襄樊农贸市场瘦肉精克伦特罗的检测1
猪肉中克伦特罗的检测
猪肉中克伦特罗的检测作者：暂无来源：《食品安全导刊》 2011年第5期□ 莱伯泰科有限公司供稿盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，猪食用该物质后可在代谢过程中促进体内蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，从而提高猪肉的瘦肉率，因此其被称为“瘦肉精”。
瘦肉精由于使用量大、使用时间长，加之在猪体内代谢慢，所以其在猪体内的残留量很大。
如果这些残留的瘦肉精通过食物链进入人体，便可导致人体食物中毒，因此一直被禁用。
然而一些养猪户不顾相关部门的规定，在饲料中掺入大量瘦肉精，视人们的食用安全而不顾，严重扰乱了肉类食品市场的秩序，给人们的日常生活带来很大影响。
在这种情境之下，如何采用科学快速的方法对猪肉中的瘦肉精进行检测，实现有效监管成为亟待解决的问题。
对于猪肉中克伦特罗的检测而言，样品前处理显得尤为重要。
为此，本文介绍了一种快速准确的检测方案，该方案使用La bTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大地简化了实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确、样品测定平行性好、回收率高。
仪器与试剂仪器：LabTechPrepElite-VS全自动固相萃取-定量浓缩仪，LabTechLC600二元梯度高效液相色谱系统；试剂：乙酸乙酯、10%碳酸钠溶液、0.1mol/L的盐酸溶液、2.5mol/L氢氧化钠溶液、甲醇（色谱级）、4%氨水甲醇、去离子水。
实验方法样品前处理1.提取方法：将50g猪肉平均分成10份，准确进行称重。
取其中5份加入15mL乙酸乙酯、3mL10%碳酸钠溶液置于50mL离心管中，10000rpm下均质2min，6000rpm下离心2min，将上清液转入另一离心管中。
用15mL乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。
向乙酸乙酯提取液中加入5mL、0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋混合1min，然后在6000rpm下离心1min，收集下层水相。
瘦肉精的检测步骤
瘦肉精快速检测卡操作步骤一、【检测原理】本试纸采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。
试剂含有被预先固定于膜上检测带（T）的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。
检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。
检测限为3ng/ml（3ppb）。
二、【样品制备】肉：装入大约4克碎的肉样本（肉泥）于离心管中（酱猪牛肉加2ml水或PBS），盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。
如有明显黄色浑浊请离心（3000rpm,5min），取上清检测。
如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min)，取上清检测。
三、【操作步骤】1.在进行测试前先仔细阅读使用说明书，使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。
2.从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。
3.吸取待检样品溶液，缓慢滴加80~100μl(约2~3滴）于加样孔中，加样后开始计时。
4.在5分钟内读取结果，超过5分钟的结果判读无效。
四、【结果判定】阳性：位置C显示出红色条带，位置T无条带或颜色非常模糊时判为阳性。
阴性：位置C显示出红色条带，位置T同时出现红色条带时，判为阴性。
无效：位置C不显示出红色条带，则无论位置T显示出红色条带与否，该试纸卡均判为无效。
【贮存及有效期】冷藏，忌冷冻，有效期12个月。
【注意事项】1.请按照操作步骤进行测试，操作时请勿触摸试纸显示区。
2.如购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请到购买处更换。
3.本品为一次性产品，请勿重复使用。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
5.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
6.由于样品（尿和饲料）的差异，有的检测线可能偏淡或偏暗，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
7.若需直接检测标准品，请用PBS或阴性样品配制。
猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法
猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。
关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法1 盐酸克伦特罗的性质盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃～176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。
20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。
80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。
但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。
2 危害性2.1 对猪的影响在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。
后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。
2.2 对人的影响人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。
3 国内外对盐酸克伦特罗的禁用规定由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解,促进蛋白质合成,实现动物营养再分配,提高胴体瘦肉率,加快猪的生长等作用,盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广,从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生,严重的甚至导致了死亡。
就国内而言,自1998年以来,每年都有数起类似中毒事件发生。
今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。
出口猪肉中盐酸克伦特罗的检测
出口猪肉中盐酸克伦特罗的检测作者：吕鹏侯俊才田丰来源：《中国科技博览》2013年第03期【中图分类号】TS201.61 引言克伦特罗中文名为瘦肉精，学名盐酸克伦特罗，是一种肾上腺类神经兴奋剂。
克伦特罗能激动β2-受体，对心脏有兴奋作用，对支气管平滑肌有较强而持久的扩张作用。
猪食用盐酸克伦特罗后在代谢过程中能够促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高了猪肉的瘦肉率，但使用剂量是人用药剂量的10倍以上。
通过食物盐酸克伦特罗被摄入人体，就在人体慢慢积累，直至中毒。
如果一次摄入量过大，就会产生心悸，面颈、四肢肌肉颤动，有手抖甚至不能站立，头晕，乏力等中毒现象；如果运动员食用含盐酸克伦特罗的肉类及肉制品，尿检呈阳性而被取消成绩或禁赛的事例。
不少企业和个人因瘦肉精事件蒙受巨大损失。
本文应用衍生化技术和气相色谱质谱联用仪（GC/MS）检测及监测肉中盐酸克伦特罗的定性定量方法，为食品安全提供了可靠依据。
2 实验部分2.1 试剂和仪器0.05mol/L盐酸，甲醇，乙酸乙酯，正己烷，乙腈，甲苯（色谱纯），5%氨水甲醇溶液，10%碳酸钠溶液，乙腈饱和的正己烷溶液，N，O-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺（BSTFA），盐酸克伦特罗标准品强，阳离子交换柱（LC-SCX）3mL，500mg。
电子天平：感量0.0001g、 50ml离心管、10ml带旋塞玻璃试管、氮吹仪、旋转蒸发仪、固相萃取装置、恒温干燥箱、均质器、涡旋振荡器、离心机；气相色谱/质谱联用仪（岛津GCMS-QP2010-Plus），EI源，电子能量：７０eV；电子倍增器电压：高于调谐电压200V；色谱柱：DB-5MS毛细管柱（30m×0.22mm×0.25μm）；进样口温度280℃；离子源温度230℃；接口温度280℃；载气流量：高纯He，1mL/min；无分流进样，进样量1μL；温度梯度：120℃保持3min然后以10℃/min升到230℃，保持4min ，再以30℃/min升到280℃保持3min。
瘦肉精快检
一．项目名称瘦肉精(盐酸克仑特罗)快速检测卡——肉及内脏样本检测二．简要说明1.产品概述:本产品是一种只需要简单仪器设备的快速检测卡，对肉及内脏（特别是瘦肉、肝脏、肺脏和肾脏）样本中的瘦肉精（盐酸克仑特罗）进行检测，肉及内脏样本渗出液的检测限为3μg/L。
2.检测原理:应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的瘦肉精与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上瘦肉精－BSA偶联物的结合。
如果样本渗出液中瘦肉精含量大于3μg/L，检测线不显颜色，结果为阳性。
反之，检测线显色，结果为阴性。
3.试剂仪器：检验样本肉及内脏样本，试剂组成瘦肉精快速检测卡（40块），展开液，一次性塑料吸管，一次性塑料手套，5ml离心管4.其他设施:1.2~1.5米宽的实验台，水浴锅，插线板。
5.快速检测：检验样本的前期处理→密封装入离心管→90℃加热10~15min(推荐方法水浴)→冷却样本渗出液→滴加2滴至检验卡→30s后滴加展开液1~2滴→5min后观察并对照说明书得出结果备注:质控C线显色，检测T线出现红色条带为阴性；质控C线显色，检测T线不出现红色条带为阳性。
质控C线不显色,说明不正确的操作过程或检测卡失效。
总时长2h三．预期效果该产品能快速筛查出肉及内脏样本中的瘦肉精(注意:若要得到较为准确的结果，尚需使用液质联用法或气质联用法等确证方法)四．注意事项1.检测卡在室温下一次性使用。
检测卡从铝箔取出后，应在半小时内使用。
检测时避免阳光直射和电风扇直吹。
2.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
3.由于肉样的差异，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
液质联用法或气质联用法是瘦肉精检测的确证方法。
5.标本收集肉及内脏样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。
若不能及时检测，样本在2-8℃冷藏可保存24小时，-20℃冷冻保存1周，冷冻时忌反复冻融。
ProRapiTTM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡 说明书
R-protagenTM0507 Page 1 of 6ProRapiT TM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡使用说明书(TM0507 For Cat. No. FS0002)产品明细产品名称包装Cat. No.ProRapiT TM Clenbuterol Rapid Test 40 assays FS0002产品概述盐酸克伦特罗（Clenbuterol, CLE）是一种肾上腺受体激动剂，俗称瘦肉精。
因该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
食用饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所生产的禽畜产品后，残留的盐酸克伦特罗可对消费者的健康构成极大危害，由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在多个国家均有报道，牲畜产品中盐酸克伦特罗残留已成为社会各界关注的公众问题。
因此，世界许多国家禁止在饲料中使用克伦特罗来增加动物的瘦肉率。
R‐Protagen Company Tel:512‐62956169 Fax:512‐62956180‐832 www.r‐ email:sales@r‐FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR HUMAN OR DIAGNOSTIC USE.R-Protagen克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡，系采用免疫胶体金技术，能够快速、半定量、特异的检测尿液、组织样品中的克伦特罗，可通过肉眼直接判读结果，检出定量值为3ppb（3ng/ml），且检测结果精确，与其它Beta受体激动剂等无交叉。
适用于现场、快速、大量样本的筛查，检测成本低，适合基层和非专业人士及家庭使用。
检测原理R-Protagen盐酸克伦特罗快速检测试纸卡采用竞争抑制免疫层析的原理设计，当样本中含有克伦特罗时，待测物将和金标垫上的金标克伦特罗抗体结合并一同向上层析迁移，到达固定有抗原的检测线（T）时，抗原将和样本中的克伦特罗竞争结合金标克伦特罗抗体上有限的抗原结合位点。
动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留的检测
阴性 ： Ｃ线条显色， Ｔ线条肉眼可见， 无论颜色深浅均判
人（ 女性） 经口Ｔ Ｌ （ Ｄ ｏ 最低中毒剂量）４６０ ｇｋ 。小鼠静 ： ０ ／ｇ ｎ 脉 Ｌ Ｓ（ Ｄ ０半数致死剂量） ２ ６０ｖ ／ｇ ：７ ０ ｇｋ 。所 以盐酸克伦特 罗早期仅在医学上用于急救和肺科病（ 主要是平喘） 。因副 作用较大已被禁用。 ２ 样品快速判断方法 看该猪肉是否具有脂肪（ 猪油）如该猪肉在皮下就是瘦 ， 肉或仅有少量脂肪， 则该猪肉就存在含有“ 精” 瘦肉 的可能。 喂过“ 瘦肉精” 的瘦肉外观特别鲜红， 后臀较大， 纤维比 较疏松， 切成 ２ 指宽的猪肉比较软， ～３ 不能立于案， 瘦肉与 脂肪间有黄色液体流出， 脂肪特别薄； 而一般健康的瘦猪肉 是淡红色， 肉质弹性好， 瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
为阴性。
对高血压、 心脏病、 甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更
大， 严重的可导致死亡。
１１２ 预防方法 ： ．． 控制源头， 加强法规的宣传， 禁止在饲料
阳性 ： Ｃ线条显色， Ｔ线条不显色， 判为阳性。 无效 ： Ｃ线条不显色 ， 无论 Ｔ线条是否显色， 该试纸均
食 品 质 量 与 安 全
４ ｇ次， 次／ 儿童 ５ ０ ／ ３ 日； ｖ 岁以上 ５ ～２ ｇ次， 次／ ｇ Ｏ ｉ ｂ ／ ３ 日。
达到提高瘦 肉率的效果。它用量大、 使用的时间长、 代谢 慢， 所以在屠宰前到上市， 在猪体内的残留量都很大。这个
残留量通过食物进入人体， 就使人体渐渐地， 积蓄中毒。如 果一次摄入量过大， 就会产生异常生理反应的中毒现象， 因 此而被禁用。国内养猪户不顾农业部的规定， 为了使猪肉 不长肥膘， 在饲料中掺入瘦肉精。猪食用后在代谢过程中 促进蛋白质合成， 加速脂肪的转化和分解， 提高了猪肉的瘦
猪肉中克伦特罗的检测
猪肉中克伦特罗的检测作者：来源：《食品安全导刊》2011年第05期盐酸克伦特罗是一种β－兴奋剂，猪食用该物质后可在代谢过程中促进体内蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，从而提高猪肉的瘦肉率，因此其被称为“瘦肉精”。
瘦肉精由于使用量大、使用时间长，加之在猪体内代谢慢，所以其在猪体内的残留量很大。
如果这些残留的瘦肉精通过食物链进入人体，便可导致人体食物中毒，因此一直被禁用。
然而一些养猪户不顾相关部门的规定，在饲料中掺入大量瘦肉精，视人们的食用安全而不顾，严重扰乱了肉类食品市场的秩序，给人们的日常生活带来很大影响。
在这种情境之下，如何采用科学快速的方法对猪肉中的瘦肉精进行检测，实现有效监管成为亟待解决的问题。
对于猪肉中克伦特罗的检测而言，样品前处理显得尤为重要。
为此，本文介绍了一种快速准确的检测方案，该方案使用LabTech公司全自动固相萃取仪一定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取一洗脱液浓缩一溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大地简化了实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确、样品测定平行性好。
回收率高。
仪器与试剂仪器：LabTech PrepElite-VS全自动固相萃取一定量浓缩仪，LabTechLC600二元梯度高效液相色谱系统；试剂：乙酸乙酯，10％碳酸钠溶液、0.1 mol／L的盐酸溶液、2.5mol／L氢氧化钠溶液、甲醇(色谱级)、4％氨水甲醇、去离子水。
实验方法样品前处理1.提取方法：将50g猪肉平均分成10份，准确进行称重。
取其中5份加入15mL乙酸乙酯，3mL10％碳酸钠溶液置于50mL离心管中，10000rpmT均质2min，6000 rpm下离心2min，将上清液转入另一离心管中。
用15mL乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。
向乙酸乙酯提取液中加入5mL、0.1moI／L的盐酸溶液，涡旋混合1min，然后在6000rpmT离心lmin，收集下层水相。
瘦肉精的检测方法
瘦肉精的检测方法1 测定原理“瘦肉精”克仑特罗竞争酶标免疫检测方法快速测定的基础是抗原抗体反应。
酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体（第二抗体）。
加入兔抗克仑特罗特异性抗体（第一抗体）与第二抗体结合而被固定，洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物（酶标记抗原），标准液或样品中的游离抗原与酶标抗原竞争兔抗克仑特罗特异性抗体上有限的结合位点。
通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标抗原，加入酶基质（过氧化脲）和发色剂（四甲基联苯胺）并孵育，结合到板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的底物。
加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。
在单波长450 nm处测吸光度，吸收光强度与样品中的克仑特罗浓度成反比。
2 试剂盒的组成每个盒中（包括标准分析孔）材料如下：（1）1×96孔板（12排×8孔），包被有第二抗体（兔IgG抗体）；（2）6个标准液（300ul/瓶）为克仑特罗水溶液。
浓度分别为0 ng/kg、100 ng/kg、300 ng/kg、900 ng/kg、2700 ng/kg、8100 ng/kg；（3）1个克仑特罗过氧物酶标记物浓缩液12 ml（红色帽）；（4）1个克仑特罗抗体浓缩液12 ml（黑色帽）；（5）1个酶基质/发色剂11 ml（蓝色帽）；（6）1个反应停止液，1 mol/L硫酸14 ml（黄色帽）；（7）1个缓冲液25 ml，酶标记物及抗体浓缩液稀释用。
3 试验材料3.1 设备微孔板酶标仪（450 nm）、均质器、冷冻离心机、离心管（50 ml）、微量可调移液器（单道、八道）、RIDAC18柱、滤纸（0.45μm）。
3.2试剂甲醇（分析纯、100%）、50 mmol/LHCL、10 mmol/LHCL、50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、500 mol/L 磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、1 mol/LNaOH。
4 储存条件试剂盒保存于2-8℃，不要冷冻。
瘦肉精快速检测方法
既快速又精确目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室一般企业会采用自己检测与外部有资质的机构测试相结合，因为样品数量巨大，如果均外部测试一是费用非常高，二是送样、检测、获得结果的周期长，效率低，无法满足实际应用的需求，所以自检也是顺应企业高效节约的宗旨的，对自己用检测出值得怀疑的样本再送检测机构检测。
一."瘦肉精"快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。
人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。
目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。
研制的 HPSPR－6000 表面等离子共振生物分析仪用于盐酸克伦特罗快速检测，有效地克服了现有方法的缺点，其优点有：（ 1）盐酸克伦特罗的最低检出限约为1.0ppb，接近和达到了高效液相色谱和酶联免疫等现行的方法的检出限（0.05～1.0ppb）；（ 2）每个样品检测时间为 10min，与目前常规方法最低需要 2～3h 相比，检测时间缩短 10 倍以上；（ 3）样品前处理简单、免标记；（ 4）能够实时监控相互作用分子的结合、解离等动力学信息。
二．快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb（μg/Kg，ng/g）的瘦肉精就能被测出。
北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检出限可达到1ppb，全程只需十几分钟。
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析LINK链接猪肉是否含瘦肉精的迅速推断办法看该猪肉的脂肪(猪油)，如该猪肉在皮下就是瘦肉或仅有少量脂肪，则该猪肉就可能含有“瘦肉精(CLB)”。
含有“瘦肉精”的瘦肉外观特殊鲜红，纤维比较疏松，切成二三指宽的猪肉比较软，不能立于案，瘦肉与脂肪间有黄色液体流出，脂肪特殊薄。
而普通健康的瘦猪肉是淡红色，肉质弹性好，瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
购买时一定要看清该猪肉是否盖有检疫印章和检疫合格证实。
一、样品迅速检测办法 1.胶体金检测卡法(1)特点①操作容易、检测速度快，尿样检测时光约5min，组织约10min。
②无需其他仪器设备。
③样品量需求少。
④适用于大量样本的迅速步筛。
⑤结果推断容易明白。
(2)推断结果①阴性:C线条显色，T线条肉眼可见，无论色彩深浅均判为阴性。
②阳性:C线条显色，T线条不显色，判为阳性。
③无效:C线条不显色，无论T线条是否显色，该试纸均判为无效。
(3)检测对象猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品。
(4)适用单位生殖养殖场、屠宰场，农业、贸易等主管部门。
2.酶联免疫(ELISA)法(1)检测原理测定的基础是抗原抗体反应。
微孔板包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体。
克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标志物、标准或试样溶液。
克伦特罗与竞争性酶标志物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体衔接的克伦特罗酶标志物在洗涤步骤中除去。
将底物(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入孔中孵育，结合的标志酶将无色的发色剂转化为蓝色产物。
加入反应停止液后使色彩由蓝色改变为黄色。
在450nm处测量吸光度值，吸光度壁纸与克伦特罗浓度的自然对数成反比。
(2)试剂磷酸二氢钠、高氯酸、异丙醇、乙酸乙酯、0.1mol/L高氯酸溶液、1mol/L氢氧化钠溶液、pH=6的0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、针孔式微孔过滤膜(0.45μm，水相)、克伦特罗酶联免疫试剂盒、96孔板(12调×8孔)包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体、克伦特罗系列标准液(最少5倍比稀释第1页共4页。
两种瘦肉精之快速检测方法
瘦肉精的两种快速检测方法瘦肉精之快速检测方法一：胶体金检测卡法产品特点：1、操作简单、检测速度快，尿样检测时间约5分钟，组织约10分钟；2、无需其他仪器设备；3、样本量需求少；4、适用于大量样本的快速初步筛；5、结果判断简单明了。
结果判断：阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
检测对象：猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品适用单位：生猪养殖场、屠宰厂、农业、贸易等主管部门保质期：18个月瘦肉精之快速检测方法二：酶联免疫(ELISA)法：一、方案特点：A、检测原理：测定的基础是抗原抗体反应。
微孔板上包被有针对兔IgG（Clenbuterol抗体）的羊抗体，含有克伦特罗抗原的样品或标准品与酶标记物被加入到小孔中，经过孵育及洗涤步骤后，游离的抗原与抗原酶标记物竞争抗体结合位点，没有结合的抗原酶标记物在清洗步骤中被除去，将显色液加入到孔中并且孵育，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。
加入反应停止液后使颜色由蓝色转为黄色。
在450nm处测量，吸光强度与样品的克伦特罗浓度成反比。
B、操作时间： 30分钟左右C、检测下限： 0.1ppb（微克/公斤）D、检测对象：猪尿样和血清、饲料、肝脏等组织。
二、检测需要仪器设备配备方案：三、天迈生物生长激素类兽药酶联试剂盒产品系列：编码品名规格灵敏度SJ4001 瘦肉精(盐酸克伦特罗)检测试剂96孔/盒0.05ppb 盒SJ4002 莱克多巴胺检测试剂盒96孔/盒0.2ppb SJ4003 沙丁胺醇检测试剂盒96孔/盒0.2ppb。
瘦肉精检测原理及操作步骤(精)
一、测定原理“瘦肉精”克仑特罗竞争酶标免疫检测方法快速测定的基础是抗原抗体反应。
酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体（第二抗体）。
加入兔抗克仑特罗特异性抗体（第一抗体）与第二抗体结合而被固定，洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物（酶标记抗原），标准液或样品中的游离抗原与酶标抗原竞争兔抗克仑特罗特异性抗体上有限的结合位点。
通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标抗原，加入酶基质（过氧化脲）和发色剂（四甲基联苯胺）并孵育，结合到板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的底物。
加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。
在单波长450 nm处测吸光度，吸收光强度与样品中的克仑特罗浓度成反比。
二、试剂盒的组成每个盒中（包括标准分析孔）材料如下：（1）1×96孔板（12排×8孔），包被有第二抗体（兔IgG抗体）；（2）6个标准液（300ul/瓶）为克仑特罗水溶液。
浓度分别为0 ng/kg、100 ng/kg、300 ng/kg、900 ng/kg、2700 ng/kg、8100 ng/kg；（3）1个克仑特罗过氧物酶标记物浓缩液12 ml（红色帽）；（4）1个克仑特罗抗体浓缩液12 ml（黑色帽）；（5）1个酶基质/发色剂11 ml（蓝色帽）；（6）1个反应停止液，1 mol/L硫酸14 ml （黄色帽）；（7）1个缓冲液25 ml，酶标记物及抗体浓缩液稀释用。
三、试验材料1、设备微孔板酶标仪（450 nm）、均质器、冷冻离心机、离心管（50 ml）、微量可调移液器（单道、八道）、RIDAC18柱、滤纸（0.45μm）。
2、试剂甲醇（分析纯、100%）、50 mmol/LHCL、10 mmol/LHCL、50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、500 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、1 mol/LNaOH。
四、储存条件试剂盒保存于2-8℃，不要冷冻。
不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与干燥剂一起重新密封。
盐酸克伦罗(瘦肉精)ELISA试剂盒质量综合评价
中圈分 类号 ：８ １ ￥ ５． ４
文献 标识码 ： Ｂ
文章编 号 ：０６ ９７ ２０ ）６００ － ３ １０ ０ ｛０６ ０－ ０６ ０ －
盐酸克伦特罗是人工合成的肾上腺索 Ｂ 受 一
１ ． ４仪 器 高速 冷冻 离心机 ＳＧ Ａ ５ （ 格 ＩＭ ３Ｋ 西 码公 司）酶标仪 Ｍｕ ｉ ａ Ｋ （ ； ｌｓ ｎ Ｍ ３雷勃公司）Ｇ Ｚ ｔｋ ；Ｘ
型人工气候箱 （ 南京 同立实验仪器有限公 司）
２ 方 法
各项 均按试 剂盒操作 步骤进行试验 。 用酶标
仪测定吸光度值或浓度 。
４ ０ ０ ２湖 南农 业 大学 ， 南 长 沙 １０ ６；． 湖
４ ０２ ； １ １８
３湖 南省畜禽 水产 品质 量检 验检测 中心 ） ． 摘 要 ： 通过 对盐酸 克伦特 罗 Ｅ Ａ试 剂 盒的 综合评价 ， 讨 了盐 酸克伦 物 罗 Ｅ Ａ试 剂盒 的检 出限 与定 量限 、 ｕＳ 探 ｕＳ 准确 度 、 密度 、 精 灵敏度 与 Ｉ 加值 、 Ｃ 线性 范 围等指 标 ， 同时对检 测 温度 、 尿液 ｐ Ｈ值 的影响度 Ｅ Ａ 试剂 盒的假 阳性 ＵＳ
｛ 考 文献 ： － ｜
Ａｎ ｍａ ｕ ｒ ｉｎ ａ ｄ Ｈｅ ｌ １ ７ ，９： — ． ｉ ｌ Ｎ ｔ ｔ ｎ ａｔ ９ ４ ２ ４ ８ ｉｏ ｈ，
３ 添 Ｊ畜 】 究还不够 ， 而益生索在羊上的应用效果 的报道更 【】 钞 海 峰 ． 加 益 生 素 对 羔 羊 增 重 效 果 的影 响【 ． 禽 业， ２０ ， ） － ． ０ ４ ５： ９ （ ８
【】 Ｐｒｅ．．． ｅ ｔｅ ａ ｆｔｅ ａ ｔ ｉ ｉ ｔ ｙ 】 ２ ａｋｒ ＢＴ ｏ ｒ ｌ ｏ ｈ ｎｉ ｏ ｃ ｓ ｒ Ⅱ ． Ｒ ｈ ｈ ｈ ｆ ｂ ｔｓ ｏ
瘦肉精(盐酸克伦特罗)快速检测卡
猪瘟抗体快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书一、原理：本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪血清中的猪瘟抗体。
将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线（T）上，兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线（C）上，用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。
当血清加入加样孔内，由于层析的原理，血清开始沿纸条移动，当遇上干燥的金标抗原，将其溶解，并带着金标抗原继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。
如果样品中有猪瘟抗体存在时，会与玻璃纤维素上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原，在检测上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色线。
样品中的抗体越高，色线颜色越深，判定为阳性。
如果样品中没有猪瘟抗体，检测线（T）线上没有色带出现，判定为阴性。
样品和金标抗原继续往上移至质控线时，此处的兔抗猪瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合，在质控线（C）上形成一条紫红色线，证明本试纸有效。
整个试验仅需20分钟。
操作简便、快速、准确、灵敏度高，直观、结果容易判定。
二．产品组成：1、检测卡(1个)：由一特制的塑料检测卡将猪瘟抗体检测试纸条夹于卡内，卡面上设有加样孔和观察孔。
加样孔作为加入待检血清，观察孔内为试剂检测线（T），试剂质控线（C）。
一个检测试剂卡用一个铝箔袋包装，内装干燥剂。
2、吸样管1个；3、5份塑料手套；4、使用说明书一份。
三．操作方法：1．用1.5ml样品管，采血0.5~1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。
2．将检测卡平置于桌面上，用吸样管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。
在室温下反应20分钟判定结果。
（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测）四．结果判断：1．阳性：在检测线（T）处，质控线（C）处，各出现一条紫红色条带，判定为阳性；检测线（T）处条带色泽的深浅，依检测样品中猪瘟抗体效价的高低而变化，效价越高色带越深，反之越浅。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡说明书
盐酸克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡说明书【产品名称】产品名称：盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金法）英文名称：Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold)【产品简介】盐酸克伦特罗（瘦肉精主要成分）是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物，在动物可食性组织中蓄积，危害食用者的健康，我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。
本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留，检测过程只需20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。
【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；提取瓶（内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL，5瓶）；小勺（1个）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。
【使用方法】1、取一小块瘦肉，用刀切成碎肉，用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内，高度与瓶盖相平（约2.0g）。
2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内，盖紧瓶盖后振荡，使碎肉与提取液充分混匀，放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出，冷却至室温。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液，垂直滴加2-3滴于加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时5分钟，对照结果判断示意图判定检测结果，其他时间判定无效。
【结果判断】阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。
阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。
无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。
【注意事项】1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。
2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。
3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。
瘦肉精的检验及处置
瘦肉精的检验及处置近期有关人食用添加了“瘦肉精”的猪肉中毒事件频频发生。
“瘦肉精”一般指盐酸克伦特罗（ｃｌｅｎ－ｂｕｔｅｒｏｌ,ＣＬＢ）［１］,化学名称为２－［（叔丁氨基）甲基］－４－氨基－３．５－二氯苯甲醇盐酸盐,又称氨酵素、克喘素。
为白色粉末,无臭,味苦,溶于水和乙醇。
性质稳定,是人工合成的β－肾上腺素能受体兴奋剂之一,是一种强效激动剂,选择性的作用于肾上腺素β２受体上激活苷酸环化酶（ＣＡＭＰ）,使环磷腺苷增加,加强脂肪分解,促进蛋白质合成。
是用于治疗呼吸系统支气管哮喘、肺气肿等疾病,平息气喘的药物。
而将一定量的盐酸克伦特罗添加到饲料中,可明显促进动物生长率和饲料转化率,饲料中添加３～５ｍｇ／ｋｇ,就可使猪的瘦肉率提高９．７％,脂肪下降１４．１％［２］。
“瘦肉精”因半衰期长,在体内代谢慢,人体对其耐受量非常小。
然而在生产上一些不法生产者,在育肥猪饲料中大量的添加（往往是治疗量的１０倍以上）至屠宰,使得“瘦肉精”在肥猪体内大量蓄积残留,又因其化学结构比较稳定,需加热至２００℃才会分解毁坏。
所以常规烹饪方法对残留在肉食品中的“瘦肉精”起不到毁坏作用,当人类食用后会发生中毒。
一般在食用含盐酸克伦特罗较高的动物组织（如眼睛、肝、肺、肾、骨髓等,肌肉中含量相对较低）后１５ｍｉｎ至６ｈ内出现症状,持续９０ｍｉｎ至６ｄ［３］,症状表现为心率加快,心悸。
中毒症状：心室早搏；面红,口渴,皮肤过敏红色丘疹,心情烦躁不安,失眠,手指震颤,足有沉感,严重时不能站立。
四肢、面颈部骨骼肌震颤,伴有疼痛,头痛,恶心,呕吐,胸闷。
交感神经效用亢进的患者更容易发生。
还能让人产生特别的兴奋,代谢紊乱,血液乳酸、丙酮酸升高；糖尿病人可能会引起酮中毒或酸中毒；严重者可能引起低钾血症,从而导致心律失常；支气管扩张作用明显减弱,作用持续时间缩短；长期食用可导致染色体畸变诱发恶性肿瘤。
故此,应加强对“瘦肉精”猪的兽医卫生检验工作,以保证人们对猪肉的食用安全。
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襄樊农贸市场瘦肉精克伦特罗的检测生物工程学院畜牧兽医专业1001班学生：张伟黄斌
摘要：新闻曝光的济源双汇食品有限公司位于河南省济源市，是河南双汇集团下属的分公司，主要以生猪屠宰加工为主，有自己的连锁店和加盟店。
据销售人员介绍，他们店里销售的猪肉基本上都是济源双汇公司屠宰加工的，严格按照“十八道检验”正规生产，产品质量可靠。
然而，按照双汇公司的规定，十八道检测并不包括”瘦肉精“的检测。
风波一起，双汇股价午后一路下行至跌停。
消息传出后，广州多家卖场紧急排查，部分商场紧急下架相关商品。
“瘦肉精“的问题屡禁不止，其背后又隐藏着怎样的利益链条？又该如何监管？在老师的带领下我们对附近农贸市场做了瘦肉精克伦特罗的抽样检测。
一、材料的准备
我们走访附近的农贸市场，在檀溪农贸市场买了两份肉，在新城农贸市场买了一份肉，在四季青农贸市场也买了两份肉，分别做好了标签。
二、实验的材料
我们在学校的实验室中实验，老师给我们准备了克伦特罗快速检测卡离心管 0.01n盐酸振荡器研碗
三、实验的步骤
1.把样品剪碎去脂肪，用研碗碾碎
2.取1克样品于离心管，加2ml0.01n盐酸，震荡一分钟左右
3.以3000转速离心五分钟
4.取出检验卡，用专用滴液管滴入2滴到检测卡，5—8分钟后观察结果
5.用以上方法，分别把剩下的样品滴入检测卡观察现象
四、观察现象
五种抽样猪肉样品快速检测卡上的C /T两条线都出现了
五、结果
把观察的现象和检验卡上的说明书对比。
得出结论：五种检验卡都为阴性，说明五种抽样猪肉中都没含有克伦特罗这种物质。
注意事项；1.抽样猪肉不能太近，避免重复
2.碾碎每种猪肉后都要洗净各种使用过的器具
3.样品放进振荡器中应该对称
4.实验中要时刻保证样品标签的正确对应
六、小结与讨论
1.医学资料表明，食用含有瘦肉精的肉会使人产生恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状。
早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监察管理局就发布公告，明令禁止在饲料及动物饮用水中添加“瘦肉精“。
而今年来”瘦肉精“致人中毒事件还是有发生。
2.瘦肉精是一种非常廉价的药品，对于减少脂肪增加瘦肉具有很
好的作用。
瘦肉精让猪的单位经济价值提升不少，但是它的副作用也很大。
例如：莱克多巴胺克伦特罗等。
3.近年来国家对瘦肉精的问题也做出了许多对策。
市农业部门紧急开展瘦肉精百日整治行动，并印发【关于开展瘦肉精等违禁药物百日整治行动的通知】要求各区迅速行动并制定切实可行的工作方案以保证全市畜牧产品的安全。
4.根据本次对周边地区农贸市场瘦肉精的检测表明，周边地区并没有出现大量的“瘦肉精“猪肉。
但是我们也不可掉以轻心，食品安全不容忽视。
参考文献：李新宇杨文祥《中国动物保健》 2011 第1期 - 维普资讯网。