种公牛耳组织成纤维细胞的分离与培养

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马头山羊耳组织成纤维细胞系的建立

遗传育种与繁殖832024.4·0 引言马头山羊是恩施州内肉羊养殖的主要品种，以个体较大，肉和板皮质量优良而著称，其肉用性能好，在全年放牧的情况下，12月龄阉羊体重可达40 kg 左右，18月龄可达50～60 kg ，如适当补料，可达80～90 kg 。

12月龄屠宰率为57.87%，肉质细嫩，味道鲜美。

马头山羊板皮质地优良，结构致密，拉力强、弹性好、油性足，为重要的出口物资，也是重要的试验材料。

目前，优良畜禽的选育主要采用“优胜劣汰”的模式，周期较长、需要饲养的种羊多而提高选育成本，制约了遗传改良的步伐。

1996年，利用体细胞克隆技术培育的克隆羊“多莉”在英国问世，“多莉”的性状与提供体细胞的母体相同，这为培育性状优良的畜禽提供依据。

成纤维细胞是结缔组织中的主要细胞之一，拥有动物完整的遗传信息，易获得且对动物伤害不大，体外培养增殖较快，是进行体细胞克隆的理想细胞系。

建立和保存性状优良马头山羊的成纤维细胞系对快速扩繁出大量优秀的马头山羊意义重大。

本研究选取性别不同的1岁马头山羊作为试验对象，利用纤维蛋白酶消化法建立马头山羊耳部组织成纤收稿日期：2024-01-15基金项目：湖北省恩施州科技计划项目（XYJ2020000027）作者简介：申红春（1982-），女，汉族，湖北恩施人，硕士，副教授，从事基础兽医研究。

*通信作者简介：陈潇飞（1990-），男，汉族，山西襄汾人，硕士，畜牧师，研究方向：动物遗传育种与繁殖。

申红春，曾璐瑶，李杨，等．马头山羊耳组织成纤维细胞系的建立[J]．现代畜牧科技，2024，107（4）：83-85．　doi ：10.19369/ki.2095-9737.2024.04.023．　SHEN Hongchun ，ZENG Luyao ，LI Yang ，et al ．Establishment of Ear Marginal Tissue Fibroblast Cell Line of Matou Goat[J]．Modern Animal Husbandry Science & Technology ，2024，107（4）：83-85．马头山羊耳组织成纤维细胞系的建立申红春1，曾璐瑶1，李杨1，李美发1，陈潇飞2*（1. 恩施职业技术学院，湖北恩施 445000；2. 恩施土家族苗族自治州农业科学院，湖北恩施 445000）摘要：马头山羊是武陵山脉的地方良种，以个体较大，肉和板皮质量优良而著称，是湖北省重点保护的品种。

体细胞克隆牛的研究进展(综述)

体细胞克隆牛的研究进展1997年，体细胞克隆绵羊多莉的诞生，改变了以往教科书中的哺乳动物已分化的体细胞不能重新去分化而重获全能性的概念。

1998年，体细胞克隆牛获得成功。

体细胞克隆动物的成功是几十年来生物学领域的重大突破之一，它引起了社会的广泛兴趣和关注。

因为该技术可能对未来农业、医学和人类自身产生重大影响。

为了使我国科学家能抓住机遇，在体细胞动物克隆领域研究中尽快加入国际竞争的行列并走在国际前列，国家自然科学基金委员会于1998年不失时机地设立了“家畜体细胞无性繁殖的研究”的重点项目。

这个项目，不仅可为发育生物学的基本理论研究提供很好模型，更重要的是在我国建立家畜克隆技术并在未来国民经济发展中发挥重要作用。

因此，该项目既具有科学上的前沿性，又符合国家重大发展需求。

“家畜体细胞无性繁殖的研究”项目（批准号39830280）是国家自然科学基金委员会的重点科研项目。

1999年、2000年和2002年，体细胞克隆山羊、转基因克隆山羊和克隆牛分别在我国降生。

2002年2月27日同行专家在中国科学院动物研究所对该项目进行了验收与鉴定。

专家们对项目成果给予了高度评价，一致认为，通过该项目的研究，我国的家畜克隆技术已迈入世界先进水平。

克隆牛研究是由中国科学院动物研究所生殖生物学国家实验室克隆动物研究组与山东五里墩中大动物胚胎工程中心合作完成的。

通过成批体细胞克隆牛的研究，我国科学家已建立了从家畜体细胞培养、卵母细胞成熟、卵子去核、重构胚构建、胚胎体外培养、胚胎移植等成套的较成熟的操作方法和规程，标志着我国成为继英国、日本、新西兰和美国等国家之后，掌握体细胞克隆家畜关键技术的少数国家之一。

体细胞克隆牛和克隆羊的成功，使我国在动物胚胎工程高科技领域已走在国际前沿。

该项目的研究可能为未来畜牧业的发展提供一个新的增长点。

特别是奶牛克隆胚胎应用技术，在我国奶牛业十分落后的条件下，一旦提高效率并投入生产应用，将对畜牧经济发展产生重要影响。

耳毛细胞临床实验

耳毛细胞临床实验耳毛细胞（Hair Cells）是内耳中的一种特殊细胞，负责感知声音和平衡的功能。

随着科技的进步，耳毛细胞的研究也逐渐受到关注。

临床实验是科学研究的重要环节之一，本文将探讨耳毛细胞临床实验的意义、方法和临床应用前景。

一、耳毛细胞临床实验的意义耳毛细胞临床实验对于理解听觉和平衡功能的机制具有重要意义。

通过研究耳毛细胞的结构和功能，可以揭示耳朵感知声音和平衡的分子机制和细胞机理，有助于深入了解耳聋、平衡障碍等疾病的发生和发展机制。

此外，耳毛细胞临床实验还可以为治疗耳聋提供新的方法和策略，促进听力康复和平衡功能的改善。

二、耳毛细胞临床实验的方法1. 组织培养实验组织培养实验是耳毛细胞临床实验中常用的方法之一。

首先，从动物的内耳中取出耳毛细胞组织样本，然后将其置于合适的培养基中进行培养。

在培养的过程中，可以观察细胞的形态和功能变化，并通过添加特定药物或激素等物质来研究其对耳毛细胞的影响。

2. 分子生物学实验分子生物学实验是耳毛细胞临床实验的另一种重要方法。

通过提取耳毛细胞中的核酸或蛋白质，可以进一步研究其基因表达和信号通路的变化。

利用PCR、Western blot等技术可以检测特定基因的表达水平和蛋白质的表达情况，从而揭示耳毛细胞的功能变化和相关疾病发生的机制。

3. 功能性实验功能性实验是耳毛细胞临床实验的关键步骤之一。

利用电生理学技术，可以记录耳毛细胞的电信号，并观察其对声音和平衡刺激的反应。

通过在实验中改变刺激的频率、强度和方向等参数，可以详细研究耳毛细胞的感受性和适应性，进而揭示听觉和平衡功能的机制。

三、耳毛细胞临床实验的临床应用前景耳毛细胞临床实验的研究成果有望为临床医学带来新的突破。

在治疗耳聋和平衡障碍方面，耳毛细胞移植和基因治疗等新技术已经取得一定的进展。

通过将健康的耳毛细胞移植到患者的内耳中，可以改善听力和平衡功能。

此外，通过修复或改造患者自身的耳毛细胞基因，可以实现基因治疗，为患者提供更加个体化的治疗方案。

以呼吸道症状为主的牛传染病

2．犊牛地方流行性肺炎急性的表现发热，高达42℃，精神沉郁，厌食，流涎，流鼻汁，痛性湿咳，呼吸加快，每分钟达60～120次，重症病例出现呼吸困难，张口呼吸，胸部听诊时双侧肺前腹侧有干性或湿性啰音。
3．牛结核病潜伏期一般为16～45d，长者达数月，甚至数年。牛结核病中肺结核最为常见。病牛在初期食欲正常，主要呈现顽固性的咳嗽，尤其在清晨最易见到。后期肺部病变严重时，表现呼吸困难，咳嗽加重。
（3）脑膜脑炎型：主要发生于4～6个月龄犊牛，病初体温升高，达40℃，流鼻汁，流泪，呼吸困难，随后表现肌肉痉挛，兴奋，惊厥，口吐白沫，最后不能站立，角弓反张，四肢划动，昏迷而死亡。
（4）流产型：流产主要发生于妊娠4～7个月的母牛，流产后约半数胎衣不下。本病型常与呼吸道型、生殖道感染型并发。
2．犊牛地方流行性肺炎主要病变为双侧纤维素性支气管肺炎，病变部位主要是肺的尖叶和心叶的下部，病变肺质地坚实，间质增宽水肿，并有肺气肿，胸腔积液呈黄色或红黄色，胸膜的脏层和壁层均有纤维素覆着，肺切面可见肉样病变。
3．牛结核病牛结核病肉眼病变最常见于肺，其次为淋巴结。在肺脏或其他器官的结核病变有两种病理变化：一是结核结节，二是干酪样坏死。结核结节大小为粟粒大至豌豆大，呈灰白色，切开后见有干酪样坏死。在检查肺脏结核结节时，有些病例肺脏表面貌似正常，但触摸时可发现坚硬的结核结节，因此触摸肺病变部位是病理剖检诊断的关键。
牛结核病是由牛型结核分枝杆菌引起的人畜共患的慢性传染病。以被感染的组织和器官形成特征性结核结节和干酪样坏死为特征。
牛流行热是由牛流行热病毒引起牛的急性热性传染病。本病的特征是突然高热，持续2～3d即恢复正常，在发热期伴有流泪、流涎、流鼻汁，呼吸促迫及四肢关节疼痛而引起跛行。

体外受精技术

.
国内外研究现状
世界体外受精的首创纪录
动物种类兔
叙利亚仓鼠小鼠
中国仓鼠猫
土拨鼠大鼠狗牛猪绵羊山羊
首创纪录文献
Thibault(1954) Yanaginmachi,chang(1963) Whittingham(1968) Pickworth,Chang(1969) Hammer(1970) Yanagimachi(1972) Miyamoto,Chang(1973) Mahi,Yanagimachi(1976) Brackett(1978) Iritani,Niwa(1977) Bondioli,Wright(1980) 花田章(1985)
产
卵母细胞体外成熟的特征 • 生发泡破裂；
技
• 染色体凝集；
术
• 纺缍体形成； • 极体排出；
要
• 透明带软化；
点
• 卵丘细胞扩展。
.
体外卵母细胞的体外成熟
胚
胎
卵母细胞成熟培养液以TCM-199较好，可使牛、羊、猪的卵
生
母细胞体外成熟率高达80%以上。
产
添加成分： • 促性腺激素：FSH、LH
要标准，因此常用地衣红染色才可判断。
生
牛卵母细胞体外成熟标准：
产
1级成熟卵：卵丘细胞完全扩展，卵丘细胞至少向外扩
展3倍于裸卵直径；
技
2级成熟卵：卵丘细胞中等扩展，卵丘细胞至少向外扩
术
展2倍于裸卵直径；
3级成熟卵：卵丘细胞轻度假扩展，卵丘细胞仍紧紧粘
要
附于透明带上。
点
1级和2级卵通常均已排出第一极体。
产
C 快速冷冻、快速解冻法
技

高考生物一轮复习第十单元生物技术实践第35讲胚胎工程教案-人教版高三全册生物教案

第35讲胚胎工程考试标准加试考试标准加试 1.从受精卵谈起a 2.胚胎工程 a考点一胚胎发育与胚胎体外培养 1．受精作用(1)过程：包括精卵识别、精子附着于卵膜、精卵质膜融合等几个过程。

(2)同种动物精卵结合的原因之一：同种动物精子、卵细胞表面有特异性相互识别的蛋白。

2．胚胎发育的过程受精卵：动物个体发育的起点，在输卵管内完成受精作用时已开始分裂卵裂球⎩⎪⎨⎪⎧ 组成：2～8个全能细胞特点：卵裂球细胞数目增加，每个细胞的体积逐渐减少囊胚⎩⎪⎨⎪⎧ 组成⎩⎪⎨⎪⎧ ①内细胞团：将来能发育成动物的所有组织和器官②滋养层：将来发育成胚胎的附属结构或胚外结构特点：细胞开始出现分化原肠胚⎩⎪⎨⎪⎧ 组成：外胚层、中胚层、内胚层特点：胚层分化3．胚胎工程的概念(1)含义：在胚胎发育过程中进行的胚胎操作技术。

(2)技术：主要包括体外受精、胚胎体外培养、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等。

(3)研究对象：主要限定于高等脊椎动物，特别是哺乳动物。

4．体外受精和胚胎体外培养(1)精子的采集及获能：从附睾中取出成熟的精子，放入培养液中培养，使其达到获能状态。

(2)卵细胞的采集：最常用的方法是卵巢经超数排卵处理后，用穿刺针吸取卵泡液，取出卵母细胞，然后在体外进行人工培养，促进其成熟。

(3)受精：获能的精子和成熟后的卵细胞在体外合适的环境下共同培养一段时间，便可受精。

(4)受精后形成的受精卵需经早期发育培养，才能完成植入或着床，通常移植的最适宜时期是发育到8细胞以上的胚胎。

(5)胚胎体外培养①早期胚胎在人工创造的环境中的发育。

②胚胎不同发育时期需要不同成分的培养液，尚无从受精卵到新生儿的全体外胚胎培养技术。

思考讨论1．填写早期胚胎发育的过程示意图，并分析2．以下图表示体外受精过程的一个流程图，据图思考以下问题：(1)体外受精的过程主要包括卵细胞的采集和培养、精子的采集和获能及受精等几个步骤。

(2)体外采集小鼠的卵子常用超数排卵处理法。

菌种分离4种常用方法介绍

菌种分离4种常用方法介绍1、纯种分离从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。

纯种分离的目的是将目的菌从混杂的微生物中分离出来，获得纯培养如果样品没有经增殖培养而直接进行分离，那么要得到具有某一特性的纯种，就更该细致、谨慎的操作。

2、纯种分离的常用方法有4种：倾注平板分离法、涂布平板分离法、平板划线分离法和组织分离法。

（1）倾注平板分离法：培养后，在培养基内部及表面形成单菌落。

倾注平板法:将无自生理盐水稀释后的样品加入无茵培养基混合均匀。

待凝固后倒置培养，内部及表面形成单自落。

（2）涂布平板分离法：培养后，在培养基表面形成单菌落。

因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途：一般多用于菌种的纯化；优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；缺点：不能计数；控制每个平板中微生物的菌落数在一定的范围可获得理想的分离效果，对于细菌和酵母，以每平板10~200菌落为佳，对于丝状菌，则应控制每平板菌落数30~50或更少。

如果分离菌丝呈蔓延性生长的丝状菌如根霉、毛霉等，则可以在培养基中添加0.1%左右的去氧胆酸钠（去氧胆酸钠在低PH下灭菌过程中易形成絮状沉淀，可以通过分别灭菌、倾注平板前混合的方法避免）或山梨糖（在察氏培养基中加山梨糖0.1%，蔗糖0.01%），这样可防止菌丝蔓延，便于挑取。

3、平板划线分离法：能达到纯种分离的目的。

经培养后会得到呈分散状态的单菌落纯培养。

最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

骨骼肌成纤维细胞分离培养

骨骼肌成纤维细胞分离培养
骨骼肌成纤维细胞（skeletal muscle fibroblasts）的分离和
培养是一种常用的实验技术，用于研究骨骼肌相关的生物学过程以及
肌肉疾病等。

以下是骨骼肌成纤维细胞分离培养的一般步骤：
1.准备离体骨骼肌组织。

从小鼠或人的骨骼肌中取出组织，最好是新鲜组织以确保细胞的活力。

2.组织消化。

将骨骼肌组织切成小块，用胶原酶或胰蛋白酶等消化酶进行消化，使细胞从组织中释放出来。

3.细胞筛选。

通过过筛网或离心的方式将消化后的细胞悬浮液筛选，去除大部分的纤维束和其他细胞类型。

4.细胞培养。

将筛选后的细胞悬浮液转移到培养皿中，添加含有合适培养基和补充物的培养液，将培养皿放置在适当的培养箱中。

5.培养条件。

骨骼肌成纤维细胞通常在37°C的孵育箱中，与5% CO2的空气保持湿润的环境中培养。

6.细胞生长和传代。

骨骼肌成纤维细胞会在培养皿中黏附并开始增殖。

当细胞达到一定密度时，可以进行传代，将细胞分离并分散到
新的培养皿中。

需要注意的是，分离和培养骨骼肌成纤维细胞需要一定的实验技巧和设备，以保证细胞的存活和生长。

同时，细胞的培养基选择和培
养条件的控制也对细胞的生长和功能有重要影响。

因此，在进行这项
技术时，需要按照具体实验要求和相关文献中的方法进行操作。

大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法

大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。

一、实验材料准备1. 动物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。

2. 试剂PBS、培养液(Hyclone的低糖DMEM，含Hyclone的10%新生牛血清、100 U/ml 青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶(含EDTA，GIBCO)，碘酒和酒精绵球。

3. 器械眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25 cm2塑料培养瓶(Costar)。

二、具体操作1. 明胶包被培养瓶过夜(准备2-3个)，取出明胶，用2 ml培养液冲洗培养瓶一遍，置于超净台中。

2. 解剖取肺：将乳鼠在酒精中浸泡后取出，转移至超净台上的玻璃培养皿中，用碘酒消毒胸部皮肤，再用酒精棉球脱碘。

左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。

用眼科镊取出肺，置于盛有PBS(含有200U/ml青链霉素)的玻璃平皿中，冲洗去血。

3. 用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科剪剪去肺门处的支气管和血管，再用含有双抗的PBS冲洗1遍。

4. 用眼科弯剪将肺组织剪碎成1 mm3大小，加入含有双抗的PBS，将肺组织块吹打开，静置15 min后，更换新的PBS。

5. 用200 ul微量加样器(最好是超净台中专用的，临用时用酒精绵球好好擦拭枪柄)取200 ul加样枪头一个，剪去尖，在酒精灯上用火焰烧弯。

用枪头吸取组织块接种于培养瓶中，每瓶20-25块左右，每小块间距0.5 cm左右。

组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内加入2 ml左右的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2-4 h后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。

动物组织细胞分离方法

动物组织细胞分离方法包括以下步骤:
准备材料:需要使用动物组织样本、培养皿、吸管、酒精等。

预处理:将组织样本放在培养皿中，用吸管吸取适量生理盐水，用吸管轻轻拍打组织样本，使其细胞分散。

离心:将处理好的组织样本放入离心管中，加入适量生理盐水，进行高速离心，转速一般为3000-5000转/分钟，离心时间一般为10-20分钟，直到组织样本分离成单个细胞。

收集细胞:将离心后的细胞倒入培养皿中，加入培养基，进行培养。

细胞分离:将培养好的细胞分离，可以使用微孔滤器过滤或离心分离等方法。

总结:动物组织细胞分离方法包括预处理、离心、收集细胞和细胞分离等步骤，其中离心是最常用的方法，可以使细胞分离并培养。

成纤维细胞分离方法

胰酶消化法1一、取得小鼠胚胎1. 性成熟母小鼠与种公鼠按1公（♂）:2母（♀）比例合笼。

2. 每天早上观察母小鼠阴道口。

有乳白色或蛋黄色冻胶状物(阴道栓)即确定为怀孕。

见栓当天上午定为怀孕的0.5d。

3. 取怀孕12.5～14.5 d母鼠，断颈处死，无菌条件下暴露子宫4. 用镊子提起近子宫颈端，分离子宫系膜，剪断子宫角。

5. 取出整个子宫，置于有PBS的平皿内。

用PBS洗涤三次，弃除表面残余血迹。

6. 沿子宫系膜侧剪开子宫，取出带有胎膜的胚胎，置于另一盛有PBS的平皿内，充分洗涤，弃除表面红细胞。

7. 用小镊子撕破胎膜，取出胎鼠，弃除胎膜，用PBS洗涤三次。

8. 去除胚胎头部、内脏和四肢，将躯干部置于另一盛有PBS的平皿内，用PBS 至少洗涤三次，充分弃除红细胞。

二、取得小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）1. 用无菌眼科小剪刀或刮胡刀片将鼠胚躯干剪(切)成1mm3以下的碎块，吸置于离心管内。

2. 加适量胰酶，将离心管置于培养箱中10-20分钟3. 取出离心管，反复吹打，加足量培养液终止消化。

4. 离心1000转，5分钟。

5. 弃掉上清，加适量培养液，反复吹打20次。

6. 分装到T75中，一般每2个胚胎可以制成一个T75的原代细胞。

7. 置37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱培养。

8. 待细胞长3-7天细胞互相重叠爬满整个培养瓶底时即可1：3-1：6传代。

9. 吸弃培养液上清。

10. PBS（不含钙镁）冲洗两次。

11. 加0.125%胰酶-0.02EDT消化。

12. 在显微镜下观察，当少量细胞漂浮，贴壁的细胞层出现裂隙时，用移液管吹打冲洗瓶底5-6次。

13. 即刻加MEF培养液终止消化。

14. 1000转，5分钟离心。

吸弃上清。

15. 加足培养液，吹打制成单细胞悬液，分装到各T75中。

完成传代。

16. 原代细胞中还有少量组织块未被充分消化，在以后的每次传代过程中要尽量制成单细胞悬液，组织块会逐渐消失。

17. 原代细胞中混有一些杂细胞，一般传到第3代时，杂细胞逐渐减少。

畜牧学考试资料

一、名词解释(每小题2分,共计10分)1、生殖激素直接作用于生殖活动，并以调节生殖过程为其主要生理功能的激素。

2、蛋白能量比1kg混合料中含有的粗蛋白质的克数与其中含有的消化能（家禽为代谢能）的兆焦耳（MJ）数之比。

3、浓缩饲料是指非草食动物使用的由蛋白质饲料、矿物质饲料和添加剂预混料按一定比例配制的均匀混合物。

4、专门化品种具有一种主要生产用途的品种5．短期优饲指对体况较差的母猪在配种前7-14天提高营养水平。

6．动物标准化生产是严格按照国家标准、行业标准（或地方标准）规定的产地环境质量标准、产品质量标准和生产技术规范，组织实施的生产过程。

7．种公猪已参加配种并有生产成绩的公猪。

8、重复配种(双重配种)在母猪的一个发情期内，用同一头公猪先后配种2次，一般在母猪接受公猪爬跨后（即发情开始后20-30小时）即进行第一次配种，间隔12-18小时再进行第二次配种。

9．全进全出将一栋圈舍内的所有饲养动物同时转进或转出，这样可有效切断疫病的传播途径，防止病原微生物在群体中形成连续感染和交叉感染。

10．高温育雏指在１～２周龄采用比常规育雏温度高２℃左右的给温规定。

11．杂优猪由杂种品系间杂交而产生商品猪。

12、人工授精是利用器械采集雄性动物的精液，经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物的生殖道内，以代替自然交配而繁殖后代的一种技术。

13、限制性氨基酸（必需AA）指一定饲料或饲粮所含必需氨基酸的量与动物所需的蛋白质必需氨基酸的量相比，比值偏低的氨基酸。

由于这些氨基酸的不足，限制了动物对其他必需和非必需氨基酸的利用。

其中比值最低的称第一限制性氨基酸，以后依次为第二、第三……限制性氨基酸。

14、添加剂预混料指由一种或多种饲料添加剂与载体或稀释剂按一定比例配制的均匀混合物。

添加剂预混料在配合饲料中所占比例很小，但它是构成配合饲料的精华部分，是配合饲料的核心。

添加剂预混料是一种饲料半成品，不能直接饲喂。

15、杂种优势指不同品种、品系间杂交产生的杂种，在生活力、生长势和生产性能方面在一定程度上优于两个亲本纯繁群体的现象。

克隆技术及其应用

科技与社会克隆技术及其应用Ξ陈大元(中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室　北京　100080)摘要　“克隆”的含义是无性繁殖,即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系,这个细胞系中每个细胞的基因彼此是相同的。

动物克隆,就是指通过无性繁殖由一个细胞产生一个和亲代遗传性状一致,形态非常相像的动物。

随着动物克隆研究的发展、克隆技术将广泛应用于医学、畜牧业和濒危动物保护等领域。

关键词　克隆,动物,胚胎细胞,体细胞 “克隆”是“clone ”的音译,其含义是无性繁殖,即由同一个祖先细胞分裂繁殖而成的纯细胞系,该细胞系中每个细胞的基因彼此是相同的。

动物克隆,就是指通过无性繁殖由一个细胞产生一个和亲代遗传性状一致、形态非常相像的动物。

科学家们很早就开始了动物克隆的研究。

早在1938年,德国胚胎学家S pemann 即提出“奇异的实验”的设想。

1952年,英国科学家Briggs 和K ing 首次报道了蛙的核移植研究。

1962年,英国剑桥大学的G urd on 获得了成年蛙。

我国已故科学家童第周教授在20世纪60—70年代曾用囊胚细胞进行鱼类细胞核移植工作,获得属间和种间移核鱼,使我国鱼类核移植研究居世界领先水平。

早期的动物克隆研究仅限于两栖类和鱼类,直到20世纪80年代,核移植克隆技术才开始应用于哺乳动物。

根据供核细胞的不同,可将动物克隆研究分为三个阶段:1　胚胎细胞克隆阶段1981年,I llmensee 和H oppe 报道了他们用小鼠的正常囊胚或孤雌活化囊胚的内细胞团细胞作为核供体,直接注入去掉雌雄原核的受精卵胞质中,重构胚体外发育到桑葚胚或囊胚后移植寄母子宫,获得克隆小鼠,这是第一次用胚胎细胞对哺乳类进行核移植获得成功。

1983年,美国科学家利用核移植技术和细胞融合方法获得了克隆小鼠。

1986年,英国的W illadsen 用绵羊的8—16细胞阶段的胚胎细胞作为供体进行核移植,首次应用电融合的方法克隆出一只小羊。

牛睾丸原代细胞的培养技术与大容量批量冻存试验

ＥＡ，．胰蛋白酶＋００ＥＴＡ以及２５ＤＴ５０．２／Ｄ９５．
苗的牛睾丸约为７０万对，牛的产仔具有相对严格但的季节性，同一个牛场每天的睾丸产量是极其有且限的。这给疫苗生产厂家批量收集睾丸以及调剂生产周期等方面带来了困难。另外，常不断的从外经
牛睾丸原代细胞是目前生产细胞型猪瘟弱毒疫苗的最主要细胞源。全国每年用于生产猪瘟弱毒疫
１３１试验设计选择３对牛睾丸作为试验对象，．．分别用含有ＨａｋＳ液的２５胰蛋白酶＋００ｎ．．２４，ｏ
培养液样品，血球计数板计数。
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中国兽医杂志２１０２年（４卷）１第８第期
ＣｉｅｅｏｒａｏｔｒａｙＭｅｉｎｈｎｓｕｎ１ｆＶｅｅｉｒｄｃｅＪｎｉ
２１０河南信阳中小型猪场大肠杆菌病０年血清型调查报告
猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的仔猪
冰箱。
的一组肠道传染性疾病，见的有仔猪黄痢、猪白常仔
痢和仔猪水肿３种。以发生肠炎、肠毒血症为特征．主要发生在Ｏ０日龄的仔猪。大肠杆菌病属于条～７件性致病菌，当环境因素恶劣或机体抵抗力下降时，容易引发该病的发生，其是冬季，气寒冷，温尤天气剧变，保温不良，空气流通不畅，更易引发此病，造成新生仔猪大批死亡或生长发育不良，重影响养猪严业的发展，养猪户造成巨大的经济损失。２１给００年２月到１１月期间，我们对信阳地区存栏母猪在１００

细胞学知识

导语：细胞学说是施莱登和施旺所提出：一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物体的基本单位。

以下是小编为大家整理分享的细胞生物学知识点总结，欢迎阅读参考。

细胞通讯的方式（1）细胞通过分泌化学信号进行细胞间通讯，这是多细胞生物普遍采用的通讯方式。

（2）细胞间接触依赖*的通讯，指细胞间直接接触，通过与质膜结合的信号分子影响其它细胞。

（3）动物相邻细胞间形成间隙连接以及植物细胞间通过胞间连丝使细胞间相互沟通，通过交换小分子来实现代谢耦联或电耦联。

细胞分泌化学信号可长距离或短距离发挥作用，其作用方式分为：（1）内分泌，由内分泌细胞分泌信号分子到血液中，通过血液循环运送到体内各个部位，作用于靶细胞。

（2）旁分泌，细胞通过分泌局部化学介质到细胞外液中，经过局部扩散作用于邻近靶细胞。

在多细胞生物中调节发育的许多生长因子往往是通过旁分泌起作用的。

此外，旁分泌方式对创伤或感染组织刺激细胞增殖以恢复功能也具有重要意义。

（3）自分泌，细胞对自身分泌的物质产生反应。

自分泌信号常存在于病理条件下，如肿细胞合成并释放生长因子刺激自身，导致肿瘤细胞的持续增殖。

（4）通过化学突触传递神经信号，当神经元接受刺激后，神经信号以动作电位的形式沿轴突快速传递至神经末梢，电压门控的ca2+通道将电信号转换为化学信号。

通过胞外信号介导的细胞通讯步骤（1）产生信号的细胞合成并释放信号分子。

（2）运送信号分子至靶细胞。

（3）信号分子与靶细胞受体特异*结合并导致受体激活。

（4）活化受体启动胞内一种或多种信号转导途径。

（5）引发细胞功能、代谢或发育的改变。

（6）信号的解除并导致细胞反应终止。

核被膜所具有的功能一方面，核被膜构成了核、质之间的天然选择*屏障，将细胞分成核与质两大结构与功能区域，使得dna复制、rna转录与加工在核内进行，而蛋白质翻译则局限在细胞质中。

这样既避免了核质问彼此相互干扰，使细胞的生命活动秩序更加井然，同时还能保护核内的dna分子免受损伤。

Hartley豚鼠耳朵成纤维细胞分离培养与鉴定分析

ｃｌｅａｒａｎｄｉｎｇｏｏｄｓｈａｐｅ. Ｔｈｅｍｙｃｏｐｌａｓｍａｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓｎｅｇａｔｉｖｅ. Ｔｈｅｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎｖｉｍｅｎ￣
ｔｉｎ. ＴｈｅｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｗａｓＳ￣ｓｈａｐｅｄꎬ ｗｈｉｃｈｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｒｕｌｅｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｃｅｌｌｓ
摘要: 本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法ꎬ为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞ꎮ 首先
采用０. ０５％Ｔｒｙｐｓｉｎ￣ＥＤＴＡ和ＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅＩＶ两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化ꎻ然后对获取的细胞
进行体外培养和形态学观察ꎬ支原体检测ꎬＶｉｍｅｎｔｉｎ蛋白免疫荧光鉴定ꎬ测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间ꎻ
续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础ꎮ
关键词: Ｈａｒｔｌｅｙ豚鼠ꎻ 耳朵ꎻ 成纤维细胞ꎻ 生物学特性
中图分类号: Ｒ￣３３２
文献标志码: Ａ
ＤＯＩ:１０. ３９６９ / ｊ. ｉｓｓｎ. １００７￣７１４６. ２０１９. ０３. ００６
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｎｖｉｔｒｏＣｕｌｔｕｒｅ
用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率ꎬ核型鉴定检测病毒对核型的影响ꎮ 分离的
豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞ꎬ消化后２ ~ ３ｈ即大部分贴壁并基本完全伸展ꎬ细胞呈梭形或多角形ꎬ胞
浆饱满ꎬ立体感强ꎬ细胞核清晰形态良好ꎬ支原体检测阴性ꎮ 细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Ｖｉｍｅｎｔｉｎꎮ 生长曲

G6P[1]型牛轮状病毒的分离培养及鉴定

G6P[1]型牛轮状病毒的分离培养及鉴定王铭月;张锦华;章青;孔翔羽;王宏;孙晓曼;李丹地;庞立丽;段招军【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2024(40)2【摘要】目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。

方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型。

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化。

绘制病毒生长动力学曲线。

结果分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL。

VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒。

PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化。

电镜检测到典型的轮状病毒颗粒。

病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6 h已经开始复制。

结论本研究成功分离到G6P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考。

【总页数】6页(P134-139)【作者】王铭月;张锦华;章青;孔翔羽;王宏;孙晓曼;李丹地;庞立丽;段招军【作者单位】甘肃中医药大学公共卫生学院;传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R373.2【相关文献】1.我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G10P[11]型牛轮状病毒的分离鉴定2.一株G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定与全基因组序列分析3.牛A群轮状病毒G10型XJ-2022株分离鉴定及基因型分析4.牛轮状病毒HSX-21内蒙株的分离鉴定与基因型分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。