流动相溶剂的处理
流动相使用注意事项
关于高效液相色谱的流动相使用的注意事项高效液相色谱的流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
它是影响分离的一个非常重要因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择1.所选用的流动相溶剂要有一定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2.溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸收的流动相。
3.在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
4.溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5.从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
二、流动相溶剂使用的注意事项1.流动相溶剂应选择HPLC的溶剂或依此为标准的溶剂。
流动相使用前用0.45μm 滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。
在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。
为此，建议常用0.45μm滤膜过滤。
流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。
2.流动相恢复到室温后使用。
流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。
水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。
3.做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。
使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。
4.流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的5.用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置过夜或更长时间。
高效液相色谱流动相
高效液相色谱流动相高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。
2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。
3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。
4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。
液相色谱流动相溶剂的选择步骤选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。
2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。
在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。
在液相色谱常用混合溶剂作流动相。
混合溶剂的P'具有加和性: P'ab= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。
hplc流动相溶剂脱气的方法
HPLC流动相溶剂脱气的方法1. 介绍在高效液相色谱（HPLC）中，流动相溶剂的纯净度对于分析结果的准确性至关重要。
其中，流动相溶剂通常包含有机溶剂和水。
然而，这些溶剂中常常存在氧气和其他气体，这些气体会对色谱柱和检测器产生负面影响，因此需要对流动相溶剂进行脱气处理。
本文将介绍HPLC流动相溶剂脱气的方法。
2. 脱气方法2.1 示性图下图为HPLC流动相溶剂脱气系统的示意图：氮气气瓶|V减压阀|V溶剂进样口|V注射器|V枪型过滤器|V色谱柱|V检测器2.2 脱气装置为了脱气流动相溶剂，通常需要使用氮气或惰性气体来替代氧气。
下面是一种常见的脱气装置：1.准备氮气气瓶和减压阀，并将其连接到溶剂进样口。
2.使用注射器将溶剂注入枪型过滤器。
3.安装枪型过滤器，并将其连接到色谱柱。
4.将色谱柱连接到检测器。
2.3 脱气步骤下面是HPLC流动相溶剂脱气的详细步骤：1.打开氮气气瓶并调节减压阀，将气体压力调整到适当的水平，以避免对系统造成损坏。
2.将溶剂进样口连接到减压阀，确保连接紧密，并确保气体只进入溶剂中，而不进入系统中。
3.打开溶剂进样口，将溶剂注入注射器中。
4.检查注射器和枪型过滤器之间的连接是否密封，确保气体不会泄漏进入系统。
5.将注射器连接到枪型过滤器，并确保连接紧密。
6.打开枪型过滤器，让溶剂缓慢通过过滤器，使其中的气体尽可能被氮气替代。
7.检查色谱柱的连接是否密封，确保气体不会泄漏进入系统。
8.将色谱柱连接到枪型过滤器，并确保连接紧密。
9.打开检测器，确保气体不会泄漏进入系统。
3. 注意事项在进行HPLC流动相溶剂脱气过程中，需要注意以下事项：1.使用合适的脱气装置和减压阀，确保气体能够顺利流动而不会造成系统损坏。
2.检查连接部分的密封性，确保气体不会泄漏进入系统。
3.控制气体压力，并根据具体实验要求进行调整。
4.注意个人安全，避免氮气泄漏引起的伤害。
5.定期检查脱气装置的性能，并进行维护和更换。
高效液相色谱法知识汇总大全集.总结
高效液相色谱法知识汇总大全集（最新最值得收藏的资料整理）HPLC应用一、样品测定1．流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。
所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。
弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。
2．样品配制：①溶剂；②容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样品液中造成污染，而且还会吸留某些药物，引起分析误差。
某些药物特别是碱性药物会被玻璃容器表面吸附，影响样品中药物的定量回收，因此必要时应将玻璃容器进行硅烷化处理。
3．记录时间：第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各进一针，并尽量收集较长时间的图谱（如30分钟以上），以便确定样品中被分析组分峰的位置、分离度、理论板数及是否还有杂质峰在较长时间内才洗脱出来，确定是否会影响主峰的测定。
4．进样量：药品标准中常标明注入10ml，而目前多数HPLC系统采用定量环（10ml、20ml 和50ml），因此应注意进样量是否一致。
（可改变样液浓度）5．计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。
6．仪器的使用：①流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤维。
有请重新滤过。
②柱在线时，增加流速应以0.1ml/min的增量逐步进行，一般不超过1ml/min，反之亦然。
否则会使柱床下塌，叉峰。
柱不线时，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率递增上去（或下来），勿急升（降），以免泵损坏。
③安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙。
④样品液请注意滤过（注射液可不需滤过）后进样，注意样品溶剂的挥发性。
⑤测定完毕请用水冲柱1小时，甲醇30分钟。
如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）冲洗过夜（注意水要够量），不须冲洗甲醇。
hplc流动相溶剂脱气的方法
HPLC流动相溶剂脱气的方法1. 简介高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
在HPLC分析中，流动相溶剂的质量对分离和检测结果至关重要。
其中，脱气是保证流动相溶剂质量的重要步骤之一。
本文将介绍HPLC流动相溶剂脱气的方法。
2. 脱气的目的在HPLC分析中，流动相溶剂中存在的气体会影响系统压力稳定性、检测灵敏度和色谱峰形。
脱气是为了去除流动相溶剂中的气体，提高系统稳定性和分析结果准确性。
3. 常用的脱气方法3.1 蒸发法蒸发法是一种简单而常见的脱气方法。
将流动相溶剂倒入一个宽口烧瓶或容器中，通过长时间搅拌或加热来加速气体从液体中脱出。
这种方法对于一些易挥发的有机溶剂比较有效，但对于一些挥发性较低的溶剂效果可能不理想。
3.2 气泡法气泡法是一种常用的脱气方法，适用于一些不易挥发的溶剂。
将流动相溶剂倒入一个容器中，通过在溶剂中通入惰性气体（如氮气）来形成气泡，从而促使气体从液体中逸出。
这种方法可以提高脱气效果，并且可以避免在蒸发过程中损失挥发性较高的溶剂。
3.3 超声波法超声波法利用超声波的能量来加速流动相溶剂中的气体脱出。
将流动相溶剂置于超声波清洗器中，通过超声波振荡使气体从液体中析出。
这种方法对于一些难以脱除的微小气泡效果较好，并且操作简便、快速。
3.4 膜分离法膜分离法利用特殊材料的半透膜来去除流动相溶剂中的气体。
将流动相溶剂通过装有膜的设备，气体通过膜的选择性渗透性而从溶剂中分离出去。
这种方法能够高效去除气体，并且可以连续操作。
3.5 氮吹法氮吹法是一种常用的脱气方法，适用于一些易挥发的溶剂。
将流动相溶剂倒入一个容器中，通过在溶剂表面通入惰性气体（如氮气）来形成液面搅动，并加速溶剂中的气体从液体中脱出。
这种方法操作简便，能够快速有效地去除气体。
4. 脱气设备和注意事项4.1 脱气设备•烧瓶或容器：用于装载流动相溶剂，并进行脱气处理。
•搅拌器或加热器：用于加速气体从液体中析出。
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理 液相色谱操作规程
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理液相色谱操作规程液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
2. 流动相：1）在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相确定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避开细菌产生。
2）流动相使用前需用微孔滤膜过滤,除去流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避开溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更简单平衡）。
3）流动相需脱气后使用，可避开因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
假如测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区分，应当使用过度分布的形式进行平衡。
避开由于流动相的蓦地变化造成柱压加添过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
4）流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水*好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
5）以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
高效液相色谱仪使用注意事项
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
高效液相色谱法流动相的注意事项
高效液相色谱法流动相的注意事项高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。
在进行HPLC分析时，流动相的选择和使用是非常重要的。
下面将详细介绍关于HPLC流动相的注意事项。
1.流动相的选择：在选择流动相时，要考虑所分离的样品的性质，包括其溶解性、极性、酸碱性等。
一般情况下，流动相可以是纯溶剂或溶剂混合物，其中溶剂混合物可以根据需要进行优化。
常见的HPLC流动相溶剂包括水、有机溶剂（如甲醇、乙腈、二氯甲烷等）以及酸、碱溶液。
2.流动相的pH值调节：流动相的pH值对于样品的分离和检测具有重要影响。
在某些情况下，需要调节流动相的pH值以改变样品的离子状态或结构。
这可以通过加入缓冲剂来实现，一般情况下，可以根据样品的性质选择合适的缓冲剂。
3.流速的控制：流速的选择应根据需要平衡分离效果和分析时间。
流速过快可能导致峰形变宽、分离不理想，而流速过慢则会延长分析时间。
因此，需要根据样品的性质和分离要求合理选择流速，并在实验过程中进行优化。
4.流动相的净化和除气：使用之前，流动相需要经过净化处理以去除悬浮物和杂质。
此外，流动相中的气泡也会对分离效果产生干扰，因此需要除去气泡。
可以通过超声波处理、真空处理或使用气体瓶来除去气泡。
5.流动相的稳定性：流动相的稳定性对于HPLC分析至关重要。
在实验过程中，需要定期检查流动相的配制是否正确，是否出现沉淀、杂质等问题。
另外，一些样品可能会与流动相产生反应或降解，导致流动相的不稳定，需及时调整。
6.流动相的储存和保养：为了确保流动相的质量和稳定性，需要正确储存和保养。
一般情况下，流动相应避光保存，并在使用前用滤膜过滤以去除杂质。
当流动相已经使用一段时间后，可能会积聚杂质或可溶性样品残留，此时需要更换或清洗柱和系统以保持分析结果的准确性。
7.设备和仪器的选择和检查：在进行HPLC分析时，需要选择适当的设备和仪器，并定期检查和维护。
液相色谱仪流动相的选择与优化 液相色谱操作规程
液相色谱仪流动相的选择与优化液相色谱操作规程液相色谱是目前应用多的色谱分析方法，液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器构成，其整体构成仿佛于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。
液相色谱的流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
它是影响分别的一个特别紧要因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的紧要工作。
选择方法1、由强到弱：一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试验，这样可以很快地得到分别结果，然后依据出峰情况调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。
2、三倍规定：每削减10%的有机溶剂（甲醇或乙腈）的量，保留因子约加添3倍，此为三倍规定。
这是一个聪慧而又省力的方法。
调整的过程中，注意察看各个峰的分别情况。
3、粗调转微调：当分别达到确定程度，应将有机溶剂10%的更改量调整为5%，并据此规定渐渐降低调整率，直至各组分的分别情况不再更改。
脱气方法1、吹氦脱气法利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60mL/min流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排出溶解的空气，能排出接近80%的氧气。
接受一个分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排出。
这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。
这种脱气方法虽然好，但氦气价格较高，很少使用。
2、加热回流法此法的脱气效果较好。
在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。
3、抽真空脱气法此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa，即可除去溶解的气体。
但是由于真空脱气会使混合溶剂构成发生变化，从而影响到试验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。
4、超声波脱气法将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中，用超声波震荡10～20min。
此法的脱气效果差。
5、在线脱气法HPLC仪器均可配置专门的在线脱气机。
流动相溶剂使用的注意事项
流动相溶剂使用的注意事项流动相溶剂使用的注意事项其实挺有意思的。
我们在实验室里，常常像“开了天窗的猴子”一样忙忙碌碌，真是让人眼花缭乱。
说到流动相溶剂，这玩意儿可不能随便用，搞不好就可能“翻车”。
大家都知道，溶剂在分离和分析过程中扮演着重要角色，有些小细节可不能忽视。
比如，选择溶剂的时候，得考虑到溶质的极性和分子大小。
想想，像吃糖果一样，酸的、甜的、苦的，口感完全不一样，不是嘛？用错了，分离效果可能就像“马失前蹄”，白忙活一场。
溶剂的纯度也得好好把控，千万别用那些劣质的，真是“让人心痛”。
想象一下，辛辛苦苦跑的实验，结果一打开，满是杂质，那可真是“心有不甘”。
大家一定要记住，最好选择那些高纯度的溶剂，像是高大上的“名牌”，用起来才能放心。
实验室里可不缺那些小瓶子，见到标签上的纯度标识，别怠慢，要仔细查阅哦！想象一下，喝水还得挑过滤的呢，更何况是实验用的溶剂！然后就是，流动相的配比也是个技术活，别小看这一步，搞不好就会让你“夜长梦多”。
如果用的比例不对，分离效果就会大打折扣，分子的“亲密关系”都得重新调整。
试着调配的时候，得小心翼翼，像在调配一杯鸡尾酒，少了什么成分，味道全变了。
这时候，实验室的天平就像是你的好朋友，记得用得当。
比例一旦弄错，可能就会把你送上“黑名单”，分离结果让人失望。
流动相的温度也是个“门道”。
有些实验需要在特定的温度下进行，温度稍微不对，实验结果就像“过期的牛奶”，完全不靠谱。
注意保持实验室的温度稳定，别让外界因素来捣乱，影响了你的实验。
像在泡茶一样，温度要控制好，才能泡出好茶，实验也一样。
大家可千万别以为随便一搞就行，差之毫厘，谬以千里。
操作的时候，安全问题也得时刻放在心上。
溶剂有些可是“小心火烛”，挥发性强的可不能大意，最好别在实验室里抽烟，不然真是“自寻死路”。
想想那些实验室事故，都是因为小细节没有注意。
穿好防护服、戴好手套，像个超级英雄一样，才能保护好自己。
咱们的实验，安全第一，才能让我们安心“做实验”。
简述液相色谱实验中,流动相配制流程
简述液相色谱实验中,流动相配制流程
液相色谱实验中，实验人员需要根据样品的特性和实验要求选择合适的流动相，并进行配制。
一般来说，液相色谱的流动相主要由有机溶剂和水组成，需要按照一定比例混合配制。
具体的流动相配制流程如下：
1. 根据实验要求选择合适的有机溶剂和水。
有机溶剂的选择需要考虑其极性、挥发性、毒性等因素。
2. 按照一定比例混合有机溶剂和水。
比例的确定需要根据具体的实验要求和样品特性进行优化。
3. 将混合后的溶液倒入流动相瓶中，并使用磁力搅拌器加热搅拌，使其充分混合均匀。
4. 注射样品前，需要先用流动相进行柱平衡，使其达到平衡状态，并调整流速和流量，以保证实验的准确性和重复性。
5. 实验后，对流动相进行回收处理。
可以通过滴漏法或者使用旋转蒸发器等设备将流动相回收，以减少废液处理量。
总之，流动相配制是液相色谱实验中非常重要的一个环节，其质量和比例的合理性对实验结果产生着不可忽视的影响。
流动相处理技术
流动相处理技术(1)溶剂的纯化分析纯和优级纯溶剂在无数状况下可以满足色谱分析的要求，但不同的色谱柱和检测办法对溶剂的要求不同，如用紫外检测器检测时溶剂中就不能含有在检测波长下有汲取的杂质。
除专供色谱分析用的“色谱纯”溶剂外，溶剂在用法前，最好要举行除去紫外杂质、脱水、重蒸等纯化操作。
乙腈是常用的溶剂，分析纯乙腈中常含有少量的丙酮、丙烯腈、丙烯醇和嗯唑等化合物，产生较大的背景汲取。
可以采纳活性炭或酸性氧化铝吸附纯化，也可采纳高锰酸钾／氢氧化钠氧化裂解与甲醇共沸的办法举行纯化。
四氢呋喃中的抗氧化剂BHT可以通过蒸馏除去。
四氢呋喃在用法前应蒸馏，长时光放置又会被氧化，因此最好在用法前先检查有无过氧化物。
办法是取10m[。
四氢呋喃和1mL 新配制的10％碘化钾溶液，混合hlllln后，不浮现黄色即可用法。
与水不混溶的溶剂(如三氯甲烷)中的微量极性杂质(如乙醇)、卤代烃中的HCl杂质可以用水萃取除去，然后再用无水硫酸钙干燥。
正相色谱中用法的亲油性有机溶剂通常都含有50～2000pg／ml的水。
水是极性最强的溶剂，特殊是对吸附色谱来说，使很微量的水也会因其剧烈的吸附而占据固定相中无数吸附活性点，致使固定相性能下降。
通常可用分子筛床干燥除去微量水。
卤代溶剂与干燥的饱和烃混合后性质比较稳定，但卤代溶剂(三氯甲烷、．四氯化碳)与醚类溶剂(乙醚，四氢呋喃)混合后发生化学反应，生成的产物对不锈钢有腐蚀作用，有的卤代溶剂(如二氯甲烷)与一些反应活性较强的溶剂(如乙睛)混合放置后会析出结晶。
因此，应尽可能避开用法卤代溶剂或现配现用。
(2)流淌相的脱气流淌相中往往因溶解有氧气或混入空气而形成气泡，气泡进火检测器后会引起检测信号的骤然变幻，在色谱图上浮现尖锐的噪音峰。
小气泡渐渐聚拢后会变成大气泡，大气泡进人流路或色谱柱中会使流淌相的流速变慢或不稳定，致使基线起伏。
溶解氧常和一些溶剂结合生成有紫外汲取的化合物，在荧光检测中，溶解氧还会使荧光淬灭。
流动相溶剂的处理
4、要防止色谱柱被振动或撞击，否 则柱内填料床层产生裂缝和空隙，会使 色谱峰出现“驼峰”或“对峰”。 5、要防止流动相逆向流动，否则将 使固定相层位移，柱效下降。
可能提高柱效的方法
1、除去柱上端固定相变色部分 (约 3mm左右)，再补充新的固定相。 2、色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效 将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。 3 、采用梯度洗脱时，柱在重复使用前， 用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子， 以重新建立起始的平衡来得到再生。
(3)溶剂的过滤和脱气
流动相溶剂在使用前必须先用 0.45ym孔径的滤膜过滤，以除去微小颗 粒，防止色谱柱堵塞。同时要进行脱气 处理，因为溶解在溶剂中的气体会在管 道、输液泵或检测池中以气泡形式逸出， 影响正常操作的进行。
样品处理技术
在某些试样中，常含有多量的蛋白质、 脂肪及糖类等物质。它们的存在，将影响组 分的分离测定，同时容易堵塞和污染色谱柱， 使柱效降低，所以常需对试样预处理。
水最大甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油最小选择流动相时应注意的几个问题1尽量使用高纯度试剂作流动相防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加
High Performance Liquid Chromatograph • • • • 理解HPLC的类型与模式的选择 理解HPLC主要部件的结构 掌握HPLC实验技术 掌握常用HPLC的使用及维护
样品的预处理方法：溶剂萃取、吸附、超速 离心及超过滤等。
1．溶剂萃取
溶剂萃取适用于待测组件为非极性物质。 在试样中加入缓冲溶液调节pH，然后用乙 醚或氯仿萃取待测组分。但如果待测组分 和蛋白质结合，在大多数情况下；难以用 萃取操作来进行分离。 2．吸附 将吸附剂直接加到试样中，或将吸附剂填充 于柱内进行吸附。亲水性物质用硅胶吸附， 而疏水性物质可用聚苯乙烯—二乙烯基苯等 类树脂吸附。
hplc流动相处理
hplc流动相处理HPLC流动相处理引言：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于生物、化学、医药等领域的分析技术。
在HPLC分析中，流动相是一个重要的组成部分，其质量和处理方式对分析结果有着重要影响。
本文将介绍HPLC流动相的处理方法和常见问题。
一、HPLC流动相的组成HPLC流动相一般由溶剂和添加剂组成。
溶剂的选择应根据待分析物的特性和分析目的来确定。
常用的溶剂包括水、乙腈、甲醇等。
添加剂的作用主要是改善色谱分离的效果，如调节溶剂极性、提高灵敏度等。
常用的添加剂有酸性缓冲液、有机酸、盐类等。
二、HPLC流动相的处理方法1. 净化流动相在使用前，应对流动相进行净化处理，以去除其中的杂质和气泡。
一般可通过过滤或超声波处理来实现净化。
过滤可以去除较大的杂质颗粒，而超声波处理则可以去除微小的气泡。
2. 调节流动相的pH值流动相的pH值是影响色谱分离的重要参数。
在某些情况下，调节流动相的pH值可以改善分离效果。
例如，对于离子化合物的分析，调节流动相的pH值可以改变其电荷状态，从而影响其在色谱柱上的保留时间和分离度。
3. 优化流动相的组成流动相的组成对分离效果也有很大的影响。
在实际应用中，可以通过改变溶剂的比例、添加剂的浓度等来优化流动相的组成。
例如，增加有机溶剂的含量可以提高溶剂的极性，从而改善某些极性化合物的分离效果。
4. 消除气泡气泡会影响流动相的均匀性和稳定性，从而影响色谱分离的准确性和重复性。
为了消除气泡，可以采用以下方法：（1）使用真空除泡器：将流动相通过真空除泡器，以去除其中的气泡。
（2）超声波处理：将流动相置于超声波清洗器中，应用超声波能量将气泡破坏。
三、常见的HPLC流动相问题及处理方法1. 流动相的波动流动相的波动会导致色谱峰形不对称，影响分析结果的准确性。
可能的原因包括流动相泵的压力不稳定、流动相槽内的气泡等。
液相色谱之流动相的存贮与冲洗
液相色谱之流动相的存贮与冲洗流动相的存储1、定期更换流动相，避光首选棕色瓶流动相与仪器的管线和色谱柱直接接触，保持流动相处于良好的状态，有利于保持仪器和色谱柱的良好性能。
2、流动相变质对液相色谱分析的影响影响流动相变质的因素主要来自光照、温度和氧化，水、缓冲盐和大部分有机相随着时间的推移都会变质，只要组成流动相的成分发生了变化，流动相的极性就发生了变化，从而导致保留时间漂移、重现性差。
3、缓冲盐的存放与更换不少用户都很关心如何保存缓冲盐，如何延缓缓冲盐变质的过程，延长使用时间？这就需要尽量来选择棕色瓶来减少光照的影响，比如缓冲盐配多了，多配的缓冲盐要密封保存并放入冰箱冷藏，减少温度带来的影响。
如果保存得好，处于冷藏的环境下缓冲盐能保存大约一周的时间，如果保存的不好，带来的影响甚至是不可逆的，尤其是对色谱柱的影响。
所以如果配缓冲盐不是很复杂，最稳妥的方法是现用现配。
4、水应何时更换如果同一个方法中的有机相受光照的影响比较小，可用棕色瓶放水，以此减少光照的影响，建议每天都换水，至少两天换一次，比起水变质对系统和色谱柱的影响来看，还是经常换水来得更方便。
注意：若仪器长时间不开机，放水的瓶子或者管线里同样会滋生微生物，所以一定要记得要把溶剂瓶里的水换成有机相，然后开机把管线里的水置换掉。
5、有机溶剂的稳定性一部分常用的有机溶剂的稳定性很差，比如像四氢呋喃、氯仿和二氯甲烷等氯代溶剂，对于这种稳定性差的溶剂建议大家购买小体积包装的有机溶剂。
注意：（1）每次取完溶剂之后，要小心把瓶盖拧紧来减少氧气的影响；（2）对于乙腈这样比较稳定的有机溶剂，若长时间不使用仪器，要避免纯的乙腈充满整个液相系统，防止乙腈产生的聚合物对仪器有所影响。
流动相的冲洗1、冲洗系统细节多，尤其注意缓冲盐在开始实验之前，我们需要冲洗并稳定系统，在实验结束之后，我们也需要使用适当的溶剂冲洗并保护系统。
2、置换系统流动相需要冲洗多长时间其实我们很难用时间准确的说明这个问题，因为冲洗时间会受流速和柱体积的影响。
液相流动相的使用注意事项汇总
液相流动相的使用注意事项汇总流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制，选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别，会影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
01选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
高效液相色谱流动相的配置及流动相瓶的清洗
加盐流动相做完实验冲洗步骤：
先用50%纯水和50%有机相冲洗，然后逐渐将有机相将低到10%甚至5%，最后用100%有机相冲洗封柱，整个过程1h以上。
若是冲洗一晚上，则用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速冲洗。
10%异丙醇在线冲洗密封垫：
10%异丙醇需定期更换，流动相不加盐时，周期可以设置1min，冲洗0.2min；流动相加盐时，周期设置1min，冲洗0.5min，最大为0.7min（长期处于最大值会导致蠕动泵磨损）。
流动相更换：
流动相瓶必须清洗干净，含水流动相需定期更换避免长菌，纯水2天换一次，进样前和实验过程中需不定时观察流动相有无沉淀。
进样瓶：
尽可能不用内衬管，样品需定期更换，以免产生沉淀。
不定时观察进样小瓶，看有无悬浮物或固体颗粒（垫片脱落等）。
流动相瓶清洗：
先用酸液浸泡，然后用大量的自来水冲洗，接着用蒸馏水涮3次以上，最后一次用哇哈哈水润洗。
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4、要防止色谱柱被振动或撞击，否 则柱内填料床层产生裂缝和空隙，会使 色谱峰出现“驼峰”或“对峰”。 5、要防止流动相逆向流动，否则将 使固定相层位移，柱效下降。
可能提高柱效的方法
1、除去柱上端固定相变色部分 (约 3mm左右)，再补充新的固定相。 2、色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效 将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。 3 、采用梯度洗脱时，柱在重复使用前， 用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子， 以重新建立起始的平衡来得到再生。
(3)溶剂的过滤和脱气
流动相溶剂在使用前必须先用 0.45ym孔径的滤膜过滤，以除去微小颗 粒，防止色谱柱堵塞。同时要进行脱气 处理，因为溶解在溶剂中的气体会在管 道、输液泵或检测池中以气泡形式逸出， 影响正常操作的进行。
样品处理技术
在某些试样中，常含有多量的蛋白质、 脂肪及糖类等物质。它们的存在，将影响组 分的分离测定，同时容易堵塞和污染色谱柱， 使柱效降低，所以常需对试样预处理。
实验前准备工作
1．流动相溶剂的处理 2．试样溶液的制备
流动相溶剂的处理
(1)水 将一般的蒸馏水，加入少许高锰酸 钾，在pH9—10的条件蒸馏，可用于常 规洗脱。
用于梯度洗脱的水，应进行二次 蒸馏。
(2)有机溶剂的提纯 ◆用蒸馏法可除掉大部分有紫外吸收的杂质。 ◆氧化铝或硅胶柱可除去溶剂中的极性化合物。 ◆氯仿中（少量甲醇）先水洗，再蒸馏。 ◆四氢呋喃（抗氧剂丁基甲苯酚）而强烈吸收紫 外线，可蒸馏。 为了防止爆炸，蒸馏终止时，在蒸馏瓶中必 须剩余一定量的液体。
选择流动相时应注意的几个问题
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏 柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定 相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉 淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外 检测器时，流动相不应有紫外吸收。
HPLC用水可以通过以下几个方 面来得到：
• • • • • • 1 2 3 4 5 6 专门的纯水机或超纯水机； 去离子水重蒸； 二次或三次重蒸水； 采用类似家用的纯水机； 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； 其它途径；
HPLC六通阀进样器的使用及保 养
•
六通阀进样器是高效液相色谱系 统中最理想的进样器，它是由圆形密 封垫(转子)和固定底座(定子)组成。 美国Rheodyne公司的六通阀进样器最 为通用，各大HPLC仪器制造商均以此 产品作为仪器的进样器。
•
不管采用何种途径，配制流动相应用 新鲜水，水质越高放置时间越短。 • 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水， 并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机 物、无机离子及空气等。
பைடு நூலகம்速的选取
使用与维护
1、对硅胶基键合相填科，水溶液流动 相的pH值不得超出2—8.5的范围，温度 不宜过高。 2、柱子在酸性或碱性条件下使用之后， 应依次用水、甲醇清洗. 3、对暂时不用而需要较长时间保存的 柱子，要用纯甲醇清洗，柱子两端用金 属螺帽封闭，保存于干净的有机溶剂中。
凝胶色谱分离模型
分离类型选择
影响液相色谱分离的因素
液体的扩散系数仅为气体的万 分之一，则高效液相色谱速率 方程中的分子扩散项 B/U 较小 ，可以忽略不计，即： H=A+Cu
H-u曲线 •淋洗液黏度、极性、组成、流速、洗脱方式 •固定相粒度、性质 •柱温
液相色谱的流动相
1. 流动相特性
（ 1）流动相（淋洗液，洗脱剂）：组成改变，极性改变 ，可显著改变组分分离状况；
（ 2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极
性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。
（ 3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液
液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上 的出峰顺序相反。
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性；
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学 习 目 标
化学键合固定相的特点
（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱；
按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。
常用溶剂 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 正相液-液分配分离：先选中等极性溶剂，若组分的保留时 间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳> 环己烷>己烷>煤油(最小)
3．除蛋白质 向试样中加入三氯醋酸或丙酮、乙腈、甲 醇，蛋白质被沉淀下来，然后经超速离心， 吸取上层清液供分离测定用。 4．超过滤 用孔径为l0×10-10一500×l0-10m的多孔膜过 滤，可除去蛋白质等高分子物质。
•HPLC的环境设置：
HPLC的日常操作条件：温度：10～30℃； 相对湿度<80％； 最好是恒温、恒湿， 远离高电磁干扰、高振动设备，有良好 的通风设施。
样品的预处理方法：溶剂萃取、吸附、超速 离心及超过滤等。
1．溶剂萃取
溶剂萃取适用于待测组件为非极性物质。 在试样中加入缓冲溶液调节pH，然后用乙 醚或氯仿萃取待测组分。但如果待测组分 和蛋白质结合，在大多数情况下；难以用 萃取操作来进行分离。 2．吸附 将吸附剂直接加到试样中，或将吸附剂填充 于柱内进行吸附。亲水性物质用硅胶吸附， 而疏水性物质可用聚苯乙烯—二乙烯基苯等 类树脂吸附。