高速逆流色谱分离纯化九里香中的黄酮类化合物
中药有效成分抑菌机制研究
０科教前沿 ｏ
２１ 年 ０１
第５ 期
中药有效成分抑菌机制研究
师 伟 （ 宁师 范大 学 生命科 学 学院 辽 宁 辽
大连 １ ６ ２ ） ０ ９ １
【 摘 耍】 中药 因细茵很 少对其产生耐药性 ， 在现在临床治疗上被广泛应用。 中药抑 茵的基础 源于中药中起到抑 茼作用 的天然化舍物。 文 本 介 绍 了 中药 有 效 成 分 的 分 离方 法 ， 对 目前 广 泛 研 究 的 抑 茵 机 制 进 行 概 述 。 并 【 关键词】 中药 ； 离； 分 分 离 技 术
１１ 微 波 萃 取 技 术 ． 微 波 萃 取 是 利 用 微 波 能 来 提 高 萃 取 率 的一 种 最 新 发 展 起 来 的 新
混 合 ， 分 配 系 数 的 大 小 次 序 ， 依 次 洗脱 。 爱 一 等 应 用 高 速逆 流 色 按 被 彭
谱法分离纯化了九里香中的 ４种纯度较 高的黄酮类化合物 。
２ 中 药 抑 菌 机 制 研 究
技术 。 微波萃取技术在提取油脂类 化合物 、 色素类化合物 、 多糖类化合 ２１ 对菌体细胞壁和细胞膜完整 性的破坏 ． 物和黄酮类化合物等方面研究较多 。李星彩 用微 波萃取苦瓜 中黄 利 菌 体 细胞 壁 和 细 胞 膜完 整 性被 破 坏后 ，细 胞 内大 量 分 子 外 泄 ． 细 酮类化合物 ． 采用单 因素和正交试验 确定最佳 萃取工艺 ， 最终 黄酮类 胞壁的防御功能丧 失 ． 细胞膜本 身的运输作 用改变 ， 息跨 膜传递 的 信 化合物 的得率 为 ６４ ％。孟庚廷等利用微波萃取 甘蓝叶绿素 ， ． ４ 以影 响 作用受阻。可通过扫描电镜 和透射 电镜 观察细胞壁和细胞膜 的变化 。 因素进 行单 因素 试验。 通过 分析确定 了最佳 实验条件 ， 此法 与传统提 对 细 胞 壁 完 整 性 测 定 还 可 以 通 过 对 细 胞 外 碱 性 磷 酸 酶 的 活 性 测 定 完 取 方 法 相 比较 ， 素 的提 取 率 可 提 高 ２ ％左 右 。 叶绿 Ｏ 成。碱性磷酸酶存在于细胞壁和细胞膜之间 ， 正常细胞胞外不能检 测 到 ， 有 当 细 胞 壁 完 整 性 被 破 坏 后 ， 性磷 酸 酶 释放 ， 会 被 检 测 １ 对 只 碱 才 ７ １ 。 １２ 酶 法 提 取 技 术 ． 提 取 中药 过 程 中， 胞 内 的有 效 成 分 向 提取 介 质 扩 散 时 ， 须 克 服 细 胞 膜 完 整 性 测 定 可 以 通 过 测 培 养 液 中 大 分 子物 质含 量 变 化完 成 。 细 必 细 细 胞 壁 及 细 胞 间质 的阻 隔 。细 胞 壁 及 细 胞 间 质 主 要 成 分 为 纤 维 素 、 半 胞 膜 完 整 性 受 到 破 坏 后 ， 量 大 分 子 物 质 外 泄 ， 致 培 养 液 Ｏ 值 升 大 导 Ｄ 纤、 果胶等 物质 。 通过恰 当使用 酶类 使细胞壁及细胞 间质 降解 ， 破坏细 高。 胞 壁 的致 密 结 构 ， 小 有 效 成 分 扩 散 出 细 胞 的 阻 力 ， 而 提 高 提 取 率 。 ２２ 对菌体蛋白质合成的影响 减 从 ． 许 英 一 等 目 用 酶 法 从 紫 花 苜 蓿 籽 提 取 紫 花 苜 蓿 籽 油 ， 过 正 交 试 验 利 通 蛋 白质是生命的物质基 础， 它是与生命与各种形式的生命活动 紧 确 定 最 佳 提 油 参 数 ． 终 苜 蓿 籽 的 出 油 率 最 高 为 １．３ 最 １ ％。 李 慧 力 等 密联系在一起的物质 ． 白含量的增减 会影响生命活动的进行 。胞 内 ２ 蛋 利 用 酶 法 结 合 水 提 法 从 竹 叶 中提 取 总 黄 酮 ， 明 总 黄 酮 的 得 率 比直 接 蛋白含量由两个相反作用的过程控 制， 证 蛋白质合成和蛋 白质降解 。前 者 与 同 源 ｍＲ ＮＡ浓 度 、 译 起 始 速 率 、 有 核 糖 体 的 活性 等有 关 ； 者 翻 所 后 应 用 水 提 法 提 高 ０２ ＿ ％。 与降解过程的活性以及蛋白质对降解 作用 的敏感性有关 。Ｓ Ｓ Ｐ Ｇ Ｄ—Ａ Ｅ １３ 分子印迹复合膜 ． 分 子 印迹 技 术 源 于 人 们 对 抗 体 一 原 专 一 性 的认 识 ，利 用 具 有 分 电 泳 结 合 蛋 白分 析 软 件 ， 析 药 物 作 用 后 ， 一 蛋 白 和 总 蛋 白的 含 量 抗 分 单 子识别能力的聚合物材料来分离 、 筛选 、 纯化 化合 物的一种仿生技术 。 变 化 。 分 子 印 迹 膜 将 分 子 印 迹 技 术 与 膜 分 离 技 术 相 结 合 ，由于 其 高 选 择 性 ， ２３ 对遗传 物质 ＤＮ ． Ａ或 Ｒ Ａ的合成影响 Ｎ ＤＮ Ａ和 ＲＮ Ａ作 为遗传物质具有相对 的稳定性 ， 过指导蛋 白质 能 近年来被 广泛运用到 中药有效成分 的分离 ， 用于黄酮类， 多 多元 酚 类 ， 控制整个 生命体代 谢 ， 控制着 生命体 的生长 ， 发育 ， 遗传 ， 变异 生物碱类， 甾体类和香豆素类 的分离纯化 。张春静等 应用分子 印迹复 的合成 。 合 膜 技 术 成 功 分 离 纯 化 了 茶 多 酚 中 的 表 没 食 子 儿 茶 素 没 食 子 酸 酯 等生命 过程。当有药 物作 用时会影 响菌体 的 自我复制过程 ， 使菌体 的 （Ｇ Ｇ 。 实 验 采 用 多 空 的乙 酸 纤 维 膜 为 支 撑 物 ， 备 了 Ｅ Ｃ ＥＣ】 制 Ｇ Ｇ分 子 印 繁殖和生长受到抑制 。 同时也能影响遗 传物质对蛋 白质合成 的指导作 迹复合膜 ， 茶多 酚 甲醇溶 液透过 膜 １ ｈ 高效 液相色谱 测定透 过膜 的 用 ， ２， 最终使 菌体生长受抑制。实验一般应用 ４，一 二脒基一 一 ６ ２ 苯基吲哚 （ Ｐ ）染 色 法 。 Ａ Ｉ 一种 能 够 与 ＤＮ ＤＡ Ｉ ＤＰ是 Ａ和 Ｒ Ａ 强 力 结 合 的荧 光 染 Ｎ Ｅ Ｃ Ｇ Ｇ纯 度 达 到 ９ ％ 。 ３ 料． 应用荧 光显微 镜分别 在 ３ ４ ｍ和 ４０ ｍ波长下观察 Ｄ Ａ和 ＲＮ ６ｎ ０ｎ Ｎ Ａ １ 超 临 界 Ｃ 取 技 术 ． ４ Ｏ萃 超 临 界 流 体 是 指 超 临界 温 度 和 临 界压 力 状态 下 的高 密 度 流 体 。 在 的 荧 光 强 度 。 酸 的 含 量 越 高 ， 光 的 亮 度 越 强 。 核 荧 超 临界状 态下 ， 将超 临界流体 与待分离 的物 体接触 ， 其有选择性地 使 ３ 结 束 语 把极性大 小 、 沸点高 低和分子量 大小的成分依 次萃取 出来 ， 就可 以达 到 分 离 提 纯 的 目 的 。在 能作 为 超 临 界 流 体 的化 合 物 中 ， ２ 研 究 最 ＣＯ 是 中药在现代防治细菌性感染疾病方面发挥了巨大作用 。 中药有效 多 的一种 流体 ， 因其无 毒 、 不易燃烧 、 价廉等 特点 ， 中药有效成分 的 成分的提取为中药抑菌奠定了基础 ， 有效成分抑菌机制 的研究 为 日 在 对 分 离 方 面 已 经 得 到 广 泛 的应 用 ， 用 于 天 然 色 素 、 然 香 料 、 酮 类 化 后中药 的医药应用提供依据。 多 天 黄 合 物 和 酚 酸 类 物 质 的提 取 。苍 久 娜 等 等采 用 此 技 术 从 番 茄 皮 中提 取 了番茄红素 ． 通过单 因素实验和正交试验确定 了最佳条件为萃取压 力 【 考文献 】 参 ２ ＭＰ ， 取 时 间 ３ 萃 取 温 度 ４ ℃ ， Ｏ 流 量 ３ ｋ ／， 条 件 下 番 茄 ［ ］ 星彩． ６ ａ萃 ｈ， ０ Ｃ２ ０ ｇｈ 此 １李 微波萃取 苦瓜 中黄 酮类 化合物 的工 艺研究 ． 农业科学 ，０ ０３ ： 安徽 ２１， ８ １ ４ ２ １ ４ ３ ７— ７ ． １ １ 红 素 的 萃 取 产 量 为 每 百 克 ２ ．４ ｇ ６３ ｍ 。
离线二维高速逆流色谱分离制备湖北海棠叶中的黄酮化合物
离线二维高速逆流色谱分离制备湖北海棠叶中的黄酮化合物丁琼;任达兵;秦燕华;梁逸曾【摘要】首次利用离线二维高速逆流色谱法从湖北海棠叶中分离制备3种黄酮化合物.第一次分离以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶4∶1∶4,v/v)为溶剂系统,在2.5h内分离得到纯度为96.5％的3-羟基根皮苷;第二次分离以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.1mol/L Cu2+水溶液(1∶4∶1∶4,v/v)为溶剂系统,在2.0h内分离得到纯度98.1％的槲皮素和纯度98.9％的根皮苷.最终,成功从200 mg湖北海棠叶乙酸乙酯萃取部位中制备25.4mg的3-羟基根皮苷,8.5 mg的槲皮素,31.3 mg的根皮苷.利用HPLC、ESI-MS和1HNMR对分离物进行结构鉴定.【期刊名称】《江西化工》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】7页(P115-121)【关键词】湖北海棠叶;离线二维高速逆流色谱;乙酸乙酯萃取;黄酮【作者】丁琼;任达兵;秦燕华;梁逸曾【作者单位】中南大学化学化工学院中药现代化研究中心,湖南长沙410083;中南大学化学化工学院中药现代化研究中心,湖南长沙410083;中南大学化学化工学院中药现代化研究中心,湖南长沙410083;中南大学化学化工学院中药现代化研究中心,湖南长沙410083【正文语种】中文引言湖北海棠(Malus hupehensis)，又称茶海棠、野海棠，广泛地作为一种观赏树种，其嫩叶可作茶，果能消食并供酿酒[1]。
湖北海棠广泛生长于湖北西部山地，长江中游，湖南，云南中、南部。
湖北海棠含有茶多酚、黄酮、Zn、Cr、Mn等多种矿物质等,具有抗菌消炎、耐缺氧、抗疲劳、降血糖等多种药理作用[2]。
高速逆流色谱(high-speed countercurrent chromatography，简称HSCCC)是由美国的Ito博士在液-液分配色谱的基础上发展起来的新型制备分离色谱技术[3]。
制备型高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶中的黄酮苷类化合物
９ ． ） ｂ ｉ ｌｉ ７Ｏ－ｉｌｃｓｄ （７ ． ｍｇ ８ ３ ／ ， ａｃ ｅ －一 ｄｇｕ ｏ ｉｅ ９ ６ ａ ｎ ８６ ，
９ ． ）， ｃ ｒ ｓｎ ７ Ｏ－ ｌｃ ｒ ｎｄ ９２ ｈ ｙ ｉ一 一 ｇ ｕ ｕ ｏ ｉ ｅ （ ７ ． ｍｇ， ０６
最近 报导 发现 ， ａｃｌ ｂ ｉ ｉ 可 降低 总胆 固 醇 水平 ， ａ ｎ还 解
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第２ 期
制备 型 高速逆 流 色谱 分 离纯化木 蝴蝶 中的黄 酮苷 类化合 物
３ ７
制 备 型 高速 逆 流 色谱 分 离 纯 化 木 蝴 蝶 中的 黄 酮 苷 类 化 合 物
袁 媛 陈俐 娟。 。
（． １ 四川 大学化 工学 院， 四川成 都 ， １ ０ ５ ６ ０６ ； ２ 四川 大学生物 治疗 国 家重 点 实验 室， ． 四川成 都 ， １ ０ １ ６ ０４ ）
化合 物 （ｈ ｙ ｉ， ａｃｌ ｎ等 ） ｃ ｒｓｎ ｂ ｉ ｅ ａｉ 及其 糖 苷 （ ａ ａｅ ～一 ｂ ｉ ｌｉ ７ ｃ ｎ
Ｏ－ ｌｃ ｓｄ ， ｃ ｒ ｓｎ ７ Ｏ－ ｌｃ ｒ ｎ ｄ ， ｂ ｉａｉ ） ｇ ｕ ｏ ｉ ｅ ｈ ｙ ｉ－ 一 ｇ ｕ ｕ ｏ ｉｅ ａｃ ｌ 。 ｎ
７Ｏ－ｉｌｃｓｄ 等 主要 的黄酮 类成 分 已从 木 蝴蝶 中 － ｄｇｕ ｏ ｉｅ 分离得 到［ ，］ 而运 用 制 备 型 ＨＳ Ｃ １１ ， ５６ Ｃ Ｃ对 此 种 植 物 中 的 ｃｒｓ ｈ ｙｉ ｎ和 ｂ ｉ ｌｉ 离 纯 化 也 成 功 实 现 ＿ ａｃ ｅ ａ ｎ分 １ 。 本文 采用 制备 型 ＨＳ （ 分离 、 化 、 Ｃ℃ 纯 制备 中药 木蝴 蝶 中的一 些主要 的黄酮 苷 类 有 效 成 分 ， 进行 了结 并 构 鉴定 ， 到 了 ｂ ｉ ｌｉ一一 － ｌｃｓｄ （ ３ ． ， 得 ａｃ ｅ ７Ｏ ｇｕ ｏ ｉｅ １ ７ ８ ｍｇ ａ ｎ
制备型高速逆流色谱分离纯化卷柏中的黄酮类化合物
高纯度黄酮类化合物 ， ＨＰ Ｃ ＭＳ和 Ｎ 经 Ｌ 、 ＭＲ鉴定 ， 分别为阿曼托双黄酮 （４ｍｇ ９． ） 罗伯 ２６ ， ５６ 、 茨双 黄酮 （１４ ，９． ）扁 柏 双黄酮 （．ｍｇ ８ ２ ） １．ｍｇ １ ３ 、 ８ ７ ，８． 。另 外还 得 到 了一个 化 合 物 （７３ ， ２ ．ｍｇ
分 配 色谱 技 术 ， 用 互 不 混 溶 的两 相 溶 剂 ，在处 于 利
高 速动 态平 衡 的两 相 中， 具有 不 同分 配 比的样 品 将
组分 分离 。由于样 品在两 相 中的分 配分 离不 需要 任 何 固态载体 ，从 而避 免 了不 可逆 吸 附 ， 得样 品具 使 有较 高 的 回收 率 ， 同时该 技术具 备 良好 的重现性 ， 因
卷柏 药材购 于成 都 市五块 石 中药材 市 场 。
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３ ２ ２ ２ 样 品制 备 ．
四川４ － ＬＶ －
第１卷 １
２０ ０ ８年 第 ４期
３ 结 果 与讨 论
３ １ ＨＳ Ｃ ． Ｃ Ｃ溶 剂 系统选择 及 实验 参数 的优 化
净化 。 、
病毒 、 抗炎 、 降血糖 、 降血压 、 镇痛和增强人体免疫功 能等 ［ ， 国民 间通 常用其 治 疗癌 症及 降血 压 ， １ 我 ｑ］ 具
有 良好 的疗效 。
高 速 逆 流 色 谱 （ ｇ —ｐｅ ｏ ｎｅ－ｕｒｎ Ｈｉ ｓｅｄ Ｃ ｕ ｔｒｃｒｅ ｔ ｈ
Ｃ ｒ ｍａｏ ｒｐ ｙ ＨＳ Ｃ 是 一种 高 效快 速 的液一 ｈｏ ｔｇａ ｈ ， Ｃ Ｃ） 液
乙酸 乙酯 一 甲醇一 （ ３： ３ Ｖ ／ ） 上相 （ 机相 ） 固定 相 ， 水 ２： ２： ， ｖ ， 有 为 下相 （ 相） 流 动相 ， 相 洗 脱 ； 水 为 反 进样 浓度 ：０ ／ 进样 体 积 ： ０ ２ ｍｇ ｍＩ； ２ ｍＬ； 速 ：． ／ ｎ 转速 ：５ ／ ｉ。进一 步分 离 获得 三 种 流 ３ ０ｍＬ ｍｉ ； ８ ０ｒｒ ｎ ａ
高速逆流色谱法分离纯化青皮中六种多甲氧基黄酮
高速逆流色谱法分离纯化青皮中六种多甲氧基黄酮于波;彭爱一;齐鑫;曲学伟;李慧;杨红【摘要】应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备了青皮中6种多甲氧基黄酮类(Polymethoxyflavones,PMFs)化合物.以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为4:6:4:6)为两相溶剂系统,在主机转速800 r/min、流动相流速2mL/min、检测波长254 nm条件下进行分离制备,460 min内从270 mg青皮粗提物中一步分离制备得到甜橙素(1,sinensetin)3.5 mg,5,7,8,4-四甲氧基黄酮(2)13.9 mg,川陈皮素(3,Nobiletin)51.3 mg,3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮(4)9.5 mg,橘皮素(5,Tangeretin)44.7 mg,5-去甲川陈皮素(6,5-O-DesmethylNobiletin)11.2 mg,纯度均达97%以上,各化合物结构经质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定.利用该方法可以对青皮中的黄酮类化合物进行快速的分离和纯化.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2010(022)003【总页数】5页(P425-429)【关键词】高速逆流色谱;青皮;分离;多甲氧基黄酮【作者】于波;彭爱一;齐鑫;曲学伟;李慧;杨红【作者单位】辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029【正文语种】中文【中图分类】R284.2高速逆流色谱(High-Speed Counter-Current Chromatography,HSCCC)是利用溶质在两种互不相溶的溶剂系统中分配系数的不同,从而进行分离的色谱方法。
白花败酱草黄酮类成分的高速逆流色谱快速制备
基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划2003AA2Z 3524)作者简介:彭金咏,男,博士 3通讯作者:范国荣,男,副教授,硕士生导师 T el :021********* E 2mail :G uorfan @yahoo 1com 1cn 白花败酱草黄酮类成分的高速逆流色谱快速制备彭金咏,范国荣3,吴玉田(第二军医大学药学院,上海200433)摘要:目的 应用高速逆流色谱分离纯化白花败酱草化学成分。
方法 利用正己烷2乙酸乙酯2甲醇2水(1∶016∶016∶1)为两相溶剂系统,主机转速800r ・min -1,上相为固定相,下相为流动相,流速210m L ・min -1,检测波长254nm ,所得产物经高效液相色谱法检测,结构经MS 、1H 2NMR 和13C 2NMR 鉴定。
结果 6h 内经一步洗脱从400mg 白花败酱草乙酸乙酯萃取物中分离得到纯度高于98%的木犀草素26mg ,52羟基27,4′2二甲氧基黄酮15mg 和52羟基27,3′,4′2三甲氧基黄酮21mg 。
结论 3个化合物均为首次从败酱属植物中分离得到,该分离制备法简便、快速、产物纯度高。
关键词:白花败酱草;黄酮;制备色谱;逆流色谱中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2006)13-0977-03Isolation and Separation of F lavones from Patrinia villosa by H igh 2Speed Counter 2Current Chrom atography PE NGJin 2y ong ,FAN G uo 2rong 3,W U Y u 2tian (College o f Pharmacy ,Second Military Medical Univer sity ,Shanghai 200433,Chi 2na )ABSTRACT :OBJECTIVE T o develop a preparative high 2speed counter 2current chromatography (HSCCC )for is olating the chemical con 2stituents from Patrinia villosa Juss 1METH ODS A tw o 2phase s olvent system com posed of n 2hexane :ethyl acetate :methanol :water (1∶016∶016∶1)was used 1at a flow rate of 210m L ・min -1,while the apparatus rotated at 800r ・min -1and the effluent was detected at 254nm 1The obtained fractions were analyzed by HP LC and identified by MS ,1H 2NMR and 13C 2NMR 1RESU LTS 26mg luteolin ,15mg 52hydroxyl 27,4′2dimethoxy flav one and 21mg 52hydroxyl 27,3′,4′2trimethoxy flav one with purities of over 98%were obtained from 400mg crude extract in one 2step elution and less than 6hours 1CONC L USION Three kinds of flav ones are all discovered from the plant of Patrinia genius for the first time 1The results indicate that HSCCC is a power ful technique of purification for natural products 1KE Y WOR DS :Patrinia villosa Juss ;flav one ;preparative chromatography ;counter 2current chromatography 白花败酱草(Patrinia villosa Juss )又名苦菜、苦斋、鹿肠,系败酱科多年生草本植物,分布于我国华东、华中、华南及西南各地。
高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展
高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展陈丛瑾;杨国恩【摘要】Objective To review research progress on the high-speed countercurrent chromatography separation and puritication of flavonoid compounds. Method Papers, monographs, etc. published in recent years, on the high-speed countercurrent chromatography separation and purification of flavonoids were reviewed and analyzed. Result and Conclusion High-speed countercurrent chromatography is a very effective separation and purification method of flavonoids.%目的综述高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展.方法查阅近年来公开发表的论文、专著等资料,对高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物进行概述.结果与结论高速逆流色谱法是一种非常有效的分离纯化黄酮类化合物的方法.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2011(026)004【总页数】4页(P306-309)【关键词】黄酮;高速逆流色谱;分离纯化;进展【作者】陈丛瑾;杨国恩【作者单位】广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004;中南林业科技大学材料科学与工程学院,湖南,长沙,410004【正文语种】中文【中图分类】R284黄酮类化合物(flavonoids)是植物中广泛存在的一类天然产物，在植物体内大部分与糖结合成苷类，有一部分是以游离态(苷元)形式存在的，其对植物的生长、发育、开花、结果及抗菌防病等起着重要的作用。
高速逆流色谱法在黄酮类物质分离中的应用
高速逆流色谱法在黄酮类物质分离中的应用张维阳;王林丽;周月;张锋;郭淑英【摘要】高速逆流色谱法(HSCCC)是一种具有独特优点的创新色谱技术,由于其无不可逆吸附等优点,被广泛应用于各领域的研究或实践;黄酮类物质是重要的天然产物成分,具有很强的生物活性,对很多疾病有治疗作用.本文介绍了高速逆流色谱及其在天然产物分离中的成功应用实例,对HSCCC技术在该领域的应用进行综述.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2011(032)001【总页数】3页(P47-49)【关键词】高速逆流色谱法;黄酮类物质;分离【作者】张维阳;王林丽;周月;张锋;郭淑英【作者单位】吉林医药学院检验系,吉林,吉林,132013;吉林医药学院检验系,吉林,吉林,132013;吉林医药学院检验系,吉林,吉林,132013;吉林医药学院检验系,吉林,吉林,132013;吉林医药学院检验系,吉林,吉林,132013【正文语种】中文【中图分类】R284.1高速逆流色谱法(high - speed countercurrent chromatography，HSCCC)是20世纪80年代由美国Ito博士研发的一种新型的液 - 液分配色谱。
由于不需要固定相，HSCCC技术具有进样量大、无不可逆吸附等优于其他色谱技术的优点，此项技术已经广泛应用于医药、环境、化工等领域[1]。
黄酮类化合物广泛存在于植物中，是一类重要的天然产物，具有很强的生理活性。
其在植物体内可以游离存在也可与糖结合成苷。
1.1 HSCCC法的基本原理HSCCC属于液 - 液分配色谱，所以其基本分离原理与其他同类色谱技术相同，即利用物质在两相间分配系数的差别进行分配。
而HSCCC将两溶剂的分配体系置于高速旋转的螺旋管内，建立起一种单向性流体动力平衡体系。
螺旋管的运动形式，是在自身自转的基础上，同时绕一公转轴旋转，成行星运动[2]。
这样，加在分配体系上的离心力场不断发生变化，使两相溶剂充分的混合和分配，从而达到洗脱分离目的。
高速逆流色谱技术分离纯化天然产物中黄酮类化合物的研究进展
江南卷柏 Selaginella
dorffii
moellen-
穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、竹柏双黄 酮 A、银杏黄酮 Amentoflavone， hinokiflavone， podo-
carpusflavone A，ginkgetin
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水 n-hexane-ethyl acetate-methanol-
1． 5
（ 1∶ 1∶ 2）
草珊瑚 Sarcandra glabra
异秦皮定 Isofraxidin
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水
n-Hexane-ethyl acetate-Methanol-
2． 0
water （ 1∶ 2∶ 1∶ 2）
800
［12］
800
［13］
800［14］ຫໍສະໝຸດ 苹果树皮 Apple tree bark
木蝴蝶 Oroxylum indicum
黄芩素、白杨黄素 Fbaicalein，chrysin
石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水
Petroleum ether-ethyl acetate-
2． 0
Methanol-water （ 5∶ 5∶ 5∶ 5）
陈皮 Pericarpium Citri
Reticulatae
苷 Quercitrin，quercetin，hyperoside，iso-
quercitrin， miquelianin， epigallocate-
乙酸乙酯-甲醇-水 Ethyl acetate-methanol-water
（ 10∶ 1∶ 10）
chin，avicularin
2． 0
800
［7］
MTBE-n-butanol-MeCN-water
高速逆流色谱分离纯化灯盏细辛中的黄酮类化合物
ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ（ Ｈ Ｓ Ｃ Ｃ Ｃ） Ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｏ ｌ ｖ ｅ ｎ ｔ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｏ ｆ ｐ ｅ ｔ ｒ ｏ ｌ ｅ ｕ ｍ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ — ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ｅ — ｍｅ ｔ ｈ ａ ｎ ｏ １ ． ｗ ａ ｔ ｅ ｒ
生物工程有 限责任公 司， 山东 济南 ２ ５ ０ ０ １ ４； ４ ． 烟台张裕 葡萄酿酒有限公 司， 山东 烟 台 ２ ６ ４ ０ ０ １ ）
摘要 ： 采用 高速逆 流 色谱技 术 快 速 分 离纯 化 灯 盏 细 辛 中 的黄 酮类 化 合 物 ， 以 石 油 醚一 乙酸 乙酯一 甲醇一 水（ ４ ： ６ ： ３ ． ５： ６ ． ５ ， Ｖ ／ Ｖ ） 为溶 剂 系统 ， 转速 ８ ５ ０ ｒ ／ ａ ｒ ｉ ｎ ， 流速 ２ ． ０ ｍＬ ／ ｍ ｉ ｎ ， 检 测波 长 ２ ５ ４ ａ ｍ。从 ５ ０ ０ ｍｇ粗提 物 中分 离得 到 ４个黄 酮类化合 物 ： 黄芩 素 （ ８ ７ ｍｇ ） 、 木 犀 草素 （ ３ ５ ｍｇ ） 、 槲皮素 （ ４ ６ ｍｇ ） 和 芹菜素 （ ９ ２ ｍｇ ） ， 经 高效液相 色谱 法 分析 ， 其 纯度分 别为 ９ ４ ． ６ ％、 ９ ２ ． ５ ％、 ９ ８ ． ２ ％、 ９ ７ ． ５ ％ 。研 究结 果表 明 ， 应 用高速 逆流 色谱 分 离灯盏细 辛 中的黄 酮类化 合物 快速 、 高效且 纯度 高。
山 东 科 学
Ｓ ＨＡＮ Ｄ ＯＮＣ １ ５年 ６月 出 版
Ｖ ｏ ｌ ２ ８ Ｎｏ ． ３ Ｊ ｕ ｎ ． ２ ０ １ ５
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分离 的方法 ， 该技术 可 以在 短 时 间 内实现 复 杂 样 品 的高效分离 分 析 。因其 无 固体 载 体 ， 以避 免 分 可
离样 品与 固体 载体 的不 可 逆 吸 附 ， 而且 对样 品 的预
处理 要求 也 比较 低 ， 用 于 粗 提 取 物 的分 离 适 。 现今 ， Ｓ Ｃ Ｈ Ｃ Ｃ这 一不 同于传统 的液相 色谱法 的新 型 液一 液色谱分 离纯化 技术 已经广 泛应 用 于生物 医学 、 天然产 物 、 品和化妆 品等领 域 。 食 本文 采用 高速逆 流色谱法 对 中药 九里香 的粗提 物进行 了分离 纯化 ， 过一步 分 离能 够 同时 得到 ５ 通 ， ７ ３ ， ， 一 甲氧基黄 酮 、一 ， ４ ５ 五 ５羟基． ， ， ４一 甲氧 ６ ７ ３ ， 四 基 黄酮 、一 ５羟基一 ， ， ， ， 五 甲氧 基黄 酮 、一 基一 ６ ７ ８ ３ ４一 ５羟 ６ ７ ８ ３ ， ５一 甲 氧基 黄酮 ４种 黄 酮类 化 合 物 ， ， ， ， ４ ， 六 为从 中药 中分 离 纯 化黄 酮 类 化 合 物 提 供 了技 术 依 据 ， 于天然黄 酮产物 的研究 具有一定 的意 义。 对
Ｔ Ｅ ３０高速逆 流 色谱 仪 （ 海 同 田生 化技 术 Ｂ 一０ 上 有 限公 司） 包括 Ｔ Ｐ５ Ａ泵 ， Ｂ ２ Ｕ ， Ｂ 一０ Ｔ Ｄ一３ Ｖ紫 外检 测 器 （ ５ ｍ） Ｎ ０ ０双通 道 色谱 工作 站 ； 用 聚 四 ２ ４ｎ ， ２ ０ 采 氟 乙烯管 缠 绕 的 ３个 分 离 柱 串联 连 接 （ 径 １ ８ 直 ． ｍｍ， 分离 体积 ２ ０ｍＬ 值 为 ０ ６～ ． ） ２ ８ ， ． ０ ８ ， ０ ｍＬ 进样 圈 ； ｔｒ 公 司高效 液相色 谱 （ Ｐ Ｃ） ， 括 Ｗａｅｓ Ｈ Ｌ 仪 包
Ｗａｅｓ２ ９ ｔｒ ６ ５型 分 离 模 块 和 Ｗａｅｓ２ ９ ｔｒ ９ ６型 二 极 管
超声溶 解后 得到 １ ／ ７ｇ Ｌ的样 品溶液 ， 用 。 备
１ ４ ＨＳ ． ＣＣＣ 分 离 纯 化已 超 声 脱 气 的上 相 （ 定 固 相 ） ２ ／ ｎ的速 度泵入 Ｈ Ｃ Ｃ分离管 中 ， 以 ０ｍＬ ｍｉ ＳＣ 待 上相充 满整 个分 离管 后 ， 慢 调 节 主 机转 速 至 ８ ０ 缓 ０
膏 １０ｇ 得到待分离纯化 的九里 香粗提物共约 ２ 。 ０ ， ０ｇ
１ ３ 溶 剂 系 统 及 样 品 溶 液 的 制 备 ． 在 分 液 漏 斗 中配 制 石 油 醚一 酸 乙 酯一 醇一 乙 甲 水
（ ： ： ． ： ， ／ ／ ／ ） 两相 溶 剂体 系 ， 分摇 匀 ５５４８ ５ ｖｖ ｖｖ 的 充
着操 作周期 长 、 骤繁 琐 、 样量 低 、 品 损耗 大 等 步 上 样
流提取 ｌ ， ２ｈ 收集 提 取液 。然 后将 提 取液 经旋 转 蒸
缺点 。 高 速 逆 流 色 谱 法 （ ｉｈｓ ｅ ｄ ｃ ｕ ｔｒｃ ｒ ｈｇ — ｅ ｏ ｎｅ—ｕ— ｐ
ｒｎ ｈ ｏ ｔｇａ ｈ ， Ｃ Ｃ） 利用 溶质 在 两 种 ｅ ｔ ｒｍａｏ ｒｐ ｙ ＨＳ Ｃ 是 ｃ
九里 香药材 经 干燥 后 用粉 碎 机将 其 粉 碎 ， 得到 九里 香粉 末 ２ 。分 别称 取约 ３ ３ｇ药 材粉 末 于若
干 滤 纸 筒 中 ， ９ ℃ 水 浴 中 用 ２ ０ｍＬ ９ ％ 乙醇 回 在 ５ ０ ５
胶柱 色谱 及制备 型高效 液相色谱 法 。这 些方法 存在
・
３ ４・ ８
色
谱
１２ 九 里 香 粗 提 物 的 制 备 ．
第２ ８卷
目前 ， 文献 ［ ５ 报 道 的对 于九 里 香化 学成 分 ３— ］
的研 究 多集 中于香豆素 、 生物碱 以及挥 发油等 物质 ，
而对 它 的分 离纯化 方 法 也 主要 采用 硅 胶 柱色 谱 、 凝
互 不 相 溶 的溶 剂 系 统 中 分 配 系 数 的 不 同 ， 而 进 行 从
发仪浓 缩成 浸膏后 ， 待用 。
将 已经 预 处 理 的 Ｄ１ １型 大 孔 树 脂 湿 法 装 柱 ０ （ 树脂量 以湿体 积计 为 ２ ０ｍＬ， 高 比为 ｌ １ ） 然 ５ 径 ：２ ， 后 用 乙醇清洗 至洗 出 液无 白色 浑浊 后 ， 用蒸 馏 水 再 将 乙醇 洗脱 出至无醇 味 ， 备用 。 称取上述 九里香浸 膏 ３ ， ２０ｍＬ９ ％ 乙醇 ０ｇ 经 ０ ５ 充分溶解后 ， 向其 中加 入 ８ ０ｍＬ水 ， 置过夜 。将 静 静 置后的药液抽 滤 ， 旋转 蒸发将 上 清液 中 的乙醇 除净 ， 所得 的九 里香 水 溶 液 ， Ｄ ０ 用 １ １型 大孔 树 脂 按 ３％、 ０ ５ ％、 ％、 ０ 的 甲醇梯 度进行洗 脱 ， ０ ７ ０ １ ％ ０ 分段 收集洗 脱 液 。经 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ分析后 ， 用 １０ 甲醇洗脱 液作 为待 选 ０％ 分离 的九里香粗 提物 。按 上述 方法 共处 理九 里香 浸
后 在 室 温 下 静 置 过 夜 。 使 用 前 将 达 到 分 配 平 衡 的两
１ 实验 部 分
１ １ 仪 器 与 试 剂 ．
相溶 剂体 系按上 相 和下 相 分 开放 入棕 色广 口瓶 中 ， 超声 脱气 ３ ｎ 备用 。 ０ｍｉ ，
准 确 称 取 九 里 香 粗 提 物 ４ ０ｇ溶 解 于 下 相 中 ， ．
ｒ ｍｉ ， 时针 旋 转 ， ／ ｎ顺 同时 以 ２ ｍＬ ｍｉ ／ ｎ的速 度 将 下
相 （ 动 相 ） 人 其 中 ， 两 相 平 衡 后 将 １ 流 泵 待 ２ｍＬ粗 提
阵列 （ Ｄ 检 测 模 块 ； ｕ ｔ ｏ Ｍｉｒ Ｐ Ａ） Ｑ ａｔ ｃｏ电 喷 雾 质 谱 ｒ 仪 （ Ｓ— ，Ｗａｅｓ公 司 ， 国） Ｖ ＮＣ ５ ０ ｚ ＥＩ ＭＳ ｔｒ 美 ；Ａ Ａ Ｅ ０ Ｈ