真菌药敏折点PPT课件
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王瑶-真菌药敏试验操作ppt课件
0.5×104~5×104 CFU/ml
皮肤霉菌 •PDA；燕麦琼脂（仅红色毛癣菌 )
•30℃4~5d至产孢良好 1×103~3×103 CFU/ml
接种量
孵育条件
•链格孢属30℃；
•其它35℃。 •根霉21~26h； •镰刀菌属、曲霉属、申克氏孢 子丝菌46~50h •赛多孢属70~74h
35℃
培养至产孢良好
11
非皮肤丝状真菌孢子菌悬液的制备
• 接种物：分生孢子或孢囊孢子菌悬液0.4×104~5×104 CFU/ml，重复性好
– 诱导产孢：大部分霉菌PDA培养基35±2⁰C 7d或至产孢良好，毛霉 和曲霉48h，镰刀菌属35±2⁰C 48~72h然后28~30±2⁰C培养到第7天 。 – 1ml 0.85%盐水，可加入1滴or0.01ml吐温20，尽量去除菌丝片段。 – 静置3~5min，取上清转移至无菌管，振荡15s（注意气溶胶） – 使用光线路径1cm比色杯，测定530nm光密度：
13
CLSI M38-A2棘白菌素类MEC判读
• 最低有效浓度（MEC）：棘白菌素-曲霉
– 与不含药物的生长对照相比，能够导致菌丝形 成小的、圆形的、紧凑的菌丝颗粒的最低药物 浓度
MEC
异常的14Fra bibliotek卡泊芬净MEC判读
黑曲霉
黄曲霉 土曲霉
烟曲霉
生长对照
15
浓度梯度稀释法--ETEST
酵母菌Etest药敏试验方法
• 曲霉、拟青霉0.09~0.13， • 镰刀菌、毛霉、波氏假阿什利霉、多育赛多孢0.15~0.17， • 链格孢、离蠕孢0.25~~0.3
– 悬液1:50稀释，达到最终要求浓度的2倍
CLSI M38-A2丝状真菌肉汤稀释法
皮肤霉菌 •PDA；燕麦琼脂（仅红色毛癣菌 )
•30℃4~5d至产孢良好 1×103~3×103 CFU/ml
接种量
孵育条件
•链格孢属30℃；
•其它35℃。 •根霉21~26h； •镰刀菌属、曲霉属、申克氏孢 子丝菌46~50h •赛多孢属70~74h
35℃
培养至产孢良好
11
非皮肤丝状真菌孢子菌悬液的制备
• 接种物：分生孢子或孢囊孢子菌悬液0.4×104~5×104 CFU/ml，重复性好
– 诱导产孢：大部分霉菌PDA培养基35±2⁰C 7d或至产孢良好，毛霉 和曲霉48h，镰刀菌属35±2⁰C 48~72h然后28~30±2⁰C培养到第7天 。 – 1ml 0.85%盐水，可加入1滴or0.01ml吐温20，尽量去除菌丝片段。 – 静置3~5min，取上清转移至无菌管，振荡15s（注意气溶胶） – 使用光线路径1cm比色杯，测定530nm光密度：
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CLSI M38-A2棘白菌素类MEC判读
• 最低有效浓度（MEC）：棘白菌素-曲霉
– 与不含药物的生长对照相比，能够导致菌丝形 成小的、圆形的、紧凑的菌丝颗粒的最低药物 浓度
MEC
异常的14Fra bibliotek卡泊芬净MEC判读
黑曲霉
黄曲霉 土曲霉
烟曲霉
生长对照
15
浓度梯度稀释法--ETEST
酵母菌Etest药敏试验方法
• 曲霉、拟青霉0.09~0.13， • 镰刀菌、毛霉、波氏假阿什利霉、多育赛多孢0.15~0.17， • 链格孢、离蠕孢0.25~~0.3
– 悬液1:50稀释，达到最终要求浓度的2倍
CLSI M38-A2丝状真菌肉汤稀释法
真菌药敏折点
氟康唑的敏感性与念珠菌感染治疗的临床有效率
感染类型 粘膜
侵袭性
例数
692
603
S
92％ (488/533)
77％
SDD
62％ (36/58)
71％
R
41％ (41/101)
44％
合计
(353/460) (51/72) (31/71)
1295
85％ 67％ 42％
(841/993) (87/130) (72/172)
常见的念珠菌体外敏感性评估：
菌株
氟康唑 伊曲康唑 两性霉素 伏立康唑 泊沙康唑 卡泊芬净
白念珠菌
S
S
S
S
S
S
热带念珠菌
S
S
S
S
S
S
近平滑念珠菌
S
S
S
S
S
S / I?
都伯林念珠菌
S / S-DD
S
S/I
S / S-DD S / S-DD
S
光滑念珠菌
S-DD S-DD S / S-DD
氟康唑的MIC折点与临床的关系
MIC（ug/ml)
8 16-32
64
692例 粘膜 念珠菌 ％(n)
77 (533)
8 ( 58)
15 (101)
603例 侵袭性念珠菌 ％(n)
76 (460)
12 (72)
12 (71)
Pfaller M, Diekema D， Sheehan D. Clin Micro REV， In Press，2006
抗真菌药物在体外对真菌病原学活性
—无活性；+/—可能有活性； +有活性，三线（至少临床有效）++有活性， 二线（作用稍差）；+++有活性，一线（常常有效）
王瑶-真菌药敏试验操作ppt课件
• CLSI 提供了24h和48h质控范围
6
商品化试剂盒—ATB Fungus 3 改良微量肉汤稀释法
• 选取培养时间不超过4天的纯培养菌落，如培养物不纯应 进行分纯后检测 • 制备2McF菌液 • 将20μl菌悬液加入ATB F2培养基的安瓿中 • 用无菌吸管轻轻吹吸混均，尽量避免产生气泡 • 在每个杯状凹槽中加入135μl混匀的ATB F2培养基 • 35± 2℃环境中，念珠菌属培养24h ±2h，新型隐球菌培 养48 h ± 6 h • ATB Fungus 3操作视频.mov
• 黄曲霉
28
小结
• 选择适合的药敏试验方法后，认真研究相应指南 或产品说明书的作要求，严格执行！
– – – – 注意培养物孵育时间 注意不同菌属接种量 注意不同菌属药敏孵育时间 注意不同药物采用不同检测方法时的判读标准
• 严格质控，质控株检测结果也是培训判读标准的 好教材！ • 切勿想当然操作，做错不如不做！
11
非皮肤丝状真菌孢子菌悬液的制备
• 接种物：分生孢子或孢囊孢子菌悬液0.4×104~5×104 CFU/ml，重复性好
– 诱导产孢：大部分霉菌PDA培养基35±2⁰C 7d或至产孢良好，毛霉 和曲霉48h，镰刀菌属35±2⁰C 48~72h然后28~30±2⁰C培养到第7天 。 – 1ml 0.85%盐水，可加入1滴or0.01ml吐温20，尽量去除菌丝片段。 – 静置3~5min，取上清转移至无菌管，振荡15s（注意气溶胶） – 使用光线路径1cm比色杯，测定530nm光密度：
Thanks
PEKING UNION MEDICAL COLLEGE HOSPITAL
PEKING UNION MEDICAL COLLEGE HOSPITAL
药敏试验结果的正确解读 PPT
clsi折点mic检测范围抗菌药物32氨苄西林舒巴坦32213216哌拉西林他唑巴坦16128441284头孢唑啉64头孢曲松64头孢他啶64头孢吡肟64头孢西丁64亚胺培南166464庆大霉素16妥布霉素16呋喃妥因3212816512甲氧苄氨嘧啶磺胺甲恶唑16测试抗菌药物菌种可被推测的抗菌药物药敏结果苯唑西林耐药葡萄球菌属所有内酰胺类及与酶抑制剂复合药耐药四环素敏感所有菌属红霉素敏感和耐药链球菌属罗红霉素克拉霉素阿奇霉素地红霉素敏感和耐氨苄西林敏感和耐药肠球菌属不产内酰胺酶的肠球菌对阿莫西林哌拉西林及其与酶抑制剂的复合剂敏感和耐药氨苄西林敏感粪肠球菌亚胺培南敏感青霉素敏感葡萄球菌属淋病奈瑟菌所有内酰胺类及与酶抑制剂复合药敏感青霉素敏感和耐药肠球菌不产内酰胺酶的肠球菌对氨苄西林阿莫西林哌拉西林及与酶抑制剂复合剂敏感和耐药头孢噻吩敏感和耐药肠杆菌科头孢匹林头孢拉啶头孢氨苄头孢克罗头孢头孢羟氨苄敏感和耐药氨苄西林敏感和耐药所有菌属阿莫西林巴氨西林氨环已西林敏感和耐药磺胺异恶唑敏感和耐药所有菌属所有磺胺类敏感和耐药萘啶酸耐药肠杆菌科所有喹诺酮类耐药头孢噻吩头孢唑林敏感肠杆菌科所有头孢菌敏感青霉素敏感链球菌属对绝大多数内酰胺类药物敏感二了解抗菌药物的pkpd参数与分类抗菌药物类别pkpd参数药物时间依赖性内酰胺类红霉素克林霉素时间依赖性长paeaucmic替加环素万古霉素阿奇霉素噁唑烷酮类四环素类氟康唑浓度依赖性aucmic或cmaxmic氨基糖苷类氟喹诺酮甲硝唑两性霉素hourgmlcmax
厄他培南 亚胺培南 ESBL筛选 美罗培南
4 4 ≥4 ≥8 ≥16 ≥64 ≥64 4 8 8 ≤0.5 ≤1
28
S μg/ml S μg/ml R μg/ml R μg/ml R μg/ml R μg/ml R μg/ml S μg/ml I μg/ml S μg/ml
厄他培南 亚胺培南 ESBL筛选 美罗培南
4 4 ≥4 ≥8 ≥16 ≥64 ≥64 4 8 8 ≤0.5 ≤1
28
S μg/ml S μg/ml R μg/ml R μg/ml R μg/ml R μg/ml R μg/ml S μg/ml I μg/ml S μg/ml
药敏试验PPT资料
肠杆菌科 一级 二级 南 头孢肤肟，头霉 替卡/克 噻肟，曲松，环丙 亚胺培南，替卡，哌拉 氨曲南，头孢他啶 卡那，奈替，妥布 四环素，氯霉素 妥布，磺胺 头孢曲松 氯霉素，奈替 环丙，亚胺培南， 氨苄 唑林，庆大 阿米卡星 氨苄/舒，阿莫/克 绿脓和非肠杆菌科 头孢他啶 庆大，替卡，哌拉 阿米卡星 吡肟，哌酮，氨曲
纸片扩散法－影响因素
• • • • • • MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
纸片扩散法－标准化
• NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) • 每年修订更改
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(一)
• • • • 每个系统特有的局限性 （快生长菌〕 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度） 各种材料的正确保存 (纸片－20℃) 操作步骤
– 纯菌、35℃、16－28h – 葡萄球菌、肠球菌 24h
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(二)
• 体内、体外试验的不一致性 • 某些菌测某些药，结果有误
– 包括质控 – 新药的判定标准 – 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规 NCCLS的法规
• 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 • 规定常规测试报告的抗生素 • 不同的药判定标准不同 • 不同的菌判定标准也不同
常规测试并报告的药物分组(1) 常规测试并报告的药物分组(1)
Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213–217
24-hr AUC/MIC 24Correlation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility) of an organism
纸片扩散法－影响因素
• • • • • • MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
纸片扩散法－标准化
• NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) • 每年修订更改
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(一)
• • • • 每个系统特有的局限性 （快生长菌〕 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度） 各种材料的正确保存 (纸片－20℃) 操作步骤
– 纯菌、35℃、16－28h – 葡萄球菌、肠球菌 24h
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(二)
• 体内、体外试验的不一致性 • 某些菌测某些药，结果有误
– 包括质控 – 新药的判定标准 – 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规 NCCLS的法规
• 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 • 规定常规测试报告的抗生素 • 不同的药判定标准不同 • 不同的菌判定标准也不同
常规测试并报告的药物分组(1) 常规测试并报告的药物分组(1)
Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213–217
24-hr AUC/MIC 24Correlation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility) of an organism
抗菌药物药敏试验PPT课件
பைடு நூலகம்
注意事项
1. 接种时均匀密涂
2. 贴片时，用无菌镊子轻轻触压药物纸片使之 与培养基充分接触
3. 贴片后不能再更改纸片位置
4. 镊取药物纸片时一旦掉到培养基表面，则继 续保持其位置，切勿镊起重新放置，以防不 同抗生素交叉影响
5. 整个贴片过程应在15- min内完成
12
-
3
试验程序
-
4
材料
❖ 普通平皿培养基,大肠杆菌菌液,葡萄球菌菌液。 ❖ 抗生素药敏纸片（直径5mm，青霉素，链霉
素、氯霉素、庆大霉素、 四环素） ❖ 无菌镊子、无菌棉签 、量尺
-
5
方法
❖取琼脂平皿培养基两个，分别在 其底部中央位置标注“大肠杆菌” 和“葡萄球菌”字样，同步进行 如下操作。
-
6
抗菌药物药敏试验 纸片扩散法
实验目的和要求
❖ 掌握纸片扩散法的原理、操作方法及结 果判读
❖ 了解药物敏感试验的方法和实际意义
-
2
原理
❖ 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂 平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解 后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度 梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被 抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试 菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最 低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈 小。
注意事项
1. 接种时均匀密涂
2. 贴片时，用无菌镊子轻轻触压药物纸片使之 与培养基充分接触
3. 贴片后不能再更改纸片位置
4. 镊取药物纸片时一旦掉到培养基表面，则继 续保持其位置，切勿镊起重新放置，以防不 同抗生素交叉影响
5. 整个贴片过程应在15- min内完成
12
-
3
试验程序
-
4
材料
❖ 普通平皿培养基,大肠杆菌菌液,葡萄球菌菌液。 ❖ 抗生素药敏纸片（直径5mm，青霉素，链霉
素、氯霉素、庆大霉素、 四环素） ❖ 无菌镊子、无菌棉签 、量尺
-
5
方法
❖取琼脂平皿培养基两个，分别在 其底部中央位置标注“大肠杆菌” 和“葡萄球菌”字样，同步进行 如下操作。
-
6
抗菌药物药敏试验 纸片扩散法
实验目的和要求
❖ 掌握纸片扩散法的原理、操作方法及结 果判读
❖ 了解药物敏感试验的方法和实际意义
-
2
原理
❖ 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂 平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解 后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度 梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被 抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试 菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最 低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈 小。
药敏试验及药敏试验结果分析课件
纸片扩散法结果的判定1. 先看菌名（鉴定到种〕2. 不同的药物使用不同的折点药名 菌名 R S 菌株1菌株2
Pip/Taz 绿脓 ≤17 ≥18 16R 30SCAZ 绿脓 ≤14 ≥18 16I 19S3. 同是S时 ， 偏离敏感折点越高的药,MIC越低 ， 活性也越高
药敏试验方法2 －肉汤稀释法
药敏试验方法2 －肉汤稀释法• 调节离子浓度的MH肉汤• 宏量肉汤法（2ml, 13x100mm ）微量肉汤法 （0. 1ml, 微量板） 自动化仪• 优点： 准确 ， 可靠 ， 可用于研究 • 缺点：– 劳动强度大– 细菌生长情况不可查
Slide no
Drug A present at concentration of 2 ug/ml for 50% of dosing intervalDrug B present at concentration of 2 ug/ml for 30% of dosing interval
Drug A(ug/ml rug B
• 苯唑西林 葡萄球菌 所有β - 内酰胺类• 四环素 所有（除葡 多西环素 ， 米诺环素 萄球菌和不动杆菌〕• 红霉素 G＋球菌 罗红 ， 克拉 ， 阿奇• 克林霉素所有 林可霉素
预报用药(一)测试药 菌名 推测其它药物的敏感性
预报用药(二)测试药 菌名 推测其它药物的敏感性
• 材料： 浸有一定Abs的干燥的园滤纸片• 步骤： 制备菌悬液 －涂平板 －贴纸片 －孵育 - 卡尺测量抑菌圈直径 －判定R 、 I 、S• 优点： 选药灵活 、便宜 、一个平皿可测多 个药• 缺点： 影响因素多• 适用于快生长菌 、部分苛养菌
药敏试验方法1（纸片扩散法〕
• MIC• 接种菌量• 细菌生长率• 抗生素含量 、扩散性• 平皿厚度• 温度 ， 预孵育时间
药敏试验结果的解读ppt课件
得的潜在有抗菌活性抗菌药物均耐药的菌株
完整版课件
28
肠杆菌科细菌
最需关注的β-内酰胺酶是ESBLs
ESBLs是肠杆菌科细菌最重要的耐药机制
•超广谱 β -内酰胺酶(ESBLs) •高产头孢菌素酶(AmpC酶)
MDR
•极少数菌株产碳青霉烯酶 (碳青霉烯酶KPC)
XDR or PDR完来自版课件29产ESBLs菌株感染治疗药物
药敏试验结果的解读
完整版课件
1
完整版课件
2
内容
药敏试验原则、意义、方法 解释标准（折点） 药敏试验结果解释及个体化治疗指导 药敏结果与临床疗效不一致性分析
完整版课件
3
抗菌药物敏感性试验
• 以患者的血液、体液、排泄物为标本，进 行细菌分离培养、鉴定及敏感性测定，以 达到诊断和治疗的目的。
完整版课件
7
药敏试验方法
纸片扩散试验：K-B法，测定抑菌圈直径,适合快速生长的致病菌。 稀释试验：测定MIC，包括肉汤稀释法、琼脂稀释法，有微量法和
常量法，用于临床疗效不佳、确定中介度的敏感性、选择二线药。
筛选试验： 确证试验： 联合药敏试验: 单一药物不能控制的混合感染、 多重耐药菌株、
Cefepime ≤8 16 ≥32
完整版课件
≤2 4-8
≥16
21
如ESBL试验阳性，则报告为耐药
用于治疗因肠杆菌科、肺炎克雷伯杆菌、 奇异变形杆菌引起的无并发症的尿路感染 时，预测头孢克洛、头孢地尼、头孢泊肟 酯、头孢丙烯、头孢呋辛酯。（呋辛、地 尼）
完整版课件
22
基于给药方案500mg/q6h或1g/q8h
中国产ESBLs肠杆菌科细菌感染应对完策整略版专课家件共识.中华医学杂志, 2014.6, 94(24): 183417-56
相关主题
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Lass FlorIC ，JAC 1998
12
抗真菌药物在体外对真菌病原学活性
—无活性；+/—可能有活性； +有活性，三线（至少临床有效）++有活性， 二线（作用稍差）；+++有活性，一线（常常有效）
真菌 烟曲霉 黄曲霉 土曲霉 镰刀霉 尖端赛多孢 多育赛多孢
氟康唑 —— —— —— —— —— ——
犁头霉毛霉根霉 ——
伏立康唑 +++ +++ +++ ++ +++ +/—
——
泊沙康唑 +++ +++ +++ ++ +++ +/—
+++
棘白菌素类 ++ ++ ++ —— +/— ——
——
多烯类 ++ ++（高MIC） —— ++（脂质） +/— +/—
氟康唑－念珠菌的药敏
• 折点适合粘膜感染、侵袭性念珠菌感染 • SDD：高剂量，疗效接近S • SDD：成功率高于R菌株
8
体外抗真菌药敏试验与体内疗效
• NCCLS M27-A
600余株念珠菌MIC值：分离自150余例AIDS的食 管念珠菌病，一致性好；治疗失败者，MIC值大于 64 µg/ml
-
-
R 64
32
1
1
4
#粘膜中酵母菌 ；*非 NCCLS标准; @ CLSI未公布对念珠菌的折点
2
纸片扩散法敏感试验的判定标准
氟康唑 mm
S:敏感
19
SDD:剂量依赖敏感 15-18
R:耐药
14
伏立康唑 mm
17 14-16 13
S＝Susceptible SDD=Susceptible-Dose Dependent R=Resistant
真菌实验室诊断进展 -----敏感试验结果的解释
北京协和医院检验科 徐英春
.
1
酵母菌的NCCLS M27-A 1997 抗真菌药物的判定折点
氟康唑 5-氟胞嘧啶 伊曲康唑 # 两性霉素B* 伏立康唑 v
S 8
4
0.125 0.5
1
SDD 16-32
-
0.25-0.5 -
2
I
-
8-16
92％ (488/533)
77％
SDD
62％ (36/58)
71％
R
41％ (41/101)
44％
(353/460) (51/72) (31/71)
合计
1295
85％0) (72/172)
Pfaller M, Diekema D， Sheehan D. Clin Micro REV， In Press，2006 7
15 (101)
603例 侵袭性念珠菌 ％(n)
76 (460)
12 (72)
12 (71)
Pfaller M, Diekema D， Sheehan D. Clin Micro REV， In Press，2006
6
氟康唑的敏感性与念珠菌感染治疗的临床有效率
感染类型 粘膜
侵袭性
例数
692
603
S
• 90-60原则—MIC值与临床疗效
药敏试验敏感菌株：90%对治疗有效 药敏试验耐药菌株：60%对治疗有效
Mahmoud A.G, JCM 1996, 34:489-495；Rex J,CID 2002, 35: 982-989
9
常见的念珠菌体外敏感性评估：
菌株
氟康唑 伊曲康唑 两性霉素 伏立康唑 泊沙康唑 卡泊芬净
• Aspergillus spp, from 29 patients with IA
– 黄曲霉 A. flavus 41% – 土曲霉 A. terreus 31% – 烟曲霉 A. fumigatus 28%
• A. terreus MIC was consistently high • Pts with isolates with MIC <2mg/L survived • 22/23 with MIC > 2 ug/ml died
400mg/d
16-32µg/ml
800mg/d
Hopenthal et al, Diagn Microb Infect Dis, 2004, 48:153-160
5
氟康唑的MIC折点与临床的关系
MIC（ug/ml)
8 16-32
64
692例 粘膜 念珠菌 ％(n)
77 (533)
8 ( 58)
10
抗真菌药物在体外对真菌病原学活性
—无活性；+/—可能有活性； +有活性，三线（至少临床有效）++有活性， 二线（作用稍差）；+++有活性，一线（常常有效）
真菌 白念珠菌 光滑念珠菌 热带念珠菌 近平滑念珠菌 克柔念珠菌 季也蒙念珠菌 新型隐球菌
氟康唑 +++ +/+++ +++ —— +++ +++
白念珠菌
S
S
S
S
S
S
热带念珠菌
S
S
S
S
S
S
近平滑念珠菌
S
S
S
S
S
S / I?
都伯林念珠菌
S / S-DD
S
S/I
S / S-DD S / S-DD
S
光滑念珠菌
S-DD / R S-DD / R
S/I
S / S-DD S / S-DD
S
克柔念珠菌
R
S-DD / R
S
S
S
S
葡萄牙念珠菌
S
S
S/R
S
S
S
S=敏感 S-DD=剂量依赖敏感 I=中介 R=耐药 Pappas PG et al, Clin Infect Dis 2004;38:161-89; Bartizal K et al, Antimicrob Agents Chemother
伏立康唑 +++ + +++ +++ ++ +++ +++
泊沙康唑 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
棘白菌素类 多烯类
+++
+++
+++
++
+++
+++
++（高MIC） +++
+++
++
++(高MIC) ++
——
+++
热病 37th Edition 2007
11
曲霉的药敏感试验与临床疗效
1997;41:2326-32; Patterson TF. J Chemother 1999;11:504-12; Pfaller MA et al, Antimicrob Agents Chemother 2002;46:1723-7; Pfaller MA et al, J Clin Microbiol 2002;40:852-6
3
M44-P纸片扩散法药敏结果判定
• 读取抑菌环直径近似到mm • 在大约80%抑制区为测量边界 • 在抑菌环内个别细小或中等大小的菌落不计
ATCC90028 白念珠菌
4
体外抗真菌药敏试验指导用药
• 以氟康唑为例：
MIC
剂量
<4µg/ml
100mg/d
4-8µg/ml
200mg/d
8-16µg/ml
12
抗真菌药物在体外对真菌病原学活性
—无活性；+/—可能有活性； +有活性，三线（至少临床有效）++有活性， 二线（作用稍差）；+++有活性，一线（常常有效）
真菌 烟曲霉 黄曲霉 土曲霉 镰刀霉 尖端赛多孢 多育赛多孢
氟康唑 —— —— —— —— —— ——
犁头霉毛霉根霉 ——
伏立康唑 +++ +++ +++ ++ +++ +/—
——
泊沙康唑 +++ +++ +++ ++ +++ +/—
+++
棘白菌素类 ++ ++ ++ —— +/— ——
——
多烯类 ++ ++（高MIC） —— ++（脂质） +/— +/—
氟康唑－念珠菌的药敏
• 折点适合粘膜感染、侵袭性念珠菌感染 • SDD：高剂量，疗效接近S • SDD：成功率高于R菌株
8
体外抗真菌药敏试验与体内疗效
• NCCLS M27-A
600余株念珠菌MIC值：分离自150余例AIDS的食 管念珠菌病，一致性好；治疗失败者，MIC值大于 64 µg/ml
-
-
R 64
32
1
1
4
#粘膜中酵母菌 ；*非 NCCLS标准; @ CLSI未公布对念珠菌的折点
2
纸片扩散法敏感试验的判定标准
氟康唑 mm
S:敏感
19
SDD:剂量依赖敏感 15-18
R:耐药
14
伏立康唑 mm
17 14-16 13
S＝Susceptible SDD=Susceptible-Dose Dependent R=Resistant
真菌实验室诊断进展 -----敏感试验结果的解释
北京协和医院检验科 徐英春
.
1
酵母菌的NCCLS M27-A 1997 抗真菌药物的判定折点
氟康唑 5-氟胞嘧啶 伊曲康唑 # 两性霉素B* 伏立康唑 v
S 8
4
0.125 0.5
1
SDD 16-32
-
0.25-0.5 -
2
I
-
8-16
92％ (488/533)
77％
SDD
62％ (36/58)
71％
R
41％ (41/101)
44％
(353/460) (51/72) (31/71)
合计
1295
85％0) (72/172)
Pfaller M, Diekema D， Sheehan D. Clin Micro REV， In Press，2006 7
15 (101)
603例 侵袭性念珠菌 ％(n)
76 (460)
12 (72)
12 (71)
Pfaller M, Diekema D， Sheehan D. Clin Micro REV， In Press，2006
6
氟康唑的敏感性与念珠菌感染治疗的临床有效率
感染类型 粘膜
侵袭性
例数
692
603
S
• 90-60原则—MIC值与临床疗效
药敏试验敏感菌株：90%对治疗有效 药敏试验耐药菌株：60%对治疗有效
Mahmoud A.G, JCM 1996, 34:489-495；Rex J,CID 2002, 35: 982-989
9
常见的念珠菌体外敏感性评估：
菌株
氟康唑 伊曲康唑 两性霉素 伏立康唑 泊沙康唑 卡泊芬净
• Aspergillus spp, from 29 patients with IA
– 黄曲霉 A. flavus 41% – 土曲霉 A. terreus 31% – 烟曲霉 A. fumigatus 28%
• A. terreus MIC was consistently high • Pts with isolates with MIC <2mg/L survived • 22/23 with MIC > 2 ug/ml died
400mg/d
16-32µg/ml
800mg/d
Hopenthal et al, Diagn Microb Infect Dis, 2004, 48:153-160
5
氟康唑的MIC折点与临床的关系
MIC（ug/ml)
8 16-32
64
692例 粘膜 念珠菌 ％(n)
77 (533)
8 ( 58)
10
抗真菌药物在体外对真菌病原学活性
—无活性；+/—可能有活性； +有活性，三线（至少临床有效）++有活性， 二线（作用稍差）；+++有活性，一线（常常有效）
真菌 白念珠菌 光滑念珠菌 热带念珠菌 近平滑念珠菌 克柔念珠菌 季也蒙念珠菌 新型隐球菌
氟康唑 +++ +/+++ +++ —— +++ +++
白念珠菌
S
S
S
S
S
S
热带念珠菌
S
S
S
S
S
S
近平滑念珠菌
S
S
S
S
S
S / I?
都伯林念珠菌
S / S-DD
S
S/I
S / S-DD S / S-DD
S
光滑念珠菌
S-DD / R S-DD / R
S/I
S / S-DD S / S-DD
S
克柔念珠菌
R
S-DD / R
S
S
S
S
葡萄牙念珠菌
S
S
S/R
S
S
S
S=敏感 S-DD=剂量依赖敏感 I=中介 R=耐药 Pappas PG et al, Clin Infect Dis 2004;38:161-89; Bartizal K et al, Antimicrob Agents Chemother
伏立康唑 +++ + +++ +++ ++ +++ +++
泊沙康唑 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
棘白菌素类 多烯类
+++
+++
+++
++
+++
+++
++（高MIC） +++
+++
++
++(高MIC) ++
——
+++
热病 37th Edition 2007
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曲霉的药敏感试验与临床疗效
1997;41:2326-32; Patterson TF. J Chemother 1999;11:504-12; Pfaller MA et al, Antimicrob Agents Chemother 2002;46:1723-7; Pfaller MA et al, J Clin Microbiol 2002;40:852-6
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M44-P纸片扩散法药敏结果判定
• 读取抑菌环直径近似到mm • 在大约80%抑制区为测量边界 • 在抑菌环内个别细小或中等大小的菌落不计
ATCC90028 白念珠菌
4
体外抗真菌药敏试验指导用药
• 以氟康唑为例：
MIC
剂量
<4µg/ml
100mg/d
4-8µg/ml
200mg/d
8-16µg/ml