挥发性盐基氮(VBN)测定方法
实验二挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定
一、实验原理 挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶与细菌的作用，在腐败过程中使蛋白质
分解而产生碱性含氮物质，如伯胺、仲胺及叔胺等，此类物质具有挥发性，可以 在 37℃碱性条件下以氨的形式释放，挥发后吸收于吸收液中，再用酸滴定以定 量，所得结果为挥发性盐基氮。 二、仪器与试剂 1、恒温箱、电子天平、扩散皿、微量滴定管、三角瓶（250ml）、量筒（100ml）、 漏斗、玻璃棒以及移液管。 2、饱和碳酸钾溶液：称取 50g 碳酸钾家 50ml 去离子水，微热助溶，取上清液。 3、2％硼酸液：称取 20g 硼酸溶解在少量蒸馏水中，再稀释至 1000ml。 4、水溶性胶：称取 10g 阿拉伯胶，加 10ml 水，再加 5ml 甘油与 5g 无水碳酸钠， 研匀。 5、混合指示液：0.2％甲基红乙醇溶液与 0.1％次甲基蓝溶液，临用时等量混合。 6、0.0100mol／L 盐酸标准溶液 7、干燥滤纸 8、市售带鱼 三、操作步骤 1、将样品除去头、内脏、鱼皮及骨头后，切碎搅匀，称取 10g 置于锥形瓶中， 加 100ml 水，不时振摇，浸渍 30min 后过滤，滤液备用。 2、将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿中央内室加入 1ml 吸收液与 1 滴混合指 示液，在皿外室一侧加入 1.00ml 样液，另一侧加入 1ml 的饱和碳酸钾溶液，实 验使两液分离而不接触，立即盖好，密封后将皿置于桌面轻轻转动，使样液与碱 液混合，然后于 37℃温箱内放置 2h，揭去盖，用盐酸标液滴定溶液进行滴定， 以溶液变蓝紫为终点。同时进行空白实验。 四、实验记录与结果计算 1、计算公式： X (m g/ g) (V1 V2 )CM 100100
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定GB/T5009.44-2003一、适用范围本检测方法适用于动物性食品，肉、水产品等二、原理挥发性盐基氮(VBN)是指动物性食品在腐败过程中，由于细菌的作用，使蛋白质分解后产生的氨、伯胺、仲胺及叔胺等碱性含氮物质，且均有挥发性。
挥发性盐基氮在弱碱性条件下分解与水蒸气一起蒸馏出来形成NH3，便可使以上挥发性的碱性含氮物溢出，然后用硼酸吸收，用标准盐酸滴定便可计算出挥发性盐基氮的含量。
1、NH4+OH→NH3↑+H2O2、4H3BO3+ NH3→NH4HB4O7+5H2O3、NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4C1+4H3BO1．实验用试剂2．实验用设备试验内容精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%附录2：盐酸标准溶液的配制与标定参考标准：GB/T601-20021.盐酸标准溶液的配制按下表的规定量取盐酸，注人1000m L 水中，摇匀。
2.盐酸标准溶液的标定按下表的规定称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50ml 水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min ，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
同时做空白试验。
3.计算盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCI)].数值以摩尔每升(mol/L 表示，按式(2)计算：MV V m HCl C ⨯-⨯=)21(1000)( m- 无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g); V1 -盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(ml);V: -空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL)M- 无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/mol)注意事项：1.灼烧温度不能超过300度，当温度超过300度时无水碳酸钠分解，可将马福炉的温度调至250，等升温稳定后再调至280，或者将马福炉事先升温至280度，待稳定后再放入无水碳酸钠2.无水碳酸钠的称量质量小于0.2g时要用十万分子之一天平称量。
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定挥发性盐基氮20.3.1 原理皮蛋中蛋白质分解后产生碱性含氮物质，如氨、伯胺、仲胺等。
此类物质具有挥发性，在弱碱性溶液中加热蒸馏可随水蒸气蒸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，可以计算出100g皮蛋中含氮的质量(mg)。
20.3.2 试剂20.3.2.1 氧化镁混悬液(10g/L)：将氧化镁经800～900℃灼烧3h，冷至200℃以下，置干燥器冷却后。
称取1g，用100mL水混匀(临用新配)。
20.3.2.2 三氯乙酸溶液(200g/L)。
取三氯乙酸20g加水溶解并稀释至100mL。
20.3.2.3 硼酸吸收液：100mL硼酸溶液(20g/L)，加1mL混合指示液，混匀。
20.3.2.4 甲基红－溴甲酚绿混合指示液：同20.2.2.1。
20.3.2.5 盐酸标准滴定溶液(0.01mol/L)。
20.3.3 分析步骤称取15.00g(将5个皮蛋洗净、去壳。
按皮蛋：水为2∶1的比例加入水，在组织捣碎机中捣成匀浆)。
皮蛋匀浆(相当于10.00g样品)，置于烧杯中，用50mL水将样品分次洗入100mL具塞量筒中，加10mL三氯乙酸(200g/L)，加水至100mL，充分振摇，待蛋白质沉淀后过滤，滤液备用。
收取10.0mL硼酸吸收液，置于50mL锥形瓶中，将半微量定氮器冷凝管下端插入吸收液液面下。
吸取上述滤液2.00mL，加入定氮器反应室中，并以少量水冲洗，立即加入5mL氧化镁混悬液(10g/L)，迅速盖塞，并加水以防漏气，夹紧废液排出口橡皮管，蒸馏5min，移动吸收瓶使冷凝管下端离开液面，继续蒸馏1min，取下吸收瓶，用盐酸标准滴定溶液(0.01moL/L)滴定至灰紫色为终点，同时做试剂空白试验。
为防止蒸馏过程中泡沫过多，可加0.5～1mL异戊醇。
20.3.4 计算式中：X8——样品中挥发盐基氮的含量，mg/100g；V8——测定用样品滴定消耗盐酸标准滴定溶液体积，mL；V9——试剂空白滴定消耗盐酸标准滴定溶液体积，mL；c5——盐酸标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；14——与1.0mL盐酸标准滴定溶液［c(HCl)＝1.000mol/L］相当的氮的质量，mg；m11——样品质量，g。
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定：半微量定氮法（参照GB/T5009.44-2003）原理：TVBN 指动物性食品由于酶和细菌的作用，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。
试剂：1、 氧化镁混悬液（10g/L ）：称取10.0g 氧化镁，加1000mL 水，振摇成混悬液2、 硼酸吸收液（20g/L ）：称取10.0g 硼酸，加500mL 水3、 盐酸（0.01mol/L ）的标准滴定溶液4、 溴甲酚绿-甲基红指示液：溶液I ：溴甲酚绿-乙醇指示剂（1g/L ）：称取0.1g 溴甲酚绿，溶于乙醇（95%），用乙醇（95%）稀释至100 mL溶液II ：甲基红-乙醇指示剂（2g/L ）：称取0.1g 甲基红，溶于乙醇（95%），用乙醉（95%）稀释至100 ml取50mL 溶液I ，10mL 溶液II ，混匀5、蒸馏水仪器：半微量定氮仪绞肉机、摇床消化管、移液管、锥形瓶、烧杯、酸式滴定管等定性滤纸、保鲜膜等分析步骤：1、 试样处理：将试样除去脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀。
称取约10.0g 于锥形瓶中，加100mL蒸馏水，使用保鲜膜将锥形瓶瓶口封住，置于摇床上振摇30min 后过滤，取滤液备用。
2、 蒸馏：将盛有10mL 吸收液及5-6滴混合指示剂的锥形瓶置于冷凝管下端并使其下端浸没入吸收液的液面下；依次准确吸取5.0mL 氧化镁混悬液和5.0mL 上述式样滤液于消化管中，迅速置于通入蒸汽进行蒸馏，计时3min 取下锥形瓶，使冷凝管下端离开吸收液液面，再计时30s ，使用蒸馏水稍清洗冷凝管下端。
3、 滴定：吸收液用盐酸标准滴定溶液滴定，观察指示剂变色情况，记录盐酸体积4、 试剂空白试验。
注意要求先做空白试验。
5、 参考标准：一级鲜度≤15mgmg/100g ，二级鲜度≤20mgmg/100g ，变质肉＞20mgmg/100g 结果计算与分析：试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算：12V -V c X=100m 5/100⨯⨯⨯⨯（）14 式中：X ：试样中挥发性盐基氮的含量，单位为mg/100gV1：测定用样液消耗盐酸标准溶液体积，单位为mLV2：试剂空白消耗盐酸标准溶液体积，单位为mLc ：盐酸标准溶液的实际浓度，单位为mol/L14：与1.00mL 盐酸标准滴定溶液（c （HCl ）=1.000mol/L ）相当的氮的质量，单位为mg m ：试样质量，单位为g计算结果保留三位有效数字。
海能仪器：用于挥发性盐基氮测定研究报告(凯氏定氮法)
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挥发性盐基氮检测技术的发展 半微量凯氏定氮法和半微量扩散法均要进行样品粉碎、肉浸液提取等操作，过程繁琐、
耗时长，难以满足当前肉品快速非破坏性的检测需求。近年来，经过科研人员大量的探索和 尝试，现已研究并建立了许多高效、快速、智能化的检测方法。
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3.1 定氮仪检测法 有研究人员研究发现，使用全自动凯氏定氮仪对肉品进行重复性实验，结果显示挥发性 盐基氮含量的相对标准偏差均小于 1%，重现性良好。 3.2 分光光度法 样品通过浸提处理提取挥发性盐基氮,与纳氏试剂在碱性条件下生成黄至棕色的化合物 ，比色定量。 3.3 近红外光谱法 3.4 漫反射光谱法 通过奈斯勒试剂处理的分子筛吸收挥发性盐基氮,形成 NH2Hg2IO 固相显色体,采用漫反 射光谱装置直接测定。
微量滴定管：最小分度 0.01ml。 2.2.3 实验步骤 将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿中央内室加入 1ml 吸收液及 1 滴混合指示液。在皿外室 一侧加入 1.00ml 按半微量定氮法制备的样液，另一侧加入 1ml 饱和碳酸钾溶液，注意勿使两 滴接触，立即盖好；密封后将皿于桌面上轻轻转动，使样液与碱液混合。 将扩散皿置于 37℃温箱内放置 2h，揭去盖，用 0.01N 盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定，终 点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。
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盐酸标准溶液 （0.01mol/L） ： 吸取浓盐酸 0.85ml， 定容至 1000ml， 摇匀。 并按 GB/T 5009.12003 附录 B 的方法进行标定。 混合指示剂： 2g/L 甲基红乙醇溶液：称取 0.2g 甲基红溶于 100mL 乙醇中。 1g/L 次甲基蓝指示剂：称取 0.1g 次甲基蓝溶于乙醇溶液，并定容至 100mL 容量瓶中。 甲基红指示剂（2g/L），次甲基蓝指示剂（1g/L），临时用将上述两种指示剂等量混合。 2.1.2 仪器 半微量定氮装置
挥发性盐基氮(TVB-N)含量的测定
挥发性盐基氮（VBN）测定方法每次每组的样品溶液都需要进行测定，并记录数据。
(企业标准)一、原理：利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。
二、仪器与器皿：1、实验室用样品粉碎机或研钵2、分析天平：感量0.001g3、凯氏蒸馏装置：半微量水蒸汽蒸馏式4、振荡机5、锥形瓶：150ml、250mL具塞6、容量瓶：100mL、1000mL7、滴定管：酸式10mL三、试剂：1、0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于98mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液；化学纯氧化镁1.0g溶于99mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定：1、称取1～5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min 后静置，上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL%的氧化镁溶液，小心提起玻璃塞使流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算：1、计算见下式：X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100式中：X1：样品挥发性盐基氮的含量，mg/100g；V1：滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL；V2：滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL；C1：盐酸标准溶液浓度，mol/L；M1：试样重量，g；V’：试样分解液蒸馏用体积，mL；V ：样液总体积，mL；14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg。
挥发性氨基氮(VBN)检测方法
挥发性氨基氮（VBN）检测方法1、VBN是指动物性食物由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，蛋白质分解而产生氨以及含氮胺类物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后．用标准酸液滴定从而计算含量。
本试验根据此原理。
在半微量检测方法的基础上改良，使检测更简易、快捷。
2、仪器设备：（1）分析天平：分度值0.0001g；（2）电炉子；（3）VBN测定设备；（4）5ml酸式滴定管；（5）电动搅拌器；（6）20ml、5ml大肚移液管；（7）150ml锥形瓶。
3、试剂溶液的配制：（1）0.1mol/L盐酸滴定液：取盐酸分析纯9ml置于1000ml容量瓶中，用蒸馏水定溶至刻度，摇匀标定；（2）1%氧化镁溶液：取氧化镁10g置于1000ml聚乙烯瓶中，用蒸馏水定溶至刻度摇匀即可；（3）2%硼酸溶液：取20g硼酸分析纯置于1000ml容器瓶中，先用少许蒸馏水加热溶解，再稀释至刻度即可。
（4）甲基红-溴甲酚绿指示剂：0.125g甲基红，乙醇25ml混合溶解；0.025g溴甲酚绿，乙醇25ml混合溶解，二者混合使用，在阴凉处保存期为3个月。
4、检测步骤：（1）试样液制备：称取样品10g左右，加入100ml蒸馏水，用电动搅拌器搅拌10分钟后，静止1小时。
（2）蒸馏：吸取5ml试样液上清液置于VBN蒸馏器中，再加入1%氧化镁溶液5ml，密封。
用20ml2%硼酸溶液吸收（150ml锥形瓶），蒸馏4分钟，空蒸1分钟，用0.1mol/L盐酸滴定液滴定，由蓝色滴至红色即可。
5、计算公式：(V1－V2) × C × 14VBN = × 100mg/100gM ×（V1/V）注：V1-------滴定试样时所需盐酸标准液的体积，ml；V2-------滴定空白时所需盐酸标准液的体积，ml；V1-------吸取试样液上清液的体积，ml（5ml）；V--------稀释试样的总体积，ml（100ml）；M-------所测试样液的总质量，g。
挥发性盐基氮的测定(TVB-N)
挥发性盐基氮的测定(TVB-N)
一、原理:蛋白质分解时，氨基酸脱氨基生成氨，氨基酸脱羧基生成胺，氨与胺在碱液中被蒸发出来，用硼酸吸收，用标准盐酸反滴定，测出其含量。
操作步骤：称取5-10g样品于250ml具塞三角瓶内，准确加入100.00ml水，振荡30min，过滤，取虑液10.00ml，按粗蛋白蒸馏操作，但加入的碱为氧化镁溶液（10g/L、1%）5-8ml。
然后用HCL滴定，滴定终点为灰红色。
二、试剂和仪器：1％氧化镁、2％硼酸溶液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.2％甲基红乙醇溶液1份与0.2％溴甲酚绿乙醇溶液5份混合、0.01N盐酸标准溶液；半微量定氮器、微量滴定管：最小分度
0.01ml。
四、计算：挥发性盐基氮（TVB－N）（mg／100g）＝｛（V1－V0）× C× 14／〔M ×（10/100）〕｝×100 。
式中：TVB-N── 挥发性盐基氮，mg／100g；V1──被测样液消耗盐酸标准溶液的体积，ml；V0──试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积，ml；C──盐酸标准溶液的当量浓度；M──样品重量，g；14── 1N盐酸标准溶液1ml相当氮的毫克数。
五、实例：鱼粉样品8.6706g，VHCL=0.0200mol/L、V=3.93ml、V0=0.015ml. VBN={0.0200*(3.93-0.015)*14/（8.6706*10/100）}*100=126.42mg/100g。
应用：新鲜度好的鱼粉VBN<100mg/100g（40-80），新鲜度差的鱼粉VBN>150mg/100g （180-350）。
挥发性盐基氮
• V1：测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，ml； • V2：试剂空白消耗盐酸或硫酸标准液体积，ml； • C1：盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，mo/Ll； • 14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[C(HCl)= 1.000 mol/L] 或
硫酸标准滴定溶液[C(1/H2SO4)=1.000mol/L] 相当的氮的 质量，mg ； • m1：样品质量，g；
半微量蒸馏法
三、仪器
半微量凯氏定氮装置; 微量滴定管：最小分度0.01mL。
半微量蒸馏法
四、分析步骤
1. 样品处理：将样品除去脂肪、骨及腱后，切碎搅 匀。称取约10.00g, 于锥形瓶中，加100mL水，不 时振摇，浸渍。30min 后过滤，取滤液置冰箱备 用。
半微量蒸馏法
2. 蒸馏：向接收瓶内加入2%硼酸10mL 及2滴混合指示 剂，并使冷凝管下端插入液面下。 蒸馏水中加入甲基橙指示剂数滴，再加入稀硫酸， 使溶液保持橙红色。 吸取10.0mL样品液注入凯氏定氮仪的反应室中，用 10mL蒸馏水冲洗进样入口，再加5mL氧化镁悬液(1 ％) 。塞好入口玻璃塞，用少量蒸馏水冲洗进样入口， 且在入口处加水封好，防止漏气。
体内外的渗透压，因此新鲜的软骨鱼肉TVBN 很高，不在这个范围。
半微量蒸馏法
半微在碱性溶液中释放出 吸收：挥发后吸收于硼酸吸收液中 2NH3 + 4H3BO3→(NH4)2B4O7 + 5H2O 滴定：生成的硼酸铵用标准酸滴定，计算含量。 (NH4)2B4O7 + 2HCl + 5H2O →2 NH4Cl + 4H3BO4
或硫酸标准滴定溶液[c(1/H2SO4)=1.000mol/L] 相当 的氮的质量，mg ； m1：样品质量，g； 允许差：相对偏差≤ 10%
挥发性盐基氮
挥发性盐基态氮的测定VBN---参照GB/T 5009.44-20031 原理挥发性盐基态氮，英文名称：V olatile Basic Nitrogen，简称：VBN，是指蛋白质因微生物滋长或本身酵素（酶）作用，使其蛋白质分解成较低分子量具有挥发性的氨、二甲胺、三甲基胺等物质，因此根据挥发性物质含量的多寡，可判断出蛋白质的变性程度。
将样品用水萃取，澄清过滤后，放入蒸馏仪中，挥发性盐基态氮在氧化镁的沸点下，被释放出来，用硼酸液吸收，再用盐酸滴定，换算成挥发性盐基态氮的含量。
2 试剂2.1 氧化镁混悬液(10g/L): 称取 1.0g氧化镁，加100mL水，振摇成混悬液。
2.2 硼酸吸收液(20g/L)。
2.3盐酸[c(HCl = 0.010 mol/L」或硫酸[c(1/2H2SO4)=0.010mol/L〕的标准滴定溶液。
（临用新配）2.4 混合指示剂：0.1%甲基红: 0.1%亚甲基蓝= 2:1 < V/V >2份甲基红0.1％乙醇（95%）溶液，与1份亚甲基蓝0.1％乙醇（95%）溶液混合，保存于棕色瓶中。
在阴凉处保存期为三个月。
3 仪器3.1半微量定氮器。
3.2微量滴定管:最小分度0.01mL.4 分析步骤4.1 试样处理称取约10.0g样品，置于150mL烧杯中，加100 mL水，磁力搅拌30min 后，静置，过滤。
4.2 蒸馏滴定将盛有25mL硼酸吸收液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插人吸收液的液面下。
准确吸取 5.0mL 上述试样滤液置于消化管内，加5mL氧化镁混悬液(10g/L)后，迅速放入蒸馏仪中，进行蒸馏。
吸收液用盐酸标准滴定溶液(0.010mol/L) 滴定，颜色由蓝绿色变至灰红色为终点。
同时做试剂空白试验5 结果计算试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算。
式中：X —试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克(mg/l00g);V1—测定用样液消耗盐酸标准溶液体积，单位为毫升(mL);V2—试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升(mL);c —盐酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升(mol/L);14 —与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HC1)=1.000mol/L〕相当的氮的质量，单位为毫克(mg);m —试样质量，单位为克(g)。
挥发性盐基氮检测方法
1硼酸吸收液（20g/L ）：称取硼酸20g于1000mL烧杯中，量取400mL蒸馏水于烧杯中溶解硼酸，将溶液转移至1000mL容量瓶中，多次清洗烧杯后转移至容量瓶中，定容至1000mL，混匀后倒入广口瓶中盖紧瓶塞，贴上标签（名称、浓度、日期、配置人）备用。
2 甲基红-乙醇指示剂(2g/L)：用分析天平称取0.2g甲基红于100mL烧杯中，使用95%乙醇多次溶解试剂，每次将已溶解的部分转入容量瓶中，最后用95%乙醇定容。
将容量瓶中的溶液转移至滴定瓶中。
3 次甲基蓝指示剂（1g/L）：用分析天平称取0.1g次甲基蓝于100mL烧杯中，使用95%乙醇多次溶解试剂，每次将已溶解的部分转入容量瓶中，最后用95%乙醇定容。
将容量瓶中的溶液转移至滴定瓶中。
4 混合指示剂：临用时，将两种指示剂按1:1混合一定数量，装于滴定瓶中，保质期两个月。
5 饱和碳酸钾溶液：称取50g碳酸钾固体粉末于烧杯中，加50mL蒸馏水使其溶解，将溶液稍稍加热助溶后，将上清液转入试剂瓶中，备用。
6 水溶性胶：称取10g阿拉伯胶，加10mL水，再加5mL甘油及5g无水碳酸钾（或无水碳酸钠）于烧杯中，玻璃棒搅拌混匀。
7盐酸标准滴定溶液（0.1moL/L）：1 配置：量取9mL盐酸，注入约500mL水中，摇匀，继续加水定容到1000mL。
2 标定：将工作基准试剂无水碳酸钠于270～300℃高温马弗炉中灼烧至恒重，称取0.2g恒重的基准试剂，溶于50mL水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示剂，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
同时做空白试验。
3 计算：盐酸标准滴定溶液的浓度c(HCl)：c(HCl)=m*1000/[(V1-V2)M]式中：m——无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为g；V1——盐酸溶液的体积的数值，单位为mL；V2——空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为mL；M——无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为g/mol,M(1/2Na2CO3)=52.9944.8 盐酸标准滴定溶液（0.01moL/L）：用移液管准确取50mL 0.1mol/L 盐酸标准溶液于500mL容量瓶中，定容至刻度，做好标签，备用。
挥发性盐基氮(VBN)测定方法
挥发性盐基氮（VBN）测定方法一、原理：利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。
二、仪器与器皿：实验室用样品粉碎机或研钵分析天平：感量0.001g3、凯氏蒸馏装置：半微量水蒸汽蒸馏式4、振荡机5、锥形瓶：150ml、250mL具塞6、容量瓶：100mL、1000mL7、滴定管：酸式10mL三、试剂：1、0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液；化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定：1、称取1～5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min后静置，上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL%的氧化镁溶液，小心提起玻璃塞使流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算：1、计算见下式：X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100式中：X1：样品挥发性盐基氮的含量，mg/100g；V1：滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL；V2：滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL；C1：盐酸标准溶液浓度，mol/L；M1：试样重量，g；V’：试样分解液蒸馏用体积，mL；V ：样液总体积，mL；14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg。
挥发性盐基氮的测定
1 适用范围
适用于鱼粉及鱼罐头副产品（鱼头粉）
2 原理
根据蛋白质在腐败过程中，分解产生的氨和胺类物质具有挥发性，可在弱碱剂氧化镁的作用下，游离出并蒸馏出来，被吸收于硼酸溶液，用标准酸滴定，从而计算出含量。
反应式如下：
蒸馏：2NH4+Mg(OH)2 2NH4OH+Mg2+
NH4OH NH3 +H2O
吸收: 2NH3+4H3BO4(NH4)2B4O7+5H2O
滴定：(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O 2NH4Cl+H3BO4
3试剂：
3.1硼酸吸收液：2%硼酸溶液；
3.2氧化镁：1%水溶液（M/V）
3.3盐酸标准溶液；
3.4混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月
4步骤
称样品4-5克于250ml锥形瓶中，加100ml水，振摇30min，静置，取10ml上清液和10ml 1%氧化镁于反应器中。
硼酸20ml，3滴混合指示剂作为吸收液，使蒸馏装置中的冷凝管末端浸入此吸收液中，开始蒸馏，待颜色变绿开始计时，蒸馏10min，取下，用水冲洗吸收管，再蒸馏1min。
用HCL标淮滴定，红色为终点，同时做一个空白对照。
5计算
Mg/g TVBN=（V-V0）×C Hc l×14.008/W
V——测定用样液消耗盐酸溶液的体积，ml；
V0——空白消耗盐酸溶液的体积，ml；
C Hc l——盐酸标准溶液的当量浓度，mol/l；W——样品重量，g；
14.008——1N盐酸标准溶液1ml相当于氮的毫克数。
挥发性盐基态氮(volatilebasicnitrogen,VBN)解读
揮發性鹽基態氮（volatile basic nitrogen, VBN）肉在變敗之過程中，肌肉蛋白會分解變成生太胺基酸後，如繼續變化則分解成低分子之無機氮化合物，使VBN量漸漸增加。
因此，VBN量常被用來當作肉變敗程度之一個指標。
依中國國家標準C.N.S. 1451, N6029（1997）冷凍魚類檢驗法，採用康威氏（Conway's）微量擴散法，加以修飾測定之。
1. 試劑：（1）2.2％三氯醋酸（trichloroacetic acid, TCA）溶液：秤取TCA 22g，加去離子水定量至1000 ml。
（2）硼酸吸收液：精秤10 g 純硼酸（H3BO3），加入95%酒精200 ml與去離子水700 ml，於1000 ml定量瓶混合後，加入溴甲酚綠（bromocresol green,0.03 g溶於1000 ml之95 %酒精）及甲基紅（methyl red, 0.06 g溶於100ml之95 %酒精）指示劑各5 ml，最後以去離子水定量至1000 ml。
（3）飽和碳酸鉀溶液：以三角錐形瓶加入去離子水140 ml後，加入無水碳酸鉀（K2CO3）並以磁石攪拌器攪拌，直到不再溶解、產生沈澱為止。
（4）0.02N 鹽酸：以甲基橙（methyl orange）做指示劑，先將0.1N鹽酸以0.1N碳酸鈉（Na2CO3）標定力價，再以0.1N鹽酸稀釋成0.02N鹽酸。
2. 步驟：（1）秤取5g樣品，置入均質杯中，加入2.2％TCA溶液45mL，以組織均質機均質（10000rpm，30秒）。
（2）倒入燒杯中，以鋁箔紙覆蓋，靜置10分鐘。
（3）以濾紙（Whatman No.1, 9cm）過濾於50 ml錐形瓶，再以鋁箔紙密封，此即為檢液。
（4）在康威氏皿（Conway dish, SIBATA, 6031-02）磨砂面塗上適量凡士林，使成密閉狀。
（5）取硼酸吸收液1 ml於內室，以蓋子蓋住內室，露出有橫溝之外室。
实验六、挥发性盐基氮的测定
氧化镁混悬液5mL，迅速盖塞，并用水封口，通入蒸 汽蒸馏。在冷凝管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏 5min即停止，取下锥形瓶，冷却。
4、锥形瓶中吸收液用0.0100mol/L盐酸标准溶液滴定
，刚呈蓝紫色为终点，记录标准酸溶液消耗的体积（ mL）。同时作空白试验。
计算
TVBN（mg/100g）=
0.01mol/L盐酸标准溶液、0.2%甲基红乙醇溶液、 0.1%亚甲基蓝水溶液
实验原理
挥发性盐基氮与动物性食品新鲜度的关系。
被检样品滤液与弱碱性氧化镁反应后，使被检样品
中的碱性含氮物质游离，并被蒸馏出来，用吸收液 吸收（含混合指示剂），再以标准酸液滴定，求其 含量。
实验方法
1、制备样品肉浸液
（V1-V2）×Cs×14 ×100
m×5/100
式中:
V1—样品消耗的盐酸标准溶液体积，（mL） V2—空白消耗盐酸标准溶液体积，（mL） Cs—盐酸标准溶液浓度，（mol／L） m—样品质量，（g）
14—1mol/L盐酸标准溶液1mL相当于氮的毫克数
评定标准
各种鲜（冻）畜肉中挥发性盐基氮含量应≤ 15mg/100g
《鲜（冻）畜肉卫生标准GB2707—2005》
将样品剔除脂肪、筋腱和骨后 ，绞碎搅匀，称取10g置于锥形瓶中，加入100mL蒸馏 水，不时摇动，浸渍30min 后过滤，滤液放入冰箱备 用。 2、预先将盛有10mL吸收液并加入5～6滴混合指示剂 的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内 吸收液的液面下。
实验方法
3、吸取5mL上述样品肉浸液于蒸馏器反应室内，加1%
动物性食品卫生学实验
实 验 六 挥发性盐基氮的测定
实验目的
通过本次实验，掌握半微量凯氏定氮法检测
挥发性盐基氮(TVB-N)的测定
肉新鲜度的实验室检验:肉新鲜度的实验室检验方法较多，如挥发性盐基氨的测定、纳斯靳（Nessler）氏试剂氨反应、球蛋白沉淀反应、pH值的测定、硫化氢的测定、细菌学检查等。
但只有挥发性盐基氨的测定作为国家现行法定检测方法，其他的实验室检测方法只能作为肉品新鲜度的辅助检验方法，应根据情况选用。
（一）挥发性盐基氮（TVB-N）的测定1. 半微量定氮法（1）原理：蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质，有氨、伯胺、仲胺等，此类物质具有挥发性，可在碱性溶液中被蒸馏出来，用标准酸滴定，计算含量。
（2）试剂①氧化镁混悬液②2%硼酸溶液（吸收液）③0.2%甲基红乙醇液④0.1%亚甲蓝水溶液临用时将③④等量混合为混合指示液⑤0.0100N盐酸标准溶液或0.0100N 硫酸标准溶液（3）仪器①半微量定氮装置：Markhan氏式②微量滴定管：最小分度0.01ml（4）操作方法①样液的制备：将样品除去脂肪、骨头及筋腱后，切碎搅匀，称取10g于锥形瓶中，加100ml水，不时振摇，浸渍30min后过滤，滤液置于冰箱中备用。
②测定：预先将盛有10ml吸收液并加有5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内吸收的液面下，精密吸取5ml上述样品滤液于蒸馏器反应室内，加5ml 1%氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，待蒸汽充满蒸馏器内时即关闭蒸汽出口管，由冷并行管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min即停止，吸收液用0.0100N盐酸标准溶液或0.0100N硫酸标准溶液滴定，终点呈蓝紫色。
同时做试剂空白试验。
（5）计算（V1-V2）×N1×14X1= ×100m1×5/100式中：X1——样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100gV1——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlV2——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlN1——盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度，mol/Lm1——样品质量，g14——1N盐酸或硫酸标准溶液1ml相当氮的毫克数2. 微量扩散法（1）原理：挥发性含氮物质在碱性溶液中释出，在扩散皿中于37℃时挥发后吸收于吸收液中，用标准酸滴定，计算含量。
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挥发性盐基氮（VBN）测定方法
一、原理：
利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。
二、仪器与器皿：
实验室用样品粉碎机或研钵
分析天平：感量0.001g
3、凯氏蒸馏装置：半微量水蒸汽蒸馏式
4、振荡机
5、锥形瓶：150ml、250mL具塞
6、容量瓶：100mL、1000mL
7、滴定管：酸式10mL
三、试剂：
1、0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液；化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定：
1、称取1～5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min后静置，上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL%的氧化镁溶液，小心提起玻璃塞使流入
反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算：
1、计算见下式：
X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100
式中：X1：样品挥发性盐基氮的含量，mg/100g；
V1：滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL；
V2：滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL；
C1：盐酸标准溶液浓度，mol/L；
M1：试样重量，g；
V’：试样分解液蒸馏用体积，mL；
V ：样液总体积，mL；
14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg。
2、重复性：
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。
允许相对偏差为5%。