人肝癌细胞系HLE 细胞表面抗原多肽的纳升电喷雾串联质谱从头测序分析
液相色谱—质谱联用的原理及应用
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质量色谱图
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总离子流图
准分子离子:
指与分子存在简单关系的离子，通过它可 以确定分子量.液质中最常见的准分子离子 峰是[M+H]+ 或[M-H]- .
灵敏度：通常认为电喷雾有利于分析极性大的小 分子和生物大分子及其它分子量大的化合物，而 APCI更适合于分析极性较小的化合物。
多电荷：APCI源不能生成一系列多电荷离子
NanoSpray 离子源
专门设计的 NanoSpray 离子源特别适合于做 微量的生化样品，其流速范围可从 5nL／min 到luL／min。一滴样品就可做数小时的分析。 可在最小的样品消耗量下获得最大灵敏度。灵 敏度可高达fmole。并可直接与微孔HPLC联用。
进样系统 离子源 质量分析器 检测接收器
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真空系统
真空系统
质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在 高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免 发生不必要的离子-分子反应。所以质谱反应属 于单分子分解反应。利用这个特点，我们用液 质联用的软电离方式可以得到化合物的准分子 离子，从而得到分子量。
电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离 子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定 的极性化合物；其易形成多电荷离子的特性可分析 蛋白质和DNA等生物大分子；通过调节离子源电压 控制离子的碎裂（源内CID）测定化合物结构。
超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中精氨酸及衍生物含量
超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中精氨酸及衍生物含量田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【摘要】建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定使用艾普拉唑后人血浆中二甲基精氨酸(ADMA)、对称二甲基精氨酸(SDMA)、单甲基精氨酸(NMMA)、瓜氨酸(Cit)和L-精氨酸(L-Arg)的浓度.采用HILIC亲水相互作用色谱和非衍生化的蛋白沉淀法进行分离分析,色谱柱选取Waters Atlantic HILIC柱(2.1 mm×50 mm×3μm),流动相由乙腈(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)-水(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)(85:15,v/V)组成,流速0.25 mL/min.采用多反应离子监测(MRM)模式,以电喷雾离子源(ESI)正离子方式检测.结果显示,ADMA、SDMA、NMMA、L-Arg和Cit的线性关系良好,相关系数r均大于0.994 0;ADMA、SDMA和NMMA的线性范围为0.1～5 mmol/L,L-Arg和Cit的线性范围为10～250 mmol/L;5种氨基酸的日内、日间精密度均小于15％,准确度在85％～115％之间.该方法快速、简便、灵敏,可为相关疾病的临床诊断提供一种高效的检测手段.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】7页(P446-452)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS);艾普拉唑;蛋白沉淀法;亲水性色谱【作者】田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【作者单位】福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730【正文语种】中文【中图分类】O657.63一氧化氮是人体重要的信使分子，L-精氨酸(L-Arg)在一氧化氮全酶(NOS)的催化下，产生一氧化氮(NO)和瓜氨酸(Cit)[1-2]。
一个新的MAGE21 表位为肝癌细胞表面HLA2B7 分子递呈①
一个新的MAGE21表位为肝癌细胞表面H LA2B7分子递呈①郭爱林 隋延仿 叶 菁 曲 萍 张晓楠 张立红 张 敏② 卢兴森②(中国人民解放军第四军医大学病理教研室,西安710032) 中国图书分类号 R73013 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2001)0520252204摘 要 目的:肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础,机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽,为肝癌免疫治疗奠定基础。
方法:对于肝癌细胞系HHCC(H LA2A2,A29,B7,B51),应用细胞膜酸洗技术使抗原肽从细胞膜表面脱落,经过凝胶层析,反相高效液相色谱层析得到不同组份多肽,高效液相色谱2质谱仪联用技术获得抗原肽的一级结构,通过氨基酸锚定位点分析,预测其H LA配体类型;互联网上氨基酸同源性分析确定其同源性序列;人工合成抗原肽,H LA同型树突状细胞递呈合成抗原肽刺激特异性CT L反应,51Cr杀伤实验检测CT L对肿瘤细胞系的杀伤作用。
结果:经过反相高效液相色谱层析后可以获得10多个组份,其中一个组份经过液质联用鉴定和氨基酸同源性分析确定其序列为EPVTK AE M L,是黑色素瘤抗原21,M AGE21(1212129)表位,由H LA2B7分子递呈,体外诱导实验表明其可以诱导出较强的CT L反应。
结论:液质联用技术是寻找抗原肽的有效方法,M AGE21抗原肽EPVTK AE M L对于H LA2B7阳性及M AGE21阳性的肝癌患者具有潜在的免疫治疗作用。
关键词 肝癌 H LA2B7 液质联用技术 黑色素瘤特异性抗原1 抗原肽A ne w MAGE21epitope naturally processed and presented by H LA2B7on human hepatocellular carcinomasG UO Ai2Lin,SUI Yan2Fang,YE Jing et al.Department o f pathology,fourth military medical univer sity,Xi’an710032Abstract Objective:The current approach to immunotherapy is mainly reliant on the role of T lymphocyte and tum or antigen recognized by T lymphocyte.T o broaden the clinical applicability of peptide2based immunotherapy in human hepatocellular carcinomas,there is a need to is olate and identify tum or antigen peptides bound to H LA class I m olecules on the human hepatocellular carcinomas.Methods:The prime struc2 ture characterization of H LA binding peptide by a human hepatocellular carcinoma cell line with a H LA2A2,A29,B7,B51was performed.Ex2 tract of MHC2ass ociated peptides by mild acid wash of viable hepatocellular carcinomas cells,and collected by gel filtration,then,fractionated by reversed phase high pressured liquid chromatography(RP2HP LC).HP LC2fractionated samples were sequenced and identified by HP LC2MS2 MS(tandom mass spectrometry).Protein database in the internet were used as additional tools for structure analysis and for determination of the protein s ource of the eluted peptides,potential peptide binding H LA alleles had been identified using a computer program by comparing anchor amino acid residues.Allolog ous dendritic cells(DCs)having the same H LA alleles pulsed the synthetic peptide,P BMCs were stimulated by peptide2pulsed autolog ous DCs.The specific cytotoxicity against the hepatocellular carcinoma cell line were determined by51Cr release assay. R esults:RP2HP LC showed that there were teens different fractions of peptides derived from HHCC human hepatocellular carcinoma cell line, HP LC2ESI2MS2MS showed the amino acid sequence of the fractions.One of the m ost promising candidates for T cell epitope is nonamers peptide EPVTK AME L,derived from M AGE11212129,had the H LA2B7peptide binding m otify.P BMC cocultured with the peptide2pulsed DCs could induce the relevant peptide specific CT Ls,m oreover,they showed specific cytotoxicity against HHCC cell line.Conclusion:Sensitive sequencing by HP LC2MS may provide a powerful method of identifying tum or specific antigenic peptides,nonamers peptide EPVTK AE M L,can be used for hep2 atocellular carcinoma vaccine strategies with con fidence that it is identical to the naturally processed peptide epitopes presented at the surface of hepatoma cells in ass ociation with H LA2B7m olecules.K ey w ords Hepatocellular Carcinoma H LA2B7 HP LC2MS M AGE21antigenic peptide①本课题受国家自然科学重点课题基金资助(课题号39830420)②西安近代化学研究所,西安710032作者简介:郭爱林,男,30岁,博士,主要从事肿瘤免疫学研究;隋延仿,男,博士生导师,主要从事肿瘤免疫分子病理学研究。
纳升电喷雾萃取电离质谱技术及其在现场分析中的应用
纳升电喷雾萃取电离质谱技术及其在现场分析中的应用Ⅱ分析化学第38卷应用.在药物分析方面,采用DESI—MS可对固态药物(如药片)进行高通量分析.采用nanoEESI—MS则可以在无需样品预处理的情况下,对治疗哮喘的药物沙丁胺醇和硫酸特布他林气雾剂中的有效成分进行了现场快速测定.结果表明,该法能对沙丁胺醇气雾剂中的有效成分沙丁胺醇和硫酸特布他林气雾剂中的有效成分特布他林进行灵敏的检测(检测限分别可达10pg/mL和9Pg/mL),还能现场监测药品质量(如监测药品是否过期等).图lnanoEESI-MS装置示意图Rawsamplewithmatrix在食品分析方面,采用nanoEESI—MS法,无需样品预处理,能对牛奶中的三聚氰胺进行现场直接测定,测定结果与DAPCI—MS法的测定结果相一致;对功能饮料(如红牛)中的功能成分如牛磺酸,咖啡因,赖氨酸,肌醇,烟酰胺和维生素B6,和软饮料(如可口可乐,百事可乐等)中的主要成分如咖啡因,磷酸,果糖,脱水果糖等,进行了高通量的现场快速测定,几秒内即可完成一个样品的分析.东华理工大学化学生物与材料科学学院胡斌等采用nanoEESI—MS法快速,灵敏地筛检饮料中痕量的禁用物质可卡因,检测限可达7～15fg/mL,文章于近期在美国质谱学会主办的JASMS期刊发表(DOI:10.1016/j.jasms.2009.10.015).在农药残留检测方面,采用nanoEESI.MS法,无需任何样品预处理,可对杂环类农药百草枯和拟除虫菊酯类农药氯氰菊酯进行现场快速直接检测,百草枯和氯氰菊酯的检测限分别可达10rig/mL和6ng/mL,均低于它们的工业排放标准(前者为0.1g/mL,后者为0.01g/mL).在爆炸物检测方面,各种无需样品预处理的敞开式电离质谱技术如DESI,低温等离子体探针,实时直接分析(DART)和EESI等的出现,充分展示了它们在各种复杂基质中爆炸物的直接分析中的能力和实力.新型nanoEESI-MS技术更是具有明显的优势,它不但无需任何样品预处理,而且无需使用辅助气体或放电气体来产生初级离子,因此实验中不需要使用高压钢瓶等笨重设备,简化了设备和操作,可以对地表水样中的痕量爆炸物梯恩梯(TNT)和黑索金(RDX)进行现场,快速,直接和灵敏的测定.l京大学朱俊杰课题组最近研制了一种基于纳米金和单壁碳纳米管复合物的细胞电化学传感器(AnnZ.em.,I=FJ2o09,81:6641—6648).该文提出了以明胶作为稳定剂和还原剂,简单,可控地合成了纳米金胶的方法(图1).利用超声组装技术,进一步合成了金胶/单壁碳管复合物,研究发现该复合物具有很好的亲水性,导电性和生物相容性,可用于肿瘤细胞的固定和增殖.以人白血病细胞(HL一60)为分析物,在金胶/碳管修饰电极表面固定细胞后,电化学阻抗明显提高,且电子传递电阻Ret与细胞的浓度成线性关系(图2),线性范围为1×10一1×10cell/mL,最低检测限为5×10cell/mL,对3×10cell/mL的细胞平行测定6次,得到的相对标准偏差为5.4%,表明该传感器具有重现性好,响应速度快,高灵敏度等优点.作者在细胞毒效应检测中发现:在0到10.0mg/L浓度范围内,该功能化的金胶/碳管复合物对HL-60细胞具有很弱的毒性,显示出很好的生物相容性.进一步研究还发现,该复合物促进了抗癌药物(阿霉素)向靶向细胞的传输,可以显着增强阿霉素进入目标癌细胞的能力,提高了药物治疗的效果.药物传输原理如图3所示,首先羧基化的单壁碳纳米管与阿霉素分子通过静电吸附形成纳米复合物;其次,由于纳米粒子的生物识别功能,明胶稳定的金胶纳米粒子容易"镶嵌"于细胞膜的磷脂双分子层上,进一步通过静电吸引或者其它协同作用力吸附负载药物的单壁碳管,从而有效促进抗癌药物分子在靶向癌细胞表面的聚集.该功能纳米材料可以作为一种优良载体,通过金胶和单壁碳管的协同作用,显着增强药物在癌变细胞内的聚积,大幅度提高药效和对靶向癌细胞的杀伤力,对于恶性肿瘤的治疗具有一定的指导作用.HAcl4'4H2O80℃+叠岛警啐WaterGelatinGelatin.StabilizedGoldNanoparticlesoGelatin-NH2+图1明胶稳定的纳米金的合成图2不同浓度中肿瘤细胞的电化学阻抗图谱*AuNPS.Ge1aIln嘲SWNTs々ADR,图3金胶碳管复合物促进药物传输的原理●●0●。
多肽抗体免疫富集-质谱法检测肝癌患者血清多肽标志物
多肽抗体免疫富集-质谱法检测肝癌患者血清多肽标志物作者：原剑， 孙云波， 周晓明， 杨帆， 杨保安， 郑俊杰， 甄蓓， 貌盼勇， 李楠， 白洁，林利忠， 徐淑芳， 肖汉族， 魏开华， YUAN Jian， SUN Yun-Bo， ZHOU Xiao-Ming，YANG Fan， YANG Bao-An， ZHENG Jun-Jie， ZHEN Pei， MAO Pan-Yong， LI Nan， BAIJie， LIN Li-Zhong， XU Shu-Fang， XIAO Han-Zu， WEI Kai-Hua作者单位：原剑,孙云波,周晓明,杨帆,郑俊杰,甄蓓,魏开华,YUAN Jian,SUN Yun-Bo,ZHOU Xiao-Ming,YANG Fan,ZHENG Jun-Jie,ZHEN Pei,WEI Kai-Hua(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;北京蛋白质组研究中心,蛋白质组学国家重点实验室,北京,102206)， 杨保安,YANG Bao-An(北京正旦国际科技有限责任公司,北京,102206)， 貌盼勇,MAO Pan-Yong(解放军302医院,北京,100039)， 李楠,LI Nan(解放军309医院,北京,100091)， 白洁,BAI Jie(解放军301医院,北京,100853)， 林利忠,徐淑芳,肖汉族,LIN Li-Zhong,XU Shu-Fang,XIAO Han-Zu(湖南金健药业有限责任公司,常德,415001)刊名：分析化学英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY年，卷(期)：2011,39(8)本文链接：/Periodical_fxhx201108002.aspx。
纳升电喷雾毛细管液相色谱-串联质谱鉴定K562细胞株中混合蛋白质
SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭
Abstract:Objective Toexploretheinfluenceofsilentinformationregulator (SIRT)3onthemigration andinvasionofhepatomacarcinomacells.Methods TransfectedHuh-7cellswithcontrolpc-DNA3.1plasmid (controlgroup),andtransfected Huh-7cellswithSIRT3plasmid (experimentalgroup).Real-timefluorescencequantitativePCR wasusedtodetecttheexpressionlevelofSIRT3 mRNAinthetwogroups,andtheex-
国际检验医学杂志2021年6月第42卷第12期 IntJLabMed,June2021,Vol.42,No.12
·论 著·
SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭*
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宋春丽,张 琰,周义文△ 南方医科大学深圳医院临床检验医学中心,广东深圳 518100
摘 要:目 的 探 讨 沉 默 信 息 调 节 因 子(SIRT)3 对 肝 癌 细 胞 迁 移 与 侵 袭 能 力 的 影 响。方 法 用 对 照 pc-
tancebetweenthecellsonbothsidesoftheexperimentalgroupwassignificantlywiderthanthatofthecontrol group,andthemigrationdistancewasshorter.Theresultsofcellinvasiontestshowedthatthecellsinthetwo groupswerecollected10hafterinoculationintheupperchamber,andcountedunderthemicroscope,thenumberofcellsineachfieldwas(45±5)inthecontrolgroup,andthenumberofcellsineachfieldwas(25±2)in theexperimentalgroup,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).Conclusion SIRT3overexpressioninhibitsthemigrationandinvasionofhepatomacarcinomacells,anditisexpectedtoserveasanew mo-
高效液相色谱-电喷雾电离质谱法分析人参皂甙
ｍｅ ｈ ｄ ａ ｄ ｉ ｉ ｅ ｔ ｅ ｈ ｔ ｃｕ ｅ ｏ ｎ ｅ ｏ ｉ ｅ ｒ ｕ ｈ ｔ ｅ ｄｆ ｒ ｎ ｓ ｐ ｃｒ ． Ｍｏｅ ｖ ｒ ａ ＨＰ Ｃ — ｔ ｏ ｎ ｔ ｄ ｎ ｉ ｄ ｔ ｅ ｓｒ ｔ ｒ Ｇｉｓ ｎ ｓｄ ｓｔ ｏ ｇ ｈ ｉ ｅ ｅ ｔｏ ｍａ ｓ ｓ ｅ ｔ ｉ ｆ ｕ ｆ ｈ ｆ ａ ｒｏ ｅ Ｌ ＥＳ ／ ｔ ｏ ｓｅ ｔ ｂ ｉ ｅ ｒｔ ｅ ａ ａｙ ｉ ｉ ｓ ｎ ｓｄ ｓ Ｉ ＭＳ ｍｅ ｈ ｄ ｗａ ｓａ ｌ ｈ ｄ ｆ ｈ ｌ ｓｓｏ ｇｎ ｅ ｏ ｉ ｅ ． ｓ ｏ ｎ ｆ Ｋｅ ｒ ｓ ｙ ｗｏ ｄ ：ｈＩ ｅ ｏ ａ ｃ ｉｕ ｄ ｃ ｒ ｍａ ｏ ａ ｈ ｉｈ ｐ ｒ ｒ ｎ ｅ ｌ ｉ ｈ ｏ ｔｇ ｐ ｙ— ｅ ｅ ｔ ｓ ｒ ｙ ｉｎ ｚ ｔ ｎ ｍａ ｓ ｓ ｅ ｔｏ ｔ ； ｉｓ ｎ ｇ ｆｍ ｑ ｒ ｌ ｅｒ ｐ ａ ｏ ｉａｉ ｓ ｐ ｃ ｒ ｍｅｒ ｇｎ ｅ — ｏ ｏ ｙ ｏ ｉｅ ； ａ ａ ｉｓｎ ｓ动相进 行梯度洗脱 ， 水 质谱法利用 电喷雾 电离质谱（ Ｓｆ ） Ｅ ＩＭＳ 研究 了 ３种人参皂甙 的
一
级质谱（ 主要给 出分子量 ） 和二级 、 三级质谱 （ 提供 碎片离 子信息 ） 并 通过质 谱 图的差异对其 结构进 行 ， 关键词 ： 高效液相色谱 一电喷雾 电离质谱法 ； 人参皂甙 ； 参 人
中图分类号 ：６ ７ ７ ０ ５ ． 文献标识码 ： Ａ
头孢菌素类抗生素的电喷雾多级串联质谱分析
收稿日期:2005203214;修回日期:2005207206基金项目:国家自然科学基金资助项目(20173057,20273067).作者简介:李惠琳(1978～),女(汉族),学士,从事天然药物化学与有机质谱学研究。
E 2mail :lhl @3通讯作者:刘志强(1962～),男(汉族),博士,研究员,博士生导师,从事天然药物化学与有机质谱学研究。
E 2mail :liuzq @第26卷第4期2005年11月质谱学报Journal of Chinese Mass Spectrometry SocietyVol.26 No.4Nov.2005头孢菌素类抗生素的电喷雾多级串联质谱分析李惠琳,邢俊鹏,刘志强3,刘淑莹(中国科学院长春应用化学研究所长春质谱中心,吉林长春 130022)摘要:采用电喷雾多级串联质谱技术,对头孢呋辛、头孢噻吩钠、头孢硫脒、头孢噻利、头孢西丁钠五种头孢菌素类抗生素进行了系统研究,总结了该类化合物的电喷雾质谱特征断裂机理。
该类化合物在电喷雾正离子或负离子模式下,均发生C 23位侧链C 2X (X =O 、N 、S )键的特征断裂,为头孢菌素类抗生素化合物结构鉴定提供了新方法。
在负离子模式下,头孢呋辛二级质谱中β2内酰胺环发生开环断裂,与文献结果一致;在电喷雾正离子模式下,头孢噻吩钠、头孢噻利、头孢西丁钠多级串联质谱中均失去C 27位侧链上一分子CO 。
关键词:头孢菌素类抗生素;电喷雾多级串联质谱;断裂机理中图分类号:O657.63;R917 文献标识码:A 文章编号:100422997(2005)042198205Analysis of Cephalosporins by Electrospray IonizationMulti 2stage T andem Mass SpectrometryL I Hui 2lin ,XIN G J un 2peng ,L IU Zhi 2qiang 3,L IU Shu 2ying(Changchun Center of M ass S pect romet ry ,Changchun I nstit ute ofA p plied Chemist ry ,Chinese A cadem y of S ciences ,Changchun 130022,China )Abstract :Electrosp ray io nization multi 2stage tandem mass spect romet ry (ESI 2MS n )is ap 2plied to analysis of five cep halo sporins ,including cef uroxime ,cefalotin sodium ,cefat hiami 2dine ,cefo selis and cefoxitin sodium ,which are one classes of antibiotics widely used in t he p revention and t reat ment of infectious diseases in t he recent years.And t heir f ragmentation pat hways are described.The cleavage of C 2X (X =O ,N and S )in t he site of C 23is t he characteristic f ragmentation pat hway of cep halosporins ,bot h in t he negative and po sitive ion mode.Additionally ,in t he MS 2spect ra of negative ion mode of cef uroxime ,β2lactam cleaves between C627and C82N1which is t he same as reference papers described.In t he MS n spectra of po sitive ion mode of cef uroxime ,cefalotin sodium ,cefoselis and cefoxitin so 2dium ,a neutral lo ss of CO happens at t he side chain of C 27.K ey w ords :cep halosporins ;elect ro sp ray ionizatio n multi 2stage tandem mass spect romet ry ;fragmentation pat hway 头孢菌素类(cep halosporins )抗生素是近年来发展较快的一类抗细菌抗生素,具有抗菌谱广、抗菌作用强、耐青霉素酶、临床疗效高、毒性低、过敏反应较青霉素少等优点,在抗感染药物中占有重要地位。
原位质谱成像技术在肿瘤靶向治疗中的应用开发
原位质谱成像技术在肿瘤靶向治疗中的应用开发肿瘤靶向治疗是目前肿瘤治疗领域的一个重要研究方向，其通过精确识别肿瘤细胞并靶向给药，以提高治疗效果。
然而，要实现精确诊断和治疗的同时还需要了解肿瘤的生物学特性，以便更好地指导治疗方案的选择和优化。
近年来，原位质谱成像技术成为了在肿瘤靶向治疗中应用开发的热点之一。
原位质谱成像技术是一种能够在组织中实现高空间分辨率的质谱成像技术。
它通过将样本表面与质谱仪接触，使样本分子被质谱仪离子源产生离子化，再通过加速器将离子引导到质谱仪中进行质谱分析。
通过分析离子的质荷比以及其相对丰度，可以获得样本中不同分子的分布情况。
而在肿瘤靶向治疗中，这种技术可以用于研究靶向药物的分布情况，了解其在肿瘤组织中的靶向效果，从而优化治疗方案。
首先，在肿瘤靶向治疗中，原位质谱成像技术可以用于研究靶向药物在体内的分布情况。
通过将药物标记为质谱探针，可以追踪其在肿瘤组织中的分布。
研究发现，不同类型的肿瘤组织对靶向药物的摄取效果存在差异。
通过分析病理组织切片上的质谱图像，可以定量测量不同部位的药物含量，了解靶向效果的差异。
这为优化治疗方案提供了有力的依据，可以针对不同类型的肿瘤制定个性化的治疗策略。
其次，原位质谱成像技术还可以用于研究肿瘤细胞内药物的代谢过程。
靶向药物在进入肿瘤细胞后可能会发生代谢，产生代谢产物。
通过原位质谱成像技术可以实时观察代谢产物的分布情况，了解药物的代谢途径与速率。
这有助于研究肿瘤细胞的药物耐药机制，为开发耐药逆转剂提供新的思路。
另外，通过观察代谢产物的分布和变化，可以进一步了解药物的作用机制，为改进靶向药物的设计提供参考。
此外，原位质谱成像技术还可用于评估肿瘤治疗的效果。
在靶向治疗过程中，药物在肿瘤组织中的分布情况可能会受到多种因素的影响，如血管生成、肿瘤微环境等。
通过比较治疗前后的质谱图像，可以定量评估靶向治疗的效果以及药物的清除速度。
该技术的应用有助于及早发现治疗效果不佳的患者，及时调整治疗方案，提高治疗效率。
人肝癌细胞系HepG2与HepG2.2.15差异HLA结合肽的分离与鉴定
人肝癌细胞系HepG2与HepG2.2.15差异HLA结合肽的分离与鉴定陈黎;谢兴旺;张恒辉;费然;丛旭;魏来;陈红松【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2008(16)21【摘要】目的:分离并鉴定整合表达HBV的人肝癌细胞系HepG2.2.15及其母细胞系HepG2的差异HLAⅠ类分子结合肽,寻找与HBV感染相关的HLA结合肽.方法:洗涤法得到HepG2和HepG2.2.15细胞表面的HLAⅠ类分子及与其结合的肽段.效液相色谱(HPLC)对两种细胞的洗脱肽段进行分离和图谱比较,挑选出HepG2.2.15特有的峰段进行纳升电喷雾串联质谱(nano ESI-MS/MS)分析,结合MASCOT数据库检索和从头测序,分析多肽的序列和来源.后采用RT-PCR法进行mRNA表达检测.结果:HPLC对比显示HepG2和HepG2.2.15的HLA结合肽存在显著差异.利用nanoESI-MS/MS技术从HPLC差异峰段中分离鉴定出一条来源于已知蛋白人烯醇酶-1(enolase1,ENO1)的多肽SPDDPSRYISPDQ.RT-PCR结果显示,ENO1在HepG2和HepG2.2.15细胞中均有表达,且在HepG2.2.15细胞中表达明显高于HepG2细胞.结论:来自ENO1的多肽SPDDPSRYISPDQ能够被HLAⅠ类分子提呈到HepG2.2.15细胞表面,且ENO1 mRNA在HepG2.2.15细胞中的表达显著高于HepG2细胞.提示HBV感染可能引起ENO1表达上调.【总页数】6页(P2343-2348)【关键词】HepG2细胞;HepG2.2.15细胞;乙型肝炎病毒;烯醇酶-1;高效液相色谱;质谱【作者】陈黎;谢兴旺;张恒辉;费然;丛旭;魏来;陈红松【作者单位】北京大学人民医院肝病研究所【正文语种】中文【中图分类】R977.11;R730.3【相关文献】1.人肝癌细胞系HepG2中survivin-3鉴定及其真核载体构建 [J], 徐兵;杨来华2.人肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM和其亲本细胞系HepG2蛋白质双向电泳图谱的差异分析 [J], 田浪;张志伟;陈孝平3.人肝癌细胞系Huh-7中CD133+细胞的分离及鉴定 [J], 孙岚;宋东颖;刘岩磊;刘岩;张英鸽4.HLA-A2限制性NY-ESO-1b肽段诱导的CD8+ T细胞对稳定表达NY-ESO-1的HepG2肝癌细胞系的杀伤效应 [J], 乔欢;钱晓萍;张华刚;田婵;陈慰峰5.罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定 [J], 千年松;李韧;于衡超;曹云新;张福琴;窦科峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
钠升电喷雾串联质谱技术鉴定两种髓系白血病细胞分化相关蛋白质
钠升电喷雾串联质谱技术鉴定两种髓系白血病细胞分化相关蛋白质夏晴;王红霞;王杰;刘炳玉;胡美茹;张学敏;沈倍奋【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2004(026)005【摘要】目的鉴定IL-6诱导小鼠髓系白血病M1细胞分化过程中出现的两种上调表达的相关蛋白质.方法将待鉴定的蛋白质斑点从双向电泳凝胶上切下,经胶内胰蛋白酶酶切后,先进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)肽质量指纹谱分析,再通过钠升电喷雾串联质谱(nano-ESI-MS/MS)技术获得其胰蛋白酶水解肽段的串联质谱图和肽段的全长序列,串联质谱图经Micromass专用软件MaxEnt3处理后,通过Mascot查询NCBI、SWISSPROT等数据库.结果两种未能通过肽质量指纹谱鉴定的蛋白质经Nano-ESI-MS/MS技术获得了明确鉴定,分别为蛋白质Destrin和Putative.结论 Nano-ESI-MS/MS通过获得多肽序列信息在鉴定蛋白质方面具有独特的优势.【总页数】5页(P483-487)【作者】夏晴;王红霞;王杰;刘炳玉;胡美茹;张学敏;沈倍奋【作者单位】军事医学科学院,基础医学研究所分子免疫室,北京,100850;National Center of Biomedical Analysis, Academy of Military Medical Sciences, Beijing;National Center of Biomedical Analysis, Academy of Military Medical Sciences, Beijing;National Center of Biomedical Analysis, Academy of Military Medical Sciences, Beijing;军事医学科学院,基础医学研究所分子免疫室,北京,100850;National Center of Biomedical Analysis, Academy of Military Medical Sciences, Beijing;军事医学科学院,基础医学研究所分子免疫室,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.纳升电喷雾串联质谱"序列对接法"确定多肽的加钠位点 [J], 吴胜明;王杰;刘炳玉;王鸿丽;魏开华;张学敏;杨松成2.采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因 [J], 汤参娥;肖志强;谭潭;肖艳华;阮林;李萃;彭芳;李茂玉;张鹏飞;易红3.蛋白质组技术鉴定肿瘤相关抗原的研究进展 [J], 邹丽云;吴玉章4.双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白质ANX1-human [J], 谢玲;应万涛;张开泰;项小琼;钱小红;王玉芝;吴德昌5.纳升电喷雾质谱鉴定维甲酸诱导HL60细胞分化相关蛋白质 [J], 牟芝蓉;吴玉章;李晋涛;周伟;魏斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纳升电喷雾串联质谱鉴定重组人甲状旁腺素(1-34)
纳升电喷雾串联质谱鉴定重组人甲状旁腺素(1-34)陈静;孙红颖;陈枢青【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2006(34)5【摘要】用先进的纳升电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱鉴定重组人PTH(1-34).通过ESI-MS测定重组人PTH(1-34)分子量及MS/MS对其胰蛋白酶酶解后的肽段的序列和数据库查询进行结构鉴定.重组PTH(1-34)测定分子量为4115.21,与理论值相比测定相差0.06%.MS/MS测定出其中双电荷离子峰m/z 728.4 肽段序列为VSEIQLMHNLG,以及其他3个单电荷离子峰的序列.数据库检索后确定重组表达的PTH(1-34)一级结构完全正确,纳升电喷雾串联质谱以其灵敏、快速和准确为蛋白质鉴定提供了有效的手段.【总页数】5页(P603-607)【作者】陈静;孙红颖;陈枢青【作者单位】浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,310031;浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,310031;浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,310031【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白 [J], 柏兆方;林碧蓉;李萍;李卫华;刘炳玉;王红霞2.骨碱性磷酸酶、N-端骨钙素在重组人甲状旁腺素(1-34)治疗原发性骨质疏松症疗效观察中的应用 [J], 翁秀妹;潘建平3.重组人甲状旁腺素1-34对去卵巢大鼠骨质疏松的作用研究 [J], 陈波;李翠琼;朱常青;李婉媚;曹小祯4.重组人甲状旁腺素1-34治疗绝经后骨质疏松症的临床研究 [J], 陆彬彬;高爱国5.观察重组人甲状旁腺素(1-34)应用于绝经后骨质疏松症(PMOP)患者的治疗价值[J], 崔路坤; 吴云丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于转录组测序技术分析补骨脂素对HepG2细胞的作用机制
基于转录组测序技术分析补骨脂素对HepG2细胞的作用机制汪思云;李艺博;谭春霞;卢涛【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2024(26)1【摘要】目的利用转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)技术分析补骨脂素对肝癌HepG2细胞的作用机制。
方法利用CCK-8法检测不同浓度的补骨脂素(0、62.5、125、250、500μM)作用HepG2细胞12 h和24 h后存活率的变化;流式细胞术检测250μM补骨脂素对HepG2细胞处理24 h后细胞周期的变化;RNA-seq测序获得对照组和补骨脂素组差异表达基因并进行GO富集分析和KEGG通路分析;实时荧光定量PCR技术验证差异基因表达水平。
结果与对照组相比,补骨脂素作用HepG2细胞后,其存活率明显下降(P<0.01),细胞周期在G0/G1期比例提高(P<0.05);RNA-seq测序分析共有286个差异显著基因,其中包括130个上调基因和156个下调基因;GO功能富集和KEGG信号通路主要集中在细胞周期相关生物学过程及信号通路;qPCR结果显示HepG2细胞经补骨脂素处理后p 53和GADD 45B基因上调(P<0.05,P<0.01),CDK 2、RRM2和CCND 1基因下调(P<0.05,P<0.01)。
结论补骨脂素对HepG2细胞产生毒性,阻滞细胞周期进程,其作用机制可能与调控细胞周期相关基因(p 53,CDK2,GADD45B,CCND1,RRM2)的表达有关。
【总页数】7页(P35-41)【作者】汪思云;李艺博;谭春霞;卢涛【作者单位】北京中医药大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】R285【相关文献】1.基于单细胞转录组测序技术分析缺血性脑卒中脑细胞转录组表达差异2.三七总皂苷诱导下的肝癌细胞HepG2细胞转录组测序分析3.基于转录组测序技术分析山药蛋白防治糖尿病性勃起功能障碍的作用机制4.基于转录组测序技术分析穿心莲内酯抑制HepG2.CW细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原作用机制5.基于转录组测序探究地塞米松在前体脂肪细胞成脂分化过程中的作用机制因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱与电喷雾飞行时间质谱联用鉴定胰岛素注射液
高效液相色谱与电喷雾飞行时间质谱联用鉴定胰岛素注射液刘劼;陈军辉;王小如;黎先春【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2007(35)3【摘要】用反相高效液相色谱(RP-HPLC-UV)和电喷雾飞行时间质谱(ESI-TOF/MS)鉴定商品化胰岛素注射液中的胰岛素.使用反相C18微柱(2.1 mm×30 mm,3.5 μm),1%醋酸的水/乙腈(66: 34,V/V)为流动相,胰岛素能在1 min之内实现快速分离检出.通过改变流动相流速、酸度以及质谱各参数获得胰岛素检测的最优化条件,在该条件下,胰岛素可获得最佳电离效率,样品量仅为0.174 pmol即可获得有效质谱信号.同时在ESI正离子全范围扫描中主要形成带有+3、+4、+5、+6、+7等不同电荷数的质谱峰.经去卷积计算可得胰岛素的精确分子量,与理论值的相对误差可至1.72×10-7以下.【总页数】4页(P393-396)【作者】刘劼;陈军辉;王小如;黎先春【作者单位】厦门大学化学化工学院化学系,现代分析科学教育部重点实验室,厦门,361005;中国海洋大学化学化工学院,青岛,266003;厦门大学化学化工学院化学系,现代分析科学教育部重点实验室,厦门,361005;国家海洋局第一海洋研究所,青岛市现代分析技术及中药标准化重点实验室,青岛,266061;国家海洋局第一海洋研究所,青岛市现代分析技术及中药标准化重点实验室,青岛,266061【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.高效液相色谱-电喷雾离子阱飞行时间质谱法鉴定乙酰甲喹及其代谢物 [J], 刘迎春;司红彬;贺利民;丁焕中;黄显会;陈建新;陈杖榴;曾振灵2.加速溶剂萃取-高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用分析莲子心中生物碱 [J], 李文龙;陈军辉;殷月芬;王小如;Frank S C Lee3.高效液相色谱/电喷雾-离子阱-飞行时间质谱联用法分析桂枝汤的化学成分 [J], 袁鹏飞;张雯;徐风;刘广学;尚明英;蔡少青4.超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用法检测癫痫平片中β-细辛醚含量 [J], 刘莉;周世玉5.内皮细胞提取和高效液相色谱－电喷雾飞行时间质谱联用预测玄参中的活性成分[J], 祝艳斐;毕志明;刘承伟;任美婷;吴斐华;李萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
超高压液相色谱-串联质谱法检测万古霉素血药浓度及与化学发光法的比较
超高压液相色谱-串联质谱法检测万古霉素血药浓度及与化学发光法的比较秦绪珍;姜小梅;侯立安;苏薇;禹松林;刘亚丽;徐英春【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2018(38)12【摘要】目的建立超高压液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测人血清万古霉素浓度的新方法.方法采用Waters ACQUITY UPLC/ABSCIEX QTRAP4000超高效液相色谱串联质谱仪和ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱,以去甲万古霉素为内标,电喷雾离子源、正离子多反应监测模式检测万古霉素血药浓度.方法学评价实验包括:专属性、线性、精密度、准确度和与微粒子化学发光分析法,并进行方法学比较.结果 UPLC-MS/MS法专属性好,反应时间为2 min,线性范围为1～100 mg/L(R2=0.997),定量下限为1 mg/L,日内、日间精密度小于15％,准确度范围在96.2％～108％.UPLC-MS/MS法与常规开展的微粒子化学发光免疫分析方法比较,结果相关性良好,相关方程y=0.576x+2.367(R2=0.911),但存在21％的负偏倚.结论 UPLC-MS/MS可简便、特异地定量人血清中万古霉素浓度,与化学发光方法具有较好的可比性,可用于临床检测.【总页数】6页(P1753-1758)【作者】秦绪珍;姜小梅;侯立安;苏薇;禹松林;刘亚丽;徐英春【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科, 北京100730;美国 SCIEX 公司北京分公司, 北京 100015;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科, 北京 100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科, 北京 100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科, 北京 100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科, 北京100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科, 北京 100730【正文语种】中文【中图分类】R446.11【相关文献】1.超高压液相色谱-串联四极杆质谱法对牛奶中24种磺胺类药物残留的检测 [J], 佘永新;刘佳佳;王静;刘永;王荣艳;曹维强2.高效液相色谱串联质谱法与化学发光法定量测定女性血清总睾酮的比较分析 [J], 狄娜;韩杨;翁雪玲;杨亚波;丁淼;杜涛;杨冬梓;赵晓苗3.液相色谱-串联质谱法检测饲料中万古霉素的方法 [J], 贾涛4.高效液相色谱串联质谱法与化学发光法定量测定女性血清总睾酮的比较分析 [J], 狄娜;韩杨;翁雪玲;杨亚波;丁淼;杜涛;杨冬梓;赵晓苗;;;;;;;;5.3种化学发光免疫分析法检测系统与同位素稀释液相色谱串联质谱法检测总甲状腺素的一致性评价 [J], 禹松林;邱玲;周伟燕;程歆琦;孟庆慧;李洪雷;侯立安;程倩;谢少伟;张传宝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人参总皂甙诱导人肝癌细胞分化初探
人参总皂甙诱导人肝癌细胞分化初探
曾小莉;涂植光
【期刊名称】《肿瘤防治研究》
【年(卷),期】2000(27)3
【摘要】目的探讨人参总皂甙(TSPG)对人肝癌细胞株HepG2的诱导分化作用。
方法以MTT法 ,光镜 ,电子显微镜和流式细胞仪分析法观察TSPG对人肝癌细胞生长增殖 ,形态 ,超微结构及细胞周期的影响。
结果癌细胞在 4 0 0ug mlTSPG
处理后 ,生长受到明显抑制。
光镜 ,电子显微镜表明经TSPG作用细胞形态向正常
肝细胞方向逆转。
流式细胞仪分析发现TSPG使细胞生长阻滞于S期。
【总页数】3页(P188-190)
【关键词】人参总皂甙;诱导分化;肝癌;肝癌细胞
【作者】曾小莉;涂植光
【作者单位】重庆医科大学临床生化教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
【相关文献】
1.肝损伤组织萃取物对人肝癌细胞株BEL-7402诱导分化作用初探 [J], 成娜;刘大伟;刘芳;向锦;杨迪;赵国强
2.人参茎叶总皂甙对人白血病细胞株的诱导分化作用 [J], 李薇;易永林
3.人参三醇组皂甙诱导分化人肝癌细胞的研究 [J], 王英凯;张明磊;张立波
4.人参皂甙 Rh2对人肝癌细胞 SMMC-7721的诱导分化作用 [J], 曾小莉;涂植光
5.人参皂甙Rh_2对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用 [J], 曾小莉;涂植光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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人肝癌细胞系HLE 细胞表面抗原多肽的纳升电喷雾串联质谱从头测序分析王红霞#1 李萍1 何家田1 周迈2 刘炳玉1 杨松成1 张学敏11（军事医学科学院国家生物医学分析中心，北京100850） 2（北京大学人民医院肝胆外科中心，北京100044）摘 要 肿瘤细胞表面的抗原多肽能够被细胞毒T 淋巴细胞特异性识别而引起免疫应答，因此有可能用于研制基于多肽的抗肿瘤疫苗。
用弱酸将人肝癌细胞系HLE 细胞表面抗原多肽和人正常肝细胞表面多肽洗脱后，经RP-HPLC 分离，选择HLE 细胞表面特异性多肽进行纳升电喷雾串联质谱（nanoESI-MS /MS ）测序，共测定5个色谱峰中的20个多肽序列，分子量分布范围为1000～2000Da 。
借助MasSeq 软件分析出其中12个多肽的序列。
经数据库查寻，其中的3个肽段分别来自钙调节蛋白、核蛋白S19和伴侣蛋白10。
这些多肽的生物学功能及与肿瘤的关系值得深入研究。
该研究表明nanoESI-MS /MS 是测定微量混合多肽序列的最有效方法。
关键词 HLE 细胞，细胞表面抗原多肽，电喷雾串联质谱，从头测序 2005-06-23收稿；2006-01-10接受本文系国家863高技术研究发展资助项目（No.2002AA202321）1 引 言多肽与机体的抗肿瘤免疫活动具有密切关系。
肿瘤细胞所产生的肿瘤特异性/相关性抗原在肿瘤细胞或专职抗原呈递细胞（如树突状细胞，DC ）内可被水解为含8～10个氨基酸残基的多肽，这些多肽在内质网中与MHC-Ⅰ类分子结合，形成MHC-I 类分子/抗原多肽复合物，通过分泌作用表达于细胞膜上，最终被CD8+T 细胞表面的T 细胞受体（TCR ）识别，并使CD8+T 细胞激活，成为细胞毒T 淋巴细胞（CTL ），从而产生抗肿瘤的特异性细胞免疫应答。
使用弱酸性溶液可将这些与MHC 分子结合的抗原多肽从肿瘤细胞表面洗脱下来，用于肿瘤的免疫治疗研究［1，2］。
为了研究将肝癌细胞表面洗脱的多肽用于肝癌免疫治疗的可行性，实验对人肝癌细胞系HLE 细胞表面的部分特异性抗原多肽进行了提取、分离和电喷雾串联质谱分析，共测定了20个肽段的序列，分析出了其中12个肽段的序列，其中的3个肽段分别来自钙调蛋白、核蛋白S19和伴侣蛋白10。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Q-TOF2正交加速电喷雾串联质谱仪（英国Micromass 公司）。
色谱纯乙腈（美国Fisher Scientific 公司）；三氟乙酸（TFA ）和甲酸（FA ）为国产分析纯试剂。
实验用水为Milli-Q 纯水器制备的去离子水。
2.2 实验方法2.2.1 人肝癌细胞系HLE 细胞的培养 复苏HLE 细胞（购自中国科学院上海细胞库）在15L 转瓶中培养，加RPMI 1640培养液和20%胎牛血清。
2.2.2 HLE 细胞表面抗原多肽的提取 每109细胞与10mL 的柠檬酸缓冲溶液（柠檬酸0.067mol /L +Na 2HPO 40.123mol /L ，用0.1mol /L NaOH 调至pH3.3），在室温下作用2min ，使细胞表面的蛋白质变性，结合肽释放至上清液中，酸洗液在4℃用超滤离心管超滤。
然后经C 18小柱脱盐，冻干，-20℃保存。
2.2.3 HLE 细胞表面抗原多肽的HPLC 分离条件及方法 HLE 细胞表面提取的总多肽经高效液相色谱仪（安捷伦公司，HP1100型）分离，色谱柱为C 18柱，（4.6mm ×150mm ，Waters 公司），梯度洗脱。
B 液为含0.1%TFA 的乙腈溶液，A 液为含0.1%TFA 的水。
洗脱梯度为100min 内B 液从0%升至第34卷2006年7月分析化学（FENXI HUAXUE ） 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry第7期915～918100%，流速为1mL /min 。
紫外检测215nm 、254nm 和280nm 。
分步收集，从18～60min ，间隔2min 收集一个组分，冷冻干燥，-20℃保存供质谱分析。
正常肝细胞的培养，肝细胞表面多肽的提取、分离与HLE 细胞的方法完全相同。
2.2.4 质谱条件及测定方法 ESI-MS /MS 为英国Micromass 公司的Q-TOF2正交加速电喷雾串联质谱仪。
配备纳升喷雾源。
质谱测定条件及方法基本与文献［3］相同。
所有测定均在正离子方式下进行。
质谱仪用Glu-fib 的串联质谱碎片校正，质量准确度小于0.1Da 。
雾化气为氮气，碰撞气体为氩气。
源温80℃，锥孔电压50V 左右。
TOF 加速电压为9.1kV 。
MCP 检测器电压为2300V 。
毛细管电压为800～1000V 。
样品经Ziptip C 18柱脱盐后装入专用needle 进行分析。
首先进行一级质谱扫描（扫描范围400～1600Da ），得到ESI-MS 图。
从ESI-MS 图中选择出待测离子，然后进行ESI-MS /MS 分析。
该质谱图经Micromass 的专用软件MaxEnt3处理后，借助Micromass 的专用软件MasSeq 直接推导出肽段序列。
镀金属钯的硼硅酸盐电喷雾针是一次性的专用needle 。
3 结果与讨论3.1 抗原多肽的RP-HPLC 分离从细胞表面提取的多肽成分很复杂，除多肽外，还含有其它化合物及盐，影响质谱分析时多肽的检测，另外，不同多肽的含量差别很大。
通过RP-HPLC 分离，可以除去样品中的非肽化合物，达到富集微量多肽的目的。
经梯度分离，用二极管阵列检测器选择215、254和280nm 3种波长进行检测。
3种检测波长的出峰情况基本一致。
保留时间从20～60min 内检测到5个主要峰，保留时间分别为24.470、29.609、35.235、42.013和48.867min 。
与正常肝细胞相比，这些峰为特异峰。
图1为215nm 检测波长下正常肝细胞和HLE 细胞表面多肽的RP-HPLC 分离图。
图1 人正常肝细胞（a ）和HLE 细胞（b ）表面多肽的RP-HPLC 图谱比较Fig.1 Reversed phase high performance liquid chromatogram （RP-HPLC ）of cell surface peptides from human normal liver cells （a ）and HLE cells （b ）3.2 抗原多肽的nanoESI-MS /MS 分析根据RP-HPLC 的分离和与正常肝细胞的比较，实验选择这5个特异性峰（保留时间见3.1）所在的组分进行nanoESI-MS /MS 分析，对其中的20个肽段进行了测序，其中分析出序列12个。
表1为这12个多肽的保留时间、序列及分子量等信息，测量误差均在0.1Da 之内。
RP-HPLC 一个峰中往往含有3～4个肽段，最多包含10个肽段。
图2为m /z 为766.82双电荷离子对应肽段的ESI-MS /MS 测序图。
为了不丢失保留时间42.013min 峰中的肽段信息，将38～42min 的样品合并进行了测序。
测序结果表明细胞表面多肽分子量分布范围为500～3000Da ，主要分布范围为1000～2000Da 。
这种天然多肽与619分析化学第34卷经胰蛋白酶酶切形成的多肽不同，部分肽段带单电荷，肽段C 末端是任意氨基酸。
另外，肽段中可能存在修饰或非天然氨基酸，因此序列分析比较困难，测定20个肽段，借助MasSeq 专用软件分析出其中的12个肽段序列。
经数据库查寻，其中的m /z 为766.82、657.37和699.36的双电荷离子对应的序列分别来自钙调节蛋白、核糖体蛋白S19和伴侣蛋白10。
这些蛋白质与肿瘤的关系以及这几个多肽分布于细胞表面的生物学功能都值得进一步研究。
表1 HLE 细胞表面12个多肽的氨基酸序列、分子量等相关信息Table 1 Amino acid sequence ，molecular weight and relative information of the 12peptides obtained from HLE cells surface序号No.保留时间RT （min ）质荷比m /z 带电荷数Charge理论分子量Theretical MW （Da ）实测分子量Measured MW （Da ）测量误差Measurement error （Da ）氨基酸序列Amino acid sequence 124～26564.3321126.581126.630.06LQAVTMAEHK 224～26925.4421848.861848.870.01EESSSVAFLLPDIGEQE 324～26904.371903.42903.36-0.06NPGAMASTR 424～26617.301616.28616.290.01TTGPGGGA 528～30487.322972.54972.630.09LQTSQLQR 628～30507.7821013.611013.55-0.06RSLDPSDPK 728～30575.3321148.591148.650.06THGPSLPGAAGGK 834～36657.3721312.661312.730.07PGVTVKDVNQQE 934～36676.3821350.761350.75-0.01KGASPGLAPAGKGGLA 1038～42766.8221531.691531.63-0.06MIREADLDGDGQVN 1138～42544.2121086.511086.41-0.10TFSGPHNGASL 1248～50699.3621396.701396.710.01FRDGDILGKYVD图2 质/荷比为766.82的双电荷离子的电喷雾串联质谱测序图，该肽段的序列为MIREADLDGDGQVNFig.2 Electrospray ionization tandem mass spectrum （ESI-MS /MS ）of the doubly charged ion at m /z 611.78.The deduced sequence is MIREADLDGDGQVN细胞表面多肽的种类很多，但含量甚微。
因此，必须培养大量细胞（109细胞）并结合具有高灵敏度（fmol ）和强大测序功能的纳升电喷雾串联质谱才能进行细胞表面多肽的研究。
本研究分析出序列的12个肽段，经数据库查寻，有3个肽段确定了其蛋白质和基因来源，另外9个是新发现的肽段。
肿瘤细胞表面除有含8～10个氨基酸的与MHC 相结合的抗原多肽外，还存在许多10个以上氨基酸组成的多肽，这些多肽的生物学功能还不清楚，有待深入研究。