三缩四乙二醇电喷雾质谱行为研究

合集下载

三缩四乙二醇二甲基丙烯酸酯化学式

三缩四乙二醇二甲基丙烯酸酯化学式
三缩四乙二醇二甲基丙烯酸酯，简称TTEGDMA，是一种重要的有机化合物。

其化学式为C16H30O6，结构中包含四个甲基基团和两个乙二醇缩合而成的环状结构。

TTEGDMA具有较好的耐水性、耐化学性和黏合性能，被广泛应用于牙科材料领域。

它是一种常用的牙科填料单体，可制备出具有良好机械强度和生物相容性的树脂充填物，广泛应用于牙齿修复、牙套制作等领域。

此外，TTEGDMA也可作为强效的粘接剂，用于粘接不同材料间的接头。

它可以将金属、陶瓷、塑料甚至不同材质的材料牢固地黏合在一起。

虽然TTEGDMA的应用十分广泛，但是其使用也存在着一定的风险。

研究表明，TTEGDMA具有一定的毒性，长期接触可能导致皮肤敏感和呼吸系统感染。

因此，在使用TTEGDMA时，应严格遵循安全操作规程，防止其对人体造成伤害。

总的来说，TTEGDMA是一种非常重要的有机化合物，具有广泛的应用前景。

在正确使用的前提下，TTEGDMA能够为人类带来诸多益处。

液相色谱-质谱法测定血药浓度试验中提高灵敏度的方法概述

液相色谱-质谱法测定血药浓度试验中提高灵敏度的方法概述马智宇【摘要】血浆中药物(或内源性物质)浓度检测是药代动力学的基础,也是药物临床前和一期临床研究重要组成部分,还是一些疾病和胎儿早期筛查的重要指标.目前血浆中药物浓度检测广泛采用液相色谱-质谱法(LC-MS/MS).而LC-MS/MS测定过程中,常遇到药物的检测灵敏度不够的问题.检测灵敏度不够主要是由于药物浓度过低或药物结构质谱响应低造成的.本文概述了LC-MS/MS法血药浓度检测中提高灵敏度的主要途径,即根据药物结构,从质谱方法、色谱方法、样品制备方法和避免低浓度样品污染四个方面来联合提高药物检测灵敏度的解决方案,从而为解决血浆中药物检测灵敏度不够的困难提供帮助.【期刊名称】《上海医药》【年(卷),期】2019(040)005【总页数】5页(P74-78)【关键词】LC-MS/MS;低灵敏度;超低浓度【作者】马智宇【作者单位】上海医药集团中央研究院上海 201203;中科院上海药物研究所药物代谢研究中心上海 201203【正文语种】中文【中图分类】O657;R969.1测定血药浓度是研究药代动力学的基础，而动物和人的药动学研究是药物临床前研究和一期临床安全性评价重要组成部分，是新药上市之前研发必由之路，同时还是疾病和胎儿早期筛查的重要途径。

由于血浆中含有血浆蛋白、盐离子、水分和待测药物等复杂组分，且其中药物浓度相对较低，而液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）集分离和检测技术为一体，能把药物从体内大多数复杂物中分离出来进行测定，故成为目前测定血浆中药物浓度的主要方法[1-6]。

药物血浆浓度检测中，由于检测灵敏度不够而不能满足测定要求是最常见的问题[7-8]。

其原因一方面是待测药物血浆中浓度过低，另一方面是药物本身结构响应低或质谱离子化不稳定，比如某些类固醇类药物不含质谱响应基团或某些药物（如鱼腥草素）质谱中裂解[3-6,9]。

以上的两种问题都需要提高仪器对药物检测灵敏度来满足测定要求。

液相质谱-电喷雾离子源(ESI)的五大常见问题

液质联用技术是目前最常用的一种分析检测仪器，今天小编通过问答形式，详细介绍一下液质联用中的ESI离子源技术，透过原理，解答您在分析过程中的常见的疑惑。

一、ESI电喷雾离子源的基本原理是什么？图1. 三重串联四极杆质谱构造图我们通过分解的方式来窥探一下ESI产生离子化的基本过程液相色谱作为进样系统和分离系统：待分析物通过液相色谱系统在色谱柱上得到分离，被流动相带入电喷雾针。

图2. ESI电喷雾离子源构造图●电喷雾针：电喷雾针为套管式结构，中空管道，如上图，中间为流动相通道，两侧翼为雾化气通道，电喷雾针中的喷雾气，形成喷雾压力，流动相液体随喷雾气，被压入大气压气化腔室（见图1）形成喷雾。

●电场梯度：在喷雾针、和离子锥孔处的反电极之间形成电场梯度，液滴在此处形成正离子或负离子，正负离子形成与化合物的性质相关。

●脱溶剂气：被加热的逆向的反吹气，与液滴发生热量交换，使得带电液滴脱溶剂化，库伦爆炸在此过程中反复进行，最终形成裸露的气相离子，通过离子传输组件，进入四极杆质量过滤器中。

●加热鞘气（辅助脱溶剂化）：加热的鞘气，在喷针的两端，和喷针平行处，其作用，一个是热量交换，使得带电液滴气化，另外一个目的是实现离子聚焦，防止离子的逃逸。

二、质谱中的各种“气”和各种“电压”，您了解吗？反吹气（又名气帘气或者脱溶剂气）：反吹气，和气帘气，脱溶剂气其实是不同的名称，从锥孔（或者毛细管）出来的加热气，运动轨迹和离子运行轨迹相反，所以有的叫它”反吹气”，又因为这种加热的气体，对于进入离子通道前的带电液滴，与之进行热量交换，起到了脱溶剂化的效果，又被称为“脱溶剂气”，在与离子传输相反的道路上，它形成了一道像窗帘一样，阻隔了中性分子进入离子通道的路线，降低了本底干扰，所以也被称为”气帘气”。

⏹喷雾气：我们可以看到，雾化气在喷雾针平行的方向上，其主要作用在于形成喷雾压力，使得经过喷针的液流，形成细小的雾滴（此过程带电和雾化同时进行）。

三缩四乙二醇二甲基丙烯酸酯化学式

三缩四乙二醇二甲基丙烯酸酯化学式三缩四乙二醇二甲基丙烯酸酯（简称TTEGMA）是一种重要的有机化合物，具有广泛的应用领域。

它的化学式为C14H24O5，结构式为CH2=C(CH3)COO(CH2CH2O)3CH3，是一种无色液体。

TTEGMA是一种具有高分子量的单体，可作为合成高分子聚合物的原料。

它具有良好的溶解性和反应活性，可用于制备各种功能性聚合物。

例如，将TTEGMA与丙烯酸酯类单体进行共聚合，可以得到具有优异性能的聚合物材料。

这些聚合物具有良好的耐热性、耐化学腐蚀性和机械强度，可广泛应用于涂料、胶粘剂、纺织品、塑料等领域。

TTEGMA还可用于制备功能性表面涂层。

通过将TTEGMA与其他单体进行共聚合或交联反应，可以得到具有特殊表面性能的涂层。

例如，将TTEGMA与硅烷偶联剂共聚合，可以获得具有耐水性、耐候性和抗污染性的涂层。

这些涂层可应用于建筑材料、汽车涂装、航空航天等领域，提供表面保护和改善材料性能。

TTEGMA还可用于制备功能性聚合物微球。

通过控制反应条件和聚合过程，可以制备具有特定尺寸、形状和表面性质的聚合物微球。

这些微球具有较大的比表面积和空隙结构，可用于催化剂载体、药物缓释、生物传感器等领域。

例如，将TTEGMA与乙烯基苯进行共聚合，可制备具有大孔径和高吸附容量的聚合物微球，用于吸附和分离有机物。

TTEGMA是一种具有广泛应用前景的有机化合物。

它可用于制备功能性聚合物、功能性表面涂层和功能性聚合物微球，应用于涂料、胶粘剂、纺织品、塑料、建筑材料、汽车涂装、航空航天、催化剂载体、药物缓释、生物传感器等领域。

未来，随着科学技术的不断发展和人们对功能性材料的需求增加，TTEGMA的应用前景将更加广阔。

我们有信心通过持续的研究和创新，不断拓展TTEGMA的应用领域，为社会经济的可持续发展做出更大的贡献。

电喷雾质谱法的实验教学探讨

验教学所用的仪器设备为Ｑｔｏ— ｍｉｏＡＩ质谱ａｒｔｃＰｒ
ｓｅｔｍｔｒ［］ｎ１ｈｍ．１８５：７ｐｃｏｅｅｓＪ．Ａａ．Ｃｅ，９５，７６５—６９ｒ７．
仪，我们首先专门针对仪器设备的各个部件作了详细的介绍，然后简单地拆卸一级锥孔，讲解一级锥
中图分类号：Ｇ４４３６２．２文献标志码：Ａ文章编号：１７４５（０１ｏ０３０６２— ５０２１４— １４— ２１
ＥｘｌｒｔｏｎＥｘｅｉｅｔＴｅｃｉｇｏｅｔｏｐａｏｉａｉｎｐｏａｉｎｏｐｒｍｎａｈｎｆＥｌｃｒｓｒｙＩｎｚｔｏＭａｓＳｅｔｏｅｒｎＤｒｇＡｎｌｓｓｓｐｃｒｍｔｙｉｕａｙｉ
第９卷
第４期
实验科学与技术
ＥｐｒｎｃｅｃｎｅｈｏｏｙｘｅｍｅｔＳｉｎｅａｄＴｃｎｌｇｉ
Ｖｏ．．１９Ｎｏ４
Ａｕｕｔ２０１ｇｓ．１
２１年８月０１
电喷雾质谱法的实验教学探讨
李娟，刘宏民
近年来，素质教育的提出越来越看重学生的实际动手能力，对于实验教学的重视程度也上了一个
挥发和小液滴的缩小，表面电荷与表面积的比值就会变大，直到电荷排斥力足以克服表面张力，使小液滴发生溅射，形成更细小的液滴。随着溶剂的进
一
新台阶，尤其是像质谱之类的大型贵重仪器的开放
仪器各部件功能及特点，掌握其操作的基本技能和

高效液相色谱_电喷雾质谱联用分析喜树果鞣花酸类成分

第37卷第1期林业科技Vol.37No.1 2012年1月FORESTRY SCIENCE＆TECHNOLOGY Jan．2012文章编号：1001－9499（2012）01－0021－03高效液相色谱－电喷雾质谱联用分析喜树果鞣花酸类成分*郭群袁桥玉（武汉职业技术学院生物工程学院，湖北武汉430074）摘要：建立喜树果的液相色谱质谱联用分析方法，并分析了喜树果中的鞣花酸类化合物。

大孔吸附树脂分离、HPLC–ESI–（MS）n数据分析结果：初步分析到5个化合物，即3，4－O，O－亚甲基－3'，4'－O－二甲基鞣花酸、3'－O－甲基鞣花酸－4'－O－葡萄糖苷、鞣花酸－4'－O－鼠李糖苷、3，4'－O－二甲基鞣花酸、3，3' 4，4'－O－四甲基－5'－甲氧基鞣花酸。

用HPLC–ESI–（MS）n方法分析喜树果鞣花酸类成分，方便、快捷、实用。

关键词：喜树果；HPLC–（MS）n；鞣花酸中图分类号：TH833，TH834文献标识码：A喜树果为珙桐科植物喜树（Camptotheca acuminata）的果实，其抗癌活性成分喜树碱和10－羟基喜树碱已经得到开发应用。

喜树果中的鞣花酸类成分—3'－O－甲基－3，4－O，O－亚甲基鞣花酸－4'－O－β－D－吡喃葡萄糖苷，具有较强抑制DNA拓扑异构酶I的作用，是潜在的抗癌药物资源［1－2］。

喜树果中的鞣花酸类成分含量较低［3］，且暂时未见有对照品提供。

本研究针对喜树果中的鞣花酸类成分，建立了大孔吸附树脂分离技术和HPLC–ESI－（MS）n分析技术，并定性分析到5个鞣花酸类化合物，其中2个为鞣花酸糖苷。

1试验部分1.1样品的制备喜树果采自中国湖北省恩施自治州。

50%乙醇回流提取，浓缩液上苯乙烯型非极性大孔吸附树脂柱，用30%、50%乙醇梯度洗脱；50%乙醇洗脱液再上聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，先用30%乙醇洗去水溶性杂质，再用50%乙醇脱洗；收集50%乙醇洗脱液的第5个至第6个BV（BV 为床体积）段的洗脱液，回收溶剂得提取物。

电喷雾离子源原理的一些理论探讨

广东化工 2020年第13期· 78 · 第47卷总第423期电喷雾离子源原理的一些理论探讨罗杰鸿(广东核力工程勘察院，广东广州 510000)[摘要]电喷雾离子源是液相质谱最常用的接口之一，广泛应用于环境、食品、医学等领域，但由极小的液滴产生气相离子的机理尚未明确，同时科学家们提出了各种的观点。

主要的机理有离子蒸发机理、带电残基机理以及链弹射理论等。

结合本实验室的研究内容，提出一种电喷雾离子源的新原理-“离子迁移搬运”机理，用以指导本实验室的研究工作。

[关键词]电喷雾离子源；液相质谱；原理；离子迁移搬运[中图分类号]O661.1 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2020)13-0078-02Theoretical Discussion on the Principle of Electrospray Ion SourceLuo Jiehong(Guangdong Nuclear Power Engineering Survey Institute, Guangzhou 510000, China)Abstract: Electrospray ion source is one of the most commonly used interfaces of liquid phase mass spectrometry. It is widely used in the fields of environment, food, medicine and so on, however, the mechanism of the generation of gas phase ions from very small droplets is not clear, and scientists have put forward various viewpoints. The main mechanisms are ion evaporation model, charged residue model and chain ejection model. Combined with the research contents of our laboratory, a new principle of Electrospray Ionization is proposed-“ion migrate and transport” mechanism, which is used to guide the research work in our laboratory.Keywords: Electrospray ion source ；liquid phase mass spectrometry ；mechanism ；ion migrate and transport电喷雾离子源(Electrospray Ionization ，ESI)是目前液相色谱-质谱联用最常用的接口之一，广泛应用于环境、食品、医学等领域，其作为一种软电离方式，可直接测定热不稳定的极性化合物、蛋白质等大分子，在蛋白组学研究中具有独特的优势[1]。

三缩四乙二醇112-60-7

14 运输信息
14.1 UN编号
欧洲陆运危规 : 无数据资料国际海运危规 : 无数据资料国际空运危规 : 无数据资料
14.2 联合国（UN）规定的名称
欧洲陆运危规:非危险货物国际海运危规:非危险货物国际空运危规:非危险货物
14.3 运输危险类别
欧洲陆运危规 : 无数据资料国际海运危规 : 无数据资料国际空运危规 : 无数据资料
10.4 避免接触的条件
无数据资料
10.5 不兼容的材料
强氧化剂,强碱
10.6 危险的分解产物
无数据资料
11 毒理学资料
11.1 毒理学影响的信息
急性毒性半数致死剂量 (LD50) 经口 - 大鼠 - 32,484 mg/kg 半数致死剂量 (LD50) 经皮 - 兔子 - > 20,000 mg/kg 亚急性毒性无数据资料刺激性（总述）无数据资料皮肤腐蚀/刺激无数据资料严重眼损伤 / 眼刺激无数据资料呼吸道或皮肤过敏无数据资料生殖细胞诱变细胞突变性-体内试验 - 老鼠 - 腹膜内的致癌性此产品中没有大于或等于 0。1%含量的组分被 IARC鉴别为可能的或肯定的人类致癌物。生殖毒性无数据资料特异性靶器官系统毒性（一次接触）无数据资料特异性靶器官系统毒性（反复接触）无数据资料潜在的健康影响
-无
3 成分/组成信息
3.1 物质
分子式 - C8H18O5 分子量 - 194.23
4 急救措施
4.1 必要的急救措施描述
一般的建议无数据资料如果吸入如果吸入,请将患者移到新鲜空气处。如果停止了呼吸,给于人工呼吸。在皮肤接触的情况下用肥皂和大量的水冲洗。在眼睛接触的情况下用水冲洗眼睛作为预防措施。如果误服切勿给失去知觉者从嘴里喂食任何东西。用水漱口。

环双(百草枯对苯撑)-双2-萘甲酸三缩四乙二醇酯二元超分子给受体体系光诱导电子转移研究

互作用自组装形成一系列特殊结构和功能的超分子体系［．文我们研究了双环（草３本］百枯对苯撑）ＣＰ（ＢＱＴ）与双２萘甲酸三缩四乙二醇（Ｐ一自组装形成超分子体系的光一Ｎ— Ｎ）
诱导电子转移过程．
（于１溶５ｍＬ干燥的四氢呋喃中）反应１ｈ加入１，５ｍＬ干燥吡啶催化，８ｈ后用ＴＬＣ检测２萘甲酰氯不再减少时（开剂：一展乙酸乙酯／油醚一１３，止反应，却，滤，干石／）停冷过蒸溶剂，黄色油状液体，色谱分离（得柱展开剂为乙酸乙酯／油醚由１１—１３石／０／）得淡黄色油状物，率为４％．产５
自由基
文章编号：１７ —４５２１）４０４ —６６４０７（０００ —２１０中图分类号：０４６文献标识码：Ａ
光诱导电子转移是人工模拟光合作用实现太阳能向化学能转化的关键步骤Ｌ．过１通］分子设计构筑多元的电子给受体体系，以获得长寿命电荷分离是化学家们长期追求的目
１２原料的合成．
环双（草枯对苯撑）百的合成参照文献［报道的方法．２萘甲酸三缩四乙二醇酯５双一
的合成［：８称取１一］０ｇ２萘甲酸（．５ｏ）５００８１，０ｍＬ干燥的四氢呋喃置于１０ｍｍ０Ｌ圆底烧瓶中，回流后加人１Ｌ新蒸的氯化亚砜（Ｏｍ过量）反应５ｈ旋除溶剂和过量的氯化亚，，砜，入５加０ｍＬ干燥的四氢呋喃，流，慢滴加４６Ｏ０４ｍｏ）缩四乙二醇回缓．７ｇ（．２１三

药物分析中电喷雾质谱法的应用

药物分析中电喷雾质谱法的应用电喷雾质谱法（Electrospray Ionization Mass Spectrometry，简称ESI-MS）是一种常用的药物分析技术，其通过将溶液中的化合物电离并喷射至质谱仪，然后进行质谱分析，从而获得化合物的质谱特征。

本文将介绍电喷雾质谱法在药物分析中的应用，并探讨其优势和限制。

一、电喷雾质谱法原理及仪器配置1.原理电喷雾质谱法是通过将溶液中的化合物在高电压作用下喷射至气相中，使其在气相中离子化，然后进入质谱仪进行质谱分析。

该方法由于在喷射过程中液滴会逐渐蒸发，使得溶液中的化合物逐渐浓缩，从而提高了检测灵敏度。

2.仪器配置电喷雾质谱仪主要由以下部分组成：喷雾装置、干燥器、进样口、真空系统、离子导入系统和质谱分析部分。

其中喷雾装置是核心部分，负责将溶液中的化合物喷射成离子。

二、电喷雾质谱法在药物分析中的应用1.药物质量检测电喷雾质谱法在药物质量检测中具有很高的应用价值。

通过该方法可以对药物样品进行定量和定性分析，确定药物的组成和相对含量。

此外，电喷雾质谱法还可以快速检测药物中的杂质和降解产物，并且无需或仅需少量的样品前处理，大大缩短了分析时间。

2.药物代谢研究药物代谢研究是药物研发过程中的重要环节，而电喷雾质谱法在该领域中也得到了广泛应用。

通过对生物体内代谢产物的离子化，电喷雾质谱法可以帮助研究人员追踪药物在体内的代谢动态，进而了解其代谢途径和代谢产物的结构。

这对于药物的安全性评价和药代动力学研究具有重要意义。

3.药物结构确认电喷雾质谱法在药物结构确认中也起到了关键作用。

该方法通过分析化合物的质谱特征，可以确定其分子式、分子量和结构。

对于一些复杂结构的药物而言，电喷雾质谱法可以提供重要的帮助，辅助研究人员准确鉴定药物的结构。

三、电喷雾质谱法的优势和限制1.优势电喷雾质谱法具有灵敏度高、准确性高、分析速度快等优点。

相对于传统的质谱分析方法，它无需或仅需少量的样品前处理，减少了分析时间和样品浪费。

电喷雾电离质谱法(ESI-MS)

电喷雾电离质谱法（ESI-MS）扎卡里·沃拉斯（Zachary Voras）1.分类电喷雾电离质谱法（electrospray ionization mass spectrometry，ESI-MS或ESI）是一种分析大型非挥发性材料（如生物材料和聚合物）的电离技术。

ESI常用作液相色谱（liquid chromatography，LC）的电离技术。

ESI可与各种质量分析仪联用，不过最常与之联用是四极杆飞行时间质量分析器。

这是一种微侵入破坏式技术。

2.说明图1 电喷雾电离源一般性示意ESI是质谱分析中用来分析大型非挥发性物质的电离方法（Yamashita和Fenn，1988; Fenn等，1989）。

顾名思义，样品溶解后经毛细管通过电场形成带电液滴的喷雾。

随着溶剂的蒸发，带电液滴的库仑力会迫使带电的分子种类解吸，将其导向质量分析器（Kebarle和Tang，1993）。

图12为ESI源的一般性示意。

这种技术要提取一毛细管的样品溶液，因此常作为液相色谱的电离源。

毛细管内液体流速通常为1~20 μL/min，但微-ESI或纳米-ESI 的毛细管内液体流速可能小于这一数值。

液体受到电场（2~6 kV）作用时会在毛细管口形成泰勒锥，随后分解成单个液滴，这个过程可以用瑞利方程来描述。

加在毛细管上的电场会令液滴带电，这也有助于电喷雾的形成，因为库仑力会导致液滴颗粒相斥。

这种技术能将液滴破成单个的完整分子，因此电喷雾电离检测限极低，已发表的成果中，检测浓度已低至埃摩尔级以下。

ESI-MS生成的质谱显示的是多电荷分子离子，这是由于ESI的间接电离几乎不会造成大量分子碎片，因此ESI被认为是一种“软”电离技术。

对于常含有两性官能团的生物材料，无须额外的辅助材料就可以使分子离子带电。

对于不含易电离位点的大型材料（如某些聚合物），可添加盐（如钾盐、钠盐等）来帮助电荷形成，以增强ESI 信号。

3.应用ESI既可单独用于纯净物检测技术，也可以与LC等复杂混合物预分离技术结合使用。

超高效液相色谱—质谱联用技术在药物分析中的应用研究

超高效液相色谱—质谱联用技术在药物分析中的应用研究一、本文概述随着科技的快速发展，药物分析领域对于分离、鉴定和定量药物成分的要求也日益提高。

传统的药物分析方法已经无法满足现代药物研发和质量控制的精确性要求。

在这样的背景下，超高效液相色谱-质谱联用技术（UPLC-MS）作为一种先进的分析技术，其在药物分析中的应用逐渐凸显出来。

本文旨在深入探讨UPLC-MS技术在药物分析中的应用，并对其进行系统的研究。

本文首先将对UPLC-MS技术进行简要的介绍，包括其基本原理、仪器构成以及技术优势等。

随后，我们将详细讨论UPLC-MS技术在药物分析中的具体应用，包括药物成分的分离、鉴定、定量以及药物代谢动力学研究等。

我们还将对UPLC-MS技术在药物分析中的优势与挑战进行深入分析，以期为该技术在药物分析领域的进一步应用提供有益的参考。

通过本文的研究，我们期望能够为药物分析领域的研究人员和技术人员提供一种新的、高效的分析方法，推动药物分析技术的不断进步，为药物研发、质量控制和临床用药提供更为准确、快速的数据支持。

二、超高效液相色谱—质谱联用技术的基本原理超高效液相色谱-质谱联用技术（UPLC-MS）是一种将超高效液相色谱（UPLC）与质谱（MS）相结合的分析技术，其基本原理主要基于色谱分离和质谱检测两个过程。

在色谱分离过程中，超高效液相色谱（UPLC）发挥着关键作用。

UPLC技术采用了小颗粒填料（通常小于2微米）和窄孔径设计，大大增加了柱子的比表面积和柱效，从而提高了分离效率和分辨率。

这种高效分离使得复杂样品中的各组分能够在更短的时间内得到有效分离，降低了样品的处理时间，提高了分析效率。

质谱检测则是通过电离样品分子，使其转化为离子，然后利用电场和磁场的作用使离子按照质荷比（m/z）分离，并检测其到达检测器的时间和强度，从而得到质谱图。

质谱图能够提供丰富的结构信息，如分子量、分子结构、官能团等，是鉴定和定量分析的重要工具。

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定蔬菜水果中27种常见农药残留

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定蔬菜水果中27种常见农药残留李娟;孙程鹏;侯颖;袁奎敬;鲁景斌;刘静【摘要】建立了蔬菜水果中27种常见农药残留超高效液相色谱-电喷雾串联质谱(UPLC-ESI -MS/MS)测定方法.样品用乙腈均质提取,加入无水硫酸镁和氯化钠盐析分层,经CARBON/NH2固相萃取柱净化,乙腈-甲苯(3∶1,v/v)洗脱,旋转蒸发浓缩,用乙腈-0.1%甲酸(1∶1,v/v)溶解,以电喷雾串联质谱在多反应监测模式(MRM)下进行测定.分析方法结果表明,多数组分在5～100μg/L范围内线性良好(r2=0.991～0.999),在10～50 μg/kg范围内,27种农药的回收率为65.81%～124.7%,相对标准偏差为3.6%～19.2%.方法的检出限和定量限范围分别为0.05～5μg/L和0.2～18 μg/L.该方法操作简便、快捷、灵敏,灵敏度、准确度和精密度均能满足农药多残留检测的技术要求,适用于蔬菜水果中常见农药残留的检测.%A new method of assay and confonnation was developed for 27 kinds of pesticide residues in vegetables and fruits by ultra performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry (UPLC - ESI - MS/MS). The sample was extracted with acetonitrile, layered by anhydrous magnesium sulfate and sodium chloride, cleaned-up by a CARBON/NH2 solid phase extraction cartridge. eluted with acetonitrile-toluene (3:1, v/v). The eluate was concentrated with a rotary evaporator. The sample was dissolved in an acetonitrile-0.1％ formic acid (1:1, v/v), then detected by UPLC - ESI -MSfMS in multiple reaction monitoring mode (MRM). The concentration range of linearity was 5-100 μg/L, the correlation coefficients was 0.991-0.999. The recoveries of 27 pesticides in spikedlevels (from 10 to 50 μg/kg) ranged from 65,81％ to 124.7％, with the relative standard deviations of 3.6％-19.2％. The limits of detection and limits of quantification were 0.05-5 μg/L and 0.2-18 μg/L, respectively. The method is sensitive and accurate to meet the requirements of the multiple pesticide residues analysis The method is applicable to determine 27 pesticide residues in vegetables and fruits.【期刊名称】《现代农药》【年(卷),期】2011(010)003【总页数】6页(P31-35,38)【关键词】超高效液相色谱-电喷雾串联质谱;农药;多残留分析;蔬菜;水果【作者】李娟;孙程鹏;侯颖;袁奎敬;鲁景斌;刘静【作者单位】大连市农产品质量监督检验测试中心,辽宁大连116037;大连市农产品质量监督检验测试中心,辽宁大连116037;大连市农产品质量监督检验测试中心,辽宁大连116037;大连市农产品质量监督检验测试中心,辽宁大连116037;大连市农产品质量监督检验测试中心,辽宁大连116037;大连市食品药品检验所,辽宁大连116021【正文语种】中文【中图分类】TQ450.2+63随着社会经济发展和人民生活水平的不断提高，农药残留污染问题越来越受到全球消费者的广泛关注。

三缩四乙二醇质量控制

三缩四乙二醇质量控制1. 前言哎，大家好！今天咱们聊聊一个可能不太引人注意，但其实相当重要的东西——三缩四乙二醇的质量控制。

说到这里，可能有人要问：“这是什么鬼？”别着急，让我慢慢道来。

三缩四乙二醇，听起来就像是化学课上的一个难题，其实它在我们的日常生活中可是大有用处哦。

无论是化妆品、塑料还是食品，几乎都能见到它的身影。

这小家伙的质量直接关系到我们使用的安全和效果，因此，质量控制就显得格外重要。

2. 什么是三缩四乙二醇？2.1 基本概念首先，咱们得先了解一下这个家伙是什么。

三缩四乙二醇，其实就是一个化学物质的名字，听起来复杂，实则它的功能可不少！它的主要作用是作为溶剂和增稠剂，帮助其他成分更好地融合在一起，真是个“和事佬”。

在化妆品中，它能让乳液变得更加顺滑；在塑料中，它可以提升材料的性能。

简而言之，就是个多面手，真是个好帮手！2.2 使用场合但这可不是说它在用的时候就可以“随便来”。

要想让这个多面手发挥作用，质量控制就成了重中之重。

如果三缩四乙二醇的质量不过关，可能导致化妆品过敏，甚至影响到食品的安全，真是“害人不浅”。

所以，咱们必须得严把质量关，让这个小家伙在安全的范围内发挥最大效能。

3. 质量控制的重要性3.1 影响因素质量控制其实就像是给这个家伙把好脉，确保它在生产、运输、储存的每一个环节都不出问题。

首先，在生产过程中，原材料的选择至关重要。

如果选用劣质的原材料，再好的生产工艺也白搭；就好比一杯茶，茶叶再好，但水如果不干净，那这杯茶喝了也没什么滋味。

其次，生产过程中的温度、时间等条件也得好好把握。

就像煮饭，火候不对，米饭就成了“夹生饭”，影响口感和安全。

3.2 检测与标准再来，检测也是一个不可忽视的环节。

很多厂家会制定一些质量标准，比如外观、气味、PH值等等，简直就像给三缩四乙二醇量身定做的“护身符”。

通过这些标准的检测，才能确保它的质量合格，才能让它在市场上“混得开”。

想想，如果不检测，消费者在使用时万一遇到问题，那可真是“得不偿失”啊！4. 质量控制的实施4.1 生产过程控制在生产的每一个环节，企业都需要设立严格的控制措施。

质谱在医院检验中的应用

特殊的天平：称量离子的质量。 Mass Spectrometry (质谱学)：是一门研究气相离子结构、性质及反应行为的科学。 Mass Spectrography(质谱法)：质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比的测定来进行分析的一种分析方法。 Mass Spectrograph (质谱仪)：将离子按照质荷比差异进行分离和检测的仪器
29
应用4：微生物鉴定
质谱在医院检验中的应用
此处介绍应用MALDI Biotyper高通量微生物鉴定系统，通过鉴定病原体自身独特的蛋白质组成，在MALDITOF 质谱仪中得到指纹图。该系统另一个重要的组成部分是已包含3 千多种微生物蛋白特征指纹图谱数据库，通过
特征模式峰的匹配值作鉴定。质谱技术鉴定微生物的优点在于其操作简单（微生物单个菌落前处理简单）、快速且
254.2
507.3
194.2
334.3 399.7
200 300 400 500
m/z 600
4
质谱(mass spectrometry,MS)
质谱工作原理与类型介绍
质谱(mass spectrometry,MS)技术是一种重要的检测分析技术,通过将待测样本转换成高速运动的离子,根据不同的离子拥有不同的质荷比(m/z)进行分离和检测目标离子或片段,然后依据保留时间和其丰度值进行定性和定量。近年来,质谱技术发展迅速,通过改进离子源和分离器相继发展了多种类型的质谱仪如电喷雾离子源质谱(ESI-MS)、大气压化学电离离子源质谱(APCI-MS)、四级杆(QQQ)质谱仪、离子阱质谱技术以及各种串联、联用质谱仪等多种类型,极大提高了检测的分辨率和检测范围。质谱技术最先应用于计量和分析化学领域,在临床检验中质谱仍属于一种年轻的检测方法。但自从其在临床检验应用以来,便以其高灵敏度、低检测限、样本用量少、高通量、检测速度快、样本前处理简单的优势显示出巨大的生命力,尤其和气相、高效液相色谱仪的联用极大的扩展了质谱技术在临床检验中的分析范围。

质谱电喷雾电离源研究新进展

质谱电喷雾电离源研究新进展李佳斌;郝斐然;田芳;张养军【摘要】自1984年约翰芬恩(John Fenn)发明一种软电离离子源,即电喷雾电离源(ESI)以来,促进了质谱技术在大分子分析领域,特别是生物大分子领域的广泛使用.ESI源的低取样效率由ESI源的离子化效率和传输效率的构成,制约着ESI源质谱灵敏度的提高,因此研究者们一直努力改进ESI源的性能,以提高取样效率、改善ESI源质谱灵敏度.本研究介绍了ESI源的原理,并评述了近年来ESI源研究的新进展和应用.%The electrospray ionization(ESI) source has been widely used for the identication and quantification of macromolecules especially biomacromolecules since John Fenn developed the soft ion source in 1984. ESI suffers from low sampling efficiency consisting of ionization efficiency and transmission efficiency, which directly limits the detection sensitivity of a mass spectrometer. So scientists working in this field have paid great attention to improve sampling efficiency. In this review, the theory of ESI source is introduced in detail, and the recent improvement of electrospray ionization source is reviewed.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2013(034)002【总页数】10页(P65-74)【关键词】电喷雾离子源;离子化效率;取样效率【作者】李佳斌;郝斐然;田芳;张养军【作者单位】蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206【正文语种】中文【中图分类】O657.63质谱是一种广泛使用的测量带电粒子质荷比的分析技术，通过测定质荷比可以获得粒子的质量，进而鉴定被分析物质的分子组成，揭示诸如肽段等化合物的化学组成和结构，还可通过质谱峰面积的测量实现被分析物质的定量，其特点是高灵敏度和高选择性。

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法快速分析烟草中7种潜香物质

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法快速分析烟草中7种潜香物质吴新华;朱瑞芝;王凯;任卓英;牟定荣;魏万之;缪明明【摘要】使用超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱(UPLC-ESI-MS/MS)在多反应离子监测(MRM)模式下分离鉴定了烟草中7种潜香物质.烟样经甲醇提取,XAD-2柱分离纯化,选择中性丢失162 u扫描确定母离子.通过对母离子二级质谱扫描(MS2),并根据m/z 192.7、179.2、163.1、134.7、133.2等特征碎片离子峰分析结果确定了7种潜香型物质,分别为熊果苷、香豆酸-葡萄糖苷、香豆素奎尼酸、新绿原酸、绿原酸、葡萄糖基阿魏酸、3-氧化紫罗兰醇葡萄糖苷.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2010(031)002【总页数】6页(P88-93)【关键词】烟草;潜香物质;超高效液相色谱-质谱联用【作者】吴新华;朱瑞芝;王凯;任卓英;牟定荣;魏万之;缪明明【作者单位】红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,云南,玉溪,653100;昆明理工大学,云南,昆明,650224;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,云南,玉溪,653100;湖南大学化学化工学院,湖南,长沙,410082;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,云南,玉溪,653100;湖南大学化学化工学院,湖南,长沙,410082;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,云南,玉溪,653100;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,云南,玉溪,653100;湖南大学化学化工学院,湖南,长沙,410082;云南烟草科学研究院,云南,昆明,650106【正文语种】中文【中图分类】O657.63Key words:tobacco;aroma precursors;ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry interfaced with electro-spray ionization(UPLC-MS/MS)卷烟香吃味是烟草品质的重要体现,因此对于烟草香味成分的分离、鉴定和分析一直以来都是烟草研究的重要领域。

三缩四乙二醇-安全技术说明书MSDS

第一部分化学品及企业标识化学品中文名：三缩四乙二醇化学品英文名：3,6,9-trioxaundecane-1,11-diolCAS No.：112-60-7分子式：C8H18O5产品推荐及限制用途：工业及科研用途。

第二部分危险性概述紧急情况概述无。

GHS危险性类别无危害分类。

标签要素：象形图：无危险图标。

警示词：无警示词。

危险性说明：无防范说明●预防措施：——无。

●事故响应：——无。

●安全储存：——无。

●废弃处置：——无。

物理和化学危险：无资料。

健康危害：无资料。

环境危害：无资料。

第三部分成分/组成信息√物质混合物第四部分急救措施急救：吸入：如果吸入，请将患者移到新鲜空气处。

皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。

如有不适感，就医。

眼晴接触：分开眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。

立即就医。

食入：漱口，禁止催吐。

立即就医。

对保护施救者的忠告：将患者转移到安全的场所。

咨询医生。

出示此化学品安全技术说明书给到现场的医生看。

对医生的特别提示：无资料。

第五部分消防措施灭火剂：用水雾、干粉、泡沫或二氧化碳灭火剂灭火。

避免使用直流水灭火，直流水可能导致可燃性液体的飞溅，使火势扩散。

特别危险性：无资料。

灭火注意事项及防护措施：消防人员须佩戴携气式呼吸器，穿全身消防服，在上风向灭火。

尽可能将容器从火场移至空旷处。

处在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中发出声音，必须马上撤离。

隔离事故现场，禁止无关人员进入。

收容和处理消防水，防止污染环境。

第六部分泄漏应急处理作业人员防护措施、防护装备和应急处置程序：建议应急处理人员戴携气式呼吸器，穿防静电服，戴橡胶耐油手套。

禁止接触或跨越泄漏物。

作业时使用的所有设备应接地。

尽可能切断泄漏源。

消除所有点火源。

根据液体流动、蒸汽或粉尘扩散的影响区域划定警戒区，无关人员从侧风、上风向撤离至安全区。

环境保护措施：收容泄漏物，避免污染环境。

防止泄漏物进入下水道、地表水和地下水。

基于电喷雾电离质谱的人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的N-糖链的定性定量比较

基于电喷雾电离质谱的人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的N-糖链的定性定量比较潘丽英;王承健;袁江北;张英;黄琳娟;王仲孚【摘要】HepG2, a primary hepatocellular carcinoma cell line, and L02 derived from normal liver tissue, were chosen as model cell lines. In this work, the total proteins of HepG2 and L02 cells were extracted and enzymatically hydrolyzed by Peptide-N-glycosidase F( PNGase F) . Then the released N-glycans were purified by microcrystalline cellulose and graphitized carbon columns. The structure of the purified N-glycans was iden-tified by electrospray ionization mass spectrometry( ESI-MS) and MS/MS. To compare the difference of N-gly-cans between HepG2 and L02 cells, β-cyclodextrin was used as the internal standard to relative quantitative analysis of the N-glycans by MS. As results, 26 N-glycans are observed in both HepG2 and L02 cells. The amounts of high-mannose, sialylated, as well as fucosylated and sialylated N-glycans of HepG2 were higher than those of L02 cells. Among them, 15 kinds of N-glycans of HepG2 cells show very significant difference (p<0.01) and 1 kind of N-glycan show significant difference(p<0.05), compared to those of L02 cells. Our studies show potential in investigation of structure partterns of N-glycans expressed in hepatocellular carcinoma and in finding early biomarker in liver cancer diagnose.%以培养的原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象,采用细胞裂解液提取总蛋白,用PNGase F酶解释放N-糖链,以微晶纤维素柱结合石墨碳柱纯化分离N-糖链,通过电喷雾电离质谱( ESI-MS)和串联质谱( MS/MS)对N-糖链进行序列鉴定,以β-环糊精为内标对2种细胞系的N-糖链进行了定量比较分析.结果表明,在肝癌细胞系HepG2和正常细胞系L02中共检测到26种N-糖链,与L02相比, HepG2的大多数高甘露糖型糖链、唾液酸化糖链和岩藻糖基化糖链的数量都明显升高,其中有15种糖链在数量上具有极显著性差异(p<0.01),1种糖链具有显著性差异(p<0.05).本研究为进一步探索肝癌中各类N-糖链的表达特点及发现早期肝癌糖链标志物提供了参考.【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2014(000)002【总页数】7页(P237-243)【关键词】原发性肝癌细胞(HepG2);正常肝细胞(L02);N-糖链;电喷雾电离质谱【作者】潘丽英;王承健;袁江北;张英;黄琳娟;王仲孚【作者单位】西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069【正文语种】中文【中图分类】O657.6;O629.12糖基化是蛋白质翻译后修饰最普遍且复杂的形式之一.在真核生物细胞中，大约超过50%的蛋白质发生了糖基化［1，2］.蛋白质糖基化主要分为N-糖基化和O-糖基化2种类型.糖蛋白上的糖链具有极其复杂的结构和微观不均一性，在生物的生命活动中发挥着多样化的功能.例如，N-糖基化在蛋白质折叠、细胞内物质运输、蛋白质降解、细胞间信号转导及细胞增殖等生命过程中具有重要作用［3～5］.很多疾病与体内蛋白质的糖基化异常有关，已有报道糖基化异常与肿瘤的发生与发展有关［6，7］.近年来，利用糖组学分析方法寻找各种疾病的糖链生物标志物已成为糖生物学研究的热点.原发性肝细胞癌是一种全球性的常见恶性肿瘤，占肝癌总发病率的90%以上［8］.因其缺乏早期特异性症状，难以发现，发展迅速，导致死亡率高.目前，肝癌的诊断方法主要是检测血清中的甲胎蛋白(AFP)水平，但是该方法对早期肝细胞癌鉴定的敏感性(41%～65%)和特异性(80%～94%)不够高［9，10］，而且只有60%的肝细胞癌患者表现出AFP阳性［11］.因此，筛选高特异性生物标志物对肝癌的早期诊断有重要意义.肝癌的发生发展通常伴随着糖基化表达的异常.近年来，生物质谱技术［12］迅速发展，并且在蛋白质组学和糖组学研究中广泛应用，为筛选特异性更高的肝癌糖链生物标志物提供了可能［13，14］.本文以原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象，采用酶解法释放N-糖链，内标法定量，通过质谱技术对N-糖链进行定性定量分析，以期比较肝癌细胞系HepG2和正常肝细胞系L02中N-糖链的差异性，为进一步研究肝癌特异性N-糖链和寻找肝癌糖链生物标志物提供参考.1 实验部分1.1 试剂与仪器肝癌细胞HepG2和正常人肝细胞L02由本实验室培养;透析袋(截留分子量为8000～14000)、细胞裂解液(RIPA BUFFER)及微晶纤维素填料(Microcrystalline powder)均为美国Sigma公司产品;石墨碳柱(150 mg/4 mL，Alltech Carbograph)为美国Grace Davison Discovery Sciences公司产品;改良型RPMI-1640培养基、DMEM/HIGH GLUCOSE培养基、苯甲基磺酰氟(PMSF)、胎牛血清、胰蛋白酶1∶250(Trypsin 1∶250)、青/链霉素、十二烷基磺酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)、乙基苯基聚乙二醇(NP-40)、0.22 μm微孔滤膜、蔡氏滤器及50 mL细胞培养瓶均购于西安周鼎国生物技术有限公司;其它试剂均为国产分析纯.LTQ-XL型电喷雾电离质谱(ESI-MS，美国Thermo Finnigan公司).1.2 实验过程1.2.1 细胞培养 HepG2细胞采用RPMI-1640培养基培养，L02细胞采用DMEM/HIGH GLUCOSE培养基培养，2种培养基中均含有10%(体积分数)胎牛血清和100 U/mL青/链霉素.培养操作在37℃，5%CO2及95%(体积分数)的空气饱和湿度的温箱中进行，待细胞长到约80%密度时收集细胞，于－70℃保存. 1.2.2 细胞总蛋白的提取向冻存的细胞中加入适量的细胞裂解液和PMSF(0.1～1 mmol/L)，吹散细胞，反复冻融(液氮和37℃水浴)4～5次并结合超声破碎(3 min，45 Hz，2次)，以14000 r/min转速离心10 min，取上清液于4℃透析(每天换水3次)2 d，以除去大部分的盐和小分子物质.冷冻干燥，于－20℃保存备用.1.2.3 N-糖链的释放及分离纯化称取细胞总糖蛋白3 mg溶于200 μL蛋白变性液(含有1 mg DTT和1.24 mg SDS)中，在100℃下加热10 min.待样品冷却至室温后，加入PNGase F酶解缓冲液(含有0.5 mol磷酸钠，pH=7.5)和10%(体积分数)NP-40各20 μL，再加入1 μL PNGase F(500 unit)混匀，于37℃水浴24 h，反应完成后，样品用氮气吹干仪浓缩，再采用微晶纤维素柱［15］结合石墨碳柱［16］分离纯化N-糖链.微晶纤维素柱纯化操作如下:采用1 mL枪头湿法装填微晶纤维素柱，用约200 mL二次蒸馏水洗脱除去柱填料本身含有的可溶性寡糖，用3mL洗脱液(正丁醇/甲醇/水，体积比4∶1∶1)平衡柱子，用50 μL洗脱液溶解经浓缩的样品后上样，再用60 mL洗脱液除去蛋白，最后用2 mL二次蒸馏水洗脱收集目标样品.用氮气吹干仪对目标样品进行浓缩.采用石墨碳柱进一步纯化:用3 mL乙腈活化石墨碳柱，用5 mL二次蒸馏水平衡柱子，然后用3～4 mL二次蒸馏水稀释浓缩后的样品，上样，用20 mL去离子水洗脱除盐，最后用15%和25%乙腈洗脱目标糖链，分管收集.1.2.4 N-糖链的定量分析将上述纯化得到的N-糖链样品用氮气吹干，加入100μL二次蒸馏水溶解，再加入4 μL 20 μg/mL β-环糊精水溶液，用于 ESI-MS 检测.1.2.5 质谱分析条件一级质谱参数:离子源电喷雾电压4000 V，鞘气(N2)流速3.04 MPa，辅助气(N2)流速0.507 MPa，毛细管温度275℃，毛细管电压350 V，毛细管透镜电压250 V，进样量2 μL，流动相甲醇/水(体积比1∶1)，流速200μL/min，正负离子模式扫描，扫描范围m/z 900～2000.MS/MS参数:离子源喷雾电压4000 V，鞘气(N2)流速2.03 MPa，辅助气(N2)流速0.507 MPa，毛细管温度300℃，毛细管电压37 V，毛细管透镜电压250 V，进样量2 μL，流动相甲醇/水(体积比1∶1)，流速25 μL/min，碰撞气体为氦气，狭缝宽度m/z 3.0，归一化碰撞能量60%，扫描数据由Xcalibur软件搜集.2 结果与讨论2.1 高甘露糖型N-糖链分析采用细胞裂解液结合反复冻融和超声破碎法提取细胞总蛋白，以PNGase F释放细胞总蛋白的N-糖链，再以微晶纤维素柱结合石墨碳柱分离纯化N-糖链.据文献［17］报道，动物细胞中中性糖的丰度远高于酸性糖，为了避免在质谱检测时高丰度糖链对低丰度糖链的信号造成抑制，完整获取多种糖链的信息，本文采用石墨碳柱实现了中性糖与酸性糖的分别收集，并分别采用正离子模式和负离子模式检测中性糖和酸性糖.经实验考察，分离的最佳条件是用15%(体积分数)乙腈洗脱中性糖，用含0.1%(体积分数)三氟乙酸的25%乙腈洗脱酸性糖.由于分离纯化过程及质谱条件的差异会给实验结果带来误差，为了减小系统误差，实验采用相同质量的HepG2和L02细胞总糖蛋白，且2种样品的糖链解离和分离纯化平行进行，在相同质谱条件下对其糖链进行检测，并对每种细胞系均重复实验3次，所得质谱图如图1所示.Fig.1 ESI-MS profiles of N-glycans drived HepG2(A，C)and L02 cells(B，D)under positive(A，B)and negative ion modes(C，D)(A，B)Eluted with 15%ACN;(C，D)eluted with 25%ACN.*Impurities.由图1(A)和(B)可见，15%乙腈洗脱的组分都是中性糖，在正离子模式下所得质谱峰m/z 933.25，1095.25，1257.33，1419.33，1581.33和1743.42均为［M+Na］+型分子离子峰;m/z 964.17为［M+2Na］2+型分子离子峰(质谱峰是否为多电荷峰是通过质谱峰的同位素峰进行判断的，若其同位素峰相差0.5则为双电荷峰，若同位素峰相差1也可能是［M+2Na－H］+).由图1(C)和(D)可见，25%乙腈(含0.1%TFA)洗脱的组分在负离子模式下所得糖链都是酸性糖，质谱峰m/z 1565.33，1727.25，1769.33，1889.33，1930.33，1711.33，1873.33和1914.42均为［M－H］－型分子离子峰;m/z 1110.25，1293.25，1438.75，1475.83，1621.33，1183.33，1366.33，1511.75，1548.33，1694.33和1840.33均为［M－2H］2－型分子离子峰;而m/z 1315.75为［M+2Na－4H］2－型分子离子峰(负离子模式下质谱峰是否为多电荷峰同样通过质谱峰的同位素峰进行判断，若同位素峰相差1为［M－H］－，若同位素峰相差0.5为［M－2H］2－，也可能为［M+2Na－4H］2－).实验中还分别在负离子模式和正离子模式下对15%乙腈和25%乙腈(含0.1%TFA)洗脱的组分进行了检测，结果表明，15%乙腈洗脱的组分中无酸性糖存在，25%乙腈(含0.1%TFA)洗脱的组分中中性糖含量极低.因此，只对15%乙腈(正离子模式)，25%乙腈(负离子模式)洗脱的N-糖链进行定性定量分析.由于糖基转移酶的活性与各种生理状态有关，在糖链的差异性比较中，一般不局限于某一糖链的上调或下调，而是分析某一类型糖链的差异趋势［18］，故对此进行分类分析.由图1(A)可以看出，HepG2的15%乙腈洗脱组分中出现了8个N-糖链的质谱峰，以MS/MS结合GlycoWorkbench软件分析及参考文献［19］结果对其进行分析和归属.由m/z 1743.42的二级裂解图谱［图2(A)］可见，二级裂解的碎片峰m/z 1581.33，1419.33，1257.42，1095.08和933.08依次相差162，为母分子m/z 1743.33依次断裂1个己糖残基形成的碎片峰;m/z 1743.33与1725.50相差18，推测为母分子失去1分子水形成;m/z 1725.50与1522.33相差203，推测为m/z 1725.50断裂1个氨基己糖形成;碎片峰m/z 1522.33，1360.25，1198.25，1036.25和874.25依次相差162，推测为m/z 1522.33依次断裂1个己糖残基形成的碎片峰;m/z 847.25与671.00相差203，推测为断裂1个氨基己糖残基;m/z 1522.33与1319.33相差203，推测为断裂1个氨基己糖残基;m/z 1319.33，1157.33，995.08，833.33，671.00和508.83依次相差162，推测为m/z 1319.33依次断裂1个己糖残基形成的碎片峰.通过分析m/z 1743.33的裂解特征推测出其可能的结构.其它糖链的MS/MS分析方法类似，L02与HepG2谱图一致，说明二者结构相似，这些糖链单糖组成的可能序列与结构归属列于表1，为高甘露糖型，共7种.Table 1 Compositions and proposed structures and the repeatability of β-cyclodextrin as inter standard of N-glycans from HepG2 and L02cells(－)The N-glycans in negative-ion mode.a.SD:standarddeviation(n=3);b.［M+Na］+;c.［M+2Na］2+;d.［M－2H］2－;e.［M+2Na －4H］2－;f.［M－H］－.H:hexose;N:N-acetyl hexosamine;F:fucose;A:sialic acaid. GlcNAc;Man;GaL;NeaAc;Fuc.Glycan type m/z Monosaccharidecomposition Peak intensity ratio of N-glycan to β-cyclodextrin(mean±SDa)CV(%)HepG2(n=3)L02(n=3)HepG2(n=3)L02(n=3)R elative ratio of N-glycans(HepG2 to L02)Proposed structure High-Mannose 933.25b H3N2 0.526±0.023 0.512±0.038 4.42 7.55 1.0281095.33b H4N20.673±0.059 0.680±0.036 8.81 5.33 0.9901257.33b H5N2 4.694±0.2621.349±0.020 5.60 1.49 3.4781419.33b H6N2 4.011±0.241 3.755±0.233 6.01 6.21 1.0681581.33b H7N2 3.151±0.2412.108±0.113 7.66 5.391.4951743.33b H8N2 3.547±0.278 3.127±0.136 7.86 4.37 1.1341905.50bH9N2 1.539±0.150 1.122±0.0599.75 5.26 1.371964.17c 1.403±0.0531.037±0.119 3.79 11.47 1.352 Complex/hybrid 1110.25(－)d H5N4A20.611±0.0700.333±0.013 11.51 4.11 1.834(sialylated) 1293.25(－)d H6N5A2 2.597±0.1021.108±0.181 3.94 16.38 2.3441315.75(－)e 1.445±0.1180.838±0.080 8.22 9.56 1.724 1438.75(－)d H6N5A30.724±0.1030.711±0.043 14.23 6.05 1.0191475.83(－)d H7N6A21.779±0.1760.657±0.041 9.94 6.252.7051565.33(－)f H4N3A11.559±0.1090.564±0.055 7.03 9.822.7631621.33(－)d H7N6A30.905±0.0580.547±0.049 6.48 9.11 1.6531727.25(－)f H5N3A11.533±0.1251.109±0.102 8.18 9.26 1.3821769.33(－)f H4N4A10.849±0.0830.731±0.087 9.80 12.00 1.1621889.33(－)f H6N3A11.624±0.0971.378±0.126 6.02 9.15 1.1791930.33(－)f H5N4A13.355±0.2961.294±0.073 8.83 5.70 2.592Complex/hybrid 1183.33(－)dH5N4A2F1 1.390±0.0421.414±0.115 3.07 8.15 0.984(fucosylated and 1366.33(－)d H6N5A2F1 6.244±0.4783.798±0.036 7.66 0.95 1.644sialylated) 1511.75(－)d H6N5A3F1 1.349±0.2311.013±0.071 17.12 7.091.3311548.83(－)d H7N6A2F1 4.285±0.4532.937±0.141 10.58 4.801.4591694.33(－)d H7N6A3F1 3.071±0.2051.721±0.093 6.68 5.441.7851711.33(－)f H4N3A1F1 1.301±0.1941.264±0.110 14.93 8.731.0291840.42(－)d H7N6A4F12.575±0.1701.202±0.077 6.61 6.482.1421873.33(－)f H5N3A1F1 0.551±0.0491.289±0.127 9.03 9.890.4271914.42(－)f H4N4A1F1 1.265±0.1740.635±0.024 13.78 3.78 1.990内标法是定量分析糖链时最常用的一种方法.Amano等［20］采用内标法(A2-amide glycan)结合定量分析了小鼠胚胎肝细胞不同分化时期N-糖链表达量的动态变化;Wang等采用β-环糊精作内标，结合质谱(ESI-MS)定量比较了不同方法释放O-糖链的产率.本文以β-环糊精为内标对HepG2和L02的N-糖链进行了定量比较分析，结果如表1所示，重复实验3次84%的糖链CV值小于10%，说明质谱检测糖链的重现性良好.与L02相比［图3(A)］，HepG2中的H3N2，H5N2，H6N2，H7N2，H8N2和H9N2在数量上具有上调现象，H4N2具有下调现象.t检验结果表明，与L02相比，HepG2中H5N2，H7N2和H9N2具有极显著性差异(p＜0.01)，其中H5N2相差3.478倍，其余4条差异不明显，各糖链相差倍数见表1.Fig.2 MS/MS spectra of N-glycans(A)MS/MS spectra of glycan with m/z 1743.33［M+Na］+in the positive-ion mode;(B)MS/MS sp ectra of glycan with m/z 1930.33［M－H］－ in the negative-ion mode;(C)MS/MS spectraof glycan with m/z 1873.33［M－H］－in the negative-ion mode.Fig.3 Peak intensity ratio of N-glycans to β-cyclodextrin from HepG2 andL02HepG2; LO2.(A)High-mannose.a.H3N2;b.H4N2;c.H5N2;d.H6N2;e.H7N2;f.H8N2;g.H9N2(［M+Na］+);h.H9N2(［M+2Na］2+).(B)Complex/hybrid(sialylated).a.H5N4A2;b.H6N5A2;c.H6N5A2;d.H6N5A 3;e.H7N6A2;f.H4N3A1;g.H7N6A3;h.H5N3A1;i.H4N4A1;j.H6N3A1;k.H5N4A1.(C)Complex/hybrid(fucosylated andsialylated).a.H5N4A2F1;b.H6N5A2F1;c.H6N5A3F1;d.H7N6A2F1;e.H7N6A3F1 ;f.H4N3A1F1;g.H7N6A4F1;h.H5N3A1F1;i.H4N4A1F1.＊＊ p＜0.01;*p＜0.05;H:hexose;N:N-acetyl hexosamine;F:fucose;A:sialic acaid.2.2 唾液酸修饰的复杂和杂合型N-糖链分析如图1(C)所示，HepG2的25%乙腈(0.1%TFA)洗脱组分中出现21个N-糖链质谱峰，以MS/MS对其进行分析和归属.由 m/z 1930.33的二级裂解图谱［图2(B)］可见，m/z 1930.33分别与m/z 1912.42和m/z 1727.50相差18和203，推测分别断裂1分子水和1个氨基己糖残基;m/z 1912.42和m/z 1727.50分别与m/z 1709.33相差203和18，推测分别断裂1个氨基己糖残基和1分子水;与m/z 1418.50和m/z 1275.33依次相差291和162加1分子水，推测依次断裂1个唾液酸残基和1个己糖残基;m/z 1930.33与m/z 1769.42和m/z 1478.33依次相差162和291，推测依次断裂1个己糖残基和1个唾液酸残基;m/z 1478.33分别与m/z 1275.33和m/z 1316.42相差203和162，推测分别断裂1个氨基己糖残基和1个己糖残基;m/z 1275.33和m/z 1316.42分别与m/z 1113.17相差162和203，推测分别断裂1个己糖残基和1个氨基己糖残基;m/z 1113.17与m/z 910.25相差203，推测断裂1个氨基己糖残基.通过分析m/z 1930.33的二级碎片峰推测出其可能的结构.其它［M－H］－型分子离子峰糖链的MS/MS分析方法类似，L02与HepG2谱图一致，说明二者结构相似，而多电荷［M－2H］2－型分子离子峰采用MS/MS很难确定其可能的结构，因此结合GlycoWorkbench软件分析及文献［19］结果对多电荷峰进行归属，共获得10种仅唾液酸化的N-糖链，包括2种单天线、4种双天线、2种三天线及2种四天线糖链，这些糖链单糖组成的可能序列与结构归属列于表1.定量分析发现，与L02相比［图3(B)］，HepG2中10种唾液酸化的糖链在数量上都具有上调现象.t检验结果表明，HepG2中H5N4A2，H6N5A2，H7N6A2，H4N3A1，H7N6A3和H5N4A1共6种糖链与L02相比具有极显著性差异(p＜0.01)，H5N3A1具有显著性差异(p＜0.05)，其余3种不具有明显差异.具有极显著性差异的6种糖链相差倍数均大于1.5倍，各糖链相差倍数见表1.2.3 唾液酸与岩藻糖同时修饰的复杂和杂合型N-糖链分析如图1(C)所示，采用MS/MS分析，结合GlycoWorkbench软件及文献［19］结果确定了HepG2与L02中含有9种唾液酸化与岩藻糖化双修饰的N-糖链.采用2.2节方法对图2(C)进行分析，推测出m/z 1873.33的可能结构.获得的9种糖链中包括1种单天线、3种双天线、2种三天线及3种四天线糖链，这些糖链单糖组成的可能序列与结构归属列于表1.通过定量分析发现，与L02相比［图3(C)］，HepG2中H5N4A2F1和H5N3A1F1在数量上具有下调现象，其余7种具有上调现象.t检验结果表明，HepG2中H6N5A2F1，H7N6A2F1，H7N6A3F1，H7N6A4F1，H5N3A1F1和 H4N4A1F1共6种糖链与L02相比具有极显著性差异(p＜0.01)，其余3种差异不明显.具有极显著性差异的6种糖链相差倍数均大于1.5倍，其中H7N6A4F1和H5N3A1F1相差倍数大于2倍，各糖链相差倍数见表1.从2种细胞系的分析结果发现，肝细胞中大部分N-糖链发生岩藻糖或唾液酸化修饰，结合图3可知HepG2中N-糖链唾液酸化及岩藻糖化在数量上明显高于L02.这可能是因为肿瘤发展过程中肿瘤的侵袭、转移等恶性行为与其细胞表面糖链的结构变化有关，因此导致与黏性有关的高度唾液酸化现象.HepG2中岩藻糖化的N-糖链明显上升已得到证实［22］.研究［23］表明，在肿瘤中跟分支有关的GlcNAc转移酶V活性提高，这种酶主要催化1，6-连接的GlcNAc加入到典型的二天线结构上，从而导致形成的三天线结构［24］分支增多，有助于N-糖链唾液酸化的增加.在肝癌细胞系HepG2和正常肝细胞系L02中共发现26种N-糖链，其中大部分糖链经唾液酸化或岩藻糖化修饰，且HepG2与L02中有15种糖链具有极显著差异(p＜0.01)，1种糖链具有显著性差异(p＜0.05).本研究为进一步探索肝癌糖链标志物和早期诊断提供了参考.参考文献【相关文献】［1］Apweiler R.，Hermjakob H.，Sharon N.，Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-General Subjects，1999，1473(1)，4—8［2］Furukawa K.，Kobata A.，Current Opinion in Biotechnology，1992，3(5)，554—559 ［3］Ohtsubo K.，Marth J.D.，Cell，2006，126(5)，855—867［4］Parodi A.J.，Annual Review of Biochemistry，2000，69(1)，69—93［5］Helenius A.，Aebi M.，Science，2001，291(5512)，2364—2369［6］Isailovic D.，Kurulugama R.T.，Plasencia M.D.，Stokes S.T.，Kyselova Z.K.，Goldman R.，Mechref Y.，Novotny M.V.，Clemmer D.E.，J.Proteome Res.，2008，7(3)，1109—1117［7］Bai C.，Wu G.，Zhao L.，Science China Chemistry，2010，53(4)，807—811［8］Skolnick A.A.，The Journal of the American Medical Association，1996，276(18)，1458—1459［9］Marrero J.A.，Clinics in Liver Disease，2005，9(2)，235—251［10］Gupta S.，Bent S.，Kohlwes J.，Annals of Internal Medicine，2003，139(1)，46—50［11］Goldman R.，Ressom H.W.，Varghese R.S.，Goldman L.，Bascug G.，Loffredo C.A.，Abdel-Hamid M.，Gouda I.，Ezzat S.，Kyselova Z.，Mechref Y.，Novotny M.V.，Clinical Cancer Research，2009，15(5)，1808—1813［12］Xu N.S.，Yang H.M.，Cui M.，Song F.R.，Liu Z.Q.，Liu S.Y.，Chem.J.Chinese Universities，2012，33(11)，2430—2434(徐牛生，杨洪梅，崔勐，宋凤瑞，刘志强，刘淑莹.高等学校化学学报，2012，33(11)，2430—2434)［13］Orvisky E.，Drake S.K.，Martin B.M.，Abdel-Hamid M.，Ressom H.W.，Varghese R.S.，An Y.，Saha D.，Hortin G.L.，Loffredo C.A.，Goldman R.，Proteomics，2006，6(9)，2895—2902［14］Ressom H.W.，Varghese R.S.，Goldman L.，An Y.，Loffredo C.A.，Abdel-Hamid M.，Kyselova Z.，Mechref Y.，Novotny M.，Drake S.K.，Goldman R.，J.Proteome Res.，2008，7(2)，603—610［15］Shimizu Y.，Nakata.，Kuroda Y.，Tsutsumi F.，Kojima N.，Mizuochi T.，Carbohydrate Research，2001，332，381—388［16］Packer N.H.，Lawson M.A.，Jardine D.R.，Redmond J.W.，Glycoconjugate Journal，1998，15(8)，737—747［17］de Leoz M.L.A.，An H.J.，Kronewitter S.，Kim J.，Beecroft S.，Vinall R.，Lebrilla C.，Disease Markers，2008，25(4)，243—258［18］Hua S.，Williams C.C.，Dimapasoc L.M.，Ro G.S.，Ozcan S.，Miyamoto S.，Lebrilla C.B.，An H.J.，Leiserowitz G.S.，J.Chromatogr.A，2013，1279，58—67［29］Kudo T.，Nakagawa H.，Takahashi M.，Hamaguchi J.，Kamiyama N.，Yokoo H.，Nakanishi K.，Nakagawa T.，Kamiyama T.，Deguchi K.，Nishimura S.I.，Todo S.，Molecular Cancer，2007，6(1)，32［20］Amano M.，Yamaguchi M.，Takegawa Y.，Yamashita T.，Terashima M.，Furukawa J.，Miura Y.，Shinohara Y.，Iwasaki N.，Minami A.，Nishimura S.I.，Molecular ＆ Cellular Proteomics，2010，9(3)，523—537［21］ Wang C.，Fan W.，Zhang P.，Wang Z.，Huang L.，Proteomics，2011，11(21)，4229—4242［22］ Nakagawa T.，Moriwaki K.，Terao N.，Nakagawa T.，Miyamoto Y.，Kamada Y.，Miyoshi E.，J.Proteome Res.，2012，11(5)，2798—2806［23］Dennis J.W.，Granovsky M.，Warren C.E.，Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-General Subjects，1999，1473(1):21—34［24］Taylor M.E.，Drickamer K.;Translated by Ma Y.J.，Introduction to Glycobiology，Chemical Industry Press，Beijing，2006，193—195(Taylor M.E.，Drickamer K.，马毓甲［译］.糖生物学导论，北京:化学工业出版社，2006，193—195)。