PCR测序和基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种的应用研究_王峰

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分枝杆菌菌种鉴定1

分枝杆菌菌种鉴定1 检测范围用于定性检测来源于临床疑似结核病和非结核分枝杆菌( Non-tuberculous Mycobacteria,NTM)病患者经过分离培养的分枝杆菌分离株样本中的核酸,检测指标包括临床常见分枝杆菌的17个种或群,包括:结核分枝杆菌复合群、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶然分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、浅黄分枝杆菌、土分枝杆菌、龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌、草分枝杆菌、不产色分枝杆菌、海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌、金色分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌和玛尔摩分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌、耻垢分枝杆菌。

可用于结核病和非结核分枝杆菌( Non-tuberculous Mycobacteria,NTM)病的辅助诊断,也可用于流行病学调查等领域。

2 方法原理基因芯片( genechip)也称为DNA芯片、DNA微陈列、寡核苷酸陈列,是指采用原位合成(或显微打印手段),将DNA探针固化于支持物表面上,产生二维DNA探针陈列,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测。

基因芯片对分枝杆菌的菌种鉴定通过在芯片上设计种属特异性寡核苷酸探针,将标记有荧光分子的PCR扩增产物与芯片上的探针在一定的条件下进行杂交反应,根据碱基互补配对原则,序列匹配的PCR扩增产物与探针形成稳定的二级结构。

根据探针在芯片上的特定位置排布,就可以推断出相应被测细菌的相关信息,鉴定出被测细菌的种类采用基因芯片微量点样技术,将检测上述基因的特异探针与各种对照探针固定在基片上,检测探针和对照探针各重复5个点,形成12行×10列的微阵列，每张芯片上有4个同样的微阵列,每一个微阵列可以检测一份样品。

3 检测样本检测适用的标本类型为来源于临床疑似结核病和非结核分枝杆菌( Non- tuberculous Mycobacteria,NTM)病患者经过分离培养的分枝杆菌分离株。

存在于固体培养基上的待测分离株样本不可冷冻储存，因为冷冻会对后续操作造成影响；存在于液体培养基中的待测分离株样本在-70℃储存不超过5年。

PNBTCH生长试验和DNA微阵列基因芯片鉴定非结核分枝杆菌的价值比较

PNB/TCH生长试验和DNA微阵列基因芯片鉴定非结核分枝杆菌的价值比较作者：王建胡立珍张国翠赵辉陈子芳来源：《医学信息》2019年第20期摘要：目的 ;比较对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼生长（PNB/TCH）和DNA微阵列基因芯片鉴定非结核分枝杆菌（NTM）临床分离株菌种的价值。

方法 ;收集2013年1月～2018年6月我院住院患者的痰分枝杆菌培阳分离菌2175株，分别采用PNB/TCH生长试验和DNA微阵列基因芯片鉴别NTM，比较两种方法的鉴定结果。

结果 ;PNB/TCH生长试验初步鉴定NTM 93株，占4.28%，DNA微阵列基因芯片鉴定NTM 79株，占3.63%，PNB/TCH生长试验初步鉴定的93株NTM中，有14例为假NTM（15.05%）;PNB/TCH生长试验鉴定NTM的阳性检出率低于DNA微阵列基因芯片;79株NTM中，占比前3位的依次为胞内分枝杆菌株（37.97%）、堪萨斯分枝杆菌（21.52%）、鸟分枝杆菌（16.46%）。

结论 ;传统对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼生长试验鉴定NTM特异性较低，采用DNA微阵列基因芯片技术鉴定NTM准确，临床参考价值较大。

关键词：非结核分枝杆菌;PNB/TCH;基因芯片;菌种鉴定中图分类号：R440 ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; 文献标识码：A ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.20.054文章編号：1006-1959（2019）20-0170-02Comparison of PNB/TCH Growth and DNA Microarray Gene Chips forIdentification of Nontuberculous MycobacteriaWANG Jian1，HU Li-zhen1，ZHANG Guo-cui1，ZHAO Hui2，CHEN Zi-fang1Abstract：Objective ;To compare the growth of non-tuberculous mycobacteria （NTM）clinical isolates with p-nitrobenzoic acid/thiophene-2-carboxylate growth （PNB/TCH） and DNA microarray microarray.Methods ;A total of 2175 strains of Mycobacterium phlei isolates in our hospital from January 2013 to June 2018 were collected. PNB/TCH growth test and DNA microarray gene chip were used to identify NTM. Identification of the method.Results ;PNB/TCH growth assay initially identified NTM 93 strain， accounting for 4.28%， DNA microarray gene chip identified NTM 79 strain， accounting for 3.63%， and of the 93 NTMs initially identified by PNB/TCH growth test， 14 were pseudo NTM （ 15.05%）; PNB/TCH growth test identified that the positive detection rate of NTM was lower than that of DNA microarray gene chip; among the 79 strains ofNTM， the top 3 were followed by intracellular branching strain （37.97%）， Kansas Mycobacterium （21.52%）， Mycobacterium avium （16.46%）. Conclusion ;The traditional p-nitrobenzoic acid/thiophene-2-carboxylic acid oxime growth test has low specificity of NTM. The DNA microarray gene chip technology is used to identify NTM accurately， and the clinical reference value is large.Key words：Non-tuberculous mycobacteria;PNB/TCH;Gene chip;Strain identification近年来，非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）发病率有逐年升高趋势。

PCR测序和基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种的应用研究

基金项目：“十一五”国家重大科技专项（２００９ＺＸ１０００３２０１８；２００８ＺＸ１０００３－００４）作者单位：５１８０２０深圳市慢性病防治中心病原检验科通讯作者：王峰，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｏｗａｎｇｆｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ·论著·ＰＣＲ测序和基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种的应用研究王峰　朱玉梅　桂静　蓝雅玲【摘要】　目的评价２种分枝杆菌菌种快速鉴定方法的临床应用价值。

方法分别用１６Ｓ～２３ＳｒＤＮＡ转录间隔序列（ＩＴＳ）ＰＣＲ－直接测序和基于１６ＳｒＲＮＡ基因的基因芯片检测２１株分枝杆菌标准菌株和５０株临床分离株。

结果２１株分枝杆菌标准株中，ＩＴＳ　ＰＣＲ测序法将１８株准确鉴定到种，结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌菌株只能鉴定到结核分枝杆菌复合群，海分枝杆菌无法鉴别是海分枝杆菌还是溃疡分枝杆菌；芯片法正确鉴定１６株，１株胃分枝杆菌鉴定为堪萨斯分枝杆菌，３株不在芯片检测范围内。

５０株临床菌株中，４７株２种方法结果一致，１株不在芯片检测范围内。

结论基因芯片鉴定分枝杆菌快速、特异，准确性高，临床常规开展应用需要进一步研究。

【关键词】　分枝杆菌属；　聚合酶链反应；　寡核苷酸序列分析Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ＰＣＲ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ＷＡＮＧ　Ｆｅｎｇ，ＺＨＵ　Ｙｕ－ｍｅｉ，ＧＵＩ　Ｊｉｎｇ，ＬＡＮ　Ｙａ－ｌｉｎｇ．　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｃｈｒｏｎｉｃ　ＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　５１８０２０，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＷＡＮＧ　Ｆｅｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｏｗａｎｇｆｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｎ　ｒＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　１６Ｓ－２３Ｓｉｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｓｐａｃｅ（ＩＴＳ）ａｎｄ　ＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　１６ＳｒＤＮＡ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２１ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　５０ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ａｎｄ　ＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｏｆ　２１ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｔｒａｉｎｓ，１８ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｃｏｒｒｅｃｔｌｙ　ａｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｌｅｖｅｌ　ｂｙ　ＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍａｎｄ　Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｃｏｍｐｌｅｘ，ａｎｄ　Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍｓｔｒａｉｎ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ／Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ．１６ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｃｏｒｒｅｃｔｌｙ　ｂｙ　ＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ，ｂｕｔ１　Ｍ．ｇａｓｔｒｉ　ｓｔｒａｉｎ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ，３ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｂｓｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｏｂｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ．Ｏｆ　５０ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ，４７ｗｅｒｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｂｙ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ，ａｎｄ　ｏｎｅ　Ｍ．ｌｅｎｔｉｆｌａｖｕｍｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗａｓｎｏｔ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｏｂｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ　ｗａｓ　ａｓｐｅｃｉｆｉｃ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｓｔ　ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ．【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ；　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ；　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ａｒｒａｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ我国的结核病疫情严重，非结核分枝杆菌（ｎｏｎ－ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ　ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ，ＮＴＭ）的感染率在我国和世界范围内也都呈上升趋势。

急性肾损伤的检测指标NGAL的研究进展

ｂｙｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａＮｓｉｎｇｌｅ２ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒ —
［８］梁建琴，高华方，李洪敏，等．ＰＣＲ一荧光探针法快速检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌口］．中华医学会结核病学分会２０１１年学
ｉｓｏｌａｔｅｓｉｎＭａｌａｙｓｉａ［Ｊ］．ＪＭｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１０，５９（Ｐｔｌ１）：１３１１ —
１３１６．
口］．ＬｅｔｔＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１１，５２（５）：５４６ — ５５４．［６］王峰，朱玉梅，桂静，等．ＰＣＲ测序和基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种的应用研究［Ｊ］．中国防痨杂志，２０１１，３３（１１）：７１３－７１７．
［Ｊ］．生物技术通讯，２０１１，３（２２）：４１９－４２３．
［１９］ＮｏｔｏｍｉＴ，ＯｋａｙａｍａＨ，ＭａｓｕｂｕｃｈｉＨ，ｅｔａ１．Ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ
［５］ＮｇａｎＧＪ，ＮｇＬＭ，ＪｕｒｅｅｎＲ，ｅｔａ１．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ

PCR-反向点杂交法耐药基因检测和BD960结核菌药敏在耐药结核病检测中的应用价值

PCR-反向点杂交法耐药基因检测和BD960结核菌药敏在耐药结核病检测中的应用价值李晓琴 1），周　敏 2），王　霖 1），曾海燕 2），骆鹏举 2），林丽佳 2）（1）昆明市第三人民医院检验科；2）综合结核科，云南昆明　650301）[ 摘要 ] 目的　分析PCR-反向点杂交法耐药基因检测和BD960结核分枝杆菌药物敏感性试验在结核分枝杆菌耐药性方面的差异，并探讨其临床应用价值。

方法　收集356例昆明市第三人民医院结核科住院患者的痰和灌洗液标本，分别用2种方法检测异烟肼（H ）、利福平（R ）、链霉素（S ）、乙胺丁醇（E ）的药物敏感性，结果通过校正卡方检验对比分析。

结果　2种检测方法对单耐药、多耐药、耐多药结核菌检测，在99%的置信区间，校正χ2均是P < 0.01。

结论　可认为2种方法对3种耐药的检测有差异性。

结核菌药敏试验耐多药PCR-反向点杂交法优于BD960检测；单耐药、多耐药BD960药敏优于PCR-反向点杂交法。

[ 关键词 ] 结核分枝杆菌；耐药；基因检测； BD960药敏[ 中图分类号 ] R446.6 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] 2095 − 610X （2020）12 − 0138 − 04Efficacy of PCR-reverse Dot Hybridization in Drug Resistance Gene Detection and Drug Sensitivity of BD960 Tuberculosis in DrugResistance Tuberculosis DetectionLI Xiao-qin 1），ZHOU Min 2），WANG Lin 1），ZENG Hai-yan 2），LUO Peng-ju 2），LIN Li-jia 2）（1） Dept. of Laboratory ; 2） Dept. of Tuberculosis ，The 3rd People’ s Hospital ofKunming ，Kunming Yunnan 650301，China ）［Abstract ］ Objective To analyze the difference between PCR-reverse dot hybridization drug resistance gene detection and BD960 Mycobacterium tuberculosis drug sensitivity test in identifying drug resistance of Mycobacterium tuberculosis，and to discuss its clinical efficacy. Methods The drug sensitivity of isoniazid (H)，rifampicin (R)，ethambutanol (E) and streptomycin (S) in sputum and lavage samples of 356 hospitalized TB patients were collected in The 3rd People's Hospital of Kunming were detected simultaneously by two testing methods. The results were compared and analyzed by correction χ2 test. Results Single drug resistance，multi-drug resistance and MDR were detected by the two testing methods. On the 99% confidence interval，the adjusted chi-square values are all P < 0.01. Conclusion The two methods have differences in the detection of three kinds of resistance. The multidrug resistance PCR-reverse dot blot hybridization method of Mycobacterium tuberculosis drug sensitivity test is better than BD960 detection. The drug sensitivity of single drug resistance and multi-drug resistance BD960 is better than PCR-reverse dot hybridization.［Key words ］ Mycobacterium tuberculosis；Drug resistance；Gene detection；BD960 sensitivity结核病（tuberculosis，TB ）是广泛关注和重点防控的的公共卫生问题之一 [1]。

结核分枝杆菌实验室检测方法的临床研究

结核分枝杆菌实验室检测方法的临床研究结核分枝杆菌是导致结核病发生的主要致病菌，传染性强，具有较高的发病率和病死率。

通常临床诊断结核病时，对诊断方法要求高，需准确、快速、特异性诊断，同时可以准确判断结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。

目前结核分支杆菌实验室检测方法日益增多，而其检测结果的敏感性和特异性并没有显著提高。

本文就对结核分枝杆菌实验室检测方法进行综述研究，以此寻求简单方便、准确性高、应用广泛的实验室检测方法。

标签：结核分枝杆菌；实验室检测方法；结核病结核病是目前世界严重性慢性传染病，在早期WHO就以对结核病发出紧急预告。

结核分枝杆菌也可称为结核杆菌，在1882年Koch证明其是结核病病原体[1]。

现今诊断技术、治疗方法的改进与发展，相应降低了结核病的死亡率。

但随着而来的是结核分枝杆菌耐药菌株的出现，使结核分枝杆菌耐药率不断上升，死亡率不减反增[2]。

在治疗和控制结核病时，主要是根据实验室检测方法早期准确对结核分枝杆菌的诊断。

现综述如下文。

1细菌学诊断技术1.1直接厚涂片法直接厚涂片法操作简单、方便快速，成本低廉，是临床诊断结核病细菌学常用方法。

相关资料显示采取直接厚涂片法，其检出率与普通涂片法相比，其高出率高达19%[3]，是《结核病诊断细菌学检验规范》中对结核病诊断的规定方法。

1.2集菌涂片法集菌涂片法利用检测标本体积或离心、浮游等方法，使标本中结核杆菌富集，操作复杂，应用少。

涂片法的应用，成本低廉，操作简单，但敏感性约为37%，较低，特异性为94%[4]，无法有效准确区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。

1.3 BACTEC-TB-460快速检测系统BACTEC-TB-460快速检测系统可对结核分枝杆菌代谢产物进行有效测定，于米氏7H12培养基中添加放射性14C量，阳性则为生长指数GI值超过19[5]。

此种方法初代分离率较高，报告时间短，2d 内可检出阳性标本，而改良罗氏法最快需要约20d才可检测出阳性结果，阴性检测需2个月报告，而BACTEC-TB-460快速检测系统只需1个月[6]。

–基于PCR和DNA测序技术快速鉴定动植物品种

–基于PCR和DNA测序技术快速鉴定动植物品种随着科学技术的不断发展，生物学研究方法也在不断革新。

PCR（聚合酶链反应）和DNA测序技术成为了现代生物学领域中最为重要的实验方法之一。

这些技术不仅在基础研究中发挥着重要作用，而且被广泛应用于医疗、食品安全以及动植物品种鉴定等领域。

本文将着重介绍基于PCR和DNA测序技术快速鉴定动植物品种的原理和应用。

一、PCR技术在动植物品种鉴定中的应用PCR技术是一种体外扩增DNA片段的方法，它能够在短时间内产生大量目标DNA片段，从而方便后续的分析与鉴定。

在动植物品种鉴定中，PCR技术可以通过特异性引物选择性扩增目标基因片段，从而鉴定物种的遗传特征。

以下是PCR技术在动植物品种鉴定中的应用案例：1. 动物品种鉴定动物的基因组中有许多特定的DNA序列可以用于鉴定品种。

例如，鸟类常用的线粒体DNA序列和核DNA序列可以用来快速鉴定不同品种的鸟类。

犬种鉴定是另一个应用广泛的领域，通过PCR技术扩增犬的线粒体DNA或核DNA，可以快速准确地鉴定出犬的品种。

2. 植物品种鉴定植物基因组中的DNA序列对于鉴定物种也起着重要作用。

例如，树木的木质部DNA序列可以用于鉴定树木的物种。

此外，某些作物栽培品种在基因组中具有特定的性状基因，通过PCR技术鉴定这些基因的存在与否可以确定作物品种。

二、DNA测序技术在动植物品种鉴定中的应用DNA测序技术是指通过测定DNA分子中的碱基序列，从而获取DNA信息的方法。

这项技术的出现，使得我们能够更准确地确定DNA序列，从而实现更精确的物种鉴定。

以下是DNA测序技术在动植物品种鉴定中的应用案例：1. 动物品种鉴定DNA测序技术可以通过测定某些保守基因的碱基序列，来确定不同动物品种间的差异。

例如，通过测序线粒体DNA的D-loop区域，可以判断不同物种的遗传差异，从而进行物种鉴定和进化研究。

2. 植物品种鉴定植物基因组中的DNA序列也可以通过测序来实现品种鉴定。

2020年《中国奶牛》杂志第1~12期总目次

TOTAL CONTENTS2020·122020年《中国奶牛》杂志第1～12期总目次（括号内圆点前为期数，后为页数）★特别关注请勿谈“冠”色变 ——人和动物冠状病毒的那些事……………祁明普，郭爱珍，等（2.1）关于当前人间新型冠状病毒肺炎疫情防控对我国养牛企业生产影响及其应对措施建议………………………………………郭爱珍，彭清洁，等（2.5）新冠肺炎防控形势下湖北奶业生存现状及其对策……………………………… ………………………………………………………滑国华，梁爱心，等（2.9）产业链视角下我国干酪产业的发展与建议………………张健，杨贞耐（3.1）细数牛奶中的免疫活性蛋白……………………………丁芳，王丽，等（3.5）★奶业要闻2020中国奶业20强（D20）峰会在石家庄市隆重召开 ……………………… ……………………………………………………………张维维，张芳（10.1）第十一届中国奶业大会暨2020中国奶业展览会于石盛大召开 ……………… ……………………………………………………………张芳，范云琳（10.4）★科学研究重组酶聚合酶扩增技术及其在牛病原检测中的应用…李天芝，于新友，等（3.8）挤奶厅气载大肠杆菌的分离鉴定及其REP-PCR指纹图谱分型研究 ………… …………………………………………………………钟召兵，王宁，等（4.1）妊娠失败牛外周血中干扰素刺激基因和细胞因子的表达分析………………… ……………………………………………………………余婕，程蕾，等（5.1）调控乳蛋白合成信号通路的研究进展……………汪东阳，谢月琴，等（5.6）牛共刺激分子CD80、CD86 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 ……………………………………………………………………唐颖，邓宇（6.1）转录组中LncRNA在牛上的研究进展 ………………龚龑，刘士钊，等（9.1）大肠杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞NF-κB信号通路的影响 ………………… ……………………………………………………姜烨琪，张瑞真，等（10.9）一株乳源蜡样芽孢杆菌肠毒素基因克隆与序列分析…………………………… ………………………………………………………陈玉娟，赵瑶，等（11.1）★饲料饲养γ-氨基丁酸在缓解奶牛热应激上的应用前景 ………刘岩，杨光，等（1.1）日粮添加裂壶藻粉对奶牛生产性能和乳品质的影响…………………………… ………………………………………………………苏世灿，王建烽，等（1.5）解决当前我国奶牛蛋白饲料资源紧缺的方法与建议…………………………… ……………………………………………………李思妍，王建发，等（1.10）植物甾醇对奶牛生产性能、血液胆固醇和抗氧化能力的影响…………………………………………………………………………谢颖，金志红，等（2.12）不同降温处理工艺对北京地区奶牛夏季生产性能和生理指标的影响…………………………………………………………………孙越，直俊强，等（2.19）高效液相色谱法测定过瘤胃赖氨酸盐酸盐的含量…赵威，徐振兴，等（2.25）玉米果穗裹包青贮饲料研究……………………张红梅，刘铁军，等（3.11）葵花籽粕的营养特性及在反刍动物上的应用…金宜全，杨志强，等（3.14）玉米与红薯秧混合青贮品质研究…………………………………苏传琛（4.5）液态发酵饲料对奶牛产奶性能、血清抗氧化能力及血液生化指标的影响………………………………………………………………杨小兵，赵超，等（4.9）犊牛初乳饲喂及管理指导…………………………白雅芳，张楠，等（5.12）不同补喂剂量的精料补充料对新疆褐牛犊牛生长发育的影响………………… ……………………………………翟卫爽，古丽孜阿依·司马依，等（5.15）饲料添加剂在犊牛日粮中的应用……………………曾浩南，李政，等（6.6）酸化乳饲喂犊牛对其生长发育的影响…………郑蒙蒙，李国忠，等（6.11）短链脂肪酸促进犊牛瘤胃发育的作用机制…………范雪，马健，等（6.14）采食对荷斯坦牛两种异常口部行为的影响及其日变规律……………………… ………………………………………………………赵卿尧，孙福昱，等（7.1）鲜奶饲喂量对中国荷斯坦犊牛生长发育、血液生化指标和养分消化的影响……………………………………………………………郑会超，黄新，等（7.7）环境温度应激对奶牛的影响……………………杨志强，刘李萍，等（7.13）有机微量元素在奶牛不同生理阶段中的作用研究进展…………王晓佳（8.1）奶牛热应激情况下脂肪酸营养调控研究进展………林聪，杨玉琪，等（8.5）过瘤胃包被壁材的研究进展………………………………符运斌，刘博（8.9）大理地区几种青贮牧草产量及营养成分评价分析…张晓燕，高景舜，等（9.6）奶牛躺卧行为简要分析 ……………………………曹斌斌，郭栋，等（9.10）后备奶牛饲养管理关键点………………………祁敏丽，彭传文，等（9.13）奶牛场优质高效安全体系的建立与实施效果分析 …韩广文，张书义，等（10.12）奶牛肢蹄病的危害及营养调控技术最新研究进展邢小光，徐鸿润，等（10.15）草地贪夜蛾虫害的饲料应对措施………………邓嘉杰，姚鸿钦，等（10.20）两种固体钙制剂对荷斯坦牛产后血液离子钙水平的影响……………………… ……………………………………………………张成喜，王清新，等（10.24）牛至油促进动物生长的作用机制研究…………高春柳，王建发，等（11.8）苜蓿青贮品质评定研究进展 …………………罗润博，张养东，等（11.12）不同磷水平日粮对奶牛生产性能和磷排放量的影响…………………………… …………………………………………………………红敏，高民，等（11.17）热应激下牛舍环境变化及牛床喷雾应用探讨 …曹斌斌，胡双峰，等（12.1）添喂5-羟基色氨酸、过瘤胃5-羟基色氨酸对奶牛产奶量及血浆激素水平的影响……………………………………………曾福祥，王丽，等（12.5）通过灰色关联度综合评价筛选饲用高粱的引种最适品种和最佳收获时间…………………………………………………………史威威，徐玉青，等（12.10）★繁殖育种加拿大LPI指数修订对中国奶牛选育工作的启示 ……范强，孙亚波（1.15）牛活体采卵技术研究进展…………………………姚顺，赵明礼，等（1.19）大通牦牛DQA2基因CDS区序列分析 ……………陈朗，彭帅，等（2.29）63TOTAL CONTENTS2020·12奶牛生长性状研究进展与展望…………………………麻柱，李艳华（2.34）奶牛流产现状分析………………………………郭启勇，柳国锁，等（2.38）影响荷斯坦牛产奶量差的因素分析…………………张强，梁艳，等（3.18）国家奶牛核心育种场建设现状及建议……………李姣，刘光磊，等（3.24）不同剂量生殖激素对小鼠超排效果的影响……田风林，宋学功，等（3.27）牛早期胚胎取样对移植妊娠率的影响…………蔺惠良，苏硕青，等（4.13）西南某规模化奶牛场全年繁殖效率及其影响因素……………………………… ……………………………………………………陈婷婷，刘文娇，等（4.17）荷斯坦牛HH5遗传缺陷基因快速检测方法的建立及应用 …………………… ……………………………………………………孙愉洪，王铭正，等（5.18）奶牛胚胎早期死亡的转录组初探…………………吕小青，刘林，等（5.23）荷斯坦牛妊娠天数影响因素分析………………王晓佩，王晓锋，等（5.26）犊牛初生重分布及其对母牛助产率的影响分析………………………………… …………………………………………………薛雅之，吐日根白乙拉（6.18）江苏某发酵床养殖奶牛场日产奶量和体细胞评分影响因素分析………………………………………………………………………周部，刘雨吉，等（6.21）奶山羊羔羊成活率现状分析及建议……………边会龙，史怀平，等（7.17）BioPRYN 酶联免疫方法检测牛早孕的应用研究 …解鑫，马文丽，等（7.23）奶牛TLR4基因编码区生物信息学分析 …………高成宏，文亮，等（8.13）种公牛阴茎纤维乳头状瘤的危害及防治………焦子康，王利利，等（8.16）牛OPU卵子体外受精和早期胚胎培养的方法研究 …………………………… ………………………………………………………王志仙，朱宏波，等（9.16）本地西杂牛与德系西门塔尔牛杂交的F1代、F2代公牛生长规律研究 ……… ……………………………………………………李春芳，和利民，等（9.20）北京与上海地区中国荷斯坦牛长寿性及淘汰原因分析………………………… …………………………………………………………彭朋，杨影，等（9.23）河南省种公牛站发展现状、存在问题及对策…………………王献伟（10.28）A2纯合基因型荷斯坦牛选育技术研究 ………蒋桂娥，赵利梅，等（10.31）陕西奶山羊良种繁育体系建设思考………………王鹏飞，陈帅，等（10.34）归芎益母散对血瘀型胎衣不下奶牛生殖激素和抗氧化能力的影响…………………………………………………………………黎玉琼，黄雪利，等（11.22）热应激对种公牛精液质量影响及应对策略………王彦平，常卓，等（11.26）早期监测与预警在奶牛繁殖中的应用…………刘海萍，杨志强，等（11.30）定时人工授精后通过不同方法增加P4浓度对奶牛妊娠率的影响 ……………………………………………………………………张萌，和东迁，等（12.14）河南省牛羊种业现状、存在问题及未来发展思考……………………………… ……………………………………………………王献伟，黄永震，等（12.18）与奶牛乳脂及乳蛋白合成有关的候选基因研究进展…………………………… ……………………………………………………吕小青，杨宇泽，等（12.22）★奶牛保健2018年进口奶牛检疫情况分析 ………………窦树龙，季新成，等（1.24）奶牛副结核病流行牛场的处置方案分析………吴建勇，杨学云，等（1.28）新饲养模式下奶牛异物性肺炎的病理剖检变化及防控研究…侯引绪（1. 33）奶牛皱胃右方变位的手术整复方法……………赵永会，李淑艳，等（2.41）青海省部分规模化奶牛场乳房炎主要病原菌调查分析………………………… ………………………………………………………王军，陈广宏，等（2.45）牛轮状病毒研究进展………………………………贾伟强，曲庆，等（2.49）中西医结合治疗奶牛焦虫病……………………李四焘，张合岗，等（2.53）荷斯坦牛血液中矿物质含量与常见疾病发病关系的研究……………………… …………………………………………………………张泰彪，朱新荣（3.30）致奶牛乳房炎肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及防治建议………………………… ……………………………………………………张保海，罗正中，等（3.33）中药防治奶牛乳房炎的研究进展…………………刘昊，曹凯捷，等（3.37）云南建水地区2017-2019年牛羊布鲁氏菌病的流行病学调查分析 ………… ……………………………………………………张小苗，周玉照，等（3.40）奶牛场无乳链球菌传播途径新发现…………………骆巧，吕倩，等（4.22）新疆地区某规模化牛场荷斯坦牛发病情况分析 …赵俊亮，赵番番，等（4.25）一例支原体和大肠杆菌混合感染奶牛乳房炎的诊断…………………………… ………………………………………………………刘琴，张泉鹏，等（4.29）BVDV在牛、羊之间的传播及预防 ……………王建东，李艳艳，等（5.29）一例夏南牛大肠杆菌与链球菌混合感染的病例报告…………………………… ………………………………………………………刘心，彭清洁，等（5.32）奶牛隐孢子虫虫种和基因型的国内研究进展………黎巧，肖冉，等（6.26）新疆和静县绵羊细粒棘球蚴流行株基因分型研究……………………………… ………………………………………………………薛新梅，齐萌，等（6.30）牛源无乳链球菌的耐药率调查及其耐药机制研究进展………………………… ………………………………………………………李明，赵艳坤，等（6.34）奶牛乳房炎研究进展及国内防治现状思考……………………张俊杰（7.26）一起规模奶牛场犊牛腹泻病的病原学诊断………覃杰，宫国令，等（7.31）新疆石河子地区牛结核病检测方法的比较研究………………………………… ……………………………………………………王宏伟，李新萍，等（7.33）上海地区奶牛“两病”净化关键技术及模式探索……………………………… ……………………………………………………叶耿坪，刘光磊，等（7.36）中国部分规模化牧场奶牛低血钙现状调查分析………………谢心美（8.19）奶牛乳房炎抗生素替代疗法的研究进展…………………………周曼（8.23）新疆石河子地区某牧场致奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验………………………………………………………………马博，卜三平，等（8.28）不同碘络合物药浴液对奶牛乳头健康及牛奶体细胞数的影响研究………………………………………………………………司马博锋，花月平，等（8.33）山楂对围产期奶牛肝功能和血脂的影响………毛桂芸，张永飞，等（8.36）2019年进口奶牛检疫情况分析 ………………窦树龙，江红旗，等（9.28）上海地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析………………………… ………………………………………………………朱宁，赵艳坤，等（9.31）某奶牛场犊牛腹泻的病原诊断及防控建议………刘伯承，王慧，等（9.36）西宁市牛衣原体病流行病学调查………………王淑琴，张成图，等（9.40）牛结核病流行现状与诊断技术研究 …………李少晗，崔尚金，等（10.38）早期预警在奶牛疾病中的应用 ………………杨玉琪，刘李萍，等（10.42）蓝舌病病毒非结构蛋白研究进展…………………赵瑶，易华山，等（10.45）牛奶体细胞分型指数变化规律研究………………安朋朋，孙健，等（10.50）青海农区育肥牦牛疾病调查与综合防控对策………张玉芳，蔡相银（10.55）奶牛场变形蹄及蹄病数据分析…………………崔文昊，孙德孝，等（11.34）山西规模牛场奶牛乳房炎发病情况调查………韩文儒，杨丽华，等（11.38）新兽药酮洛芬的研究开发及临床应用进展……寇贺红，焦晓军，等（11.41）某规模化牧场致奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的鉴定及耐药性分析…………………………………………………………………甘卫泽，李益涛，等（11.45）甘肃省武威市凉州区奶牛病毒性腹泻病毒的流行病学调查与分析…………………………………………………………………………王衡，满海燕（12.26）兽医日常工作给奶牛带来的应激影响及缓解措施……………黄荣春（12.29）河南省某肉牛屠宰场牛支原体感染情况调查…徐引弟，焦文强，等（12.33）芍药甘草汤治疗奶牛卧地不起综合征案例…………范占炼，陈志良（12.36）64TOTAL CONTENTS2020·12★机械设施DG/T 082-2019《粪污固液分离机》推广鉴定大纲解读 ……………………… ……………………………………………………………杜金，陈立丹（1.36）DG/T 086-2019《畜禽尸体处理机》推广鉴定大纲解读 …陈立丹，杜金（3.55）DG/T 148-2019《有机废弃物好氧发酵翻堆机》推广鉴定大纲解读 ………………………………………………………………………杜金，陈立丹（4.55）传送带式饲喂系统在规模化奶牛场的应用………………………王波（5.35）农业滴灌设备流量一致性测试方法探讨…………………冯健，李民（5.39）畜牧养殖机械推广鉴定技术体系研究…………………………王明磊（8.52）自走式青饲料收获机噪声测定结果影响因素分析……冯健，刘德普（9.54）德国畜禽粪污资源化利用政策与技术装备研究 …刘声春，王桂显，等（9.57）打捆机捡拾宽度实验室间比对研究………………刘辉，王明磊，等（10.67）信息化技术在奶牛生产中的应用……………………王云，芦娜，等（11.61）基于双目立体视觉的挤奶机自动奶杯套杯技术研究…………………………… ……………………………………………………李小明，杨开锁，等（12.42）★乳与乳制品不同食物源中乳酸菌的分离及酸奶发酵性能研究郑天宇，彭帅，等（1.43）动物双歧杆菌A6体内外安全性评价 ……………周晓娟，桑跃，等（1.48）葡萄汁奶酒发酵工艺研究………………………林少华，李星宇，等（2.55）模糊数学评判法在大麦若叶牛奶研制中的应用…孙记涛，郑阳，等（2.60）抹茶椰子乳饮料制作工艺的研究…………………………杨洋，高航（3.44）发酵牦牛乳蛋白肽的分离纯化及抗氧化活性研究……………………………… ……………………………………………………魏光强，李华瑞，等（4.32）牛奶酒酿造过程中微生物多样性的动态变化…林少华，贾红亮，等（4.39）凝固型酸奶仪器检测指标与感官指标间的相关性研究………………………… …………………………………………………………郭奇慧，雷守成（5.42）生鲜乳中芽孢杆菌的危害与控制措施……………李建洲，邵伟，等（5.47）双歧杆菌生物特性及其功能研究进展……………李吉平，陈雪，等（6.57）中美第一阶段经贸协议中几种乳制品及其工艺分析…………………………… ……………………………………………………郭利亚，顾佳升，等（7.39）动物双歧杆菌NMC对小鼠溃疡性结肠炎的预防作用 ………………………… ……………………………………………………姜岩世，张永祥，等（7.43）副干酪乳杆菌YLZB对小鼠免疫的调节作用 …姜岩世，张永祥，等（8.40）枸杞姜撞奶的工艺研究………………………………钱旺，丁波，等（8.44）应用于婴幼儿配方奶粉中油脂的对比分析……粘靖祺，王青云，等（8.48）发酵牦牛乳菌种筛选及加工工艺优化……………杨婧，郑娴余，等（9.44）花生牛奶饮料原料配比优化及加工工艺的研究………李伟，辛跃珍（9.50）植物乳杆菌FEED8对小鼠抗氧化作用的研究 …闫刘慧，王小鹏，等（10.59）乳制品减糖方案研究进展…………………………王鑫，许凤莲，等（10.63）软质干酪生产工艺研究………………………………辛跃珍，刘淑玲（11.49）牛奶免疫调节及预防慢性基础病作用简述………王鑫，许凤莲，等（11.53）牛奶浓缩蛋白的加工制备、特性及其应用研究进展…………楼盛明（12.39）★质量安全提高液相色谱固相萃取柱使用效率的可行性研究……………辛跃珍（1.40）离子色谱法测定生乳中硫氰酸根的方法研究 …叶巧燕，高亚男，等（4.49）液体乳产品加工过程质量控制浅谈……………………………辛跃珍（6.62）离子色谱法同时测定生鲜乳中碘离子、硫氰酸根离子………………………… …………………………………………………………李征，黄骅，等（7.47）乳中硫氰酸钠检测方法研究进展……………………张宁，周鑫，等（9.62）★DHI专栏应用MIR预测牛健康状况的研究进展 ……陈焱森，上官爱哨，等（1.58）基于DHI数据浅谈石河子地区奶牛酮病发病情况及预防措施 ……………… ………………………………………………………高天乐，徐烨，等（1.64）天津地区奶牛生产性能测定（DHI）工作现状 …夏敏，赵庆彬，等（3.48）利用DHI奶样检测孕酮的可行性分析 …………邹杨，娄文琦，等（3.51）防腐剂对DHI检测指标及防腐效果的影响 ……高天乐，徐烨，等（4.44）黑龙江省规模化奶牛场副结核病血清学调查 …师庆伟，桑学波，等（7.61）DHI防腐剂不同添加形式对乳品质检测指标的影响 …高天乐，何开兵（8.60）★奶业经济休闲观光牧场的现状、机遇、发展前景及建议………………吴胜军（1.51）十堰市都市型奶业的发展定位和生产方式……张荣兵，曹钟鑫，等（1.54）2019年中国乳业贸易形势与后期展望 ……………何洋，郭杰，等（3.59）从生鲜牛乳监测角度谈宁夏奶产业的发展……高建龙，周海宁，等（3.63）婴幼儿配方乳粉市场需求测算模型应用研究…张书义，祝庆科，等（6.40）2019年山东省奶业发展情况、存在问题及对策建议 ………………………… ……………………………………………………薛光辉，张汝美，等（6.43）筑建可持续低碳经营的中国奶业……………………陈幼春，王雅春（6.47）黑龙江省完达山乳业股份有限公司战略管理研究……………陈仪静（6.51）2019年中国奶业市场分析与未来10年展望 …………………王东杰（7.51）中国奶牛生产布局变迁影响因素分析……………………………崔力航（7.56）荷兰奶业补贴政策对我国奶业振兴的启示………祝丽云，李彤，等（12.46）法国奶业发展现状及与中国合作研究……………王礞礞，张超，等（12.51）山东省奶业发展现状、存在问题与对策建议…胡智胜，李建斌，等（12.55）★管理培训提升牧场自主管理水平，推动奶源基地建设 …时发亿，张巧娥，等（5.53）牧场检测实验室风险管理分析及控制…………………………王小丽（5.59）基于线上教学的乳品检验教学实施报告…………刘倩，孙先枝，等（12.59）★养殖环境保护华北地区规模化奶牛场用水及粪污处理情况调查报告………………………… ………………………………………………………靳爽，李聪聪，等（2.64）我国畜禽粪便资源化利用的现状及展望…………李莉，杨昕涧，等（11.55）★牧草专栏我国东北、西北地区秸秆牧草类饲料资源常规概略养分含量调查报告………………………………………………………………陈志敏，张姝，等（4.59）燕麦在凉山地区不同刈割期草产量分析…………………………何巍（8.56）凉山地区燕麦与光叶紫花苕不同混播比例对生物量影响的研究………………………………………………………………………柳茜，乔雪峰，等（11.64）★信息动态“以牛为先质胜未来” 2020第七届勃林格奶牛论坛在上海成功举办 ………… ……………………………………………………………………本刊讯（9.66）致力挤奶设备创新分析分享奶业最新成果 ——奶业荐新论坛在石家庄国际会展中心成功举办……本刊讯（10.71）65。

结核分枝杆菌的分子生物学鉴定

结核分枝杆菌的分子生物学鉴定结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起人类结核病的主要病原体，具有很高的传染性和致死率。

目前，结核病仍然是全球公共卫生问题，尽管已经有了许多有效的治疗方案，但是由于结核分枝杆菌的进化和抗药性的出现，人类与结核病之间的斗争仍然在进行。

结核分枝杆菌的种类很多，据估计约有150种，但其中只有少数能够感染人类。

因此，在进行结核病诊断和治疗时，需要对病原体进行准确鉴定。

传统鉴定方法主要基于形态学、生理化学和生物学特征等方面，但是这些方法往往需要很长时间，且存在误判的风险。

近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，结核分枝杆菌的分子生物学鉴定技术逐渐成为一种快速、准确、可靠的鉴定方法。

分子生物学鉴定技术主要包括PCR、脱氧核糖核酸（DNA）序列分析和病原菌基因芯片技术等。

其中，PCR技术是最常用的方法之一。

PCR技术利用特异引物扩增病原体基因（一般选择16S rRNA和IS6110基因），然后通过凝胶电泳分离和检测，可实现对结核分枝杆菌的快速鉴定。

另外，PCR技术也可用于检测结核分枝杆菌的耐药性基因以及特定毒力因子等。

DNA序列分析是一种更加准确的结核分枝杆菌鉴定方法。

它利用PCR技术扩增目标基因，然后将扩增产物纯化、测序，并与基因序列数据库比对，确定结核分枝杆菌的种类和亚型等。

由于M. tuberculosis的基因组序列已经被测定，DNA序列分析对于对结核分枝杆菌的鉴定更为准确和可靠。

病原菌基因芯片技术是一种较新的结核分枝杆菌鉴定方法，它利用在晶片上固定的检测探针，可同时检测数以千计的病原菌基因（包括结核分枝杆菌和其他病原体），并通过计算机软件分析得出结果。

这种技术不仅可用于结核病诊断，还可以用于监测传染病病原体在不同地区的分布、病原体进化、抗药性的形成等方面的研究。

总之，分子生物学鉴定技术为结核病的诊断和治疗提供了更加快速、准确、可靠的解决方案。

分子生物学常用检测技术

分子生物学常用检测技术分子生物学是一门研究生物体内分子互动和功能的科学，其研究领域涵盖了基因组学、蛋白质组学、转录组学、代谢组学等。

这些领域的研究需要借助各种检测技术来实现，以下是几种常用的分子生物学检测技术。

1、基因测序技术：基因测序技术是测定DNA序列的技术，它可以直接读出基因序列，是分子生物学研究的重要工具。

基因测序技术可用于基因组学研究，解析物种的基因组结构和功能，也可以用于疾病的诊断和治疗。

2、聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种用于快速、灵敏地扩增特定DNA片段的分子生物学技术。

通过PCR，我们可以将微量的DNA片段进行数百万倍的扩增，从而可以进行后续的分析和检测。

PCR技术广泛应用于基因克隆、突变分析、疾病诊断等领域。

3、生物芯片技术：生物芯片是一种高密度DNA阵列技术，可以同时对大量基因进行检测和分析。

生物芯片技术可用于基因表达谱分析、基因多态性研究、疾病预测和诊断等。

4、质谱技术：质谱技术是一种用于分析生物样品中分子质量和组成的技术。

通过质谱技术，我们可以对蛋白质、多糖、脂质等生物分子进行定性和定量分析。

质谱技术广泛应用于蛋白质组学研究、药物发现、疾病诊断等领域。

5、细胞荧光染色技术：细胞荧光染色技术是一种用于观察细胞内生物分子活性的技术。

通过荧光染料对目标分子进行标记，我们可以在显微镜下观察到细胞内分子的分布和活性。

细胞荧光染色技术广泛应用于细胞信号转导、药物筛选等领域。

以上仅是分子生物学领域中的几种常用检测技术，实际上还有许多其他的实验技术和方法如核磁共振技术、双向电泳、免疫沉淀等等，这些技术的发明和发展都为分子生物学的研究提供了强有力的支持。

各种技术的选择和使用主要取决于研究目的和研究样本的类型。

随着科学技术的发展，未来的分子生物学检测技术将更加灵敏、高效和个性化。

分子生物学常用技术及其应用分子生物学是一门研究生物大分子结构和功能的科学，包括DNA、RNA 和蛋白质等。

医学领域中的分子诊断技术及其临床应用研究

医学领域中的分子诊断技术及其临床应用研究医学研究的发展为人们的健康和生活质量带来了巨大的变革。

随着科学和技术的不断发展，诊断和治疗工具也得到了极大的改善。

分子诊断技术是其中的重要代表之一，因其高灵敏度和特异性而被广泛应用于临床医学。

一、分子诊断技术的原理分子诊断技术是一种基于分子遗传学和生物化学的检测技术。

其原理是利用分子生物学的手段，对具有特异性的分子标志进行检测，以便在疾病的早期阶段对其进行检测和诊断。

PCR技术PCR技术是分子诊断技术中最常用的一种技术，其原理是在核酸片段中选择特定的序列，通过聚合酶链式反应（PCR）扩增这些序列来判断患者是否感染了病原体。

PCR技术还可以应用于各种基因检测、基因突变检测、基因分型、基因定量等领域。

基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量的分子诊断技术。

其原理是通过固相法，将数千甚至数百万个具有特定的DNA序列的探针固定在芯片上，使其与待检测核酸分子进行特异性杂交，从而检测该核酸分子的含量和基因表达水平。

二、分子诊断技术的临床应用血液肿瘤诊断血液肿瘤是一种常见的恶性肿瘤。

传统的诊断方法是通过骨髓活检、外周血细胞学检查、细胞表面标志物检测等方式进行诊断。

然而，这些检测手段具有一定的局限性，无法对早期病变进行检测。

分子诊断技术能够实现对血液肿瘤患者的早期筛查和诊断。

例如，应用基因芯片技术可以检测出白血病患者的特定基因表达模式，并快速确定治疗方案，提高治疗效果。

病原体检测分子诊断技术在病原体检测上的应用广泛。

例如，在感染性疾病诊断中，PCR技术已经成为主要的检测手段。

此外，利用PCR技术和基因芯片技术对HIV、结核分枝杆菌、HPV、乙肝病毒等病原体的检测已成为临床应用例行检查手段。

基因治疗利用分子诊断技术，可以对人类基因进行研究，包括基因检测、基因序列分析、基因表达谱分析等。

这对基因治疗技术的开发和实现具有重要意义。

三、结语尽管分子诊断技术在临床应用中具有广阔前景，但是也存在一些挑战。

基因芯片技术检测贵州省结核分枝杆菌耐药基因KatG和inhA

基因芯片技术检测贵州省结核分枝杆菌耐药基因KatG和inhA欧维正;陈峥宏;陈静;骆科文;王燕;秦万;蒙俊【摘要】目的了解本地区结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)相关耐药基因katG和inhA的突变特征,评价基因芯片法对MTB INH耐药性检测的临床应用价值.方法应用基因芯片法对经PCR-荧光探针法鉴定为MTB阳性的2 738例病人标本进行INH耐药性检测,分析其相关耐药基因katG和inhA的突变特征,同时应用比例法检测上述同期送检的相同病人的同类型标本经罗氏培养MTB阳性菌株的INH耐药性,比较两种方法的检测结果.结果 2 738例MTB核酸阳性标本经基因芯片法检测,INH耐药465例,耐药率16.98％,其中以katG 315 (AGC→ACC)突变为主,基因突变率为78.06％,其次为inhA-15(C→T),katG 315 (AGC→AAC),突变率分别为16.13％和5.59％.上述病人同期送检的同类型标本有1 493例经罗氏培养MTB阳性,比例法检测,INH耐药255例,耐药率17.08％,对应的基因芯片法检测结果为INH耐药249例,耐药率16.68％.以比例法结果为判断标准,基因芯片法测定INH 耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)及准确性分别为85.49％、97.50％、87.55％、97.03％和95.45％.结论本地区INH耐药以katG 315 (AGC→ACC)和inhA-15(C→T)突变类型为主;基因芯片对MTB INH耐药性检测具有高敏感性、特异性、准确性和快速性,可用于本地区MTBINH耐药性的快速检测.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2015(031)007【总页数】4页(P655-658)【关键词】基因芯片;异烟肼;基因突变;比例法药物敏感性试验;结核分枝杆菌【作者】欧维正;陈峥宏;陈静;骆科文;王燕;秦万;蒙俊【作者单位】贵阳市公共卫生救治中心,贵阳 550003;贵阳医学院微生物学教研室,贵阳 550025;贵阳市公共卫生救治中心,贵阳 550003;贵阳市公共卫生救治中心,贵阳 550003;贵阳市公共卫生救治中心,贵阳 550003;贵阳市公共卫生救治中心,贵阳550003;贵阳市公共卫生救治中心,贵阳 550003【正文语种】中文【中图分类】R378.91异烟肼(isoniazid，INH)是治疗结核病的首选化学药物，对结核病的有效控制起着重要作用。

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性张俊仙;吴雪琼;阳幼荣;梁艳【期刊名称】《中国防痨杂志》【年(卷),期】2011(033)010【摘要】目的应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)对利福平和异烟肼的耐受性,评价其临床应用价值.方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增一基因芯片杂交的方法检测经常规药敏实验证实的30株Mtb利福平和异烟肼敏感株和5.株耐利福平和异烟肼分离株的堆rB基因及katG和inhA基因突变,同时以PCR-直接测序法为对照.结果应用PCR-基因芯片与基因测序方法检测30株Mtb利福平敏感株咖B基因和异烟肼敏感株katG基因和inhA基因均为野生型.50株Mtb利福平耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析3株rpoB基因均为野生型,41株均为突变型;6株PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.50株Mtb异烟肼耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析16株katG基因和30株inhA基因均为野生型,31株katG基因均为315位密码子突变,7株inhA基因均为-15位突变型,其中2株为katG和inhA双重突变,3株katG和13株inhA PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.结论应用PCR-基因芯片方法可快速、有效地检出大多数Mtb耐多药分离株,指导临床用药.【总页数】6页(P680-685)【作者】张俊仙;吴雪琼;阳幼荣;梁艳【作者单位】100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室【正文语种】中文【相关文献】1.长春地区基因芯片法和比例法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究 [J], 赵淑杰;2.基因芯片和比例法药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究 [J], 欧维正;骆科文;王燕;秦万;蒙俊;张廷梅3.基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价 [J], 许榕青;李丹;林银霞;黄明翔;陈新朝4.基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的研究 [J], 熊敏;骆科文;周忠;欧维正5.基因芯片技术对结核分枝杆菌利福平及异烟肼的耐药性检测研究 [J], 孙桂英; 赵刚; 沈燕; 徐密琴; 高胜利; 俞净; 钮志林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

应用基因芯片快速检测分枝杆菌

Ｓ－ｉｇＨＥＪａ — ｎＩＬｎＨａ，伽ＪｎＨＩＹｕＬｎ，ＣＮｉｎＹｕ，Ｌｉ— ｉｕ，
ＣＥＹｎ－ｎ，ＹＧＹｎ－ｕｎＨ一ｉｇＨＮｏｇＨｏｇＡＮｏｇＱａ，ＥｊＪｎ
ＤｅａｔｎｔｆＣｌｎｉＬｂｒｔＯ，ＧｕｎｚｏＧｅｅａＨｏｐｉａｏａｚｏｕｉｉａｙｐｒｍｅｏｉｃａｏａｏ，ａｇｈｕｎｒｌｓｔｌｆＧｕｎｇｈＭｌｔｒＣｏｍｍｎｎｄＧｕｎｚｏ５１ａｇｈｕ００１，Ｃｈｎ０ｉａ
［ｓｒｃ］ＯｊｃｉｅＴｖｌａｈｅｆｍｎｅｏａｂｏｈｐｓｓｍｆｒｄｔｔｎＭｃｂｅｉｍｉｃｎａＡｂｔａｔｂｅｔ：ｏｅａｕｔｔｅｐｒｒａｃｆｉｉｙｔｏｅｃｉｙｏｔｒｎｌｉｌｖｅｏｅｅｅｏｗｔｕｉｃ
ｔｓｅｉｐｒｌｅｂｉｃｉｓｓｅｅｔｄｎａａｌｌｂｙｏｈｐｙｔｍａｄｃｄ—ａｔｔｉｉｇＲｅｕｔｍｉｒቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ｒｙｎａｉ —ｆｓｓａｎｎ．ｓｌｓｅｏｒａｄｅｅｔｏｙｏ（ｔｒｕｔｃｉｎＭｃｂｕ．ｉｍｐｓｔｖｒｔｅｏｉｉｅａｅ
生物技术通讯ＬｒＲＳｌＯＴＨＮＯＧＹＶｏ．２Ｎ．ＥｒＥＮＢＩＥＣＯＬ１ｏ３２Ｍａ．２ｙ０１１
４１９
ｄｉ０３６￣．ｓ．０９００．１．．６ｏ：１．９ｉｎ１０－０２２００９ｓ０１３２

利用基因芯片法检测鸟分枝杆菌

利用基因芯片法检测鸟分枝杆菌史新辉;王芳;龙宇鹏;方丽【摘要】目的通过PCR扩增和基因芯片技术检测鸟分枝杆菌,并与现行的细菌培养法进行比较分析,使基因芯片法检测鸟分枝杆菌能尽快应用于临床.方法对95例痰液标本进行DNA提取、PCR扩增、基因芯片检测,与细菌培养法检测结果进行比对分析.结果结果显示,以细菌培养法为参考方法,培养法检出鸟分枝杆菌5例,基因芯片检测出4例,基因芯片检测法的灵敏度为80.0％;培养法检出其他菌株及阴性样品89例,基因芯片检出88例,特异性为98.9％;基因芯片法与培养法的总体符合率为97.9％,两种方法的检测符合率无显著性差异(P＞0.05).结论基因芯片法灵敏度高、特异性强,与细菌培养检测结果符合度高,而且比常规的细菌培养法快捷、简便,非常适合鸟分枝杆菌的临床检验.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2014(024)012【总页数】3页(P1344-1346)【关键词】基因芯片;鸟分枝杆菌;临床检验【作者】史新辉;王芳;龙宇鹏;方丽【作者单位】400020 重庆,解放军324医院检验科;400020 重庆,解放军324医院检验科;400020 重庆,解放军324医院检验科;成都军区疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R378.91鸟分枝杆菌病是由鸟-胞内分枝杆菌复合体(Mycobacterium avium complex,MAC)[1]感染引起的人兽共患性传染病,早期症状不明显,多是发展到中后期通过胸部X光片或CT检查才被发现[2]。

目前,临床多采用抗酸染色、培养法来检测[3]。

抗酸染色操作简便,但灵敏度不高,不能鉴定细菌种类,只能作为初筛手段；培养法可以进行鉴定及药敏试验,是目前微生物鉴定的最有效和常用的方法。

但分枝杆菌培养一般需要7～14 d才可出结果,容易延误临床诊断。

与培养法相比,基因芯片法[4]检测时间短、通量高,可以将检测时间缩短为6 h左右。

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中国防痨杂志２０１１年１１月第３３卷第１１期ＣｈｉｎＪＡｎｔｉｔｕｂｅｒｃ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．１１
中心，本室保存。分别是结核分枝杆菌Ｈ３７ＲｖＡＴＣＣ２７２９４、胞内分枝杆菌ＡＴＣＣ１３９５０、不产色分枝杆菌ＡＴＣＣ１９５３０、草分枝杆菌ＡＴＣＣ１１７５８、耻垢分枝杆菌ＡＴＣＣ１９４２０、非洲分枝杆菌ＡＴＣＣ２５４２０、戈登分枝杆菌ＡＴＣＣ１４４７０、海分枝杆菌ＡＴＣＣ９２７、金色分枝杆菌ＡＴＣＣ２３３６６、堪萨斯分枝杆菌ＡＴＣＣ１２４７８、瘰疬分枝杆菌ＡＴＣＣ１９９８１、母牛分枝杆菌ＡＴＣＣ１５４８３、鸟分枝杆菌ＡＴＣＣ２５２９１、脓肿分枝杆菌ＡＴＣＣ１９９７７、偶然分枝杆菌ＡＴＣＣ６８４１、浅黄分枝杆菌ＡＴＣＣ１４４７４、胃分枝杆菌ＡＴＣＣ１５７５４、龟分枝杆菌ＡＴＣＣ３５７５２、副偶发分枝杆菌ＡＴＣＣ１９、爱知分枝杆菌ＡＴＣＣ２７２８０、新金色分枝杆菌ＡＴＣＣ２５７９５。５０株临床分离株由深圳市慢性病防治中心临床痰标本中分离，经对硝基苯甲酸（ｐａｒａｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ，ＰＮＢ）生长试验初步鉴定为ＮＴＭ４７株，结核分枝杆菌复合群（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｃｏｍｐｌｅｘ，ＭＴＣ）３株。
（二）试剂改良罗氏培养基由本室制备；ＰＣＲ体系各试剂购自宝生物工程大连有限公司；引物由上海Ｉｎｖｉｔｒａ－ｇｅｎ公司合成；ＢｉｏＭｉｘｅｒ Ⅱ 芯片杂交仪、ＳｌｉｄｅＷａ－ｓｈｅｒ８芯片洗干仪、ＬｕｘＳｃａｎ－１０Ｋ微阵列芯片扫描仪、分枝杆菌菌种鉴定芯片试剂盒为北京博奥公司产品。二、方法（一）菌株处理按照中国防痨协会《结核病诊断实验室检验规程》，改良罗氏培养基复苏菌株，置于３７ ℃ 培养，并通过观察其生长速度、色泽等生物学性状进行生长特性鉴定。（二）１６Ｓ～２３ＳＩＴＳ测序鉴定１．ＤＮＡ制备：水煮法提取培养菌株ＤＮＡ。置于１００℃水浴箱中煮沸灭活３０ｍｉｎ，１８０００×ｇ离心１０ｍｉｎ，取上清液作为ＤＮＡ模板，于－２０ ℃ 冰箱保存。２．引物设计与合成：根据分枝杆菌１６Ｓ～２３ＳｒＤＮＡ转录间隔区序列，参考文献设计引物。［２－３］上游引物Ａ１：５′－ＧＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧＴＡＧＣＣＧ；下游引物Ａ２：５′－ＧＡＴＧＣＴＣＧＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴ－ＣＹＡ，分别位于上游１６ＳｒＤＮＡ的末端和１６Ｓ～２３ＳｒＤＮＡＩＴＳ序列保守区。３．ＰＣＲ扩增及测序：扩增反应体积为２５μｌ，含１０×ｂｕｆｆｅｒ缓冲液２．５μｌ，４×２．５ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ２μｍｏｌ，１０ｐｍｏｌ引物各２．５μｌ，ｒＴａｑＤＮＡ聚合酶０．２５μｌ（５Ｕ／μｌ），模板ＤＮＡ５μｌ。反应条件：９５ ℃
学方法中，ＤＮＡ测序是检测分枝杆菌特异性核苷酸序列最直接可靠的方法，已成为菌种鉴定的 “金标准”。以ＰＣＲ和核酸探针杂交技术为基础的分子鉴定方法已经商业化，并得到广泛的应用评价。［１］近期我国基于１６ＳｒＲＮＡ基因的基因芯片试剂盒也得ＳＦＤＡ的批准用于临床。本研究分别以１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ基因转录间隔序列（ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒｓ，ＩＴＳ）ＰＣＲ－直接测序和基于１６ＳｒＲＮＡ基因的ＰＣＲ－基因芯片对２１株分枝杆菌标准株和５０株临床分离株进行菌种鉴定，探讨两种方法的临床应用价值。
【关键词】分枝杆菌属；聚合酶链反应；寡核苷酸序列分析
ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＰＣＲｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙｆｏｒｒａｐｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐｅｃｉｅｓＷＡＮＧＦｅｎｇ，ＺＨＵＹｕ－ｍｅｉ，ＧＵＩＪｉｎｇ，ＬＡＮＹａ－ｌｉｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｇｅｎｉｃＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｈｅｎｚｈｅｎＣｅｎｔｅｒｆｏｒＣｈｒｏｎｉｃＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ５１８０２０，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＷＡＮＧＦｅｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｏｗａｎｇｆｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ
中国防痨杂志２０１１年１１月第３３卷第１１期ＣｈｉｎＪＡｎｔｉｔｕｂｅｒｃ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．１１
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·论著·
ＰＣＲ测序和基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种的应用研究
王峰朱玉梅桂静蓝雅玲
【摘要】目的评价２种分枝杆菌菌种快速鉴定方法的临床应用价值。方法分别用１６Ｓ～２３ＳｒＤＮＡ转录间隔序列（ＩＴＳ）ＰＣＲ－直接测序和基于１６ＳｒＲＮＡ基因的基因芯片检测２１株分枝杆菌标准菌株和５０株临床分离株。结果２１株分枝杆菌标准株中，ＩＴＳＰＣＲ测序法将１８株准确鉴定到种，结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌菌株只能鉴定到结核分枝杆菌复合群，海分枝杆菌无法鉴别是海分枝杆菌还是溃疡分枝杆菌；芯片法正确鉴定１６株，１株胃分枝杆菌鉴定为堪萨斯分枝杆菌，３株不在芯片检测范围内。５０株临床菌株中，４７株２种方法结果一致，１株不在芯片检测范围内。结论基因芯片鉴定分枝杆菌快速、特异，准确性高，临床常规开展应用需要进一步研究。
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ；Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｒｒａｙｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ
我国的结核病疫情严重，非结核分枝杆菌（ｎｏｎ－ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ，ＮＴＭ）的感染率在我国和世界范围内也都呈上升趋势。ＮＴＭ肺病的临床表现、Ｘ线特征和痰涂片与结核病相似，但许多ＮＴＭ对抗结核药物呈天然抗药性。因此，分枝杆菌菌种的准确鉴定，是有效诊断、治疗分枝杆菌感染性疾病的第一步。传统的菌种鉴定方法以菌落生长特性和细胞酶化学定性反应为基础，烦琐、费时，结果受多种因素影响，可靠性较差，临床难以常规开展。分子生物学方法特别是核酸相关鉴定技术快速、准确，具有较大的临床应用潜力。而在分子生物
基金项目：“十一五 ”国家重大科技专项（２００９ＺＸ１０００３２０１８；２００８ＺＸ１０００３－００４）
作者单位：５１８０２０深圳市慢性病防治中心病原检验科通讯作者：王峰，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｏｗａｎｇｆｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ
材ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ和方法
一、材料（一）菌株２１株标准菌株来源于中国医学细菌保藏管理
４．序列分析：测序结果经ＤＮＡＳｔａｒ软件拼接后，分别在ＮＣＢＩＧｅｎＢａｎｋ数据库进行ＢＬＡＳＴＮ序列相似性搜索（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ）和医学微生物核糖体数据库ＲＩＤＯＭ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｉｄｏｍ－ｒｄｎａ．ｄｅ／）进行序列同源性比较，以鉴定菌种。
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅｏｎｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆ１６Ｓ－２３Ｓｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓｐａｃｅ（ＩＴＳ）ａｎｄＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＤＮＡｆｏｒｔｈｅｒａｐｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｅｃｉｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２１
（三）基因芯片鉴定分枝杆菌菌种该芯片采用微量点样技术，将１７种种特异性探针与各种对照探针固定在基片上，检测探针和对照探针各重复５个点，形成１２×１０的微阵列，即构成分枝杆菌菌种鉴定基因芯片。每张芯片上有４个同样的微阵列，每一个微阵列可以检测一份样品。对样品中分离得到的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增和芯片杂交，通过芯片扫描仪和相应的分析系统进行信号的读取、分析，根据探针在芯片上的特定位置排布，从而得到被测样本的鉴定结果。所有实验室检测操作严格按照试剂盒说明书进行。挑取菌落至８０μｌ核酸提取液，振荡５ｍｉｎ后９５℃水浴５ｍｉｎ；２５００×ｇ离心１ｍｉｎ，得到的核酸使用前置于－２０ ℃ 暂存。不对称ＰＣＲ扩增１６ＳｒＲＮＡ基因片段。ＰＣＲ产物与杂交缓冲液配制杂交混合物，将杂交混合物９５ ℃ 热浴５ｍｉｎ变性后，吸取１３．５μｌ杂交混合物经加样孔加入芯片点阵，密封杂交盒后５０ ℃ 杂交２ｈ；杂交产物经洗涤、甩干后使用芯片扫描仪扫描读取检测信号。使用分枝杆菌菌种芯片判读系统并以人工判读辅助鉴定结果：在质控探针信号正常的情况下，若某一探针信噪比 ≥３，且其信号值 ≥ 其对应的临界（ｃｕｔｏｆｆ）值，则该探针结果为阳性；否则探针结果为阴性。菌种鉴定结果根据探针阴阳性结果判断，若只有１条探针为阳性结果，则表示待测样品为该探针所对应的分枝杆菌种或群；若有１条以上探针为阳性结果，则通过组合来确定待测样品所对应的分枝杆菌种或群。