色、形状和质地来初步判断酵母的种类。
4. 形态鉴定：将挑选出的单菌落接种到WL鉴别培养基上，进一步观察和鉴定。
酿酒酵母在WL培养基上通常呈现为奶油色带有绿色、不透明，形状为球形、光滑、突起。
5. 生理生化测试：进行一系列的生理生化测试，以确定酵母的种属。
这些测试包括发酵能力、产生酒精的类型和数量、对不同碳源和氮源的利用等。
6. 分子生物学鉴定：为了更准确地鉴定酵母菌株，可以采用分子生物学方法，如PCR和DNA测序，分析其核糖体RNA（rRNA）或内部转录间隔区（ITS）等基因序列。
7. 保存与应用：经过鉴定和性能测试的酵母菌株可以保存于-4℃的冰箱中，用于未来的酿造。
在实际酿造过程中，根据酵母的特性选择合适的接种量和发酵条件。
在整个分离和纯化过程中，无菌操作是关键，避免任何外来的污染。
此外，记录所有的操作步骤和结果也是非常重要的，以便于后续的跟踪和分析。
在酵母的应用上，还需考虑其对酿造条件的适应性，以及是否能产生期望的风味特征。
啤酒酵母中乳杆菌的分离鉴定
２００７Ｎｏ．１ＳｅｒｉａｌＮｏ．１６６ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇ在啤酒生产过程中，酵母的纯种培养和纯种发酵对啤酒的质量至关重要。
但实际生产中啤酒厂的酵母一般要连续使用多代，在循环使用过程中很容易染菌。
乳酸菌是最容易污染、且危害较大的细菌。
当使用受到乳酸菌污染的酵母进行啤酒发酵时，会导致啤酒产生丝状浑浊、酸味增加、双乙酰超标等质量问题。
因而对酵母定期进行微生物检测、控制乳酸菌的污染是非常重要的。
本文对种酵母中存在的乳酸菌进行了分离和初步鉴定。
１材料与方法１．１材料１．１．１样品连续使用５代以上的种酵母：取自济南某啤酒厂。
１．１．２培养基ＵＢＡ固体培养基：酵母膏６．１ｇ，蛋白胨１５ｇ，葡萄糖１６ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４０．３１ｇ，ＫＨ２ＰＯ４０．３１ｇ，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．１２ｇ，ＮａＣｌ０．００６ｇ，ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．００６ｇ，ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ０．００６ｇ，番茄汁２４４ｍＬ，啤酒２５０ｍＬ，琼脂２０ｇ。
蒸馏水定容至１０００ｍＬ，ｐＨ６．０。
改良ＵＢＡ固体培养基：ＵＢＡ固体培养基中加入２％ＣａＣＯ３。
用来分离种酵母中的乳酸菌。
ＰＹＧ培养基：蛋白胨０．５ｇ，胰酶解酪朊０．５ｇ，酵母膏１．０ｇ，葡萄糖１．０ｇ，盐溶液４．０ｍＬ，蒸馏水１００ｍＬ，ｐＨ值自然。
用来测定乳酸菌发酵葡萄糖产乳酸的情况。
盐溶液成分：无水ＣａＣｌ２０．２ｇ，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．４８ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４１．０ｇ，ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ，ＮａＨＣＯ３１０ｇ，ＮａＣｌ２．０ｇ，蒸馏水１０００ｍＬ。
麦汁培养基：将粉碎的粗麦芽与水按１：４在６３℃水浴中保温１ｈ，升温至６５℃继续保温１ｈ，至碘检无色。
糖化醪用纱布过滤，向滤液中加入３０ｍＬ／Ｌ麦汁澄清剂，煮沸３０ｍｉｎ后过滤，麦汁糖度调至１２°Ｐ。
麦汁培养基用来测定低温下乳酸菌的发酵产酸性能。
１．２方法１．２．１乳酸菌的分离纯化以无菌操作取２５ｇ酵母泥于装有２２５ｍＬ无菌生理盐水的５００ｍＬ三角瓶中，振荡均匀。
分离观察酵母菌实验报告
1. 学习微生物分离纯化的基本原理和方法。
2. 掌握酵母菌的分离纯化技术。
3. 观察酵母菌的形态和培养特征。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中。
本实验通过平板划线法将混合菌液中的酵母菌分离纯化，并在适宜的培养基上培养，观察其形态和特征。
三、实验材料1. 菌种：啤酒酵母菌2. 培养基：酵母膏葡萄糖琼脂培养基（YGA）3. 工具：接种环、酒精灯、无菌试管、无菌棉签、培养皿、显微镜等四、实验方法1. 菌种活化：将啤酒酵母菌菌种接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 分离纯化：取活化后的酵母菌菌液，用无菌棉签涂布于YGA平板上，用接种环进行平板划线，划线时注意不要划破菌落。
将平板倒置于28℃恒温培养箱中培养24小时。
3. 观察与计数：观察平板上的菌落，记录菌落形态、大小、颜色等特征。
用无菌棉签挑取单个菌落，接种于新的YGA平板上，重复上述操作，直至获得纯化的酵母菌。
4. 酵母菌形态观察：将纯化的酵母菌接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时，用无菌吸管吸取少量菌液，滴加于载玻片上，用无菌盖玻片覆盖，在显微镜下观察酵母菌的形态。
五、实验结果1. 菌落特征：酵母菌菌落呈圆形，表面光滑，湿润，边缘整齐，颜色为乳白色。
2. 酵母菌形态：酵母菌为单细胞，呈椭圆形或卵圆形，细胞核明显，细胞壁较厚。
1. 通过平板划线法，成功分离纯化了酵母菌，表明该方法适用于微生物的分离纯化。
2. 酵母菌在YGA培养基上生长良好，菌落特征明显，便于观察和识别。
3. 显微镜下观察酵母菌的形态，有助于了解其生物学特性。
七、实验结论1. 本实验成功分离纯化了酵母菌，掌握了酵母菌的分离纯化技术。
2. 通过观察酵母菌的形态和培养特征，了解了酵母菌的基本生物学特性。
3. 平板划线法是一种简单、有效的微生物分离纯化方法，适用于实验室研究。
八、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，防止杂菌污染。
啤酒酵母的 分离和鉴定
酵母的分离和鉴定酵母的分离实验目的：应用酵母的生理生化和生态学特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
实验原理：酵母能在较高温环境生长能，在50至70摄氏度快速生长；酵母菌常见于含糖分比较高的的环境中，如果园中的果皮表面，多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0，酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
实验器材和材料：苹果皮马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，分装三角瓶乳酸马铃薯葡萄糖培养液：马铃薯200g，葡萄糖20g，乳酸5ml，pH5.5，分装试管无菌培养皿，无菌水，显微镜，接种环，枪，美兰染液实验方法1、接种：取苹果皮，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用枪吸取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28°C-30°C培养箱中培养24h2、加富培养：用枪吸取上述溶液1ml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28°C-30°C培养箱中培养24h3、镜检：用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，在高倍镜下观察酵母菌的形态和出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因为活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用枪吸取0.1ml加富培养液到平板中，涂匀后培养24h5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上划线，培养后分离得到单个菌落。
6、镜检：挑取单菌落，制片观察形态酵母的鉴定实验材料：酵母菌种：分离的酵母菌菌种分离培养基：11°P无酒花麦汁琼脂培养基菌种斜面培养基：11°P无酒花麦汁琼脂培养基发酵麦汁：11°P普通麦芽汁硫酸钙缓冲液实验步骤：观察单菌落，选取生长快、菌落大小适中、洁净、有代表性的移入液体试管中→培养后划斜面→1级筛选→选出两个候选菌株同保藏菌种一起进行鉴定。
啤酒生产酵母菌株筛选技术
啤酒生产酵母菌株筛选技术摘要: 鲜啤酒以其独特的风味、营养、时尚而流行于都市生活。
啤酒酵母菌株的特性直接决定着鲜啤酒的质量,在生产中采用不同的菌株和生产工艺,可酿造出不同类型的啤酒。
根据实际经验,提出了啤酒生产酵母菌株分离的技术要点，并依此进行了啤酒生产酵母菌株的筛选。
.关键词：啤酒酵母；筛选啤酒发酵是一个复杂的生化过程：在啤酒酵母所含酶系的作用下，原麦汁会发生变化生成酒精、二氧化碳和其它的醇、醛、酯以及硫化物，这些发酵产物使啤酒具有独特的风味，决定着鲜啤酒的泡沫、色泽和稳定性等各项指标。
啤酒生产过程中，可能存在野生酵母菌的污染及生产菌种的自然变异和衰老，从而使菌种发生退化现象[1，2]。
菌种退化后,经常表现为[1]：（1）细胞形态变化、增殖不良、初始发酵缓慢；（2）发酵过程降糖慢、发酵度低；（3）双乙酰峰值升高；（4）酵母凝聚性变差、滤酒困难。
因此,如果继续使用已退化的菌种，就会影响鲜啤酒的质量。
为了保持产品的质量，稳定鲜啤独特的风味，需要定期进行生产菌种的分离和纯化工作。
虽然有人使用活性干酵母[3]，可免除啤酒生产中的分离工作。
但是要制造有自己特色的啤酒，应在生产时从自己啤酒原液中分离、纯化出的酵母进行酿制更佳。
故建立一套自己的酵母菌株筛选体系，每年进行1-2 次的生产用菌的分离、纯化。
当然，为了不影响旺季的销售，此工作最好在销售淡季时进行。
1 啤酒酵母菌株的分离与纯化1.1 啤酒酵母菌株的分离啤酒酵母菌株的选择，即分离筛选底物的选择，一般存在选择保藏菌株和生产菌株两种方法。
保藏菌株虽然能保护原有菌种的优良性能，减少污染杂菌的机会，但从中难以选育到有益的突变型菌株。
因此，积极的筛选方法应从生产中不断选育出有利于产品质量和风味的菌株。
根据经验，选用第三代酵母发酵中，发酵旺盛的高泡期发酵液，作为啤酒酵母菌株筛选样品，最为合适。
1.2 发酵液的处理在无菌条件下吸取发酵液10mL，放入无菌的100mL 麦汁中，以10 倍稀释法稀释，取后三种稀释液各1mL 分别置于无菌平皿中，每个稀释度作两个皿。
啤酒酵母蔗糖酶提取、 分离纯化、性质鉴定及反应动力学实验
3,5-二硝基水杨酸比色定糖法工作曲线的制作Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作米氏常数正交实验结果分析：啤酒酵母蔗糖酶提取、分离纯化、性质鉴定及反应动力学实验一、实验目的1、熟悉工作曲线的制作方法及注意事项；2、掌握3, 5-二硝基水杨酸（DNS）比色定糖的原理和方法；3、掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；4、掌握酶蛋白分离提纯的原理；5、掌握酶的比活力测定及其计算方法；6、掌握酶促反应动力学中用双倒数法测定Km的方法；7、运用正交试验法确定温度、pH值、离子浓度的最适条件。
二、实验原理1、蔗糖酶的提取细胞破壁：就酶在生物体内的分布，可分为胞内酶和胞外酶，蔗糖酶系胞内酶。
提取胞内酶时，要破碎组织和细胞，然后用一定的溶液提取，得到的材料称为无细胞抽提液。
材料不同，破壁的方法也不同。
我们用的酵母菌细胞破壁方法有机械（匀浆）法、超声波处理法、反复冻融法、化学处理法、溶胞作用(酶溶解法)、自溶法，本实验采用自溶法。
自溶法即将新鲜的生物材料存放于一定的pH和适当的温度下，细胞结构在自身所具有的各种水解酶（如蛋白酶和酯酶等）的作用下发生溶解，使细胞内含物释放出来。
2、蔗糖酶的纯化（1）酶的蛋白属性①两性电离：蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。
②等电点(isoelectric point, pI) ：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH 称为蛋白质的等电点。
③大分子(胶体) : 分子量可自1 万至100 万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。
④稳定的因素: 颗粒表面电荷、水化膜（2）调节酶溶解度的方法；①改变离子强度；盐析、硫酸铵分级沉淀（反抽提法）反抽提法（Back Extraction）例：E.coli RNA聚合酶42% - 50% 硫酸铵饱和度时沉淀通常方法：先33%-------再50%反抽提法：再42%将包含待分离酶在内的多种蛋白一起先沉淀出来，然后再选择适当的递减浓度的硫酸铵溶液来抽提沉淀物。
啤酒酵母分离后的提取方法
啤酒酵母分离后的提取方法摘要：一、啤酒酵母的培养与分离方法二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤三、啤酒酵母在生产中的应用四、酵母菌提取方法的探讨正文：一、啤酒酵母的培养与分离方法啤酒酵母，作为一种常用的发酵剂，在食品、饮料等行业中具有广泛的应用。
啤酒酵母的培养与分离方法主要有以下两种：1.直接从麦汁中培养：这种方法适用于啤酒厂家的生产过程中，目的是将酵母添加到麦汁中进行发酵。
在此过程中，培养基就是麦汁，无需进行酵母分离。
2.从土壤中分离：这种方法适用于研究或生产中需要特定酵母菌的情况。
通过从土壤中分离啤酒酵母，可以得到具有特定性状的酵母菌株。
二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤1.配制适合酵母菌的选择培养基，如麦芽汁培养基或YPD培养基。
2.对土壤样品进行梯度稀释，首先配制几包9mL的生理盐水，对1g土壤样品进行稀释，一般稀释到6的梯度就可以了。
3.倒平板，分区划线，将稀释后的土壤样品均匀涂布在培养基表面，25℃培养2到3天。
4.挑选生长良好的菌落进行进一步纯化。
三、啤酒酵母在生产中的应用啤酒酵母不仅在啤酒生产中起到发酵作用，还具有以下应用：1.酿造：啤酒酵母用于麦汁的发酵，使麦汁中的糖分转化为酒精和二氧化碳，从而制成啤酒。
2.食品添加剂：啤酒酵母含有丰富的营养成分，如蛋白质、维生素和矿物质，可作为食品添加剂，提高食品的营养价值。
3.生物发酵：啤酒酵母还可用于生产其他发酵产品，如葡萄酒、果酒、腐乳等。
四、酵母菌提取方法的探讨酵母菌提取是酵母生产与应用的关键环节。
常用的提取方法有以下几种：1.机械法：通过离心、过滤等机械手段将酵母菌从培养液中分离出来。
2.沉降法：利用酵母菌与培养液的密度差异，使酵母菌自然沉降，从而实现分离。
3.浮选法：通过添加表面活性剂，使酵母菌聚集在一起，形成浮游颗粒，从而实现分离。
4.生物分离法：利用酵母菌与其他微生物的生物学特性差异，选择合适的分离介质和条件，实现酵母菌的分离。
综上所述，啤酒酵母的培养、分离与提取方法多种多样，可根据实际需求和应用场景选择合适的方法。
啤酒酵母的质量检查
啤酒酵母的质量检查一、实验目的：学习酵母菌种的质量鉴定方法，二、实验原理：酵母的质量直接关系到啤酒的好坏。
酵母活力强，发酵就旺盛；若酵母被污染或发生变异，酿制的啤酒就会变味。
因此，不论在酵母扩大培养过程中，还是在发酵过程中，必须对酵母质量进行跟踪调查，以防产生不正常的发酵现象，必要时对酵母进行纯种分离，对分离到的单菌落进行发酵性能的检查。
三、实验器材与试剂：显微镜，恒温水浴，温箱，高压蒸汽灭菌锅，带刻度的锥形离心管等0.025%美兰（又称次甲基兰，Methylene blue）水溶液：0.025g美兰溶于100mL水中；pH4.5的醋酸缓冲液：0.51g硫酸钙，0.68g硫酸钠，0.405g冰醋酸溶于100mL水中；醋酸钾（钠）培养基：葡萄糖0.06%，蛋白胨0.25%，醋酸钾（钠） 0.5%，琼脂2%， pH 7.0。
四、实验步骤：1.显微形态检查载玻片上放一小滴蒸馏水，挑酵母培养物少许，盖上盖玻片，在高倍镜下观察。
优良健壮的酵母菌，应形态整齐均匀，表面平滑，细胞质透明均一。
年幼健壮的酵母细胞内部充满细胞质；老熟的细胞出现液泡，呈灰色，折光性较强；衰老的细胞中液泡多，颗粒性贮藏物多，折光性强。
2.死亡率检查方法同上，可用水浸片法，也可用血球计数板法。
酵母细胞用0.025%美兰水溶液染色后，由于活细胞具有脱氢酶活力，可将兰色的美兰还原成无色的美白，因此染不上颜色，而死细胞则被染上兰色。
一般新培养酵母的死亡率应在1%以下，生产上使用的酵母死亡率在3%以下。
3.出芽率检查指出芽的酵母细胞占总酵母细胞数的比例。
随机选择5个视野，观察出芽酵母细胞所占的比例，取平均值。
一般生长健壮的酵母在对数生长阶段出芽率可达60%以上。
4.凝集性试验对下面发酵来说，凝集性的好坏牵涉到发酵的成败。
若凝集性太强，酵母沉降过快，发酵度就太低；若凝集性太弱，发酵液中悬浮有过多的酵母菌，对后期的过滤会造成很大的困难，啤酒中也可能会有酵母味，凝集性可通过本斯试验来确证：将1g酵母湿菌体与10mL pH4.5的醋酸缓冲液混合，20℃平衡20分钟，加至带刻度的锥形离心管内，连续20分钟，每隔1分钟记录沉淀酵母的容量。
啤酒酵母蔗糖酶的提取、纯化及测定研究
浙江工业大学海洋学院生物化学实验论文专业：食品科学与工程班级：食品1201姓名：徐素媛啤酒酵母蔗糖酶的提纯及相关性质测定研究作者：徐素媛单位：浙江工业大学海洋学院食工1201班摘要：为了了解酶的提取及及初提纯方法，并在此基础上掌握Q Sepharose-柱层析法提纯酶、DNS法测定酶活力、Folin-酚法和微量凯式定氮法测定蛋白含量以及SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理和方法，需要进行一系列的实验，主要实验过程如下：啤酒酵母自溶后经多次分别离心得到初提液A、热提取液B和乙醇提取液C。
利用Q Sepharose-柱层析法洗脱乙醇提取液C得到洗脱液，通过测定洗脱液的吸光值及酶活力的定性测定，选取活力最高的洗脱液得到柱分离液D。
接着进行定量酶活力测定，根据葡萄糖标准曲线的方程计算4个样品的总活力单位数和酶回收率，并得出随着蔗糖酶的不断提纯，酶的总活力单位数和酶回收率都逐渐减小。
随后用Folin-酚试剂法测样品中蛋白质的含量，与用微量凯氏定氮法测定的结果进行比较，后者测出的总蛋白含量比前者大，并得出A、B、C、D4个样品的比活力在一步步的纯化中逐渐升高，纯化倍数也明显增大，而总酶活、总蛋白和蛋白回收率却在下降。
最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法通过凝胶对样品的筛选分离、染色、洗脱等步骤测量蛋白质分子和染料的迁移距离来间接测定蔗糖酶的相对分子质量。
关键词：蔗糖酶提纯酶活力Folin-酚法微量凯式定氮法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法正文：1、文献综述1.1 总述啤酒酵母也叫营养酵母，为酵母科、酿酒酵母属，可作食用、药用和饲料酵母，还可以从其中提取核酸、谷胱甘肽、蔗糖酶、细胞色素c等营养物质[1]从啤酒酵母中提取蔗糖酶的一般工艺过程包括提取和分离纯化以及相关性质测定[2]。
1.2 蔗糖酶的提取蔗糖酶(Sucrase，EC 3.2.1.26)又称转化酶(Invertase)，可作用于β-1，2糖苷键，并将蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖。
啤酒酵母的分离纯化与保存技术考核试卷
9. ABD
10. ABC
11. BD
12. ABC
13. ABCD
14. ABC
15. ACD
16. AB
17. ABC
18. ABCD
19. ABCD
20. ABCD
三、填空题
1. 20-25
2.铅笔、镊子、无菌吸管
3.冷冻保存
4.酒精灯火焰
5.甘油
6.抑制杂菌生长，促进目标酵母生长
7.划线分离法、液体稀释分离法
四、判断题（本题共10小题，每题1分，共10分，正确的请在答题括号中画√，错误的画×）
1.啤酒酵母的分离纯化过程中，可以使用未消毒的工具进行操作。（）
2.低温保存是啤酒酵母长期保存的最佳方法。（）
3.在进行啤酒酵母的分离纯化时，可以在非无菌环境下打开培养皿。（）
4.真空干燥保存是啤酒酵母的一种长期保存方法，可以保持其遗传稳定性。（）
标准答案
一、单项选择题
1. A
2. C
3. D
4. D
5. D
6. A
7. D
8. A
9. B
10. D
11. D
12. D
13. C
14. D
15. D
16. C
17. D
18. C
19. A
20. D
二、多选题
1. BCD
2. ABCD
3. ABC
4. BD
5. ABCD
6. ABCD
7. BD
A.冷冻保存
B.真空干燥
C.液氮冷冻
D.酒精浸泡
4.以下哪些是进行啤酒酵母分离纯化时的无菌操作步骤？（）
A.烘干接种环
【doc】啤酒酵母单细胞分离的种源获取理想途径及其操作技术
啤酒酵母单细胞分离的种源获取理想途径及其操作技术2001年第4期(总第106期)№.4∞1I_106酿葺斟技Scienee&3l啤酒酵母单细胞分离的种源获取理想途径及其操作技术董新堇(浙江省洛克啤酒有限公司,浙江宁波317600)摘要:从生产现场走罐发酵的酵母泥中选取第2～3代生命力强的酵母作为啤酒酵母单细胞分离的理想种潦,选取的最好时问为双乙酰还原王闽值后降温王5℃,井让其停留2411时取样位王为排压酵母的管口,最后将所得菌种进行初选,复选或模拟生产恒温培齐鉴定,选出优良菌株.(孙悟)关键词:微生物;啤酒酵母;单细胞分离;种;!募中图分类号:Q93—331;TS261.1;TS2625文献标识码:B文章编号:1001—9286(2001)04—0031—02 TheBestApproachtoObtainSpeciesSourcesSeparatedfromY east MonoplastInBeefandItsOperationalTechniquesDONGXin—hl(丑li丑IIgh,okew廿Nin如.Zhejlang317600.0dna)A血埘:Weselectedthe2ndandthe3rdgenerationyeastwithpowerfulvi【丑lif:rocatheyeastmudfermentedintanksinwcxklngfield曲theidealspeciesSOlllV.esepafromyeastnn0PIaEtinbeerandthewaystoobtainthemwere拈follows:24hours曲盯deoxidisationofdiaeetyltothreshold valueanddecreaseofitstemperatmeto5~CⅦa5thebesttimeforselectionandBan】e—extractionlocationwasatthenozzleofpressure—di8cl1a】萨却es.Andhi曲一Ia1itybacterialstrainsreselectedbyinitialandrecurrentselectionoftheobtainedbacterialspe cies盯bys/muhntproductional1dconstanttemperuarecultmeidentification.(Tmn.byYUE"fang)Keyw0l出:microbe;beeryeast;separationofm0∞plB;印eciesS0tllR~1前育单细胞分离是人们筛选啤酒酵母的惯用技术手法,且在生产实践中已经显示它的一定价值,这是值得肯定的,但据笔者了解,现时人们对于这一技术操作过程中种源获取问题,所用方法繁多,这些方法的利弊如何?由于这是整个单细胞分离技术大树上分枝"的"分枝",可能未引起人们高度重视.而实质上由于各种方法的内涵不同,其技术效果是大相径庭的.笔者根据个人见解,阐述如下观点,并提出有关技术操作意见,供同行参考,不当之处,诫盼指正.2对现时种谭获取方法的看法对于啤酒酵母单细胞分离种源的获取,现时人们运用的主要途径有:①用冰箱保存的斜面菌苔;②用石蜡保存的斜面苗苔;③用冰箱,石蜡保存的斜面菌苷经斜面固体培养基复壮的苗苔;④用讨箱,石蜡保存斜面菌苔经液体培养基复牡的菌液:⑤用汉生罐或扩培罐繁殖的菌液;⑥用生产现场大罐发酵的发酵液;⑦用生产现场大罐发酵过程中的酵母泥.按笔者实践和见解,这7种种源获取方法,按其排歹顺序,愈后边的盘好,也就是说,最理想的单细胞分离种源应该是用生产现场大罐发酵过程中的酵母泥3选用生产现场太罐发酵中的酵母泥作种源的机理及其优越性的表现从生物进化的机制分析,生物在生存的环境中会因各种环境因素的影响而不断的发生变异,而变异的结果是存优去劣,适者生存,这就是自然选择因而可以说自然选择是推动生物进化的主要因素之一.同时还可以看出,自然选择必须有个前提,那就是环境不同的环境,会使生物个体发生不同的变异,按生物(主体)与环境(客体)有机相结合的原则,生物体会有区别的筛除某些不利的变异,保留另一些有利的变异.结合到单细胞分离啤酒酵母从生产现场大罐发酵过程的酵母泥中获取种源问题,生产现场是人们为酵母生命话动提供的特定环境,这个环境是按人们意怒预设的酵母生话理想场所,因而从这里获取种源,实是较为理想.而笔者根据实践,运用"从生产现场大罐发酵过程的酵母泥中获取种源"的手法.深感更能提高选育出生话力强.生殖力高,适应性好的酵母概率,工作效果亦往往事半功倍.所以笔者认为这样获取种源的途径是最为理想.相比其他种源获取的途径.如直接用斜面或石蜡保存的菌苷,因其较长时问处于"体眠状态.体内酶系活动受抑,其分离出的菌种活力颇弱;而用经复壮处理的斜面或石螬保藏的菌苔或苗收稿日期:2001—01—02作者简介:董新篁(1934-).男,浙江^.太学,工程师,中国微生物学会会员.浙江省微生物学会理事,获省科技进步优秀奖,台州市科技进步二等奖.县科技进步一等奖.发表论文30杂篇,获奖12篇,其中4篇获省优秀论文三等奖.酿薯斟技32"佃of—makinSdence&2001年第4期(总第106期)No.42o01To1.106液虽然其酶系活动已括跃起来,菌种括力亦增强了一些,但困未经受自然环境的熏胸,种性只能近似"温室中的花朵";再说先用汉生罐或扩培罐的发酵液作种源,亦因未受各种环境条件的考验,种性亦只能算是"大寡闺秀".所以单细胞分离啤酒酵母种源的选择应以从"生产现场"中来为佳,而拔头筹者应属于从生产现场太罐发酵过程中的酵母泥.表I为从不同种源分离的啤酒酵母对比试验.4选用生产现场太罐发酵中的酵母泥获取种源的操作方法4I查发酵档案从大罐发酵酵母生育情况来看,2—3代的酵母生命力是最强的.因此首先应确定这是选取的前提,在这个前提下,再应注意查阅生产现场各个发酵罐的前数代和当代酵母生育历史档案,主要项目有:接种后酵母起发速度,主酵期酵母最高浓度,过滤时酵母细胞密度,降糖速度,还原双己酰速度,稳定性,杂苗污染率,发酵周期长短,酒液风味等.当然从获取种源的要求来说,有些项目对当代酵母来说是不需测试的.根据档案材料的显示,选取各项指标最满意的发酵罐作为正式获取种源对象,并进行跟踪观察, 直至到期取种.4.2确定取神时间这是本技术的关键所在,笔者认为获取种源的时间应该选在双己酰还原至阚值后降温至5"C,让其停留24h,这时较为优良的酵母已逐渐下降至罐底,所以在选时取用种源最为适宜.43严格技术.认鼻进行分离4.3.1取样瓶的准备;可用宽口锥形瓶作取样瓶,取样瓶应先塞好棉塞,用高压灭菌法(01MPs,30rain)或高温灭菌法(145~C, 120~Mn)进行灭菌,玲却备用.4.3.2取样操作:在获取种源最适宜的时期进行取样.取样的位置是排压酵母的管口,具体操作方法,先排除部分带有死酵母及杂质,颜色黄白不均的酵母泥,随后排出的酵母泥慢慢变得乳白洁爽起来,这时用清洁的器具蘸少许酵母泥用舌尖品尝,如气味芳香,并兼有"辣麻麻的桶敏感受,此处的酵母泥就是认可的理想酵母,可小心地用取样瓶采取酵母泥,随后迅速塞好已灭菌的棉塞.拿到实验室作分离备用.分离基本上按常规法进行,即以麦汁琼脂为基础培养基.但为了使分离工作能够得到较满意的结果,操作时亦应注意如下几方面事项;①要有较严密的无菌条件,最好能在超净台中进行操作.@分离培养后培养皿中的菌落数最好船控制在30个左右,因为这个数量,能让每个菌落吸收到生长需要的适量营养,使生长良好,因而尉选取带来诸多方便,为了达到这个要求,据实践, 一般用20m]生理盐水,取0.鲥酵母泥稀释成l0或l0倍郎基本可得满意效果.③分离后以25℃条件培育3～4天.待菌落长至直径3mm,就可进行挑选,但在培育过程中,每天都需进行观察,对于生长情况,标以记号,为挑选好菌株奠定基础.④挑选工作一是以肉眼观察.二是用显微镜检查,这两方面一定得结台使用,方能功刊事戚,否则肯定是徒劳无功.肉眼观察酵母菌落形状,在麦汁琼脂培养基上的菌落首先应该具有该啤酒酵母菌落的特征.在此前提下观察其菌落应为圆形.中间凸起,有丰满感.菌落边缘光滑,呈淡黄色或偏向乳白色, 有光泽,呈新鲜感.显微镜检查时,首先亦应看其单细胞是否具有该菌种的特征,譬如细胞形状是圆形,卵圆形或椭圊形,然后观察细胞大小是否均匀,有无杂菌污染,如有杂菌污染,应弃之不用,如杂菌污染严重,应推翻重来.不过出现这种情况的概率很小.镜检满意后,可挑菌株上部分酵母接种于麦汁斜面培养基上,编好号,以备鉴定之用.5种性鉴定菌株的鉴定分初选,复选,终选3个阶段.其选育时的培养方法:初选,复选都是以300ml锥形瓶,盛150ml麦汁培养基进行培养发酵试验,培养温度25℃,终选用2种方法相结合进行,一种方法如同初选复选,另一种方怯模拟生产现场.即用10L的麦汁培养基盛于小型试验发酵罐中,接^菌种,模拟生产现场的温度.使其发酵,即给予8℃起发温度,12℃主发酵温度.待辟糖和还原双zl酰至理想阈值后,再降温至0℃,直至出酒.鉴定的项目,初选,复选取:发酵力,酵母收得量,凝聚性;终选除上述3个项目外,还增加了双己酰峰值和还原速度,酵母稳定性和发酵淮的风味这几方面内容.初选的菌株在30～柏株,复选取l2株,终选取4株,最后从4株中选得一株最为理想的菌株.6小结6.1笔者用上述分离方法取育苗种,实践已达10余年,且选得了NB,DY一9,LIt一3数个菌株,应用于生产实践中,生产啤酒敦十万吨.创经济价值数亿元.因此自我感觉这一方法是经受得住实践考验,具有实用价值.62上述分离选取菌种方法,可用如下示意波程图来表达:l堡壹蔓!些堡董壁卜I皇主墨堑J—l丛生理堑金鱼垂直焦皂童塑一匝叵圈}l保存原种,作下轮出发菌株llI.…如此选用的方法有以下优越性:①可以选育适于本企业特点的菌种(使一个企业使用的菌种一年四季,年复一年始终处于优良状态之下运转.63运用本方法选取菌种,一年从事I一2次即可●。
酿酒酵母的分离纯化 - 副本
分离接种 • 用接种针挑取适量酿酒酵母斜面培养物于三角瓶摇匀打散， 用盛无菌生理盐水的大试管逐级稀释，血清计数，稀释至 每毫升稀释菌液中含250~300个菌为止（计数板每中格约 50~80个菌），取最终稀释液各0.1ml涂布在麦芽汁琼脂培 养基平板上，置于30℃培养12h~24h。
酿酒酵母菌的筛选 • 初筛：对麦芽汁培养48h的酵母菌株， 以16×40倍的显微 镜镜检，筛选出以多端出芽繁殖的菌株。 • 复筛：将镜检筛选出来的菌株，接种麦芽汁液体培养基， 活化24h后接种到WL琼脂培养基，27℃培养5d后观察， 选出菌落颜色为奶油色（浅黄色）至绿色，球形突起的表 面光滑、不透明、奶油状的菌株。 赖氨酸培养基鉴定： 酿酒酵母不能采用赖氨酸作为酵母氮源，因而在赖氨酸培 养基上不能生长。将经过初筛和复筛的菌株，接种到麦芽 汁液体培养基活化24h后，按照1%接种量接种酵母菌到 5mL无菌水中进行饥饿处理，7d后接种到赖氨酸培养基， 27℃培养5d后观察是否有酵母生长，培养48h后没有菌落 出现的继续培养，直到15d后仍无菌落生长说明是酿酒酵 母
酵母的筛选 • 酵母菌在长期的白酒发酵生产过程中因不断的生长繁殖， 将产生一定量的自发突变，一旦“耐酸突变”发生，耐酸 突变个体因“自然选择与适应”，将出现并存活于窖底泥、 黄浆水等低pH值环境中；因此，采用酸度呈梯度差异的 选择培养基，利用微生物学、遗传学等的相关原理与技术 方法，通过菌种的分离、纯化、扩培以及筛选、鉴定等相 关试验，以pH值呈梯度差异的培养基为选择条件，进行 了酵母菌的筛选。
酿酒酵母的分离纯化
酵母的背景 酵母菌是发酵工业中重要的一类微生物，不但应用于 面包、酒精等的发酵，而且近年来应用于石油发酵脱脂棉 及糖化饲料发酵，还可以从酵母菌体中提取医药、食品和 化工等方面的重要产物。 • 酵母菌是分属于子囊菌纲、担子菌纲、半知菌类的单 细胞真菌微生物。多分布于高糖的偏酸环境，最适生长温 度25℃~30℃， 兼性厌氧。酵母菌在通气充分时，进行好 氧呼吸，生长代谢快，繁殖旺盛。厌气条件下，进行厌氧 呼吸，通过相关代谢途径进行乙醇发酵，产生乙醇。 •
酵母菌分离筛选方法要点
酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO42.5g/LNa2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用）★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃ 20min（分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/LKH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★1.5 豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g 黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
酿酒酵母分离纯化实验报告
酿酒酵母分离纯化实验报告
酿酒酵母分离纯化实验报告：本实验中使用了四个不同的抑制剂，乙酸、乙酰乙酸乙酯、低浓度苯酚和醋酸，对原始水抽出的酿酒酵母进行了分离纯化。
根据实验数据，发现乙酸和乙酰乙酸乙酯有助于抑制非酿酒酵母菌株和其他微生物菌群增长，可以有效分离酿酒酵母。
低浓度苯酚可以使非酿酒酵母菌群的增长速率大幅下降，而醋酸可以减少正常葡萄酒的发酵速率。
总的来说，本实验表明，通过使用四种不同的抑制剂，可以有效地分离和纯化酿酒酵母，从而提高酿酒质量。
酿酒酵母分离纯化的实验设计
《酿酒酵母的分离纯化》实验设计一、实验目的1、学习并掌握酿酒酵母的分离纯化技术；2、复习血清记数法和培养基的配制操作；3、巩固显微镜的使用。
二、基本原理酵母菌是一类单细胞真菌，一般成圆形，椭圆形和圆柱形。
无性繁殖以芽殖为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生子囊孢子，有的酵母菌能形成假菌丝。
酵母菌的菌落近似细菌的菌落。
但较大且厚，多呈白色。
酵母菌在液体中生长可形成菌膜，菌环，沉淀和混浊，酵母菌的细胞结构较完整即有壁、膜、质、核等结构。
酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。
分离纯化即从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。
平板分离的方法主要有平板划线分离法和稀释涂布平板法，后者除能有效分离纯化微生物外，还可以用于测定样品中活菌数量。
另外还有混菌法分离。
平板菌落记数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中的细胞密度。
由于待测杨平往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是耽搁细胞生长繁殖而成，有的可能来自2个或多个细胞。
因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。
显微计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定的容积的载玻片上，于显微镜下直接观察、计数的方法。
本实验用血细胞计数板进行计数。
血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台。
中间较宽的平台又被一横槽隔成两半，每边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。
每一个大方格都有400个小方格。
每一个大方格边长1mm，则每一个大方格的面积1mm2,盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度0.1mm,所以计数室的容积为0.1mm3。
计数时，通常数5个中格的总菌数，然后求得每个中格的平均值，再根据下式计算：1mL菌液中的总菌数=A/5*25*104*B(A为5个中格的总菌数，B为菌液稀释倍数)三、实验准备仪器：无菌试管（根据稀释倍数暂定大试管7个、用作斜面的小试管3个）、无菌培养皿6个、无菌涂布器3个、无菌移液管1ml的7个，接种环、带玻珠的无菌三角瓶、酒精灯、血细胞计数板、盖玻片、显微镜。
酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离与纯化土壤是微生物生活的大本营，是寻早有重要应用潜力的微生物的主要菌源。
不同图样中各类微生物的含量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。
放线菌一般在较干燥、偏碱性、有机质较多的土壤中较多；霉菌在含有机质丰富、偏酸性、通气性较好的土壤中较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在酒曲、面肥、水果表皮、果园土壤中数量多些。
（一）菌源1土样用无菌的采样小铲在橘树果园中取土壤表层下1~10cm土壤10g，装入灭菌的牛皮纸袋内。
封好袋口，记录取样地点、环境及日期。
图样采集后应及时分离，饭不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥的条件下，以减少其中菌相的变化。
2面肥（1）面粉500克，白酒100克，水250，和好静置发酵就可以了。
冬季10个小时。
（2）在温水中兑一点酒，倒入适量面粉拌匀后放入绝缘保温盛器（陶瓷，砂锅）中，用布将整个盛器盖好置于温度较高处，6小时后即成面肥。
*以上方法做出的面肥只能保存几天，不宜放置太久。
3水果果皮桔子和葡萄等的果皮上含有数量较多的酵母菌，既可单独作为菌源也可以和果园土壤作为混合菌源。
（二）酵母菌的分离1制备菌悬液称取菌源1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。
振荡20min，即成10-2的菌源悬液。
再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。
2涂布法分离取融化并冷却至45~50度左右的豆芽汁葡萄糖培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。
注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。
呆平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的豆芽汁葡萄糖培养基平板上。
每个稀释度做2~3个平行皿。
左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
啤酒酵母纯种分离
一、实验目的：
学习酵母菌种的纯种分离技术
二、实验原理：
关于纯种分离，在基础微生物学实验中已学过稀释分离法和划线分离法，这里不再重复。
这两种方法虽然简单，但并不能保证分离所得种的纯度。
而单细胞分离法因可用显微镜直接检查，其纯度能得到充分保证。
林德奈单细胞分离法，即小滴培养法，是将酵母菌液充分稀释至每一小滴差不多含一个酵母细胞，然后在显微镜下确证只含一个细胞的小滴，经适当培养后，扩大保存。
三、实验器材与试剂：
显微镜，凹载玻片，计数板，盖玻片等。
四、实验步骤：
1. 取2块盖玻片，用分析天平称重（精确至0.1mg）后，在一块盖玻片（最好用血球计数板的盖玻片）上用毛细滴管滴上9滴酵母培养基，合上另一玻片，再称重，计算每滴培养基的体积。
2. 用计数板计数酵母菌，用培养基对其进行高倍稀释，稀释至每滴培养基中大致含一个酵母菌。
3. 在已灭菌的盖玻片上滴上酵母稀释液（每张玻片可滴9滴），放于已灭菌的凹载玻片上，显微镜下观察，找到只含一个酵母菌的小滴，做上记号。
4. 30℃培养一定时间后（应放于湿室中），用无菌滤纸片吸走标记的酵母菌，进行扩大培养和菌种保藏。
五、注意事项：因小滴易干，操作时动作要快，培养时要用湿室。