超滤标准操作规程

甲型肝炎减毒活疫苗原液超滤SOP

目的: 为保证CUF-20型超滤器在生产过程中的使用达到规范化、标准化，特制定本操作规程。

范围: 本操作规程适用于CUF-20型超滤器超滤透析甲肝原液。

职责: 纯化组人员应严格按本标准操作程序的要求进行超滤操作。

QA应监督检查本标准的实施效果。

内容：

1.操作前检查

1.1工作环境的检查

超滤操作应在万级环境的百级层流罩下进行，操作前应检查以下事项：

1.1.1操作间处于清洁状态，无上次工作遗留物，无与本次操作无关的物品。

1.1.2 操作间备有废弃物收集容器。

1.1.3 生产状态标识已挂好。

1.1.4 提前30分钟开启层流罩。

1.2 设备仪器运行检查

1.2.1 超滤器

型号：CUF-20 资产编号：01D002074 厂家：美国密理博公司状态完好，备用。

1.2.2 蠕动泵

型号：ZG60-600 资产编号：01G001061 厂家：保定兰格恒流泵有限公司。状态完好，备用。

1.3 物料及器具检查

1.3.1透析液：核实批号、数量及有效期。

1.3.2 0.1NNaOH：核实批号、数量及有效期。

1.3.3 10倍浓缩199培养液、8.0%碳酸氢钠液：核实批号、数量及有效期。

1.3.4 待透析原液的确认:确认原液的批号及液量。

1.3.5 0.1%新洁尔灭溶液或3%来苏儿溶液：经0.2um除菌过滤. 核实批号及有效期。

1.3.6 10L瓶、桶盖、10号栓、100mL瓶、10mL吸管、钢瓶经0.105Mpa.121C 60分钟湿热灭菌，核实数量及有效期。

1.3.7 超滤管道、分液管道、50L桶、20L桶经0.105Mpa.123C 、90分钟湿热灭菌，核实数量及有效期。

2. 操作过程

2.1 启动蠕动泵，进液管道、回液管道、膜下排液管道用0.1N NaOH溶液循环30分钟。

2.2 管道连接：进液管道、回液管道、膜下管道和已灭菌的超滤管道无菌连接。膜下排液管道无菌放入回收桶中，将收集原液的管道放入20L桶内，用止血钳夹住，待收集原液备用。

2.3 冲洗膜

2.3.1 用另外20L 0.1N NaOH冲洗膜包。

2.3.2 用透析液冲洗膜包：关闭部分回流阀门，打开膜下滤出阀门，用透析液冲洗膜包，至回流端和膜下的液体pH值呈中性。

2.4 取样：核对原液批号、液量，用10mL吸管取样至青瓶，抗原1mL ，三氯甲烷残留量3 mL，青瓶盖栓写标签待检。

2.5 透析：原液用透析液5-7倍稀释.将超滤器的进液管道放入透析液稀释后的原液瓶内，打开回液管道的止血钳，检查各连接管道连接是否正确，连接管道是否渗漏，各管道不要折皱，然后启动蠕动泵，调节泵速，使进液端压力控制在1.0bar-1.5bar，回流口端压力控制在

0.4 bar-0.9 bar之间。在透析过程中，不要停止蠕动泵，回液瓶中一定要确保原液收回量80%的液体在循环。

2.5.1回收原液：当全部原液透析完之后，回流阀门全部打开，关闭膜下滤出阀，打开收集原液管道的止血钳，用199培养液将原液连续3次循环回收20L桶内，每次循环5分钟，泵速由慢至透析泵速：4升/分钟(收回透析原液量)。为确保病毒不损失，可再反复收集3次，关闭蠕动泵。(收集时也可适当浓缩，浓缩则透析时间短，则回收率高,。但是浓缩倍数过大则易导致病毒聚集，不易回收，影响收率。)

2.5.2 回收原液取样：用10mL吸管取样，抗原1mL 、三氯甲烷残留量3 mL、病毒滴度2 mL 、牛血清白蛋白残留量1mL 、异常毒性15 mL，盖栓写标签待检。

将回收的原液用分液管道分至10L(或5L)钢瓶内，每个钢瓶做无菌检查、支原体检查。包好瓶口，放置-60C冰箱。

2.6 清洗超滤器：用灭菌注射用水冲洗膜，冲洗体积：

3. 膜包的完整性检测

3.1首先确定系统已经清洗好。

3.2 将超滤系统内的水排空。

3.3 调节进口压力至规定压力。

3.4 把回流口用阀门或其他方法封闭。

3.5 膜下排液管道口是开放的。

3.6 稳定超滤系统的规定压力5分钟让残留的水排走。

3.7测量并记录气压、温度和从透液口出来的气体流量.气体流量可用气体流量计测量或用量筒测量(一定时间内在倒置的灌满水的量筒中有多少体积水被排走)

充分湿润的完整的超滤膜的空气流量(毫升/分钟)

结果：测得的空气流量低于标准为合格，超过为不合格。

4 超滤器及膜包清洗、消毒、除热源：用0.1N NaOH循环。在循环过程中,反复关闭回流阀,排净气泡,确保所有的表面接触到NaOH。循环30分钟关闭。

5清场

5.1操作完成后,将用后物品装入废弃物收集容器内,移出操作室,送洗刷处理。

5.2将操作间原有设备、工具经消毒剂擦拭干净,放回原处,确保各种设施运转正常，挂”备用”标识。

5.3洁净室清洁

洁净室的工作台、凳、开关、插座、地面用浸湿消毒液的抹布擦拭。

5.4上述过程检查合格后,操作室挂”已清洁”状态标识牌。

5.5使用过的无菌服、抹布送洗衣间清洗。

6过程分析

超滤器、蠕动泵:状态良好,操作结果合乎预期。

7变更记载:

培训:

培训部门:疫苗七室

培训对象:CUF-20型超滤器使用人员

培训时间:60分钟