2沙眼衣原体感染实验室诊断20160613

沙眼衣原体感染的实验室诊断
河北省疾病预防控制中心
性病艾滋病防治所
赵翠英
性传播疾病(STD)/性传播感染(STI)
病 种
病原体
淋球菌 梅毒螺旋体 生殖器疱疹病毒 生殖道沙眼衣原体 乳头瘤病毒 HIV病毒 杜克雷噬血杆菌 衣原体 念珠菌 滴虫 疥虫 阴虱 肝炎病毒 －－－ 淋病 梅毒: 生殖器疱疹: 生殖道沙眼衣原体感染: 尖锐湿疣: HIV感染/艾滋病: 软下疳: 性病性淋巴肉芽肿: 念珠菌性阴道炎: 滴虫性阴道病: 疥疮: 阴虱病: 肝炎（乙、丙）：
沙眼衣原体: 30%～50% 生殖支原体: 10%～40% 其它: 20%～30%
HIV/AIDS
2007年卫生部《全国性病监测 方案》要求
监测性病5种：TP，NG，CT, HSV, HPV 沙眼衣原体作为独立病种报病
沙眼衣原体感染后：
约70％女性和50％男性为无症状
86％的女性和55％的男性感染者持续感染 时间为1年以上。 不寻求治疗…….
抗原检测 免疫胶体金快速法检测临床应用
敏感性：较低 特异性: 高 缺点：需要确证，不宜质控操作 临床应用：临床症状典型病例的检测 不适合非典型感染的筛查
抗原检测 沙眼衣原体酶免疫法检测临床应用
敏感性：较高 特异性: 高 缺点：需要确证，批量操作 临床应用：临床和健康体检 沙眼衣原体感染的筛查
三、核酸扩增试验（NAAT）
小结
绝大多数感染无症状，每年10%比例增加 实验室诊断是临床诊断的唯一标准 合理选择实验室方法，合理解释结果
谢谢！
Байду номын сангаас逆行感染：
1.女性：盆腔炎、输卵管炎、不孕、流产和死胎等 2. 男性：附睾炎、前列腺炎和不育 3. 新生儿：结膜炎、肺炎及Reiter综合征（反应性 关节炎）
近年来研究：
引起活动性关节炎，与动脉硬化、冠心病 有关；细胞内生长导致与HIV感染的促进 作用
沙眼衣原体感染已成为全世界范围 的公共卫生问题!
敏感性：高（90%-97%） 特异性: 高（99%-100%） 缺点：实验室条件和技术要求高，成本 高，费时，假阳性，抑制物 临床应用：临床和健康体检沙眼衣原体 感染的筛查。可用于宫颈、尿道标本以 及尿液和阴道标本。
四、细胞培养法：
原理：衣原体在瘤细胞生长，染色检测 方法：制备McCoy细胞 接种标本（2500转，1h） 去上清加新培养液（培养48－72） 检测（碘或姬姆萨染色，荧光法）
确诊病例：符合1+2+3或2+3者， 无症状感染病例：符合3且没有临床症状者。
沙眼衣原体生物学特性
衣原体属微生物 具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA 具有合成蛋白质、核酸和脂类的能力 不能产生三磷酸腺苷（ATP），完全依靠 宿主细胞提供必须的能量
沙眼衣原体病原学
具有原体和始体二个发育型
原体有传染性。原体一旦进入细胞内，就发育
实验室检测是控制传播的最有 效手段
一级预防：倡导性行为的改变（推迟首次 性交年龄，减少性伴，使用安全套等） 二级预防：检测与治疗（性病患者及性伴 ；孕妇新生儿；普通人群无症状感染传播 三级预防：检测与治疗并发症
沙眼衣原体感染病例定义
《全国性病监测方案》,2007
流行病学史：有不安全性行为，或性伴感染史 临床表现;男性尿道炎、附睾炎等，女性宫颈 炎、盆腔炎 实验室检查：CT抗原或核酸或培养阳性
核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的 多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和 RNA）检测病原体。 方法包括：聚合酶链反应（PCR）
连接酶链反应（LCR） 等温链置换扩增技术（SDA） 转录介导扩增技术（TMA） 核酸序列扩增技术（NASBA） 实时荧光PCR技术（目前采用较多的方法）
NAAT法临床应用
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我国主要流行的性传播疾病（性病）
50-60年代 经典性病 梅毒 淋病 软下疳 性病性淋巴肉芽肿 80-90年代 监测性病 梅毒 淋病 软下疳 性病性淋巴肉芽肿 非淋菌性尿道炎 生殖器疱疹 尖锐湿疣 HIV/AIDS
目 前 传染法报告病例 监测性病
梅毒 淋病
梅毒 淋病 沙眼衣原体感染
生殖器疱疹 尖锐湿疣
二、沙眼衣原体抗原检测 试剂盒-艾博
检测方法
使用前将试剂、裂解液和样本恢复到室温（ 15-30℃）。 1 将试剂放置在干净的水平台面上； 2 在裂解管中竖直滴入无色的裂解液A 5滴， 立即放入棉签样本（宫颈拭子），用手指挤压 裂解管中的棉签头，并转动棉签15次，静置2 分钟；
检测方法
3 在同一裂解管中竖直滴入裂解液B 6滴，混 合液可能产生沉淀为正常现象。用手指挤压裂 解管中的棉签头，并转动棉签15次，此时溶液 呈淡蓝色。静置1分钟； 4 挤干裂解管中的棉签头，弃去棉签，盖上并 旋紧裂解管滴头； 5 在试剂的加样孔中滴入3滴裂解后溶液； 6 10～20分钟判读结果，20分钟后判读无效。
(7).质控：取试剂2加5滴於塑料管,再加试 剂1至刻度,以下操作同4-5, 结果应在质 控窗和结果窗均显示一条兰带。
3.注意事项
(1).本试剂盒仅可作为泌尿生殖道衣原 体感染的检测。 (2) 本试剂检测的是衣原体抗原，因而 不能区别是衣原体的感染还是携带者。 不能区别衣原体的死活，不能作为判愈 试验。 (3) 本试验的敏感性为 87% ，特异性为 98.8%。
检验结果的解释
1 阳性（+）：出现两条红色条带，位于检测 区（T）和质控区（C）。 阳性结果表明：样本中含有衣原体抗原。 2 阴性（-）：仅在质控区（C）出现一条红色 条带，在检测区（T）无红色条带出现。阴性 结果表明：样本中检测不出衣原体抗原，或是 含量低于可检测范围。
检验结果的解释
3 无效：在质控区（C）未出现红色条带，表 明不正确的操作过程或试剂已变质损坏。 4 注意：检测区（T）内的红色条带可显现出 不同深浅的颜色。但是，在规定的观察时间内 ，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色 带也该判为阳性结果
物理和化学因素对沙眼衣原体的影响
温度 衣原体对热敏感，其传染性在60℃ 10分钟完全丧失 化学制剂 衣原体很容易被乙醚、福尔马林、 酚等化学制剂灭活
发病机理
衣原体感染人体后， →柱状上皮→单核巨噬细胞→繁殖→细胞 死亡， 细胞内增值可逃避宿主免疫防御功能， 得到间歇性保护。 衣原体的致病机理是抑制被感染细胞代 谢，溶解破坏细胞并导致溶解酶释放， 代谢产物的细胞毒作用，引起变态反应 和自身免疫。
细胞培养法检测临床应用
敏感性：较低 特异性: 极高 缺点：实验室条件和实验技术要求高， 费时，敏感性低 临床应用：“金标准”方法 方法学评价 沙眼衣原体感染的确证 沙眼衣原体感染的科研
沙眼衣原体检测方法的选择：
临床典型沙眼衣原体感染，快速法 70％女性/50%男性无症状，ELISA或核酸 检测 可疑病例确证：DFA，核酸检测，培养法 复发性感染：再感染：同上 持续性感染：基因检测分型
(3).如标本中含有衣原体LPS抗原,可与上述标 记的单抗结合, 结合物可通过毛细管作用移动 到结果窗,并可被该处所含有的未标记的鼠抗 衣原体LPS单抗所捕捉 ,阳性时在结果窗中形 成一条可见的兰色带, 过剩的未结合的带色乳 胶标记的鼠抗衣原体LPS单抗可移动到质控窗, 与该处的兔抗鼠抗体相结合,显现一条兰色带。
“立明”衣原体抗原免疫快速法试验 1.原理
该实验是检测寄生於尿道或宫颈柱状上 皮细胞内的沙眼衣原体抗原的快速免疫 方法。
(1). 标本加提取缓冲液经 80℃水浴加热 , 使衣原 体脂多糖(LPS)抗原释放。 (2).加标本提取液到含有带色乳胶标记的鼠抗衣 原体LPS单克隆抗体的测试卡检体窗中,作用15 分钟。
(5).将测试卡平置台面上,逐滴加入5滴提取液于 检体窗,静置15 分钟后观察结果。 (6).结果 质控窗:显示一条兰带,表明卡片质量可靠,如30 分钟内无兰带显示,应另取测试卡进行试验。 结果窗：阳性时显示一条深浅不同的兰带 ,强阳 性者可在 15 分钟内出现 , 一般一小时后作出报 告。 质控窗和结果窗的兰带深浅可能不同，不影响 结果的解释。
沙眼衣原体的检测
常用实验室方法 标本涂片染色直接镜检 抗原检测试验,包括衣原体抗原免疫快速 法、直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验 核酸检测，多采用实时荧光PCR法 细胞培养法
一、直接涂片法（姬姆萨染色） ：方法：涂片－姬姆萨染色－镜检包涵体
沙眼衣原体包涵体姬姆萨染色 临床应用：
眼部感染：敏感性95％， 男性尿道：敏感性15％， 宫颈感染：敏感性41％。 应用范围：眼部标本。
为始体
始体具有新陈代谢活性，行二分裂增殖，生长 成具有传染性的原体，然后释放出来去感染邻 近的细胞 从感染细胞到释放出原体大约需要35-48小时
沙眼衣原体病原学
严格细胞内寄生 生活特性：原体和始体
正常生活周期
持续性感染
沙眼衣原体血清分型和致病性
沙眼衣原体有15个血清型, A, B, Ba, C,D-K, L1, L2, L3 － A，B，Ba和C型最常引起沙眼 － D-K型主要感染泌尿生殖道 － L1,L2,L3型引起性病性淋巴肉芽肿
2.检测方法
(1).先将试剂、测试卡、塑料管置室温30分钟复 温。 (2).预备80℃±2℃水浴。 (3).加试剂1至塑料管刻度(约0.6ml)。 (4). 将 拭 子 标 本 浸 入 管 内 混 匀 , 置 水 浴 80℃±2℃,10-12分钟提取 LPS抗原 ,取出后 ,转 动拭子并沿管壁挤压 , 弃去拭子。提取液置室 温冷却后盖回管塞(此液置室温3小时内不影响 结果)。