荧光光度分析法测定维生素B2的含量
荧光分光光度法测维生素B2的含量
荧光分光光度法测维生素B2的含量一、实验目的1.了解荧光分析法的原理2.学习荧光公光光度计的使用方法二、实验原理维生素B2在230—490nm范围波长的照射下，激发出峰值在526nm左右的绿色荧光，在pH=6-7的溶液里荧光最强，在pH=11时荧光消失。
三、仪器与试剂荧光分光光度计、容量瓶、玻璃棒10.0ug/ml维生素B2标准液：称取10.0mg维生素B2，先溶解于少量的1%乙酸中，然后用1%乙酸定容至1000ml。
溶液应该保存在棕色瓶中，置于阴凉处。
四、实验步骤1. 标准系列溶液的配制取6个25ml比色管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml及2.5ml维生素B2标准溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2．测定荧光激发光谱和发射光谱取上述第3号标准系列溶液，测定激发光谱和发射光谱。
先固定发射波长为525nm，在400—500nm区间进行激发波长扫描，获得溶液的激发光谱和荧光最大激发波长λex再固定激发波长为λex，在480—600nm区间进行发射波长扫描，获得溶液的发射光谱和荧光最大发射波长λem。
3.标准曲线的绘制（1）波长的设定：将激发波长和发射波长分别设定为上述得到的λex T和λem 值。
（2）绘制标准曲线：用1号标准系列溶液将荧光强度“调零”，然后分别测定2—6号标准系列溶液的荧光强度。
4.未知试样测定取未知试样溶液2ml置于25ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，测定此溶液的荧光强度。
五、实验数据及结果（1）从绘制的维生素B2的激发光谱和发射光谱曲线上，确定其最大激发波长和最大发射波长；（2）从绘制维生素B2的标准曲线，并从标准曲线上确定未知试样溶液中维生素B2的浓度；（3）计算出原始未知试样中维生素B2的浓度。
六、注意事项测定的顺序要从稀到浓，以减小测量误差。
七、思考题（1）什么是荧光激发光谱？如何绘制荧光激发光谱？（2）什么是荧光发射光谱？如何绘制荧光发射光谱？。
实验四 荧光分光光度法测定维生素 B2
实验四荧光分光光度法测定维生素B2一、实验目的1．了解F 96 荧光分光光度计的性能及操作。
2．掌握荧光分析法的基本原理。
3．学习荧光分析法测定维生素B2 的含量。
二、实验原理维生素B2 是一种具有强烈荧光特性的化合物。
其水溶液在pH = 6～7 时荧光最强，其最大激发波长为λex= 465 nm ，最大发射波长为λem = 520 nm。
在低浓度时，λex = 465 nm 时在520 nm 处测得的荧光强度与维生素B2 成正比。
即：I F＝Kc采用校正曲线法可测定复合维生素片剂中维生素B2 含量。
当pH 在11以上时，荧光猝灭。
图 4 维生素B2 的激发光谱（a）和荧光光谱（b）三、仪器与试剂1．仪器：F96 型荧光分光光度计；容量瓶；移液管。
2．试剂：1％HAc 溶液；维生素B2；复合维生素片剂。
四、实验步骤1．维生素B2 标准溶液的配制称取10.0 mg 维生素B2，先溶解于少量1％HAc中，然后转移至 1 000 mL容量瓶中，用1％HAc稀释至刻度，摇匀，即配制成10.0 μg/mL的维生素B2 标准溶液。
溶液保存在棕色容量瓶中，置阴凉暗处。
2．标准系列溶液的配制取5个50 mL的容量瓶，分别加入1.00、2.00、3.00、4.00 及 5.00 mL 维生素B2 标准溶液，用水稀释至刻度，摇匀，待测。
3．未知样品溶液的配制取复合维生素片剂适量，于100 mL小烧杯中，以1％HAc溶解，转移至50 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，待测。
4．将标准系列溶液及未知样品溶液，分别置于F96 荧光分光光度计上，选择合适的激发波长和测定波长，测定其荧光强度，绘制工作曲线，查出未知样品中维生素B2 的含量。
五、数据处理1．由记录仪记录所得荧光光谱图上查出标准系列不同浓度维生素B2 相应的荧光强度，作工作曲线。
2．在荧光光谱图上查出未知样品的荧光强度，在工作曲线上查出对应浓度，进行换算后求出片剂中维生素B2 的含量。
荧光光度法测定维生素B2的含量-实验五、荧光分析法测定维生素B2
实验八、荧光光度法测定维生素B2的含量内容：P94-97和P208-210一、实验目的1、学习荧光分光光度计的工作原理2、熟悉荧光分光光度计的结构及使用方法3、掌握荧光光度分析法测定维生素B2的方法二、实验原理在紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。
以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。
对同一物质，若alc << 0.05，即对很稀的溶液，荧光强度F与该物质的浓度c有以下的关系：F = 2.3 Φf I0alc，I0和l不变时，F = K⋅c (K为常数)。
因此，在低浓度的情况下，荧光物质的荧光强度与浓度呈线性关系。
维生素B2在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为535 nm。
维生素B2的荧光在pH值为6～7时最强，在pH值为11时消失。
荧光分析实验首先选择滤光片，使测量获得最强荧光，且受背景影响最小。
激发光谱受选择激发滤光片的依据，该滤光片的最大透射比与待测物质激发光谱的最大峰值波长相近。
荧光光谱是选择荧光滤光片的主要依据。
本实验使用的Cary Eclipse荧光分光光度计，其预扫描功能可自动识别出该容积的拉曼、瑞利及二级散射峰，并在扫描结束后自动给出最佳的激发/发射波长。
本实验采用标准曲线法来测定维生素B2的含量。
三、实验仪器与试剂（略）四、实验内容1、扫描测定取待测液2.50 mL置于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用Cary Eclipse 荧光分光光度计进行扫描测定，选择最佳的激发/发射波长。
2、浓度测定在5个50 mL容量瓶中，分别加入1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL和5.00 mL 维生素B2的标准溶液，稀释，定容。
选定扫描测定确定的最佳激发/发射波长，用Cary Eclipse荧光分光光度计依次从稀到浓测量系列标准溶液和待测液稀释液的荧光强度。
五、结果与分析1、标准系列溶液的荧光强度绘制标准曲线。
荧光分析法
– 前部 – 侧部 – 后部 – 鬓角
• 无汗味，没头屑
√ ×
仪容仪表之男士篇
• 面部清洁； • 耳朵； • 鼻孔； • 口气； • 指甲、指头。
仪容仪表之女士篇
• 头发 • 日常化淡妆 • 指甲干净整齐 • 避免使用气味浓烈的香水。
• 服饰是指人的服装穿着，饰品，它是仪表的重要部分。 • 人际交往中的主要礼仪对象之一，它包括服装和饰物
• 11 会面时你说话的音量总是：
• A 很低，以致别人听得较困难B 柔和而低沉C 声音 高亢热情
• 12 通常第一次交谈，你们分别所占用的时间是：
•
A 差不多B 他多我少C 我多于他
• 计分标准 • 选项得分题号ABC
• 1 513 2 513 3 351 4 135 5 351 6 135 7 513 8 315 9 135 10 513 11 351 12 351
【实验原理】
维生素B2在430-440nm蓝光照射下，发出绿色荧光，荧光峰在525nm左右。在pH＝6-7的溶液中荧光强度最 大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质-光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光 比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
3. 测定 （1）测定1号荧光强度（F1）和2~5号荧光强度（FS），并以FS-F1为纵坐标，以 标准溶液浓度为横坐标，用Excel绘制标准曲线。 （2）测定6号荧光强度（F6）和7号荧光强度（FX），将FX-F6代入标准曲线线性 方程，乘以稀释倍数，求出样品中维生素C含量。
荧光分光光度法测定维生素B2含量
一、实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计基本原理、结构及性能，掌握基本操作。
二、实验原理维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其分子式为：C17H20N4O6，分子量：376.4。
VB2分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
VB2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
VB2溶液在430～440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
VB2在pH＝6～7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与VB2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测VB2的含量。
VB2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比VB2的荧光强得多，故测VB2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，当实验条件一定时，荧光强度F与荧光物质浓度c 呈线性关系：F=Kc，这是荧光光谱法定量分析的依据。
注意：高浓度时，荧光物质发生熄灭和自吸收现象，使F与c不呈线性关系。
三、主要仪器与试剂主要仪器：荧光分光光度计；1cm石英皿；25mL比色管；1mL、5mL移液管试剂：VB2标准溶液5.0μg/mL；待测样品溶液四、实验步骤1、系列标准溶液的制备取VB2标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 分别置于25mL比色管中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
得浓度依次为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.30μg/mL、0.40μg/mL、0.50μg/mL 的一系列VB2标准溶液。
待测。
2、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在250～500nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。
从得到的激发光谱中找出最大激发波长，在此激发波长下，在450～700nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
荧光分光光度法测定维生素B2含量
精选文档荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验报告——应用化学（环境检测与剖析）一、实验目的1、掌握标准曲线法定量剖析维生素B2的基来源理。
2、认识荧光分光光度计的基来源理、构造及性能，掌握其基本操作。
二、实验原理1什么是荧光？荧光是光致发光。
当物质的分子接受光子能量被激发后，从激发单重态的最低振动能级返回基态时发射的光。
23荧光与环境要素的关系代替基的性质、溶剂的极性、系统的pH和温度。
维生素B2(VitaminB2)，又名：核黄素(Riboflavin，RF)，是橘黄色无臭的针状结晶,分子式：C17H20N4O6，相对分子量为：。
因其色黄且含有核糖醇，故称为核黄素。
构造式为：.精选文档因为分子中有三个芬芳环，拥有平面刚性构造，所以它能够发射荧光。
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳固，光照易分解，对热稳固。
维生素B2溶液在430—440nm蓝光的照耀下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm邻近。
维生素B2在pH＝6—7的溶液中荧光强度最大，并且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，所以能够用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光芒照耀会发生疏解而转变为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝ФI0εbc当实验条件一准时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量剖析的依照。
三、仪器与试剂1、主要仪器：荧光分光光度计（日立F—7000）；比色皿：1cm；容量瓶：50mL；移液管：5mL。
2、试剂：核黄素；维生素B2药片四、实验步骤1.溶液的配制标准溶液的配制：精准称取2mg核黄素(VB2)，用超纯水于50ml棕色容量瓶中定容待测液的配制：将维生素B2药片研磨成粉末状，精准称取2mg，用超纯水于50ml棕色容量瓶中定容；2.扫描激发光谱和荧光光谱3.标准曲线的绘制在室温条件下，分别汲取、、、、标准溶液于50ml棕色容量瓶中定容。
荧光分光光度法测定维生素B2的含量
荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验项目：荧光法定量测定维生素B2的含量实验目的：1.掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理含有荧光基团的化学物质维生素B2，在吸收光能而被激发以后发射荧光，因此溶液的荧光强度与该溶液中荧光物质吸收光能的程度以及荧光效率有关。
溶液中维生素B2被入射光（I0）激发后，可以在溶液的各个方向观察荧光强度（I f）。
在低浓度时，溶液的荧光强度与溶液中荧光物质的浓度呈线性关系。
标准曲线法是取一定已知量的维生素B2的对照品与待分析试样溶液经过相同的处理后，将对照品配制成一系列浓度的对照溶液，测定其荧光强度，并以荧光强度为纵坐标，以对照溶液浓度为横坐标绘制工作曲线，然后在同样条件下测定试样溶液的荧光强度，由工作曲线求出维生素B2片试样中荧光物质的含量。
2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，基本操作荧光分光光度计的基本原理：由氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接收，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光.。
荧光分光光度计的主要部件：①光源：为高压汞蒸气灯或氙灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
②激发单色器：置于光源和样品池之间的为激发单色器，筛选出特定的激发光谱。
③发射单色器：置于样品池和检测器之间的为发射单色器，常采用光栅为单色器，筛选出特定的发射光谱。
④样品池：通常由石英池组成。
⑤检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器，可将光信号放大并转为电信号。
光源发射的激发光通过入射狭缝，经激发单色器分光后照射到被测物质上，发射的荧光再经发射单色器分光后用光电倍增管检测，并经信号放大系统放大后记录。
荧光分光光度法测定维生素 B2的含量
荧光分光光度法测定维生素 B2的含量维生素B2（核黄素）是一种黄色的水溶性维生素，参与人体多种代谢过程，如能量代谢、蛋白质合成及细胞呼吸等。
因此，对维生素B2的含量进行精确测量至关重要。
本文将介绍一种常用的荧光分光光度法测定维生素B2含量的方法。
一、测定原理荧光分光光度法是一种基于物质吸收光谱和荧光光谱的仪器分析法，它利用物质在受激光或外界光源激发下，发生荧光的特性来测定物质的含量。
维生素B2在紫外光530.0nm 处吸收，同时能在pH8.0的碳酸氢钠缓冲溶液中产生荧光。
因此，荧光分光光度法可以通过测定维生素B2产生的荧光强度来计算其含量。
二、测定步骤1.准备样品将要测定的维生素B2溶于50mL的碳酸氢钠缓冲液中，并将其均匀混合。
用已知浓度的维生素B2标准品分别配制成不同浓度的标准溶液，用于绘制标准曲线。
2.测定荧光光谱取适量的样品及标准溶液分别装入荧光分光光度计的比色皿中，然后在含有Excitation (Ex)波长为450.0nm、Emission (Em)波长为530.0nm的荧光滤光片下进行测量。
将标样及待测样荧光强度值分别记录下来。
3.制定标准曲线将已知浓度的维生素B2标准溶液按照步骤2测定，绘制标准曲线，根据数据进行回归分析，得出求出待测样品浓度的公式。
4.检测待测样品按照步骤2进行待测样品的测定，利用标准曲线计算出待测样品中维生素B2的含量。
三、测定注意点1.样品配制时要保持一定浓度，过高或过低都会影响分析结果；2.样品制备、实验条件及荧光光度计的使用必须保证一致性；3.测量结果可受色、浑浊等因素影响，需要有一定的操作经验、严守操作规程。
四、结论本文介绍了荧光分光光度法测定维生素B2含量的方法，并简要说明了测定原理及详细的操作步骤。
此种方法具有测量简便、操作方便、灵敏度高等优点，被广泛应用于维生素B2含量的测量。
荧光光度分析法测定维生素B2的含量
荧光光度分析法测定维生素B2的含量引言荧光分光光度法简介有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。
荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。
由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。
利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。
同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。
这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。
测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片―单色器荧光计和荧光分光光度计。
荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g／m1，线性范围宽。
现在主要应用的是荧光分光光度计。
【实验目的】1. 学习荧光光度法测定维生素B2的含量的基本原理和方法。
2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。
【实验原理】在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c有以下关系：IF?2.303?I0?bc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：IF?Kc这种以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。
荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度，可成倍提高荧光强度。
同时，提高仪器灵敏度，可提高荧光光度法的灵敏度。
而吸收光度法，无论是提高激发光强度还是提高仪器灵敏度，入射光和出射光同时增大，其灵敏度不变。
因此，荧光光度法比吸收光度法灵敏度高。
VB2(即核黄素)在430～440nm蓝光照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为535nm。
VB2的荧光强度在pH6～7时，在pH=11时基本消失。
维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：VB2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
荧光分光光度法测定维生素B2的含量
华南师范大学实验报告课程名称：仪器分析实验实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2的含量荧光分光光度法测定维生素B2的含量一、实验目的1．掌握荧光物质的标准曲线法定量测量含量的操作方法和原理；2．了解分子荧光光谱定量分析与定性分析的特点及区别；3．熟悉荧光光度计定量法测量软件的数据处理。
二、实验原理含有荧光基团的化学物质，其分子吸收了辐射能成为激发态分子，再从激发态返回基态时发射光的波长比吸收的入射光波长更长，分子荧光就是发光方式中较常见的光致发光。
在一定频率和一定强度的激发光照射下，当溶液的浓度很小同时光被吸收的分数也不太大时，稀溶液体系将符合朗伯-比尔定律，该溶液所产生的荧光强度与溶液中这种荧光物质的浓度呈线性关系，可用公式表示：I F=2.3K'kbcI0当入射光强度I0一定时 I F=Kc以上两式中 K'为荧光量子效率； K为荧光分子的摩尔吸光系数；b为液槽厚度；c以为荧光物质的浓度。
分子荧光标准曲线法是取一定已知量的标准物质与待分析试样溶液经过相同的处理后，配制成一系列的标准溶液，测定其荧光强度，并以荧光强度为纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标绘制其工作曲线，再由所测获的试样溶液的荧光强度对工作曲线作图从而求出试样溶液中该被分析检测物质的实际浓度含量。
此法适用于痕量分析，并且标准溶液和试样溶液的荧光强度必须是在荧光仪已扣除空白溶液的荧光强度的读数。
维生素B2，又称核黄素。
分子式C17H20N4O6。
它是人体必需的13种维生素之一，作为维生素B族的成员之一，微溶于水，可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液。
可以用荧光光度法测维生素B2的含量的原因:维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。
维生素B2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量。
该实验的控制条件:维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
VB2的测定
4.00
5.00
－
－
－
－
－
－
－
0.5 00
用H2O定容至50 mL ，摇匀，测定 …
…
…
…
…
…
ρ(VB2) /mg·L-1
0.000 0.200 0.400 0.600 0.800
… 1.000
荧光强度(F)
1）．用标准系列溶液的荧光强度绘制标准工作曲线 2）．根据待测液的荧光强度，从标准工作曲线上求得其浓度
4、结果的计算：
VB2% x 50 100 (wx 106 ) 100%
Vx
1
四、实验步骤：
1、试剂溶液的配制
1）5％醋酸溶液: 取5份冰醋酸与95份体积蒸馏水混合
2）10.0mg·L-1VB2标准溶液：
准确称取10.0mgVB2
于少量的5%HAc中溶解
转移 至1L容量瓶中用5%HAc稀释至刻度
置阴凉处保存
3）待测液：
准确称取市售VB2一片
于50mL烧杯中
加入约12mL 5%HAc溶液，用玻璃棒捣碎药片 水浴加热至透明
维生素B2水溶液在430-440nm蓝光或紫外光照射下 会发生绿色荧光，荧光峰在535nm,在pH=6-7溶液 中荧光强度最大，在pH=11的碱溶液中荧光消失， 所以可以用荧光光谱法测定维生素Ｂ2的含量
三、实验用品： 1．仪器： 荧光分光光度计，移液管，容量瓶，棕色试剂瓶， 比色管，烧杯，离心机，离心管 2．药品： 核黄素（生化试剂），冰醋酸（AR）,盐酸（AR） 氢氧化钠，市售维生素B2片剂
(4) 然后将激发波长设定在442nm处 在400－700nm波长范围内对荧光波长扫描 约在525nm处荧光强度最大
荧光光度法—核黄素药片含量测定
荧光分析法测定维生素B2药片含量目的与要求1.掌握荧光分析法测定维生素B2含量的原理及方法。
2.熟悉荧光分光光度计的结构和使用方法。
原理维生素B2（即核黄素）的溶液在430~440nm蓝光照射下，会发黄绿色荧光，荧光峰值波长为535nm。
在pH6~7的溶液中荧光最强，在pH>11时荧光消失。
醋酸溶液中荧光强度将会增强。
其它条件一定时，维生素B2的稀溶液（0.5~5μg/ml）的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。
本实验采用标准曲线法。
利用维生素B2可被还原剂（连二亚硫酸钠）还原为非荧光性物质，通过测定加还原剂前后样品液的荧光强度，来消除可能的样品基体干扰，基于上述原理来测定药片的维生素B2含量。
仪器与试剂1.仪器荧光分光光度计，样品池（石英），10ml刻度吸管，10ml具塞比色管2.试剂维生素B2贮备液（100μg/ml）避光操作，精确称取100mg维生素B2(生物试剂，避光干燥保存)置于250ml烧杯中加冰醋酸10ml及蒸馏水90ml在水浴上加热溶解后，放冷，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中放暗处保存。
维生素B2标准应用液（1.0μg/ml）实验当天用移液管准确吸取标准贮备液5.0ml于500ml棕色容量瓶中，用1%醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。
1%醋酸溶液取1ml冰醋酸用去离子水稀释至100ml。
连二亚硫酸钠（AR，保险粉）操作步骤1.样品药液制备1）取核黄素药片10片，研细，称出适量（约相当于维生素B210mg）置于250ml烧瓶中加冰醋酸10ml，加蒸馏水90ml，置水浴上加热约1小时，并时时振摇使其溶解澄清后放冷，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中避光保存。
该样品药液含维生素B2 10μg/ml。
2）用移液管准确吸取维生素B2药液10ml于100ml容量瓶中，用1%醋酸液稀释至刻度，摇匀，取此溶液10ml于比色管中，按与标准系列同样步骤测定此溶液的荧光强度。
荧光光度法测定样品中维生素B2的含量
实验六荧光光度法测定样品中维生素B2的含量一、目的与要求1．掌握用荧光光度法测定维生素B2的原理;2．加深对荧光光度法原理的理解;3．巩固荧光光度计的基本操作。
二、方法原理维生素B2又称核黄素，溶于水，在ω为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。
维生素B2在一定波长光照射下产生荧光。
在稀溶液中，其荧光强度与浓度成正比，即：F = Kc故可采用标准曲线法测定维生素B2的含量。
三、仪器与试剂1．930型荧光光度计及其附件。
2．容量瓶：25 mL。
3．维生素B2标准贮备液（100 mg·L-1）：准确称取25mg维生素B2，用ω为0.05的乙酸溶解，转移至250 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，保存于冰箱中。
4．维生素B2标准工作液（0.5mg·L-l）：吸取上述贮备液0.50mL于100 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，随用随配。
5．含维生素B2的水样（自行制备）：取VB2片剂一片，用ω为0.05的乙酸溶液溶解（若有不溶杂质，过滤即可），稀释适当倍数后测量。
四、内容与步骤1．标准系列溶液的配制吸取维生素B2标准工作液0，0.50，1.00，2.00，3.00和4.00 mL，分别加入6个25 mL 容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀。
2．样品的准备吸取含维生素B2的水样5.00 mL于25 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀。
3．标准系列与样品溶液的测定按仪器的使用方法准备好仪器(仪器操作流程如下)。
待仪器稳定后，以360 nm或400 nm 为激发波长，以550 nm为荧光发射波长，用1 cm荧光皿及ω为0.05的乙酸溶液作参比（凋荧光强度为“0”），用标准系列溶液中最高浓度的溶液调节其荧光强度为“100”，分别测定其他标准系列溶液和样品溶液的荧光强度。
实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量
实验报告2荧光分光光度法测定维⽣素B2的含量实验项⽬：荧光分光光度法测定维⽣素B2的含量【实验题⽬】荧光分光光度法测定维⽣素B2的含量【实验⽬的】1、掌握标准曲线法定量分析维⽣素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】维⽣素B2(⼜叫核黄素，VB2)是橘黄⾊⽆臭的针状结晶。
其结构式为：由于分⼦中有三个芳⾹环，具有平⾯刚性结构，因此它能够发射荧光。
维⽣素B2易溶于⽔⽽不溶于⼄醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维⽣素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿⾊荧光，荧光峰在535nm附近。
维⽣素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最⼤，⽽且其荧光强度与维⽣素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以⽤荧光光谱法测维⽣素B2的含量。
维⽣素B2在碱性溶液中经光线照射会发⽣分解⽽转化为另⼀物质——光黄素，光黄素也是⼀个能发荧光的物质，其荧光⽐维⽣素B2的荧光强得多，故测维⽣素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进⾏。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2.303ФI0εbc当实验条件⼀定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。
【主要仪器与试剂】主要仪器：F-2500 HiTachi荧光分光光度计；1cm⽯英⽫；50mL容量瓶；5mL移液管；烧杯；胶头滴管试剂：维⽣素B2标准溶液：未知液4【实验内容及步骤】1、系列标准溶液的制备取维⽣素B2标准溶液(10.0µg/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分别置于50mL的容量瓶中，各加⼊去离⼦⽔稀释⾄刻度，摇匀。
标记为①②③④⑤的⼀系列维⽣素B2标准溶液。
待测。
2、待测液制备取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中，加⼊去离⼦⽔稀释⾄刻度，摇匀。
待测。
3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在250~500nm范围内扫描标准溶液③，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析（共7篇）
荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析(共7篇)实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验题目】荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验目的】1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其结构式为：由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
维生素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2.303ФI0εbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。
【主要仪器与试剂】主要仪器：F-2500 HiTachi荧光分光光度计；1cm石英皿；50mL 容量瓶；5mL移液管；烧杯；胶头滴管试剂：维生素B2标准溶液：未知液4【实验内容及步骤】1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
标记为①②③④⑤的一系列维生素B2标准溶液。
待测。
2、待测液制备取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中，加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
维生素B2含量的测定方法--荧光分光光度法
维生素B2含量的测定方法--荧光分光光度法含量测定为例介绍荧光分光光度法测定维生素Ｂ2含量的以饲料中维生素B2方法。
采用标准：GB/T5009.85——2003，本标准规定了饲料中维生素B2测定方法。
1.1方法原理（即核黄素C17H20N4O6）在440nm紫外光激发下产生绿色荧光，维生素B2在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素浓度成正比。
用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄素的含量。
1.2试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。
1.2.1盐酸溶液，0.1mol／L，将8.5mL盐酸（GB 622）用水稀释至1000mL。
1.2.2盐酸溶液，1mol／L，将85mL盐酸用水稀释至1000mL1.2.3氢氧化钠溶液，1mol／L，将40gNaOH（GB 629）溶于水定容至1000mL1.2.4冰乙酸（GB 676）。
1.2.5冰乙酸溶液，0.02mol／L：将1.8mL冰乙酸用水稀释至1000mL。
1.2.6高锰酸钾（GB 643）溶液，40g／L。
1.2.7过氧化氢（HG 3─1082）溶液，100mL／L。
现用现配。
1.2.8核酸素标准溶液核黄素贮备液Ⅰ：将核黄素于五氧化二磷干燥器中干燥24h，称取0.0500g，溶解于0.02mol／L乙酸溶液（3.2.5）中，在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至500mL。
盛入棕色瓶滴加甲苯覆盖，低温（4℃）保存。
该溶液每毫升含0.1mg核黄素。
核黄素贮备液Ⅱ：取核黄素贮备液Ⅰ10mL用0.02mol／L乙酸溶液稀释至100mL，盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖，低温（4℃）保存。
该溶液每毫升中含10μg 核黄素。
核黄素标准工作液：取核黄素贮备液Ⅱ10mL，用水稀释至100mL。
现用现配。
该溶液每毫升中含1μg核黄素。
1.2.9荧光素标准溶液1.2.9.1荧光素贮备液：称取荧光素（Q／HG 22─786）0.0500g，用水稀释至1000mL，盛于棕色瓶中，低温（4℃）保存。
荧光光度分析法测定维生素B2
H2C (CHOH)3 CH2OH
NN O
N N
O
VB2 ，核黄素
VB2的C（HAc）=0.1mol/L溶液在紫外光照射下，发出黄 绿色荧光，可直接进行荧光测定。 pH=2.9, λ激发 370nm，467nm
λ发射 527nm
PROCEDURE
1 维生素B2系列标准溶液的配制
准确吸取VB2贮备液 (125g/ ml )
线。
F’
0
C (g/ml)
4 样品测定
1）在相同的荧光测定条件下，测定样品液的荧光强度F。 2）从标准曲线上查出对应的组成量度，再乘以5，得试样
中维生素B2的组成量度。
F’
0
C待测
C (g/ml)
DATA
编号
12340 6.00 8.00 10.00 5.00样品
维生素 B2 的含量测定 （荧光光度法）
OBJECTIVE
1 学习和掌握荧光光度分析法测定VB2的基本原理和方法。 2 学习荧光分光光度计的使用方法。
PRINCIPLE
荧光：物质的分子经紫外光照射后，发射出的较原来吸收 光的频率低、波长长的光。不同的荧光物质有各自 的特征激发光波长和荧光波长，利用物质的荧光现 象进行定性、定量分析的方法称为荧光分析法。
用0.1mol/L Hac稀释至(ml)
25.00
VB2标准溶液组成量度(g/ml) 荧光强度 F 相对荧光强度 F’
实验结果：CVB2 =
QUESTION & DISCUSSION
为何要以5号液来调节荧光强度为90左右?
定容
5.00ml
摇匀
25.0ml
待测溶液
3 标准曲线绘制
1）仪器预热（激发光波长360nm，荧光波长510nm）。 2）以系列标准液6号液为标准，调节荧光强度F为90左右 。 3）固定荧光测定条件不变。分别测定下列标准液1~6号液（由稀倒浓）的
荧光光度法测定维生素B2的含量
实验五 荧光光度法测定维生素B 2的含量一、实验目的1、学习荧光分光光度法测定维生素B 2的分析原理；2、掌握荧光分光光度计的操作技术和测定维生素B 2的方法。
二、实验原理1.荧光光度法原理（1）常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下的关系：bc I I F εφ0303.2=当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：Kc I F =这是荧光光谱法定量分析的理论依据。
（2）荧光分析法的特点：a. 与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更高的灵敏度。
b. 选择性好。
荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质。
c. 所需试样量少、操作方法简便。
（3）荧光光谱激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。
激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。
发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。
激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
（4）荧光分析仪器常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成，如下图所示：2. 荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：H HOHOHOHNH H H OHN C NHN OH3CH3C维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。
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荧光光度分析法测定维生素B 2的含量
引言
荧光分光光度法简介
有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。
荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。
由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。
利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。
同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。
这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。
测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。
荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g ／m1，线性范围宽。
现在主要应用的是荧光分光光度计。
【实验目的】
1. 学习荧光光度法测定维生素B 2的含量的基本原理和方法。
2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。
【实验原理】
在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下关系：
bc I 303.2I 0F εφ=
当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：
Kc I F =
这种以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。
荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度，可成倍提高荧光强度。
同时，提高仪器灵敏度，可提高荧光光度法的灵敏度。
而吸收光度法，无论是提高激发光强度还是提高仪器灵敏度，入射光和出射光同时增大，其灵敏度不变。
因此，荧光光度法比吸收光度法灵敏度高。
VB
2
(即核黄素)在430～440nm蓝光照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为
535nm。
VB
2
的荧光强度在pH6～7时，在pH=11时基本消失。
维生素B
2（又叫核黄素，VB
2
）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：
VB
2
易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。
维生素B2的荧光强度在pH=6～7时最强，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测定维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测定维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
【仪器与试剂】
1. 仪器
荧光光度计；容量瓶(50、1000mL)；吸量管(5mL)；棕色试剂瓶；洗瓶
2. 试剂
VB
2对照品；市售VB
2
片；1％HAc溶液
【实验步骤】
1. 标准系列溶液的配制
(1) 10.0mg／L VB2标准溶液的配制
准确称取10.0mgVB2，将其溶解于少量的1％HAc溶液中，转移至1000mL容量瓶中，用1％HAc溶液稀释至刻度，摇匀。
该溶液应装于棕色试剂瓶中，置阴凉处保存。
(2) 标准系列溶液的配制
准确移取1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00mL和5.00mL的标准VB2溶液，分别加入5个干净的50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2. 待测样品液的配制
一片，用1％HAc溶液溶解，定容成1000mL，贮存于棕色试剂瓶取市售VB
2
中，置阴凉处保存。
3. 标准溶液的测定
开启仪器，预热。
用蒸馏水作空白，合上样品室盖，接通电源，调读数至“0”。
用标准溶液中最浓的溶液，调节“满度”旋钮使其荧光读数为满刻度，用此作为荧光测量的基准；然后，从稀至浓的顺序分别测量系列标准溶液的荧光强度。
4. 未知试样的测定
取待测样品液2.50mL置于50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
用与测定标准溶液相同的条件，测量待测样品液的荧光强度，平行测量其荧光强度3次。
【数据记录和结果处理】
1. 标准曲线绘制。
2. 根据待测样品液的荧光强度，从标准曲线上求得样品液的浓度。
3. 计算药片中VB
的含量：_____________ mg／片。
2
【注意事项】
1. 在测量荧光强度时，最好用同一个荧光皿，以避免由于荧光皿之间的差异而引起的测量误差。
2. 取荧光皿时，手指拿住棱角出，切不可碰光面，以免污染荧光皿，影响测量。
【思考题】
1. 荧光法对物质进行定性，定量的测定与紫外分光光度法的异同？
2.荧光法测定过程中应注意哪些问题?
3.试解释荧光光度法比吸收光度法灵敏度高的原因?。