薄层色谱和柱层析综述41页PPT
薄层色谱讲义ppt课件
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
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1
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2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
柱层析、薄层层析
柱色谱、薄层色谱一、实验目的1、了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用。
2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术。
二、实验原理色谱法（Chromatography）亦称色层法、层析法等。
色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。
色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。
色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几方面:1、分离混合物一些结构类似、理化性质也相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满意的结果。
2、精制提纯化合物有机化合物中含有少量结构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以除去杂质，得到纯品。
3、鉴定化合物在条件完全一致的情况，纯粹的化合物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。
但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。
所以，要获得重现的比移值就比较困难。
为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。
4、观察一些化学反应是否完成，可以利用薄层色谱或纸色谱观察原料色点的逐步消失，以证明反应完成与否。
吸附色谱主要是以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质自溶液中吸附到它的表面上，而后用溶剂洗脱或展开，利用不同化合物受到吸附剂的不同吸附作用，和它们在溶剂中不同的溶解度，也就是利用不同化合物在吸附剂上和溶液之间分布情况的不同而得到分离。
吸附色谱分离可采用柱色谱和薄层色谱两种方式。
柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两种。
吸附色谱常用氧化铝和硅胶为吸附剂。
分配色谱以硅胶、硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收较大量的液体作为固定相。
柱色谱常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。
薄层色谱和柱层析综述
薄层色谱和柱层析综述薄层色谱（TLC）是一种简单、快速、经济的分离方法，广泛应用于药物分析、天然产物分离等领域。
TLC的原理是基于物质在固定相（通常是硅胶或聚脂基质）和流动相（通常是有机溶剂或溶液）之间的分配行为。
通过在硅胶板上涂布样品，并将样品在硅胶上移动，样品中的成分会根据其在固体支持物和流动相之间的亲疏性不同而在硅胶上分离开来。
移动过程结束后，可以使用紫外线灯、显色剂或其他方法来观察和检测样品中的化合物。
薄层色谱具有许多优点。
首先，它可以同时分离多种成分，并提供对样品的初步评估。
其次，它是一种快速和经济的方法，几乎不需要仪器设备。
此外，它对样品的量要求很低，只需要微量的样品就可以进行分析。
最重要的是，TLC的操作简单，可以方便地进行实验室分析。
与薄层色谱相比，柱层析是一种更为高效和精确的分离技术。
柱层析的原理是利用固定相（通常是多孔吸附剂或树脂）和移动相（通常是有机溶剂或溶液）之间的相互作用来分离混合物中的化合物。
柱层析中，样品按照它们在固定相和移动相之间的相对亲疏性的不同以不同的速率通过柱子，从而实现物质的分离。
柱层析可以通过调整固定相和移动相的性质、柱子的大小和形状、操作温度等参数来改变分离的选择性和效果。
柱层析通常分为几种类型，包括固相萃取、分区层析、离子交换层析和亲和层析等。
柱层析相比于薄层色谱具有更高的分离能力和选择性。
柱层析通常用于复杂混合物的分离和纯化，如药物、天然产物、蛋白质等。
它不仅可以得到更准确和精确的分离结果，还可以得到更高纯度的样品。
尽管柱层析具有高分离效率和较高纯度的优点，但其操作相对复杂且较耗时。
此外，柱层析通常需要使用专用仪器和设备，使得其成本较高。
综上所述，薄层色谱和柱层析是化学分析和分离中常用的技术。
薄层色谱简单易操作，适用于快速分析和初步评估样品。
柱层析具有更高的分离能力和选择性，适用于复杂混合物的分离和纯化。
根据实际需求，可以选择合适的方法进行化学分析和分离。
薄层色谱和柱层析
薄层色谱和柱层析一、薄层色谱（TLC）1.原理：薄层色谱是一种基于分子在固体表面和流动相之间相互作用的分离技术。
它使用薄层固定在玻璃或铝板上的吸附剂（例如硅胶或氧化铝）来分离混合物中的化合物。
在色谱板上涂覆样品后，通过液态或气态的流动相让混合物成分在吸附剂上移动，不同化合物的移动速度不同，从而实现分离。
2.应用：薄层色谱被广泛应用于药物化学、食品科学、环境科学和生命科学等领域。
它通常用于混合物的分析，确定混合物中是否存在特定化合物。
此外，它也可用于纯化样品中的化合物，通过可视化或其他检测方法来定位目标化合物位置。
3.操作步骤：薄层色谱的操作步骤主要包括：（1）准备色谱板：将吸附剂均匀涂覆在固定的玻璃或铝板上，使其成为薄层。
（2）样品的涂覆：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，并用微量移液管将样品均匀地涂覆在色谱板上。
（3）开展分离：将涂覆了样品的色谱板悬挂在色谱槽中，加入合适的溶剂溶液，使之满足色谱板的一端。
（4）显色：在色谱板完全干燥后，通过目视或化学法将化合物可视化。
常用的显色剂包括碘、紫外线灯或化学染色剂。
二、柱层析（CC）1.原理：柱层析是一种基于分子在固定填料（固相）和流动相之间相互作用的分离技术。
根据样品的特性选择不同的固相材料，并将其装填在柱中。
当样品通过柱时，不同化合物与固相发生不同程度的相互作用，从而分离。
2.应用：柱层析广泛应用于化学和生物化学领域，用于分离和纯化化合物。
它可用于药物合成中的纯度检查、食品中毒素的分离、蛋白质的纯化等。
柱层析的分离效果通常较好，纯度高。
3.操作步骤：柱层析的操作步骤主要包括：（1）准备填料和柱子：根据需要选择适当的固相材料，并将其装填在柱子中。
（2）样品的预处理：将待分离的样品预处理，如溶解在适当的溶剂中，并清除杂质。
（3）样品注入：将样品注入柱中，注意控制样品体积和注入速度。
（4）洗脱：通过加入不同组成的洗脱液（流动相），使样品中不同化合物以不同速率从柱中洗脱。
薄层色谱和柱层析
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缺点
柱层析法的缺点包括样品损失、洗脱峰易受干扰、操作参数难以控制等。此外， 对于某些特定组分的分离，柱层析法可能需要较长的分离时间和较多的样品量。
03
薄层色谱与柱层析的比 较
分离原理的比较
薄层色谱（TLC）
基于吸附剂对不同成分的吸附能力差异进行分离。
柱层析
基于固定相和流动相之间的分配平衡进行分离。
新型固定相
固定相是薄层色谱和柱层析中的重要组成部 分，用于吸附样品中的组分。研究者正在开 发新型固定相，以提高分离效率和特异性。 例如，一些新型固定相可以通过改变表面化 学性质、孔径和形貌等方式来提高分离性能
。
新技术的开发
微流控芯片技术
微流控芯片技术是一种新型的分离分析技术，具有高通量、高分辨率和高灵敏度等优点。 该技术可以将薄层色谱和柱层析集成在一个芯片上，实现快速、高效的分离分析。目前，
结果分析
分析实验结果，比较不同实验条件下的分离效果， 总结实验规律和改进措施。
05
薄层色谱和柱层析的发 展趋势
新材料的应用
硅胶替代品
硅胶是常用的薄层色谱和柱层析材料，但存 在一些限制，如硅胶粒径分布广、吸附能力 不稳定等。因此，研究者正在寻找硅胶的替 代品，如氧化铝、活性炭、聚合物等。这些 新材料具有更好的粒径控制、更稳定的吸附 性能和更高的分离效率。
实验操作步骤
洗脱
结果观察
选择合适的洗脱液进行洗脱，控制洗 脱速度和体积。
观察并记录样品在色谱柱上的分离情 况。
收集
根据需要将洗脱液收集到不同的容器 中。
实验结果分析
数据记录
详细记录实验数据，包括标准品和样品的分离情 况、洗脱液的体积和成分等。
薄层色谱和柱层析综述
薄层色谱和柱层析综述
薄层色谱（Thin Layer Chromatography， TLC）和柱层析（Column Chromatography，CC）均属于分离分析技术，广泛应用于化学、生物学、药学等领域，用于对混合物中的各组分进行快速、有效的分离。
薄层色谱和柱层析的相似点：
1.都是分离分析技术，都可以用来分离混合物中的各组分，以及鉴定化合物的结构和性质。
2.两者都基于组分之间的分子量大小、相对极性及分子结构等差异而分离，运用相同的原理及方法。
3.都需要在选择溶剂时考虑搭配，确保溶剂的性能以及所需的相对极性。
薄层色谱与柱层析有其明显的不同：
1.薄层色谱和柱层析在分离分析过程中采用的基体是不同的，前者采用的是薄膜，而后者采用的是柱状基体。
2.对溶剂的选择也不尽相同，薄层色谱可以采用溶剂萃取、溶剂烘干等技术，而柱层析则只能采用溶剂萃取技术。
3.薄层色谱的分离更加快捷方便，更适合分析稀释液，而柱层析分离速度较慢，适合分析浓度较高的混合物。
4.薄层色谱仪由于体积小、设备灵活简十，而柱层析仪的体积较大且操作较为复杂。
色谱概论及薄层色谱法PPT课件
操作技巧要求高
薄层色谱法的实验操作技巧要求较高， 需要经验丰富的实验员进行操作。
对环境条件敏感
薄层色谱法的分离效果易受环境温度、 湿度等因素的影响。
薄层色谱法的展望
优化实验条件
发展新型薄层板
未来可以通过优化实验条件，提高薄层色 谱法的分离效果和定量分析精度。
研究开发新型的薄层板材料和制备方法， 提高薄层色谱法的分离速度和分辨率。
色谱概论及薄层色谱 法ppt课件
contents
目录
• 色谱概论 • 薄层色谱法 • 薄层色谱法的实验技术 • 薄层色谱法的实验结果分析 • 薄层色谱法的优缺点及展望
01
色谱概论
色谱法的定义与分类
定义
色谱法是一种分离和分析复杂混 合物中各组分的方法，基于不同 组分在固定相和流动相之间的分 配平衡原理。
分类
按分离原理可分为吸附色谱、分 配色谱、离子交换色谱和凝胶色 谱等；按操作方式可分为柱色谱 、纸色谱和薄层色谱等。
色谱法的原理
固定相
选择合适的固体或液体作为固定 相，与流动相相对静止，使混合 物中各组分在固定相中产生吸附、
溶解或分配作用。
流动相
选择合适的液体或气体作为流动 相，使混合物中的组分随流动相 通过固定相，实现各组分的分离。
合于实验室和现场分析。
分离速度快
薄层色谱法的分离时间相对较 短，可以快速得到分离结果。
适用范围广
薄层色谱法适用于各种不同性 质的混合物，如有机物、无机
物、高分子化合物等。
薄层色谱法的缺点
定量分析精度不高
由于薄层色谱法的分离原理和操作方 法的限制，其定量分析的精度相对较 低。
对样品要求较高
薄层色谱法要求样品具有一定的挥发 性、稳定性和溶解性，对于某些特殊 样品可能不太适用。
薄层色谱和柱层析综述
聚酰胺
硅酸镁 多孔玻璃珠
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纤维素硅藻土
离子交换剂 反相键合硅胶（硅烷化处理）
5-薄层板的制备
将吸附剂均匀地涂铺在规定尺寸的玻璃板或其它平面板上， 这一过程称铺板或铺层，即制成薄层板。 板的好坏是分离成功与否的关键，好的板要求吸附剂涂铺 均匀，表面光滑，厚度一致。现有预制板出售。 制板方法主要有干法和湿法两种： （1）干法制板 氧化铝和硅胶可用干法铺板，干法铺层比较简便，制得的 板展开速度快，但展开后不能保存，薄层不牢固，喷显色剂时 易吹散。 方法：将吸附剂均匀地撒在薄层板上，两手用两端圈套的 玻璃棒滚动，厚度0.25～3mm，滚动不宜太快，不能停。 0.25mm左右主要是分析和分离用，3mm的厚板主要是制备色 谱用。
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将溶剂抽提中的一个相固定在硅胶上，装在柱内，并按色 谱法操作，使另一液相流过柱子，分离获得成功。从此出现了 基于分配原理的分配色谱法，因此获得了诺贝尔奖。以后的发 展采用了纤维素、继而采用滤纸作分配色谱载体，发展了纸色 谱法。薄层色谱法的研究和发展也出现在二十世纪的三、四十 年代，现在已和气、液色谱一起成为最常用的色谱分离、分析 方法。为与柱色谱相区别，并突出纸色谱和薄层色谱的特点， 这两种方法也叫平床色谱法（Flat bed chromatography）或平 面色谱法（Planar chromatography）。 色谱法经过多年的发展已有多种操作形式，其分类方法 也有多种。按固定相和流动相的物态可分为以气体为流动相的 气相色谱（包括气固色谱、气液色谱）和以液体为流动相的液 相色谱（包括液固色谱、液-液色谱）；如以固定相的操作方 式以及形状分类则有柱色谱、 纸色谱、薄层色谱；
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薄层色谱中，Rf值与组分的分配系数K值有关：
薄层色谱鉴别介绍ppt课件
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46
❖ 2.展开 ❖ 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展
开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组 分固移动速度不同而彼此分离。
❖ 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂，密 封室顶的盖。
❖ 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。强烈振 摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。 绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合 不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比 例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高 精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，
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44
F 展距的影响
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45
❖ 薄层色谱法---跑板
❖ 点样
❖ 用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层 析上距末端2cm 处轻轻画一横线，然后用毛细管 吸取样液在横线上轻轻点样，点的斑点较小，展 开的色谱图分离度好，颜色分明。如果要重新点 样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点 样（用电吹风的热风吹干再点），以免点样斑点 过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm。 点好样的薄层板用电吹风的热风吹干。底线距基 线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻 璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，
碱性氧化铝：pH = 9～10,可分离合成染料，生物碱等 酸性氧化铝：pH = 4～5，适应于酸性物质的分离 中性氧化铝：pH = 7～7.5，适于分离醛酮，以及对酸碱
不稳定的脂和内酯等化合物
氧化铝的活度与其含水量有关，含水量大，则吸 附能力小。
色谱概论及薄层色谱法PPT幻灯片
活化：100℃左右（除水）
11
常用的吸附剂——聚酰胺
流 动 相
固定相
聚酰胺色谱分离原理：氢键 12
分配色谱法
固定液 （固定相）
流 动 相
载体 支持作用（如硅胶）
➢分离机制：不同组分溶解度差异 正相色谱：流动相极性＜固定相极性
反相色谱：流动相极性＞固定相极性
13
离子交换色谱
m
树脂骨架
1
2
1.固定离子； 2.可交换离子
32
A．三氯化铁 B.硫酸 C.茚三酮 D.碘化铋钾
B 11.属于通用型显示剂的是（ ） A 12.用于检测含有酚羟基化合物的显色剂（ ） C 13.用于检测氨基酸类化合物的显示剂（ ）
有关薄层操作方法以下说法正确的是（AB）CD
A．展开之前将斑点晾干
B. 展开之前进行饱和
C．展开后记录溶剂前沿
D. 制备好薄层板后降其活化
29
展开操作应注意的问题
1
检查层析 缸密闭性
2
展开前——先饱和 ，防止边缘效应
3
展开时，注意展开 剂不要浸到点样线
v
v
v
v
v
v
v
v
30
观察
日光 灯 紫外灯 (365或254nm)
荧光板上在 紫外灯下观察暗斑
硫酸
通用显色剂
碘
物理 化学 检出 显色
法法
茚三 酮
FeCl3
专属显色剂
31
同步测试
1. 甲乙两化合物，经用一薄层色谱系统展开后，它们的Rf
分配系数
组分在固定相 (s) 与流动相 (m) 中的浓度 (C) 之
比。
K = Cs Cm
薄层色谱和柱层析PPT共50页
8、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序。——亚里士多德 9、上帝把法律和公平凑合在一起，可是人类却把它拆开。——查·科尔顿 10、一切法律都是无用的，因为好人用不着它们，而坏人又不会因为它们而变得规矩起来。——德谟耶克斯
薄层色谱和柱层析
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
பைடு நூலகம்
END