挥发性盐基氮的测定仪器与试剂
挥发性盐基氮
公司内部检测标准1原理挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨及胺等碱性含氮物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。
2 试剂2.1氧化镁混悬液(10g/L)：称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。
2.2氢氧化钠溶液(30g/L)。
2.3硼酸吸收液(20g/L)。
2.4盐酸标准溶液(0.01000mol/L)。
2.5混合指示剂：临用时用甲基红-乙醇(2g/L)和次甲基蓝-乙醇(1g/L)等量混合。
2.6酚酞指示剂(10g/L)。
2.7高氯酸溶液(0.6mol/L)：量取25ml高氯酸加水定溶至500ml。
2.8清洗液：化学纯稀硝酸1:2稀释。
3 仪器3.1半微量定氮器3.2 1ml微量滴定管：最小分度为0.01ml。
4分析步骤4.1试液的制备4.1.1禽畜肉：将试样肌肉去除脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀，称取约10.00g，置于250ml三角瓶中，加入100ml水，不时振摇，浸渍30min后用快速滤纸过滤（或离心分离），滤液置于冰箱中备用。
4.1.2水产品：鱼、虾等只取肌肉部分，绞碎，称取约10.00g置于均质杯中，加入90ml高氯酸溶液，均质2分钟，用快速滤纸过滤（或离心分离），滤液置于2－6℃冰箱中备用，可保存2天。
4.2蒸馏滴定4.2.1禽畜肉：将成盛有10ml硼酸吸收液及5-6滴混合指示剂的100ml三角瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取5.0ml试样滤液（若挥发性盐基氮含量较少蒸馏吸收时变色不明显，可吸取10.0ml试样滤液）于蒸馏器的反应室内，加入5ml氧化镁混悬液(临用时摇匀），水洗注液口，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸气，待蒸气充满蒸馏器内时即关闭蒸气出口管，由冷凝管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min停止，提起冷凝管下端出液面，停留约60秒，水洗。
4.2.2水产品：将成盛有15ml硼酸吸收液及5-6滴混合指示剂的100ml三角瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取5.0ml试样滤液于蒸馏器的反应室内，再分别加入1－2滴加入酚酞指示剂和硅油消泡剂，5ml氧氢化钠并水洗注液口，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸气，待蒸气充满蒸馏器内时即关闭蒸气出口管，由冷凝管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min停止，提起冷凝管下端出液面，停留约60秒，水洗。
实验二挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定
一、实验原理 挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶与细菌的作用，在腐败过程中使蛋白质
分解而产生碱性含氮物质，如伯胺、仲胺及叔胺等，此类物质具有挥发性，可以 在 37℃碱性条件下以氨的形式释放，挥发后吸收于吸收液中，再用酸滴定以定 量，所得结果为挥发性盐基氮。 二、仪器与试剂 1、恒温箱、电子天平、扩散皿、微量滴定管、三角瓶（250ml）、量筒（100ml）、 漏斗、玻璃棒以及移液管。 2、饱和碳酸钾溶液：称取 50g 碳酸钾家 50ml 去离子水，微热助溶，取上清液。 3、2％硼酸液：称取 20g 硼酸溶解在少量蒸馏水中，再稀释至 1000ml。 4、水溶性胶：称取 10g 阿拉伯胶，加 10ml 水，再加 5ml 甘油与 5g 无水碳酸钠， 研匀。 5、混合指示液：0.2％甲基红乙醇溶液与 0.1％次甲基蓝溶液，临用时等量混合。 6、0.0100mol／L 盐酸标准溶液 7、干燥滤纸 8、市售带鱼 三、操作步骤 1、将样品除去头、内脏、鱼皮及骨头后，切碎搅匀，称取 10g 置于锥形瓶中， 加 100ml 水，不时振摇，浸渍 30min 后过滤，滤液备用。 2、将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿中央内室加入 1ml 吸收液与 1 滴混合指 示液，在皿外室一侧加入 1.00ml 样液，另一侧加入 1ml 的饱和碳酸钾溶液，实 验使两液分离而不接触，立即盖好，密封后将皿置于桌面轻轻转动，使样液与碱 液混合，然后于 37℃温箱内放置 2h，揭去盖，用盐酸标液滴定溶液进行滴定， 以溶液变蓝紫为终点。同时进行空白实验。 四、实验记录与结果计算 1、计算公式： X (m g/ g) (V1 V2 )CM 100100
挥发性盐基氮测定
挥发性盐基氮（VBN）测定方法一、原理：利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。
二、仪器与器皿：实验室用样品粉碎机或研钵分析天平：感量0.001g3、凯氏蒸馏装置：KDN-103F定氮仪4、振荡机5、锥形瓶：150ml、250mL具塞6、容量瓶：100mL、 1000mL7、滴定管：酸式 10mL三、试剂：1、 0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液；化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定：1、称取1～5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min后静置，上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的消化管中，将消化管装上仪器，再加入10mL 1%的氧化镁溶液，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算：1、计算见下式：X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100式中：X1：样品挥发性盐基氮的含量，mg/100g；V1：滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL；V2：滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL；C1：盐酸标准溶液浓度，mol/L；M1：试样重量，g；V’：试样分解液蒸馏用体积，mL；V ：样液总体积，mL；14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg。
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定GB/T5009.44-2003一、适用范围本检测方法适用于动物性食品，肉、水产品等二、原理挥发性盐基氮(VBN)是指动物性食品在腐败过程中，由于细菌的作用，使蛋白质分解后产生的氨、伯胺、仲胺及叔胺等碱性含氮物质，且均有挥发性。
挥发性盐基氮在弱碱性条件下分解与水蒸气一起蒸馏出来形成NH3，便可使以上挥发性的碱性含氮物溢出，然后用硼酸吸收，用标准盐酸滴定便可计算出挥发性盐基氮的含量。
1、NH4+OH→NH3↑+H2O2、4H3BO3+ NH3→NH4HB4O7+5H2O3、NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4C1+4H3BO1．实验用试剂2．实验用设备试验内容精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%附录2：盐酸标准溶液的配制与标定参考标准：GB/T601-20021.盐酸标准溶液的配制按下表的规定量取盐酸，注人1000m L 水中，摇匀。
2.盐酸标准溶液的标定按下表的规定称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50ml 水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min ，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
同时做空白试验。
3.计算盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCI)].数值以摩尔每升(mol/L 表示，按式(2)计算：MV V m HCl C ⨯-⨯=)21(1000)( m- 无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g); V1 -盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(ml);V: -空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL)M- 无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/mol)注意事项：1.灼烧温度不能超过300度，当温度超过300度时无水碳酸钠分解，可将马福炉的温度调至250，等升温稳定后再调至280，或者将马福炉事先升温至280度，待稳定后再放入无水碳酸钠2.无水碳酸钠的称量质量小于0.2g时要用十万分子之一天平称量。
鱼粉中挥发性盐基氮的测定
项目
指标 特级品 一级品 二级品 三级品
粗 蛋 白 质 ／％
≥６５ ≥６０ ≥５５ ≥５０
挥发性盐基氮 ＶＢＮ（ ｍｇ／１００ｇ） ≤１１０ ≤１３０ ≤１５０ ≤１５０
７．２ 本 检 测 方 法 可 推 广 应 用 至 其 他 的 动 物 性 蛋 白质饲料， 例如血浆蛋白粉、血球蛋白粉， 等等。
（ 参考文献略） ■
３ 分析步骤 ３．１ 样品处理
称取 １０ｇ 鱼粉（ 精确至±０．０００１） 于 ２５０ｍＬ 锥 形 瓶 中 ， 加 １００ｍＬ（ Ｖ 总 ） 蒸 馏 水 ， 于 磁 力 搅 拌 器 上搅拌 ３０ｍｉｎ， ４ ０００ｒ／ｍｉｎ。 ３．２ 蒸馏滴定
吸取 ２０．０ｍＬ ２％硼酸吸收液于锥形瓶中， 加 混合指示剂 ２￣３ 滴， 使 ＫＤＮ－ ２Ｃ 型定氮仪的冷凝 管末端浸入此溶液。准确吸取 １０．０ｍＬ（ Ｖ 分） 上述 样品清液于消化管中， 加少量蒸馏水冲洗， 再加 入 １０ｍＬ １％的 氧 化 镁 溶 液 ， 蒸 馏 至 １５０ｍＬ （ 约 ５ｍｉｎ） 。吸收液立即用 ０．０１ｍｏｌ／Ｌ 盐酸标准溶液滴 定， 溶液由蓝绿色变为灰红色为终点， 同时做试 剂空白。
时间 ２ｈ １ｈ ０．５ｈ １０ｍｉｎ ５ｍｉｎ ３ｍｉｎ
表 １ 时间对 ＶＢＮ 含量的影响 ＶＢＮ（ ｍｇ／１００ｇ） １７５ １５８ １３３ １１２ １０６ １０５
以上表明， 试液应在 ５ｍｉｎ 以内进行测定。 ６．２ 温度
磁力搅拌过程也要维持一定的温度， 温度越 高， ＶＢＮ 含量越大， 检验的误差越大（ 表 ２） 。
４ 计算 挥发性盐基氮 （ Ｗ） 以每 １００ｇ 样品含氮 ｍｇ
数表示。 Ｗ（ ｍｇ／１００ｇ） ＝ Ｃ×（ Ｖ１－ Ｖ２） ×１４ ×１００ ｍ×（ Ｖ 分取／Ｖ 总）
实验六、挥发性盐基氮的测定
实 验 六 挥发性盐基氮的测定
实验目的
通过本次实验，掌握半微量凯氏定氮法检测
挥发性盐基氮的原理与试剂作用;掌握凯氏定 氮法的操作程序及实验要点。
实验仪器材料与试剂
仪器材料：半微量凯氏定氮蒸馏装置、微量酸式滴
定管等。
仪器试剂： 1%的氧化镁混悬液、2%的硼酸吸收液、
将样品剔除脂肪、筋腱和骨后 ，绞碎搅匀，称取10g置于锥形瓶中，加入100mL蒸馏 水，不时摇动，浸渍30min 后过滤，滤液放入冰箱备 用。 2、预先将盛有10mL吸收液并加入5～6滴混合指示剂 的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内 吸收液的液面下。
实验方法
3、吸取5mL上述样品肉浸液于蒸馏器反应室内，加1%
（V1-V2）×Cs×14 ×100
m×5/100
式中:
V1—样品消耗的盐酸标准溶液体积，（mL） V2—空白消耗盐酸标准溶液体积，（mL） Cs—盐酸标准溶液浓度，（mol／L） m—样品质量，（g）
14—1mol/L盐酸标准溶液1mL相当于氮的毫克数
评定标准
各种鲜（冻）畜肉中挥发性盐基氮含量应≤ 15mg/100g
《鲜（冻）畜肉卫生标准GB2707—2005》
0.01mol/L盐酸标准溶液、0.2%甲基红乙醇溶液、 0.1%亚甲基蓝水溶液
实验原理
挥发性盐基氮与动物性食品新鲜度的关系。
被检样品滤液与弱碱性氧化镁反应后，使被检样品
中的碱性含氮物质游离，并被蒸馏出来，用吸收液 吸收（含混合指示剂），再以标准酸液滴定，求其 含量。
实验方法
1、制备样品肉浸液
氧化镁混悬液5mL，迅速盖塞，并用水封口，通入蒸 汽蒸馏。在冷凝管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏 5min即停止，取下锥形瓶，冷却。
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定挥发性盐基氮20.3.1 原理皮蛋中蛋白质分解后产生碱性含氮物质，如氨、伯胺、仲胺等。
此类物质具有挥发性，在弱碱性溶液中加热蒸馏可随水蒸气蒸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，可以计算出100g皮蛋中含氮的质量(mg)。
20.3.2 试剂20.3.2.1 氧化镁混悬液(10g/L)：将氧化镁经800～900℃灼烧3h，冷至200℃以下，置干燥器冷却后。
称取1g，用100mL水混匀(临用新配)。
20.3.2.2 三氯乙酸溶液(200g/L)。
取三氯乙酸20g加水溶解并稀释至100mL。
20.3.2.3 硼酸吸收液：100mL硼酸溶液(20g/L)，加1mL混合指示液，混匀。
20.3.2.4 甲基红－溴甲酚绿混合指示液：同20.2.2.1。
20.3.2.5 盐酸标准滴定溶液(0.01mol/L)。
20.3.3 分析步骤称取15.00g(将5个皮蛋洗净、去壳。
按皮蛋：水为2∶1的比例加入水，在组织捣碎机中捣成匀浆)。
皮蛋匀浆(相当于10.00g样品)，置于烧杯中，用50mL水将样品分次洗入100mL具塞量筒中，加10mL三氯乙酸(200g/L)，加水至100mL，充分振摇，待蛋白质沉淀后过滤，滤液备用。
收取10.0mL硼酸吸收液，置于50mL锥形瓶中，将半微量定氮器冷凝管下端插入吸收液液面下。
吸取上述滤液2.00mL，加入定氮器反应室中，并以少量水冲洗，立即加入5mL氧化镁混悬液(10g/L)，迅速盖塞，并加水以防漏气，夹紧废液排出口橡皮管，蒸馏5min，移动吸收瓶使冷凝管下端离开液面，继续蒸馏1min，取下吸收瓶，用盐酸标准滴定溶液(0.01moL/L)滴定至灰紫色为终点，同时做试剂空白试验。
为防止蒸馏过程中泡沫过多，可加0.5～1mL异戊醇。
20.3.4 计算式中：X8——样品中挥发盐基氮的含量，mg/100g；V8——测定用样品滴定消耗盐酸标准滴定溶液体积，mL；V9——试剂空白滴定消耗盐酸标准滴定溶液体积，mL；c5——盐酸标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；14——与1.0mL盐酸标准滴定溶液［c(HCl)＝1.000mol/L］相当的氮的质量，mg；m11——样品质量，g。
半自动凯氏定氮仪法测定挥发性盐基氮含量
第47卷第7期2019年4月广 州 化 工Guangzhou Chemical IndustryVol.47No.7Apr.2019半自动凯氏定氮仪法测定挥发性盐基氮含量*方 靖1,徐清霞2,冼灿标1(1广东环境保护工程职业学院,广东 佛山 528000;2广东维中检测技术有限公司,广东 佛山 528000)摘 要:挥发性盐基氮是判断肉类新鲜程度的一个重要指标㊂实验对半自动凯氏定氮仪法测定猪肉中挥发性盐基氮含量的方法进行研究,结果表明,半自动凯氏定氮仪法与国标第一法半微量定氮法对同一样品的测定结果具有一致性,且方法重现性更好㊂相比之下半自动凯氏定氮仪法更加便捷,省时省力㊂并运用本方法测定新鲜猪肉在不同贮存温度下,随着时间变化猪肉中挥发性盐基氮的含量㊂关键词:半自动凯氏定氮仪法;挥发性盐基氮;猪肉 中图分类号:TS251.5 文献标志码:A 文章编号:1001-9677(2019)07-0108-03*基金项目:广东环境保护工程职业学院2017年院级教研教改项目(No:J443418061906)㊂第一作者:方靖,女,讲师,主要从事食品营养与检测㊂Determination of Volatile Base Nitrogen in Pork bySemi-automatic Kjeldahl Method *FANG Jing 1,XU Qing -xia 2,XIAN Can -biao 1(1Guangdong Polytechnic of Environmental Protection Engineering,Guangdong Foshan 528000;2GD Veizhong Tesing Techique Co.,Ltd.,Guangdong Foshan 528000,China)Abstract :Volatile base nitrogen is an important indicator for judging the freshness of meat.The determination of volatile base nitrogen in pork by semi-automatic Kjeldahl method was studied.The results showed that the semi-automatic Kjeldahl method and semi -micro -quantitative method,which were the national standard first methods,had the same results for the same sample,and the semi-automatic Kjeldahl method was more reproducible and convenient.The changes of volatile base nitrogen value with time at different storage temperatures of pork were compared with the method applied.Key words :semi-automatic Kjeldahl method;volatile basic nitrogen;pork挥发性盐基氮是动物性食品由于酶和细菌的作用,在腐败过程中,使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质[1]㊂这些物质具有挥发性,含量越高,反映肉类中蛋白质及氨基酸被微生物分解得越多,肉类的营养价值受影响㊂因此,挥发性盐基氮含量是一项常用来评判肉类新鲜度的重要指标㊂GB 2707-2016‘食品安全国家标准鲜(冻)畜㊁禽产品“,对鲜(冻)畜㊁禽产品的挥发性盐基氮限量值做出了规定为:≤15mg /100g [2]㊂实验参考GB 5009.228-2016‘食品安全国家标准食品中挥发性盐基氮的测定“中第一法半微量定氮法和第二法自动凯氏定氮仪法,对半自动凯氏定氮仪法测定猪肉中挥发性盐基氮含量的方法进行研究㊂并对比新鲜猪肉不同贮存温度下,随着时间变化,猪肉中挥发性盐基氮含量的变化,对照国标GB 2707-2016限量要求,找到不同温度下猪肉挥发性盐基氮含量超过或接近国家限量值的贮存时间,为实际生产㊁流通㊁食用以及检测提供参考㊂1 实 验[1,3]1.1 仪器与试剂 JJ500天平(感量1mg),双杰测试;S2-A818绞肉机,九阳;K9840半自动凯氏定氮仪,海能;半微量定氮装置;蒸馏管;吸量管;微量滴定管㊂氧化镁;硼酸(20g/mL);盐酸标准滴定溶液(0.1000mol /L);甲基红乙醇溶液(1g /L);溴甲酚绿乙醇溶液(1g /L);混合指示剂(1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合),所用试剂均为分析纯㊂水为GB /T6682规定的三级水㊂1.2 实验方法1.2.1 半自动凯氏定氮仪法(1)测定流程:鲜瘦肉搅碎拌匀→称取10g 于蒸馏管→加入75mL 水→振摇均匀→浸渍30min →加入1g 氧化镁→上机测定→滴定至终点㊂(2)仪器条件:加碱㊁加水体积:0mL;硼酸接收液:30mL;蒸馏时间:180s㊂(3)滴定终点:向接收液中加入混合指示剂,用盐酸标准滴定溶液(0.1000mol /L)滴定至溶液呈紫红色为终点㊂(4)结果计算:X =(V 1-V 2)×c×14×100/m,其中,X:试样中挥发性盐基氮的含量(mg /100g);V 1:试液消耗盐酸标准滴定溶液的体积(mL);V 2:试剂空白消耗盐酸或硫酸标准滴第47卷第7期方靖,等:半自动凯氏定氮仪法测定挥发性盐基氮含量109 定溶液的体积(mL);c:盐酸或硫酸标准滴定溶液的浓度(mol /L);m:试样质量(mL);14:滴定1.0mL 盐酸[c(HCl)=1.000mol /L]标准滴定溶液相当的氮的质量(g /mol);100:单位换算系数㊂1.2.2 半微量定氮法按照GB 5009.228-2016‘食品安全国家标准食品中挥发性盐基氮的测定“第一法半微量定氮法进行㊂2 结果与讨论2.1 测定结果相同条件下,做试剂空白,首先测得空白值㊂测定结果以重复条件下两次独立测定结果算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂2.2 精密度及方法比较对同一份样品,分别用半微量定氮法㊁半自动凯氏定氮仪法进行6次平行测定,比较两种方法分析结果是否一致,实验结果如表1所示㊂表1 精密度及方法比较结果 Table 1 Precision and method comparison results(mg /100g )半微量定氮法半自动凯氏定氮仪法16.036.0726.086.1036.045.9846.126.0575.965.9585.886.11平均值6.026.04RSD /%1.30.98由表1可知,两种方法测定结果一致㊂两种方法在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值均不超过算术平均值的10%,满足GB 5009.228-2016要求㊂精密度良好,都在GB /T 27404-2008‘实验室质量控制规范食品理化检测“[4]要求范围内㊂半自动凯氏定仪法的RSD 值比半微量定氮法小,重现性更好㊂2.3 样品分析运用半自动凯氏定仪法测定新鲜猪肉在不同贮存温度下,随着时间变化挥发性盐基氮含量变化㊂2.3.1 贮存8h 内猪肉在-18℃,10℃,25℃,35℃贮存0~8h,每2h 取样进行挥发性盐基氮含量测定,实验结果如图1所示㊂图1 贮存8h 内猪肉挥发性盐基氮含量变化Fig.1 Changes in volatile base nitrogen value of pork duringstorage of 8h从图1可知,在贮存过程中,随着贮存时间增加,四组温度条件下的猪肉挥发性盐基氮含量均有不同程度的增长,贮存温度越高,挥发性盐基氮含量增长速度越快㊂其中,35℃贮存约5h 及25℃贮存8h 的猪肉,挥发性盐基氮含量即已达到或超过国家限量要求≤15mg /100g㊂而在-18℃,10℃条件下贮存的猪肉,8h 内挥发性盐基氮含量值增长较缓慢,低于国家限量要求,保鲜效果较好㊂2.3.2 贮存24h 后猪肉在-18℃,10℃,25℃,35℃贮存24h 后,取样测定挥发性盐基氮含量㊂实验结果如表2所示㊂表2 贮存24h 猪肉挥发性盐基氮含量Table 2 Volatile base nitrogen value of pork during storage of 24h时间/h 不同温度下挥发性盐基氮含量/(mg /100g)-18℃10℃25℃35℃05.975.975.975.97811.312.315.216.92412.4314.842.3160由表2可知,在25℃及35℃中贮存的猪肉,如隔夜放置,挥发性盐基氮含量将远超于国家限量要求≤15mg /100g,猪肉品质不合格㊂10℃条件保存的猪肉,隔夜放置后挥发性盐基氮含量亦已接近国家限量标准≤15mg /100g,需尽快食用㊂在-18℃条件保存的猪肉挥发性盐基氮含量在隔夜期间增长缓慢,新鲜度得到保障,故若猪肉运输销售期较长或购置后不能当天食用,建议选择-18℃(冷冻)或以下温度进行贮存,一般冷藏㊁室温或室外贮存均不利于猪肉新鲜度的保存㊂而齐娟等[5]㊁王天佑等[6]研究均表明,猪肉在30℃下6h 内仍为鲜猪肉或近似鲜猪肉,12h 以后开始腐败变质㊂刘婷婷等[7]㊁杨春婷等[8]研究表明,在4℃冷藏条件下,冷鲜猪肉能够在较长时间内保持良好品质㊂以上结论与本次实验结果相符㊂3 结 论实验研究了半自动凯氏定氮仪法测定猪肉中挥发性盐基氮含量的方法,实验结果与国标第一法半微量定氮法结果具有一致性,且方法重现性更好㊂相比之下半自动凯氏定氮仪法更加便捷,省时省力㊂实验发现随着贮存时间增长,贮存温度越高,猪肉中挥发性盐基氮含量增长速度越快㊂35℃贮存约5h 及25℃贮存8h 的猪肉,挥发性盐基氮含量即已达到或超过国家限量要求≤15mg /100g㊂10℃条件保存的猪肉,隔夜放置后挥发性盐基氮含量接近国家限量,需尽快食用㊂在-18℃条件保存的猪肉挥发性盐基氮含量增长缓慢,适合较长时间保存㊂参考文献[1] GB5009.228-2016食品安全国家标准食品中挥发性盐基氮的测定[S].北京:中国标准出版社,2016.[2] GB2707-2016食品安全国家标准鲜(冻)畜㊁禽产品[S].北京:中国标准出版社,2016.[3] 郝治华,李颖鲜.冻畜禽肉及水产品中挥发性盐基氮含量比较分析[J].西藏科技,2018(7):28-29.[4] GB /T 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测[S].北京:中国标准出版社,2008.[5] 齐娟,徐志方.猪肉㊁猪肝挥发性盐基氮与其感官性状的差异研究[J].肉类工业,2015(10):32-34.(下转第156页)156 广 州 化 工2019年4月活的设计性实验能激化学生极大学习的热情,激发起他们的聪明才智,从学习中感到快乐和学以致用㊂1.2 结合专业开设实验内容闽江学院化工与材料系目前有应用化学专业㊁高分子工程专业㊁制药工程三个专业㊂以往的基础定量分析化学设计性实验,各专业学生都以 鸡蛋壳中钙含量的测定”为题目开展设计性实验,实验内容结合专业不强,且项目单一,学生在设计实验过程往往会相互抄袭,这与原来设计性实验开设的初衷相违背㊂为此我们针对不同的专业,结合专业的特点开出不同实验内容的项目[4]㊂如在应用化学专业我们开出 NaH2PO4-Na2HPO4混合盐分析㊁NaOH-Na3PO4混合物的分析㊁鸡蛋蛋壳中钙含量测定㊁果汁中酸度测定及维生素C的测定㊁漂白粉中有效氯和总钙量的测定等等”;在高分子工程专业我们开出 壳聚糖脱乙酰度测定㊁甲胺基乙腈测定㊁马来酸酐接枝聚丙烯中的酸酐含量㊁聚合氯化铝中氧化铝含量的测定等等”;在制药工程专业我们开出 乙酰水杨酸含量的测定㊁胃舒平药片中铝和镁的测定㊁硫酸锌糖浆中锌含量的测定㊁葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定㊁生理盐水中氯含量的测定等等”㊂学生可以选择其中之一开展设计性实验,让学生从大一开始就接触本专业知识体系,了解专业知识所涉及知识体系,为后续的专业知识的学习打下良好的基础㊂1.3 以小组为团队,讨论设计实验以往我们设计性实验全班都统一一个项目,要求每个学生独自设计,目的是促进学生独立思考㊁独立分析及独立实验㊂但实际上由于项目单一,总有部分学生设计时往往偷懒而相互抄袭,这样达不到预定的实验教学效果㊂为此我们对设计项目进行改革,一个班有七至八个的设计项目,要求学生3人为一组开展一个实验项目的设计㊂小组成员之间相互查阅文献资料,对实验方案进行讨论,确定实验方法,写出具体的实验步骤,如标准溶液的配制和标定,指示剂的选择,试样的称样量等等㊂在写好设计方案后,将设计方案提交给老师审核㊂在实验过程既分工又协作,相互帮助,共同完成实验内容㊂在整个过程学生集思广益,学会了讨论㊁分工与协作,深刻体会到一个人的力量是有限的,但团队的协作的力量是巨大的,收获的远远不只是设计实验㊂1.4 改革实验室管理制度由于设计实验内容相对复杂,所用的试剂较多,实验时间也较长,有时实验还可能遇到挫折,需要修改与调整,因而以往的固定时间㊁固定学时的实验方法显然不适合设计性实验的要求㊂因而采用开放实验室开来满足设计性实验的要求,学生在网上预约申请实验时间,待实验室管理老师确认后,可以进入实验室进行实验,如实验过程遇到问题或实验失败,可以申请延长使用时间,保证学生有充裕的时间完成实验内容[5]㊂这种实验室管理方法有利于提高实验室的使用效率,又有力于学生实验的坚持㊁耐性和创新能力的培养,对学生专业素养的提高极有益处㊂1.5 改革实验的成绩评定标准传统的验证性实验的成绩评定,主要从学生提交的实验报告予以评分,实验报告内容包括实验目的㊁实验原理㊁仪器药品㊁实验步骤,数据处理,误差分析及讨论㊂而设计性实验的成绩评定应结合实验方案的设计㊁小组的课堂讨论㊁实验操作规范㊁实验时间与实验次数㊁实验数据处理方法及有效性㊁分析结果讨论及不同方案的比较与评价等方面予以全面评定㊂对特别有新意的和创新性的设计方案适当加分,以鼓励学生多开动脑筋㊁独立思考,大胆创新㊂2 结 论基础定量分析设计性实验可以从设计性实验项目㊁不同专业实验内容㊁实验成员组成和实验室管理制度方面进行改革创新,并改革成绩评定的标准,这对学生实验技能的提高和创新能力素质的培养有着重要的作用㊂参考文献[1] 廖晓宁,谢静思,张琳,等.分析化学设计性实验多元性考核体系的构建与实践[J].广州化工,2013,41(24):146-148. [2] 马志刚,李菲,凌剑,等.分析化学设计实验教学的实践与探讨[J].实验科学与技术,2015,13(4):83-85,102.[3] 何瑜,王雪,钟书华,等.设计性分析化学实验项目的选择和探索[J].科技文汇,2012(8):137-138.[4] 万彩霞.分析化学设计性实验教学改革的探索和实践[J].中山大学学报论丛,2007,27(10):38-40.[5] 王玲,吴卫平.分析化学设计性实验教学模式初探[J].实验室科学,2011,14(1):23-25.(上接第109页)[6] 王天佑,王玉娟,秦文.猪肉挥发性盐基氮值指标与其感官指标的差异研究[J].食品工业科技,2007,28(12):124-126. [7] 刘婷婷,方忠意,范念亭,等.冷鲜猪肉贮藏期间微生物污染对其品质的影响[J].中国动物检疫,2018,35(8):29-31.[8] 杨春婷,赵晓娟,陈国梅,等.冷鲜猪肉挥发性盐基氮值与感官品质的差异研究[J].食品工业,2018,39(3):197-199.。
挥发性盐基氮的测定
挥发性盐基氮的测定：半微量定氮法（参照GB/T5009.44-2003）原理：TVBN 指动物性食品由于酶和细菌的作用，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。
试剂：1、 氧化镁混悬液（10g/L ）：称取10.0g 氧化镁，加1000mL 水，振摇成混悬液2、 硼酸吸收液（20g/L ）：称取10.0g 硼酸，加500mL 水3、 盐酸（0.01mol/L ）的标准滴定溶液4、 溴甲酚绿-甲基红指示液：溶液I ：溴甲酚绿-乙醇指示剂（1g/L ）：称取0.1g 溴甲酚绿，溶于乙醇（95%），用乙醇（95%）稀释至100 mL溶液II ：甲基红-乙醇指示剂（2g/L ）：称取0.1g 甲基红，溶于乙醇（95%），用乙醉（95%）稀释至100 ml取50mL 溶液I ，10mL 溶液II ，混匀5、蒸馏水仪器：半微量定氮仪绞肉机、摇床消化管、移液管、锥形瓶、烧杯、酸式滴定管等定性滤纸、保鲜膜等分析步骤：1、 试样处理：将试样除去脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀。
称取约10.0g 于锥形瓶中，加100mL蒸馏水，使用保鲜膜将锥形瓶瓶口封住，置于摇床上振摇30min 后过滤，取滤液备用。
2、 蒸馏：将盛有10mL 吸收液及5-6滴混合指示剂的锥形瓶置于冷凝管下端并使其下端浸没入吸收液的液面下；依次准确吸取5.0mL 氧化镁混悬液和5.0mL 上述式样滤液于消化管中，迅速置于通入蒸汽进行蒸馏，计时3min 取下锥形瓶，使冷凝管下端离开吸收液液面，再计时30s ，使用蒸馏水稍清洗冷凝管下端。
3、 滴定：吸收液用盐酸标准滴定溶液滴定，观察指示剂变色情况，记录盐酸体积4、 试剂空白试验。
注意要求先做空白试验。
5、 参考标准：一级鲜度≤15mgmg/100g ，二级鲜度≤20mgmg/100g ，变质肉＞20mgmg/100g 结果计算与分析：试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算：12V -V c X=100m 5/100⨯⨯⨯⨯（）14 式中：X ：试样中挥发性盐基氮的含量，单位为mg/100gV1：测定用样液消耗盐酸标准溶液体积，单位为mLV2：试剂空白消耗盐酸标准溶液体积，单位为mLc ：盐酸标准溶液的实际浓度，单位为mol/L14：与1.00mL 盐酸标准滴定溶液（c （HCl ）=1.000mol/L ）相当的氮的质量，单位为mg m ：试样质量，单位为g计算结果保留三位有效数字。
挥发性盐基氮(TVB-N)含量的测定
挥发性盐基氮（VBN）测定方法每次每组的样品溶液都需要进行测定，并记录数据。
(企业标准)一、原理：利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。
二、仪器与器皿：1、实验室用样品粉碎机或研钵2、分析天平：感量0.001g3、凯氏蒸馏装置：半微量水蒸汽蒸馏式4、振荡机5、锥形瓶：150ml、250mL具塞6、容量瓶：100mL、1000mL7、滴定管：酸式10mL三、试剂：1、0.lmol／L盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸8.3mL，用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液：用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于98mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液；化学纯氧化镁1.0g溶于99mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定：1、称取1～5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水100mL，振荡摇匀30min 后静置，上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL%的氧化镁溶液，小心提起玻璃塞使流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏10min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算：1、计算见下式：X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100式中：X1：样品挥发性盐基氮的含量，mg/100g；V1：滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL；V2：滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL；C1：盐酸标准溶液浓度，mol/L；M1：试样重量，g；V’：试样分解液蒸馏用体积，mL；V ：样液总体积，mL；14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量，mg。
挥发性盐基氮的测定(TVB-N)
挥发性盐基氮的测定(TVB-N)
一、原理:蛋白质分解时，氨基酸脱氨基生成氨，氨基酸脱羧基生成胺，氨与胺在碱液中被蒸发出来，用硼酸吸收，用标准盐酸反滴定，测出其含量。
操作步骤：称取5-10g样品于250ml具塞三角瓶内，准确加入100.00ml水，振荡30min，过滤，取虑液10.00ml，按粗蛋白蒸馏操作，但加入的碱为氧化镁溶液（10g/L、1%）5-8ml。
然后用HCL滴定，滴定终点为灰红色。
二、试剂和仪器：1％氧化镁、2％硼酸溶液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.2％甲基红乙醇溶液1份与0.2％溴甲酚绿乙醇溶液5份混合、0.01N盐酸标准溶液；半微量定氮器、微量滴定管：最小分度
0.01ml。
四、计算：挥发性盐基氮（TVB－N）（mg／100g）＝｛（V1－V0）× C× 14／〔M ×（10/100）〕｝×100 。
式中：TVB-N── 挥发性盐基氮，mg／100g；V1──被测样液消耗盐酸标准溶液的体积，ml；V0──试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积，ml；C──盐酸标准溶液的当量浓度；M──样品重量，g；14── 1N盐酸标准溶液1ml相当氮的毫克数。
五、实例：鱼粉样品8.6706g，VHCL=0.0200mol/L、V=3.93ml、V0=0.015ml. VBN={0.0200*(3.93-0.015)*14/（8.6706*10/100）}*100=126.42mg/100g。
应用：新鲜度好的鱼粉VBN<100mg/100g（40-80），新鲜度差的鱼粉VBN>150mg/100g （180-350）。
挥发性盐基氮
挥发性盐基态氮的测定VBN---参照GB/T 5009.44-20031 原理挥发性盐基态氮，英文名称：V olatile Basic Nitrogen，简称：VBN，是指蛋白质因微生物滋长或本身酵素（酶）作用，使其蛋白质分解成较低分子量具有挥发性的氨、二甲胺、三甲基胺等物质，因此根据挥发性物质含量的多寡，可判断出蛋白质的变性程度。
将样品用水萃取，澄清过滤后，放入蒸馏仪中，挥发性盐基态氮在氧化镁的沸点下，被释放出来，用硼酸液吸收，再用盐酸滴定，换算成挥发性盐基态氮的含量。
2 试剂2.1 氧化镁混悬液(10g/L): 称取 1.0g氧化镁，加100mL水，振摇成混悬液。
2.2 硼酸吸收液(20g/L)。
2.3盐酸[c(HCl = 0.010 mol/L」或硫酸[c(1/2H2SO4)=0.010mol/L〕的标准滴定溶液。
（临用新配）2.4 混合指示剂：0.1%甲基红: 0.1%亚甲基蓝= 2:1 < V/V >2份甲基红0.1％乙醇（95%）溶液，与1份亚甲基蓝0.1％乙醇（95%）溶液混合，保存于棕色瓶中。
在阴凉处保存期为三个月。
3 仪器3.1半微量定氮器。
3.2微量滴定管:最小分度0.01mL.4 分析步骤4.1 试样处理称取约10.0g样品，置于150mL烧杯中，加100 mL水，磁力搅拌30min 后，静置，过滤。
4.2 蒸馏滴定将盛有25mL硼酸吸收液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插人吸收液的液面下。
准确吸取 5.0mL 上述试样滤液置于消化管内，加5mL氧化镁混悬液(10g/L)后，迅速放入蒸馏仪中，进行蒸馏。
吸收液用盐酸标准滴定溶液(0.010mol/L) 滴定，颜色由蓝绿色变至灰红色为终点。
同时做试剂空白试验5 结果计算试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算。
式中：X —试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克(mg/l00g);V1—测定用样液消耗盐酸标准溶液体积，单位为毫升(mL);V2—试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升(mL);c —盐酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升(mol/L);14 —与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HC1)=1.000mol/L〕相当的氮的质量，单位为毫克(mg);m —试样质量，单位为克(g)。
挥发性盐基氮检测作业指导书模板
挥发性盐基氮检测作业指导书挥发性盐基氮检测作业指导书【微量扩散法】1.目的为规范肉类新鲜度检测岗位操作和确保检测结果的准确性和一致性。
2.适用范围本手册适用于化验员对肉类TVB-N的测定。
3.职责检验人员负责对肉类TVB-N的检测，并根据检验结果进行判定。
4.工作程序4.1.原理肉类TVB—N原理：挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
挥发性含氮物质可在37 ℃碱性溶液（饱和碳酸钾溶液）中释出，挥发后吸收于吸收液（2%硼酸）中，用标准酸滴定，计算含量。
4.2.使用试剂4.2.1.饱和碳酸钾溶液称取50g碳酸钾，加 50mL 水，搅拌助溶、过滤，使用上清液。
4.2.2.水溶性胶称取 10g 阿拉伯胶，加 10mL 水，再加 5mL 甘油及 5g无水碳酸钠（或无水碳酸钾），研匀。
4.2.3.硼酸吸收液硼酸(20g/L)溶液。
用精确到0.01g的电子天平准确称取1.00g的硼酸,用50 mL 的移液管准确移取50 mL的蒸馏水,配制成20g/L的硼酸溶液.4.2.4.盐酸 [c(HCL)=0.001mol/L] 的标准滴定溶液。
参照GB/T601-A. 基准试剂（无水Na2CO3）称取在270～300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水Na2CO3: 5.4g加入500 mol的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成0.1 mol/L的Na2CO3溶液;再取10 ml 浓度为0.1 mol/L Na2CO3溶液至1000 ml的容量瓶中, 加入蒸馏水定容,配制成0.001 mol/L碳酸钠溶液,待用.B. 0.001 mol/L的盐酸溶液的配制取36%的盐酸8.4mL至100mL的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成约0.1 mol/L 的盐酸。
再取10ml浓度为0.1 mol/L mol的盐酸至1000 ml的容量瓶，加入蒸馏水定容，配制成约0.001 mol/L的盐酸溶液。
挥发性盐基氮检测方法
1硼酸吸收液（20g/L ）：称取硼酸20g于1000mL烧杯中，量取400mL蒸馏水于烧杯中溶解硼酸，将溶液转移至1000mL容量瓶中，多次清洗烧杯后转移至容量瓶中，定容至1000mL，混匀后倒入广口瓶中盖紧瓶塞，贴上标签（名称、浓度、日期、配置人）备用。
2 甲基红-乙醇指示剂(2g/L)：用分析天平称取0.2g甲基红于100mL烧杯中，使用95%乙醇多次溶解试剂，每次将已溶解的部分转入容量瓶中，最后用95%乙醇定容。
将容量瓶中的溶液转移至滴定瓶中。
3 次甲基蓝指示剂（1g/L）：用分析天平称取0.1g次甲基蓝于100mL烧杯中，使用95%乙醇多次溶解试剂，每次将已溶解的部分转入容量瓶中，最后用95%乙醇定容。
将容量瓶中的溶液转移至滴定瓶中。
4 混合指示剂：临用时，将两种指示剂按1:1混合一定数量，装于滴定瓶中，保质期两个月。
5 饱和碳酸钾溶液：称取50g碳酸钾固体粉末于烧杯中，加50mL蒸馏水使其溶解，将溶液稍稍加热助溶后，将上清液转入试剂瓶中，备用。
6 水溶性胶：称取10g阿拉伯胶，加10mL水，再加5mL甘油及5g无水碳酸钾（或无水碳酸钠）于烧杯中，玻璃棒搅拌混匀。
7盐酸标准滴定溶液（0.1moL/L）：1 配置：量取9mL盐酸，注入约500mL水中，摇匀，继续加水定容到1000mL。
2 标定：将工作基准试剂无水碳酸钠于270～300℃高温马弗炉中灼烧至恒重，称取0.2g恒重的基准试剂，溶于50mL水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示剂，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
同时做空白试验。
3 计算：盐酸标准滴定溶液的浓度c(HCl)：c(HCl)=m*1000/[(V1-V2)M]式中：m——无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为g；V1——盐酸溶液的体积的数值，单位为mL；V2——空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为mL；M——无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为g/mol,M(1/2Na2CO3)=52.9944.8 盐酸标准滴定溶液（0.01moL/L）：用移液管准确取50mL 0.1mol/L 盐酸标准溶液于500mL容量瓶中，定容至刻度，做好标签，备用。
水产品化学指标的检测—挥发性盐基氮的测定
二、试剂和仪器 1.试剂 ①氧化镁混悬液 （1%）
②2%硼酸溶液（吸收液）
③三氯乙酸溶液(20g/L) ④盐酸标准滴定溶液(0.1000 mol/L)或硫酸标准滴定溶液 (0.1000 mol/L):按照GB/T601制备。 ⑤0.0100mol/L盐酸标准溶液或0.0100mol/L硫酸标准溶液。 临用前用④配制。
式中： X ——样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100g V1——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mL V2——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mL c——盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度，mol/L m——样品质量，g 14——1N盐酸或硫酸标准溶液1mL相当氮的毫克数
挥发性盐基氮的测定 ——半微量定氮法
称取试样10g,于蒸馏管内,加入75mL水,振摇,使试样在样 液中分散均匀,浸渍30min。
2. 仪器设定
① 标准溶液使用盐酸标准滴定溶液(0.1000mol/L)或硫酸标准滴定溶 液(0.1000mol/L)。
② 带自动添加试剂、自动排废功能的自动定氮仪,关闭自动排废、自 动加碱和自动加水功能,设定加碱、加水体积为0mL。
③ 硼酸接收液加入设定为30mL。
2.仪器设定
④ 蒸馏设定:设定蒸馏时间180s或蒸馏体积 200mL,以先到者为准。
⑤ 滴定终点设定:采用自动电位滴定方式判 断终点的定氮仪,设定滴定终点pH =4.65。 采用颜色方式判断终点的定氮仪,使用混 合指示液,30mL的硼酸接收液滴加10滴混 合指示液。
• 滤液应及时使用,不能及时使用的滤液置冰箱 内0 ℃~4 ℃冷藏备用。
三、分析步骤
2.加样 将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿中央内室加
入1mL硼酸吸收液及1滴混合指示液，溶液呈红 紫色。 在皿外室一侧加入1mL的样液，另一侧加入1mL 饱和碳酸钾溶液，注意勿使两液接触，立即盖好.
海能仪器：挥发性盐基氮含量的测定(凯氏定氮法)
1 前言 挥发性盐基氮多见于水产品等肉类中，它是指腐败过程中，由于酶和细菌的作用使蛋白 质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质具有挥发性，使用高氯酸溶液浸提，在 碱性溶液中蒸出后，用硼酸吸收液吸收，再以标准滴定酸溶液滴定计算含量。
2
பைடு நூலகம்实验部分
2.1 仪器 Hanon K9840 半自动凯氏定氮仪 均质机 离心机 微量酸式滴定管：精确到 0.01ml 2.2 试剂 高氯酸溶液（0.6mol/L）：取 50ml 高氯酸加水定容至 1000ml 氢氧化钠溶液（30g/L）：称取 30g 氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释到 1000ml 盐酸标准溶液 （0.01mol/L） ： 吸取浓盐酸 0.85ml， 定容至 1000ml， 摇匀。 并按 GB/T 5009.12003 附录 B 的方法进行标定。 硼酸吸收液（30g/L）：称取硼酸 30g，溶于 1000ml 水中。按 10:1 比例加入混合指示剂 硅油消泡剂 酚酞指示剂 混合指示剂：将一份 2g/L 甲基红乙醇溶液与一份 1g/L 次甲基蓝乙醇溶液临用时混合 2.3 实验步骤 2.3.1 样品处理 鱼，去鳞，去皮，沿背脊取肌肉；虾，去头，去壳，取可食肌肉部分；蟹，甲鱼等（其 他水产品）取可食部分；将样品切碎备用。 2.3.2 样品制备 称取上述处理好的试样 10g（精确到 0.01g）于均质杯中，再加入 90ml 高氯酸溶液，均质 2min ，用滤纸过滤或离心分离。准确移取 5.0ml 滤液于消化管中，分别加入 1-2 滴酚酞指示 剂，1-2 滴硅油防泡剂。并用 5.0ml 高氯酸溶液做空白试验。
其中： X-----样品中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）； V-----样品滤液消耗的标准滴定酸的体积，单位为毫升（ml）； V0-----空白样品消耗的标准滴定酸的体积，单位为毫升（ml）； C-----盐酸标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； 14-----与 1.00ml 盐酸标准滴定溶液（1.00mol/L）相当的氮的质量，单位为毫克（mg）； m------取样质量，单位为克（g）。 计算结果保留 3 位有效数字。