谷氨酸受体拮抗剂MK801对肢体_省略_脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的影响_周洪霞

中国临床康复第１０卷第２８期２００６－０７－２５出版ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ，Ｊｕｌｙ２５２００６Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．２８谷氨酸受体拮抗剂ＭＫ８０１对肢体缺血再灌注致脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的影响★周洪霞１，王海涛１，朱丽华２，司道文１，田清友１，张连元１，张宇新１・基础研究・１华北煤炭医学院基础医学部，河北省唐山市０６３０００；２华北煤炭医学院生物医学系，河北省唐山市０６３０００周洪霞★，女，１９７０年生，河北省滦南县人，汉族，２００５年华北煤炭医学院毕业，硕士，主要从事脑损伤研究。

中图分类号：Ｒ５４２．２文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－５９２６（２００６）２８－０１０２－０３收稿日期：２００５－１２－２７修回日期：２００６－０２－０８（０５－５０－１２－１０２３４／Ｍ・Ｑ）ＥｆｆｅｃｔｏｆｇｌｕｔａｃｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔＭＫ８０１ｏｎｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｌｅｖｅｌｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙｄｕｅｔｏｌｉｍｂｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎＺｈｏｕＨｏｎｇ－ｘｉａ１，ＷａｎｇＨａｉ－ｔａｏ１，ＺｈｕＬｉ－ｈｕａ２，ＳｉＤａｏ－ｗｅｎ１，ＴｉａｎＱｉｎｇ－ｙｏｕ１，ＺｈａｎｇＬｉａｎ－ｙｕａｎ１，ＺｈａｎｇＹｕ－ｘｉｎ１１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈＣｈｉｎａＣｏａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｔａｎｇｓｈａｎ０６３０００，ＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＺｈｏｕＨｏｎｇ－ｘｉａ★，Ｍａｓｔｅｒ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮｏｒｔｈＣｈｉｎａＣｏａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｔａｎｇｓｈａｎ０６３０００，ＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＲｅｃｅｉｖｅｄ：２００５－１２－２７Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２００６－０２－０８ＡｂｓｔｒａｃｔＡＩＭ：Ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙａｆｔｅｒｌｉｍｂｓｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（ＬＩＲ），ａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＮＯｉｎｉｎｊｕｒｙａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＭＫ８０１ｏｎＮＯ．ＭＥＴＨＯＤＳ：ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄａｔｔｈｅＳｔａｆｆＲｏｏｍｏｆＡｎａｔｏｍｙａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＮｏｒｔｈＣｈｉｎａＣｏａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅＢｅｔｗｅｅｎＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２００３ａｎｄＤｅｃｅｍｂｅｒ２００４．①Ｔｏｔａｌｌｙ４０Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆｉｖｅｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈ８ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ：ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ４－ｈｏｕｒｇｒｏｕｐ（ｉｓｃｈｅｍｉａｆｏｒ４ｈｏｕｒｓａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｒ４ｈｏｕｒｓ），ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ１２－ｈｏｕｒｇｒｏｕｐ（ｉｓｃｈｅｍｉａｆｏｒ４ｈｏｕｒｓａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｒ１２ｈｏｕｒｓ），ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ２４－ｈｏｕｒｇｒｏｕｐ（ｉｓｃｈｅｍｉａｆｏｒ４ｈｏｕｒｓａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓ），ａｎｄＭＫ８０１ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｇｒｏｕｐ（ｉｓｃｈｅｍｉａｆｏｒ４ｈｏｕｒｓａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓ＋ＭＫ８０１）．②ＬＩＲｍｏｄｅｌｓｏｆｒａｔｓｗｅｒｅｄｕｐｌｉｃａｔｅｄ．ＦｉｖｅｍｉｎｕｔｅｓｂｅｆｏｒｅｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｔｈｅｒａｔｓｉｎｔｈｅＭＫ８０１ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＭＫ８０１（０．５ｍｇ／ｋｇ）ｂｙｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙ．③ＣｏｎｔｅｎｔｓｏｆＮＯａｎｄｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ｉｎｔｈｅｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｏｆｒａｔｓｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｈａｎｇｅｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ）ｏｆｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉＮＯＳｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｔｏｔａｌｌｙ４０ｒａｔｓｗｅｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔａｎａｌｙｓｉｓ．①ＣｏｍｐａｒｅｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＭＫ８０１ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｇｒｏｕｐａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ２４－ｈｏｕｒｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭＤＡｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙ４５．８％，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＮＯｒｅｄｕｃｅｄｂｙ１２．８％．②ＴｈｅｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉＮＯＳｏｆｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｏｆｒａｔｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｇｒａｄｕａｌｌｙｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｌｏｎｇａｔｉｏｎｏｆｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄｕｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｐｅａｋａｔｔｈｅ２４ｔｈｈｏｕｒ．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｓｉｎｇｌｅｍａｉｎｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄａｔｎｅｕｒｏｎｓｏｆｈｉｐｐｏｃａｍｐｉａｎｄｒｅｄｎｕｃｌｅｕｓｏｆｍｉｄｂｒａｉｎ．Ｔｈｅｒｅｗａｓｓｌｉｇｈｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉＮＯＳａｆｔｅｒｔｈｅｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｗｉｔｈＭＫ８０１ｒｅｄｕｃｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙbＭｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｉｎｊｕｒｉｅｓｏｆｅｄｅｍａａｎｄｎｅｕｒｏｎｓｏｆｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｒｅｌｉｅｖｅｄ，ｗｈｉｃｈｗａｓｔｈｅｓａｍｅｔｏｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：ＭＫ８０１ｄｅｃｒｅａｓｅｓｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＮＯａｎｄＭＤＡ，ｄｅｃｒｅａｓｅｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｉＮＯＳ．ＩｔｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＭＫ８０１ｍａｙａｌｌｅｖｉａｔｅｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙｆｏｌｌｏｗｉｎｇＬＩＲ，ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＮＯａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉＮＯＳｆｏｌｌｏｗｉｎｇＬＩＲ．ＺｈｏｕＨＸ，ＷａｎｇＨＴ，ＺｈｕＬＨ，ＳｉＤＷ，ＴｉａｎＱＹ，ＺｈａｎｇＬＹ，ＺｈａｎｇＹＸ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｇｌｕｔａｃｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔＭＫ８０１ｏｎｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｌｅｖｅｌｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙｄｕｅｔｏｌｉｍｂｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．ＺｈｏｎｇｇｕｏＬｉｎｃｈｕａｎｇＫａｎｇｆｕ２００６N１０（２８）：１０２－４（Ｃｈｉｎａ）周洪霞，王海涛，朱丽华，司道文，田清友，张连元，张宇新．谷氨酸受体拮抗剂ＭＫ８０１对肢体缺血再灌注致脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的影响［Ｊ］．中国临床康复，２００６，１０（２８）：１０２－４［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ］摘要目的：观察肢体缺血再灌注所致脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的变化，分析一氧化氮在损伤中的作用及ＭＫ８０１对其的影响。

方法：实验于２００３－０９／２００４－１２在华北煤炭医学院解剖教研室和实验中心完成。

①４０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成５组，每组８只：对照组、再灌４ｈ组（缺血４ｈ再灌４ｈ）、再灌１２ｈ组（缺血４ｈ再灌１２ｈ）、再灌２４ｈ组（缺血４ｈ再灌２４ｈ），ＭＫ８０１干预组（缺血４ｈ再灌２４ｈ＋ＭＫ８０１）。

②复制大鼠肢体缺血再灌损伤模型，ＭＫ８０１干预组在再灌注前５ｍｉｎ立刻皮下注射ＭＫ８０１（０．５ｍｇ／ｋｇ）。

③分别测定各组大鼠脑组织中一氧化氮、丙二醛含量、免疫组化观察各组脑组织诱导型一氧化氮合酶表达变化、并用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达。

结果：４０只大鼠均进入结果分析。

①ＭＫ８０１干预组与再灌２４ｈ组比较，丙二醛含量降低了４５．８％，一氧化氮含量降低了１２．８％。

②免疫组化结果显示随再灌时间的延长，大鼠脑组织诱导型一氧化氮合酶表达呈逐渐上升趋势，再灌２４ｈ达高峰。

阳性信号主要分布海马区，中脑红核区等部位的神经元细胞，对照组仅见少量表达，而ＭＫ８０１干预后诱导型一氧化氮合酶表达明显降低，同时减轻脑组织水肿及神经元受损。

与Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达结果一致。

结论：ＭＫ８０１减少脑组织一氧化氮、丙二醛含量，降低诱导型一氧化氮合酶表达，说明ＭＫ８０１可减轻肢体缺血再灌注所致脑损伤，可能与一氧化氮含量及诱导型一氧化氮合酶表达在肢体缺血再灌注所致脑损伤中降低有关。

主题词：后肢；再灌注损伤；脑损伤；一氧化氮；丙二醛；一氧化氮合酶０引言肢体缺血再灌注可引发脑损伤，且诱导型一氧化氮合酶—一氧化氮参与脑损伤过程［１］，但其确切机制还未完全阐明。

以往研究表明，在脑缺血再灌注后期，诱导型一氧化氮合酶介导的一氧化氮延迟性增高，过量一氧化氮可增加自由基生成，Ｃａ２＋内流，加重脑损伤。

同时一氧化氮参与谷氨酸的神经毒性作用，给予谷氨酸受体拮抗剂ＭＫ８０１可减小由脑缺血兴奋氨基酸毒性作用引起的梗死体积。

一氧化氮及ＭＫ８０１在肢体缺血再灌注引发脑损伤中是否发挥作用及关系如何需要进一步实验证明。

因此，深入探讨肢体缺血再灌注后ＭＫ８０１的神经保护机制与一氧化氮关系具有重要的临床意义。

本实验在大鼠肢体缺血再灌注损伤模型基础上，观察ＭＫ８０１对一氧化氮的影响，进一步探讨ＭＫ８０１对肢体缺血再灌注后脑损伤的保护作用。

１材料和方法设计：随机对照动物实验。

单位：华北煤炭医学院基础医学部和生物医学系。

材料：实验于２００３－０９／２００４－１２在华北煤炭医学院解剖教研室和实验中心完成。

实验动物：清洁级健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只，鼠龄３个月，体质量２００～２５０ｇ，由华北煤炭医学院实验１０２动物中心提供（许可证号ＳＹＸＫ（冀）２００５－００３８），常规饲养。

随机将大鼠分为５组，每组８只：①对照组。

②再灌４ｈ组。

③再灌１２ｈ组。