T细胞的分化培养、染色
南开大学20秋《微生物学》在线作业-1(参考答案)
1.溶原性细菌是指()。
A.带有毒性噬菌体的细菌B.带有原噬菌体基因组的细菌C.带有R因子的细菌D.带有F因子的细菌答案：B2.芽孢是芽孢杆菌在不良环境条件下形成的特殊结构，属于()。
A.无性孢子B.繁殖体C.休眠体D.营养体答案：C3.细菌在接合转移中在菌体间转移的是()。
A.双链环状DNAB.单链环状DNAC.双链线状DNAD.单链线状DNA答案：D4.下列关于病毒核酸的描述，错误的是()。
A.遗传物质B.决定病毒的感染性C.每一病毒只有一种类型的核酸D.-ssRNA可作为mRNAE.核酸可分节段答案：D5.大肠杆菌的鞭毛类型属于()。
A.单端极生鞭毛B.两端极生鞭毛C.周生鞭毛D.丛生鞭毛答案：C6.人类中引起鹅口疮、阴道炎或肺炎等疾病的真菌是()。
A.新型隐球酵母B.烟曲霉C.白假丝酵母D.匐枝根霉答案：C7.在五界分类系统中，真菌放在称为()的界中。
A.原生动物B.真菌C.藻类D.原核生物答案：B8.当进行糖酵解化学反应时，()。
A.糖类转变为蛋白质B.酶不起作用C.从二氧化碳分子产生糖类分子D.从一个单个葡萄糖分子产生两个丙酮酸分子答案：D9.抑制噬菌体进入裂解周期的蛋白是()。
A.CIB.CroC.N蛋白D.Q蛋白答案：A10.光能微生物的能量来源于()。
A.氧化还原反应B.日光C.ATP分子D.乙酰CoA分子答案：B11.需要载体但不能进行逆浓度运输的是()。
A.主动运输B.扩散C.促进扩散D.基团转位答案：C12.化能自养微生物能量产生的方式是()。
A.氧化磷酸化B.底物水平磷酸化C.光合磷酸化D.无氧呼吸答案：A13.主要由节肢动物如虱、蜱、螨等进行传播的原核微生物是()。
A.衣原体B.支原体C.立克次氏体D.螺旋体答案：C14.在原核微生物中，具有固定CO2功能的结构是()。
A.羧酶体B.类囊体C.载色体D.迂回体答案：A15.化能自养微生物的能量来源于()。
A.有机物B.日光C.氧化态无机化合物D.还原态无机化合物答案：D16.细菌更容易形成芽胞的条件是()。
免疫组化双重染色技术在胸腺肿瘤PD-L1检测中的应用
-1032-临床与实验病理学杂志J Cliv Exp Patinl2020Dec；36(8)网络出版时间：2020-8-258：46网络出版地址：https://kus.c/di.ue/kcms/2e4il/34.1073.R.62221025.1457.025.htul免疫组化双重染色技术在胸腺肿瘤PD-P1检测中的应用邢杰，赵继开，丁闻洁，韩昱晨关键词:胸腺瘤;PDW/PD-L-;免疫组化双重染色中图分类号:R734.5文献标志码：B文章编号：008-7366（2222）10-1435-03doi:44.13315/j.c/di.cjcep.7020.10.226PDW/LD-CI通路已经在多种肿瘤中进行了广泛深入的研究，如黑色素瘤、结肠癌、肺癌、乳腺癌等，并且PDN/PD-L8表达可能与恶性肿瘤的临床病理特征或不良预后相关J T。
近年来国内外关于胸腺瘤PDN/PD-C-的研究较少，但均表明PD-CI表达与胸腺肿瘤（包括胸腺瘤和胸腺癌）的组织学类型、MasaWs分期以及疗效相关，并且能够提示肿瘤的恶性程度及预后J「5。
常规PD-C8检测方法为免疫组化，但PD-C8在正常的胸腺上皮细胞及淋巴细胞中也有表达J-6,可能使得免疫组化染色结果判读困难，为解决这 一问题，作者尝试采用P/3+PDW-免疫组化双重染色法对胸腺肿瘤进行染色，由于p/3广泛表达于上皮源性肿瘤细胞胞核,p63+PD-C I免疫组化双重染色法能够更加清楚的判断胸腺源性上皮细胞的PD-C8阳性率。
1材料与方法14材料收集上海市胸科医院病理科存档的胸腺肿瘤手 术切除样本64例，其中B1、B2及B3型胸腺瘤各I5例，胸腺癌-5例，每例胸腺肿瘤连续切片3张，分别用于HE染色、PD-C8免疫组化染色、p63+PD-C I免疫组化双重染色。
14染色方法标本均经I0%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，免疫组化染色采用Mulbmer法，染色平台为Dabu Link48全自动免疫组化染色平台,一抗PD-CI（22C3,5 :50,Dako公司）、p63（-:300,上海长岛生物公司、，其他试剂均为Dako AuWstainr Link48全自动免疫组化染色平台专用试剂,购自安捷伦科技（上海）公司。
t细胞效应检测方法
t细胞效应检测方法标题：深入了解T细胞效应检测方法T细胞是人体免疫系统的重要组成部分，负责识别并消灭感染和异常细胞。
在研究和临床实践中，准确检测T细胞的效应功能对于评估免疫状态和疾病进展至关重要。
本文将详细介绍几种常见的T细胞效应检测方法。
一、T细胞增殖实验T细胞增殖实验是检测T细胞功能的一种基础方法。
该实验通常通过以下步骤进行：1.收集待检测的T细胞样本。
2.将T细胞与特异性抗原或刺激剂共同培养。
3.通过细胞计数、放射性标记物摄取或其他检测手段评估T细胞的增殖情况。
二、细胞因子释放实验细胞因子是T细胞活化后分泌的免疫调节蛋白。
通过检测细胞因子的释放，可以评估T细胞的效应功能。
常见的细胞因子释放实验有以下两种：1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：通过特异性抗体捕获细胞因子，然后进行定量分析。
2.流式细胞术：利用荧光标记的抗体检测细胞因子分泌情况。
三、T细胞杀伤实验T细胞杀伤实验是评估T细胞对靶细胞杀伤能力的方法。
常见的方法有：1.51Cr释放实验：将放射性同位素标记的靶细胞与T细胞共培养，通过测定释放的放射性同位素量来评估T细胞的杀伤能力。
2.非放射性细胞毒性实验：利用荧光染料、钙离子指示剂等代替放射性同位素，评估T细胞对靶细胞的杀伤作用。
四、流式细胞术流式细胞术是一种高精度的细胞检测技术，可以评估T细胞的多种功能，如：1.表型分析：通过检测细胞表面的标记物，了解T细胞的亚群分布和活化状态。
2.细胞内细胞因子染色：检测T细胞内特定细胞因子的表达情况。
五、免疫组化技术免疫组化技术是检测组织中T细胞分布和功能的一种方法。
通过特异性抗体与T细胞表面或细胞内分子结合，然后利用染色剂显色，观察T细胞在组织中的分布和活化状态。
总结：T细胞效应检测方法多种多样，研究人员可以根据实验需求和条件选择合适的方法。
TCR的研究分析报告
TCR的研究分析报告一、引言T细胞受体（TCR）是T细胞识别抗原并被激活的关键分子。
TCR在T 细胞的发育、活化、增殖和凋亡等过程中起着至关重要的作用。
对TCR进行深入研究，有助于我们更深入地理解T细胞的生物学特性，并对免疫疾病的治疗和预防提供理论支持。
二、TCR的结构与功能TCR是由α和β两条多肽链组成的复合体，其主要功能是识别并结合抗原提呈的肽段。
当TCR与抗原肽段结合后，可以触发一系列的信号转导通路，最终导致T细胞的活化、增殖和分化。
三、TCR的研究方法目前，用于研究TCR的主要方法包括：基因组学、蛋白质组学、结构生物学、生物信息学等。
通过这些方法，我们可以了解TCR的结构与功能，以及其在免疫应答中的作用。
四、研究分析通过对大量文献的梳理，我们发现TCR的研究主要集中在以下几个方面：1）TCR的结构与功能关系；2）TCR在免疫应答中的调控机制；3）TCR在免疫疾病中的作用；4）基于TCR的免疫疗法开发。
在结构与功能关系方面，研究者们利用X射线晶体衍射和冷冻电镜等技术，解析了TCR的结构，并揭示了其与抗原肽段的结合模式。
这些发现有助于我们理解TCR的识别和结合抗原的机制，为基于TCR的药物设计和开发提供了理论基础。
在免疫应答的调控方面，研究者们通过基因敲除、转基因等技术，研究了TCR在T细胞活化、增殖、凋亡等过程中的作用。
这些研究揭示了TCR在免疫应答中的核心地位，以及其在调节免疫应答强度和持续时间方面的重要作用。
在免疫疾病中的作用方面，研究者们发现了一些与自身免疫性疾病、感染性疾病等相关的TCR突变。
这些发现为理解这些疾病的发病机制提供了新的视角，同时也为开发基于TCR的治疗方法提供了新的思路。
在基于TCR的免疫疗法开发方面，研究者们正在尝试利用TCR的特性，开发新的治疗方法。
例如，通过基因工程技术将TCR改造为能特异性识别肿瘤抗原的T细胞，用于治疗肿瘤；或者利用TCR的结构和功能特性，开发新的疫苗设计方法。
2024年高中生物试题精选
2024年高中生物试题精选学校：___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．如图是过敏原引起哮喘的示意图。
当外源性过敏原首次进入机体后，会使机体产生相应的浆细胞并分泌相应抗体，抗体可被吸附在肺组织中肥大细胞的表面，当该过敏原再一次进入机体后，可促使肥大细胞释放出组胺等各种过敏介质。
下列说法正确的是( )A.过敏反应有快慢之分，还有明显的遗传倾向和个体差异B.临床药物可以通过促进过敏介质的释放来治疗哮喘C.浆细胞识别过敏原后能够分泌特异性抗体D.哮喘是人体特异性免疫应答的一种正常生理现象2．如图所示为人体细胞间信息交流的常见模型，A和C分别表示某种物质，B为A的靶细胞。
下列有关叙述不正确的是( )A.若A为促甲状腺激素，则C可能会影响神经系统的发育和功能B.若A为神经递质，B为胰岛B细胞，则C分泌过程的调节方式为神经一体液调节C.若B为下丘脑神经内分泌细胞，C为抗利尿激素，则C调节水盐平衡方式为体液调节D.若C为肾上腺素且参与体温调节，则A可能是神经递质，B所在组织可能是反射弧效应器3．有诗云“鱼在在藻，依于其蒲”，其实水中除“藻”“蒲”外，还有色球蓝细菌、大肠杆菌等微生物。
下列说法正确的是( )A.诗中提及的“藻”“蒲”、大肠杆菌及支原体、衣原体都有细胞壁B.“藻”“蒲”和色球蓝细菌的染色体的主要成分是DNA和蛋白质C.上述生物都含细胞质、细胞膜、遗传物质，体现了细胞的多样性D.色球蓝细菌和“藻”“蒲”都含叶绿素，都能进行光合作用4．普通的肿瘤治疗——单克隆抗体（单抗）只能结合单一的抗原，无法有效地聚集于肿瘤组织处。
双特异性单克隆抗体（双抗）可以将抗肿瘤的药物直接导致靶细胞，通过靶向多个抗原发挥协同抗肿瘤作用。
基因工程制备双抗的原理是对传统单抗进行基因工程方面的改造，从而形成双特异性抗体。
利用杂交瘤细胞融合也可以制备双抗，先将每个杂交瘤细胞受抗原刺激产生单克隆抗体，然后将这两个杂交瘤细胞融合在一起，此融合的杂交瘤细胞能够重新随机组合“双亲”单抗肽段，从而产生双抗。
T细胞分化
T细胞分化1.断颈椎处死小鼠，70%酒精消毒，固定小鼠于操作台。
2.暴露、分离淋巴结（腹股沟LN、肠系膜LN、腋下LN等）和脾，放至装有C1640（PBS）的离心管中。
3.碾磨淋巴器官（cell strainer，40um），收集细胞悬液至50ml离心管（200目滤网过滤），1500rpm，5min。
4.弃上清，加1ml ACK buffer 重悬细胞沉淀，作用30-45sec，加15--20ml C1640（PBS）稀释，1500rpm，5min。
5.弃上清，800ul AutoMACS Buffer重悬，加100ul Biotin-Antibody Cocktail，混匀，至冰上10min。
6.加600ul AutoMACS Buffer，加200ul Anti-Biotin MicroBeads，混匀，至冰上15min。
7.加5ml AutoMACS Buffer稀释，1500rpm，5min。
8.弃上清，加3-5ml AutoMACS Buffer重悬，悬液200目滤网过滤，收集细胞悬液。
9.3-5ml AutoMACS Buffer预先冲洗柱子，细胞悬液过柱，滤液滤尽时加3ml C1640冲洗柱子，收集滤液至新离心管。
10.加10-20ml C1640（PBS）稀释悬液，1500rpm，5min。
11.600ul 0.5%BSA-PBS重悬沉淀。
12.分别取4份5ul细胞悬液至装有95ul的0.5%BSA-PBS流式试管中，分别做空白、Anti-CD4-percy5.5、Anti-CD4-APC和Anti-CD4-PE对照。
13.在流式细胞管染色Anti-CD4-percy5.5（1:200）、Anti-CD44-PE（1:300）和Anti-CD62L-APC（1:200），30min。
14.0.5%BSA-PBS稀释细胞悬液，1500rpm，5min。
15.弃上清，加3-4ml 0.5%BSA-PBS重悬。
t细胞研究方法
t细胞研究方法T细胞是免疫系统中起关键作用的细胞类型之一。
了解和研究T细胞的功能和特性对于疾病治疗和免疫疫苗开发非常重要。
本文将介绍一些常用的T细胞研究方法，以及如何进行这些实验。
首先，了解T细胞表面受体的表达是研究T细胞的第一步。
通过免疫荧光染色技术，研究人员可以使用特定的抗体来标记和分析T细胞的表面受体表达。
这样做可以帮助我们确定T细胞的类型和亚群。
例如，常用的抗体有CD4和CD8，可以区分辅助T细胞和细胞毒性T细胞。
其次，了解T细胞的活化和增殖对于研究其功能至关重要。
目前广泛使用的方法是刺激T细胞，例如通过与抗原或其他激活剂的结合来促使T细胞的活化。
然后，可以使用细胞增殖染色试剂来测量T细胞的增殖情况。
这些试剂会与细胞内DNA结合，可以通过检测DNA含量的变化来确定T细胞增殖的情况。
另外，了解T细胞的细胞因子产生也是研究T细胞功能的重要内容。
细胞因子是T细胞分泌的蛋白质分子，可以调节免疫反应。
通过使用酶联免疫吸附实验（ELISA）等技术，可以测量和分析T细胞分泌的不同细胞因子，如干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）等。
此外，了解T细胞的细胞毒性也是重要的研究内容之一。
通过使用细胞毒性测定方法，可以评估T细胞对肿瘤细胞或感染细胞的杀伤能力。
如细胞毒性测定试剂可以测量T细胞识别和杀伤靶细胞的能力。
在进行T细胞研究时，为确保结果的准确性和可重复性，还需要注意一些实验技巧。
首先，要选择合适的实验模型和细胞系，以保证实验的可靠性。
其次，细胞培养和实验条件要严格控制，包括细胞培养基的配制、培养温度和CO₂浓度等。
此外，数据分析和统计方法也很重要，要选择适当的统计学方法来评估实验结果的显著性和可靠性。
总之，研究T细胞的方法多种多样，需要综合应用多种实验技术。
通过充分了解T细胞的功能和特性，我们可以更好地理解和利用免疫系统，为疾病治疗和疫苗开发提供指导。
不断深入和完善T细胞研究方法将促进免疫学领域的发展，为人类健康做出更大贡献。
t细胞激活实验步骤
t细胞激活实验步骤
T细胞激活实验是用来研究T细胞受体（TCR）与抗原结合后的激活过程。
下面是一般的T细胞激活实验步骤：
1. T细胞的分离：采集小鼠或人类血液或组织，使用密度梯度离心法等方法分离出T 细胞。
2. T细胞培养：将分离得到的T细胞进行培养，在细胞培养培养基中添加适当浓度的白细胞介素-2（IL-2），促使T细胞的增殖和活化。
3. 抗原处理：选择合适的抗原，如蛋白质、多肽或细菌等，并根据实验要求进行处理，如对抗原进行特定的处理或标记。
4. 抗原呈递：将处理后的抗原加入到培养的T细胞中，使其与T细胞表面的TCR结合。
5. 活化标志物检测：在抗原处理后的一段时间内，检测T细胞的活化标志物，如细胞表面标志物的表达（如CD69、CD25），细胞内信号通路的激活（如细胞因子的分泌）等。
6. 细胞增殖检测：通过细胞计数、MTT法、CFSE染色等方法，检测T细胞的增殖情况。
7. 细胞因子检测：通过ELISA、流式细胞术等方法，检测细胞因子的产生和分泌情况。
8. 细胞信号通路检测：通过免疫印迹、实时荧光定量PCR等方法，检测T细胞活化后相关信号分子的表达和激活情况。
以上是一般的T细胞激活实验步骤，具体步骤的选择和操作可以根据实验的目的和要求进行调整和优化。
小鼠T细胞诱导实验_20131113_PMG
小鼠naive CD4+T细胞分离和Th细胞诱导分化实验小鼠naïve CD4+T细胞分离取6～8周雌性C57小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡1分钟，取出小鼠置于无菌皿上，取两侧腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结及两侧腹主动脉旁淋巴结，放入400目筛网上置于盛有1640培养液的培养皿中用研杵轻轻研压淋巴结，获细胞悬液。
CD4/CD62L/CD44/CD25抗体染色，采用流式分选得到CD4+CD62LhighCD44lowCD25−naïve CD4+T细胞。
流式抗体染色方案(optional)CD4-PerCP(Cat.No.553052);CD62L-PE(Cat.No.553151,551918);CD44-FITC(Cat.No.553133);CD25-APC(Cat.No.557192);小鼠Th细胞分化1.流式分选小鼠naïve CD4+T淋巴细胞(CD4+CD62LhighCD44lowCD25−);2.培养于anti-CD3(5µg/ml，Cat.No.553057)预包被的培养板中(4℃包被过夜)，加入可溶型anti-CD28(2µg/ml，Cat.No.553294)(96孔板1x105/孔；48孔板，5x105/孔)；3.Th细胞分化培养，加入下表所列细胞因子及抗体；表1小鼠Th细胞分化条件Cat.No.Th0Th1Th2Th17Treganti-CD35530575μg/ml5μg/ml5μg/ml5μg/ml5μg/mlanti-CD285532942μg/ml2μg/ml2μg/ml2μg/ml2μg/mlIL-25500694ng/ml4ng/ml4ng/mlIL-4550067100ng/mlIL-1255459210ng/mlTGF-β5ng/ml1ng/mlIL-6554582100ng/mlanti-IL-455443210μg/ml10μg/mlanti-IFN-γ55440810μg/ml10μg/mlanti-IL-1255447510μg/ml4.3天后，去除anti-CD3和anti-CD28抗体(细胞因子不变)，培养2天可获得小鼠Th细胞。
医学检验技术：T细胞增殖试验及其类型
医学检验技术：T细胞增殖试验及其类型
T细胞增殖试验的含义：
T细胞增殖试验又称T细胞转化试验。
T细胞在体外经某种物质刺激，细胞代谢和形态相继发生变化，在24～48h内细胞内蛋白质和核酸的合成增加，产生一系列增殖的变化，如细胞变大、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等，由淋巴细胞转变为淋巴母细胞。
因此，这种淋巴细胞增殖又称为淋巴细胞转化。
据此可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。
(1)非抗原性刺激物：如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陆(PWM)、脂多糖(LPS)，通称促有丝分裂原。
其中LPS刺激B细胞，PWM可刺激T和B类细胞，PHA和ConA刺激T 细胞增殖。
(2)抗原性刺激物：如结核菌素、葡萄球菌毒素、破伤风类毒素、链球菌激酶、肿瘤抗原、同种异型组织抗原等。
T细胞增殖试验的类型：
(1)T细胞增殖试验形态法：其原则是将外周血液或分离的单个细胞与适量的植物血凝素(PHA)混合，置37℃培养72h，取培养细胞作涂片染色镜检。
据细胞的大小、核与胞浆的比例、胞浆的染色性和核结构以及有无核仁等特征，分别计数淋巴母细胞、过渡性母细胞和核有丝分裂相以及成熟的小淋巴细胞，以前三者为转
化细胞，每份标本计数200个细胞，计算转化率。
(2)核素法：绝大多数外周血T细胞通常处于细胞周期的G0期，受特异性抗原或促有丝分裂原激活后，从G0期进入G1期，开始合成蛋白质、RNA和DNA前体物质等，为DNA复制准备物质基础，然后进入S期，细胞合成DNA量倍增，此时若在培养液中加入3H标记的TdR，后者掺入新合成的DNA中，据掺入的多少推测细胞增殖程度。
T细胞体外扩增培养
人T细胞分离与体外培养实验方案一．实验目的从人外周血中分离PBMCs，利用CD3和CD3/CD28免疫磁珠分离并扩增T细胞，用于慢病毒载体的感染。
二．实验过程1．人外周血单个核细胞的分离（每mL外周血大约可获得1×106个单个核细胞）⑴采血，稀释（外周血：稀释液=1：1）；⑵在离心管中加入人淋巴细胞分离液，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：2）；⑶20℃，440g，离心20-30min；⑷离心后轻轻吸取中间白膜层，移入另一试管中；⑸加入足量的稀释液充分洗涤，400g，离心5min，弃上清；⑹细胞沉淀加1640培养液重悬，即可用于T细胞的磁珠分选。
2．CD3+T细胞分选⑴适量的MACS缓冲液洗涤PBMCs（107/mL），300g，离心10min，去上清；⑵MACS缓冲液重悬PBMCs（80μL/107PBMCs），加入CD3免疫磁珠（20μL/107PBMCs），混匀，4℃孵育15min；⑶MACS缓冲液（1-2mL/107 cells）洗涤细胞1次，300g，离心10min，弃去上清；⑷500μL MACS缓冲液重悬细胞；⑸将MS分离柱放置于磁力架上，加入500μL MACS buffer预清洗分离柱；⑹将⑷步得到的细胞悬液加入预先洗涤过的MS分离柱，先流出的细胞为未标记的CD3-T细胞。
MACS缓冲液洗涤分离柱3次；⑺将分离柱从磁力架上取下，放入合适的管子内，加入1mL MACS缓冲液至分离柱内，洗脱液即为CD3+T细胞，细胞计数后，用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基重悬。
3．CD3+T细胞的激活和扩增⑴CD3/CD28免疫磁珠预先洗涤①涡旋30s以上重悬CD3/CD28免疫磁珠；②取需要量的CD3/CD28免疫磁珠加至一个新的管中；③加入与磁珠体积相等的缓冲液（至少1mL），混匀（涡旋5min或者颠倒混匀5min）；④将管子置于磁力架上1min，弃去上清液；⑤将管子从磁力架上取下，加入与第②步取出的磁珠体积相等的培养液重悬CD3/CD28免疫磁珠。
t细胞流式染色流程
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肠道t细胞研究方法
肠道t细胞研究方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：肠道T细胞是一类生存在肠道的免疫细胞，主要起着免疫监视和保护作用。
研究肠道T细胞对于深入了解免疫系统在肠道中的作用和调节机制具有重要意义。
由于肠道T细胞数量少、分布广泛且功能复杂，对其研究存在一定的困难。
研究肠道T细胞的方法也日益多样化和精细化。
一、细胞分离与纯化肠道T细胞研究的第一步是将肠道组织中的T细胞分离、纯化出来。
常用的方法包括：1. 胶原酶消化法：将肠道组织经过消化处理，使细胞松解，再通过离心等操作得到T细胞。
2. 密度梯度离心法：利用不同质量的梯度溶液，使细胞按密度不同沉降，从而分离出T细胞。
3.磁珠分选法：利用表面标记的磁珠，结合特定的抗体，通过磁场把T细胞与其他细胞分开。
这些方法可以根据实验需求选择合适的方式进行T 细胞的分离和纯化。
二、表面标记与检测肠道T细胞的类型和功能不同，表面标记也不尽相同，因此必须通过特定的抗体对肠道T细胞进行检测和表征。
目前常用的表面标记包括CD3、CD4、CD8、CD45等多种标记，通过流式细胞术或免疫荧光染色技术可以对肠道T细胞进行标记和检测，进而分析其表型和功能。
三、功能评估了解肠道T细胞的功能状态是肠道T细胞研究的重要内容之一。
常用的方法包括：1. 流式细胞术：通过检测T细胞分泌的细胞因子（如IFN-γ、IL-17等）或使用功能性标记（如CD107a等）来评估其功能状态。
2. T淋巴细胞增殖试验：通过检测T细胞在特定刺激条件下的增殖能力来评估其功能。
四、免疫组织化学肠道T细胞不仅在肠黏膜中存在，还可能分布在淋巴结、脾脏等淋巴器官中。
通过免疫组织化学技术，可以对肠道T细胞在组织中的定位和表达情况进行研究。
这包括对组织切片的染色、显微镜观察等操作，可以直观地了解肠道T细胞在组织中的分布情况。
五、基因组和转录组分析现代生物技术的发展为肠道T细胞研究提供了更多的手段。
通过基因组和转录组分析，可以深入了解肠道T细胞的基因表达水平和转录调控机制，揭示其在肠道免疫调节中的作用和调控网络。
小鼠t细胞表面标志__概述说明以及解释_
小鼠t细胞表面标志概述说明以及解释1. 引言1.1 概述T细胞是免疫系统中非常重要的一种淋巴细胞，能够对抗感染和诱发免疫反应。
T细胞在机体免疫应答的调节和控制中起到了关键作用。
小鼠作为实验动物模型，在研究免疫系统功能和相关疾病机制方面具有广泛应用价值。
在T细胞表面，有很多特定的蛋白质或分子被称为表面标志，它们可以在免疫系统中识别和区分不同类型的T细胞，并参与调控T细胞的活化、增殖、分化等过程。
因此，了解小鼠T细胞表面标志的表达及其功能对于深入理解小鼠免疫系统和相关疾病具有重要意义。
1.2 文章结构本文将从以下几个方面来介绍小鼠T细胞表面标志：首先，介绍T细胞的基本概念，包括其分类、结构以及功能；其次，阐述小鼠T细胞表面标志的重要性和作用机制；然后，列举一些常见的小鼠T细胞表面标志及其功能进行详细讨论；接着，介绍了表达小鼠T细胞表面标志的方法和技术，包括流式细胞术（流式细胞仪）、免疫组化染色法以及免疫荧光染色法；最后，总结了小鼠T细胞表面标志与免疫系统相关疾病的关联性研究进展，并提出了未来的研究展望。
1.3 目的本文旨在全面介绍小鼠T细胞表面标志及其功能，并探讨这些标志与免疫系统相关疾病之间的关系。
通过对小鼠T细胞表面标志的深入了解，有助于加深我们对小鼠免疫系统的理解，并为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。
2. 小鼠T细胞表面标志2.1 T细胞基本概念T细胞是一类免疫系统中的重要细胞，主要负责调节和协调机体的免疫反应。
作为一种特殊类型的白血球，T细胞可以通过其表面上不同的标志物来实现对宿主免疫系统的调控。
小鼠作为实验动物之一，其T细胞表面标志在免疫学领域中受到广泛关注。
2.2 T细胞表面标志的重要性小鼠T细胞表面标志具有重要的生物学功能和临床意义。
这些标志物能够帮助我们认识和分辨不同类型和亚群的T细胞，并对其功能进行描述和区分。
通过研究T细胞表面标志，我们可以深入了解小鼠免疫系统中T细胞的分布、数量、活性状态以及与其他免疫组分之间的相互作用，从而推动疾病机制和治疗方法等方面的研究进展。
T细胞培养
主要有分离淋巴细胞、补液、装袋、分袋、收获等步骤。
细胞培养日程如下：第一天分离淋巴细胞第四天补液50ml第五天补液140ml第六天装袋第十天第一次分袋第十四天第一次收获第二次分袋第二十天第二次收获第三次分袋第二十六天第三次收获1 分离淋巴细胞以100ml外周血为例，如血量不同，可按此操作规程做相应调整。
①患者100ml外周血，室温1200rpm离心10分钟（刹车ON）。
将上层血浆转入离心管-40℃保存。
②用生理盐水1：1稀释血细胞沉淀(生理盐水：原全血体积=1：1)，用移液管吹打混匀后小心加到用50ml离心管分装的15ml Ficoll层上，使分层保持清晰，每管约35ml。
室温2000rpm离心20分钟（刹车OFF）。
③尽量吸尽两液面交接处的细胞层，均分到3个干净的50ml离心管中，用RPMI-1640液补充至50ml混匀，室温1600rpm离心10分钟（刹车ON）。
④倾去上清，将各离心管细胞沉淀振荡开后用10mlRPMI-1640悬浮合并为一管，混匀后取10μl与Turk工作液（1:10）混合，避光反应15min后再加10μl胎盘兰10倍稀释计数。
剩余液体再加RPMI-1640至50ml，室温1200rpm离心10分钟（刹车ON）。
⑤倾去上清，将细胞沉淀振荡后加RPMI-1640培养液50ml重悬，室温1000rpm离心10分钟（刹车ON）。
⑥弃上清，振开管底细胞沉淀后用细胞培养基50ml重悬细胞。
取一新的细胞培养瓶，用移液管吸干瓶中的缓冲液。
将细胞加到培养瓶中，同时加入800μgSM蛋白。
将内有细胞悬液的培养瓶放入CO2培养箱，拧松瓶盖，查看培养箱状态，确保正常。
温度：37±℃、湿度：大于90％、CO2浓度：7.5±0.5％⑦计算细胞密度及细胞数量细胞浓度(个/ml)=N/4×稀释总倍数×104细胞数量(个)=细胞浓度(个/ml)×细胞悬液总体积(ml)起始培养细胞数量应控制在2-3×107以上。
T细胞研究的流式检测方案
Target
CD4 CD25 CD127
Format
FITC PE-Cy7 Alexa Fluor 647
Human Treg Sorting Kit
Cat no: 560753 10 Tests
Target
Format
CD4
PerCP-Cy5.5
CD25 CD127 CD45RA*
PE
Alexa Fluor 647
Blood. 2007;110:1225-1232.
Tregs新标记:CD152
CD152 (CTLA-4)：抑制活性Marker，维持Treg细胞保持正常 的抑制活性, 对于维持自身免疫耐受,保持免疫自稳的非常重要 的标志。
Tregs功能性标记: SATB1
• 功能性Marker
– 代表了Treg的Suppressive功能
Day 3
IL-17+1.(9T%H17) cells 1.7% are non-overlapping with Foxp3+ (Treg) cells
IL-17A
30
FoxP3
1.9%
2.3%
3.3% 2.5%
2.5% 3.2%
2.6%
4.5% 2.9%
2.3% 7.9%
2.3%
文献：T细胞多色检测
Alexa Fluor@647
QC 数据
FoxP3 和 IL-17A的表达
Condition: A:CD3/CD28 B:A+IL-1b/IL-6 C:B+TGF-b
D:C+IL-23
Day 1
Day 2
2.9%
3.5%
TGF-b induces IL17
特异性免疫应答的基本过程及其调节机制
特异性免疫应答的基本过程及其调节机制特异性免疫应答的基本过程特异性免疫应答的基本过程免疫应答的全过程是有机的系统的过程，目前免疫应答机制的研究，已由细胞水平、分子水平进入了基因水平。
非常复杂，是严密控制和精细的调节过程，这对保持机体自身免疫稳定性是十分重要的。
为了描述方便，人为地将其划分为相应的三个阶段，即：感应段阶活化增殖和分化阶段效应阶段1、抗原识别阶段包括对抗原的摄取、处理加工、抗原的呈递和对抗原的识别，分别由MΦ、T和B细胞完成。
2、免疫细胞的活化和分化阶段包括抗原识别细胞膜受体的交联、膜信号的产生与传递、细胞增殖与分化以及生物活性介质的合成与释放，主要由T和B 细胞完成。
3、免疫应答的效应阶段主要包括效应分子（体液免疫）和效应细胞（细胞免疫）对非已细胞或分子的清除作用（即排异效应）及其对免疫应答的调节作用。
在此阶段除抗体和效应T细胞参与外，还必须有免疫增强系统参加才能完成排异和免疫调节作用。
抗原的提呈细胞在其表面以能被T细胞受体(TCR)特异性识别的方式表达抗原的过程称为抗原提呈，也称为抗原呈递。
APC的抗原呈递作用是一个涉及抗原摄取、处理与呈递的复杂过程。
一、抗原在体内的分布和定位进入体内的抗原几分钟内，即可经血管和淋巴管迅速地运行到全身，其中绝大部分被吞噬细胞分解清除，只有少部分存留于淋巴组织中诱导免疫应答。
1、淋巴结中的抗原在两个主要区域被抗原递呈细胞捕获。
一是在深皮质区（即胸腺依赖区）和淋巴窦壁被巨噬细胞或树突状细胞捕获。
二是在浅皮质区淋巴滤泡内。
2、在脾脏中，抗原从边缘区通过边缘窦而入白髓，并在淋巴滤泡中被长期存留，这是脾脏中抗原存留的主要部位。
二、抗原提呈细胞是指能捕捉、加工、处理抗原，并将抗原提呈给抗原特异性淋巴细胞的一类免疫细胞(antigen-presenting cell，APC)。
三、抗原的摄取、加工和递呈1、抗原的摄取：2、抗原的加工：APC摄入的抗原以及在胞内产生的抗原需要通过代谢而修饰成能与MHC分子结合且具有强免疫原性的肽段，此过程称为抗原的加工。
铁死亡与t细胞实验方法
铁死亡（ferroptosis）是一种与铁代谢紊乱相关的细胞死亡方式，近年来被发现在多种生物过程中扮演重要角色，包括癌症的发展和免疫反应等。
T细胞是免疫系统中的关键细胞类型，它们在铁死亡过程中也可能发挥重要作用。
以下是一些实验方法，可以用于研究铁死亡与T细胞之间的关系：1. 细胞培养与处理：-使用T细胞白血病细胞系或外周血分离的T细胞进行实验。
-暴露细胞于铁死亡诱导剂（如erastin、RSL3等）或控制条件下。
-设置不同浓度和时间的处理组，以探索铁死亡诱导的最佳条件。
2. 形态学观察：-使用光学显微镜观察细胞形态的变化，如细胞膜的完整性、细胞内容的释放等。
-利用电子显微镜观察细胞超微结构的变化。
3. 生化分析：-通过Western blot检测铁死亡相关的蛋白，如GPX4、GSDMD、LC3等。
-测定细胞内铁含量和脂质过氧化水平。
4. 细胞功能测试：-通过流式细胞术检测T细胞的活性、增殖和凋亡情况。
-进行细胞毒实验，评估T细胞对铁死亡细胞的杀伤能力。
5. 基因表达分析：-使用qPCR检测T细胞中与铁死亡相关的基因表达水平。
-进行RNA测序（RNA-seq）以获取更全面的基因表达模式。
6. 免疫组学分析：-利用免疫组化或免疫荧光染色观察铁死亡相关蛋白在T细胞中的分布。
-通过免疫沉淀（IP）和质谱分析（MS）寻找与铁死亡相关的蛋白质相互作用网络。
7. 动物模型：-使用铁死亡诱导剂处理小鼠模型，观察T细胞的功能和铁死亡现象。
-通过基因敲除或敲入技术，研究特定基因在小鼠T细胞铁死亡中的作用。
8. 数据处理与分析：-使用统计软件分析实验数据，确定实验结果的显著性。
-结合文献和现有知识，对实验结果进行解释和总结。
在进行以上实验时，应严格遵守实验室安全规范，使用专业的实验设备和试剂，并确保实验设计的科学性和重复性。
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T细胞的分化培养
脾细胞的分离与计数：
过滤PBS 10mL于离心管中，杀小鼠，取脾脏放入此PBS，冰浴。
配含10% FBS的1640培养液（5ml+45ml）。
平皿中研碎脾脏。
加PBS离心（1400 rpm,7 min)。
去上清，加2-3mL红细胞裂解液，吹打，静置5min。
加10 ml 1640（稀释掉裂解液），过滤（过筛），离心（1400 rpm，7 min）。
去上清，加之前配好的培养液3 mL打匀得悬液。
取少许入小管，于小管中取20uL，加20uL台盼蓝（染上死细胞）。
细胞计数，16大格板，计左上和右下对角线的各16小格。
算得结果。
此时细胞密度=一个角的16格细胞数×104/mL，由于台盼蓝稀释，再×2。
参照加样体积，取适量悬液用培养液稀释成1.5-2.5×106个/mL。
=台盼兰染色后150-250cells/左上16格+右下16格
细胞因子的分装：
原管分别含IL-2 :20 μg,IL-4 :10μg ,IL-12 :10μg ,TGF-β:1μg。
分别取1 ml所配培养液加入rmIL-2,rmIL-4,rmIL-12,rmTGF-β。
配1μg/ml的IL-2，100μL/管。
配1μg/ml的IL-4。
100μl/管。
配1μg/ml的IL-12。
50μl/管。
配1μg/ml 的TGF-β。
50μl/管。
分装1μg/ml的GM-CSF。
20uL/管。
细胞的激活培养：
在总加样体积的细胞悬液中，加入下列细胞因子与抗体：
稀释800倍的Anti-CD3（5ug/mL），稀释1000倍的Anti-CD28（1ug/mL），稀释500倍的IL-2（2 ng/mL）。
于48孔板上选取8孔，每2孔分别对应Th1,Th2,Treg及对照。
每孔500uL培养液，8孔共4 mL。
Th1：加入200倍稀释的IL-12，100倍稀释的Anti-IL-4（10ug/ml）。
Th2：加入50倍稀释的IL-4（20 ng/ml），100倍稀释的Anti-IFN-γ（10 ug/ml）。
Treg：加入100倍稀释的TGF-β（10 ng/ml）。
2天后，换液，一孔分为3孔，不必离心，稀释500倍的IL-2（2 ng/mL）（溶于含10%FBS 的培养液）刺激。
○·包板：稀释400倍的Anti-CD3（10µg/ml）, 在1640培养基（不含血清）中稀释。
100µl/孔（48孔板）。
4℃过夜或 37℃ 2 小时。
换液1天后，换液换板（1640洗板，离心），细胞在1640培养液（10%FBS，稀释500倍的IL-2, 稀释1000倍的Anti-CD28）中加入Anti-CD3板中。
用Anti-CD3包被板再刺激。
37℃, 4小时。
抑制蛋白分泌、固定细胞（用于细胞内细胞因子染色）
加Golgi-plug 0.5uL Golgi/500uL培养液, 37℃ 4-6 h。
PBS洗板，转移至离心管。
离心，1400rpm，7min。
终浓度2%甲醛（PBS溶液）固定, 每管2mL。
RT 30min，补加PBS10mL，离心，PBS洗一遍，每管加PBS约2mL，4℃保存。
可保存4-5周。
细胞表面染色
在100uL细胞悬液中加入0.5uL抗体，遮光冰浴15min。
洗去PBS—a，每管加0.5mL，上机，或b，继续下列步骤。
细胞内细胞因子染色
配Saponin的PBS溶液（0.5%）（Saponin buffer），轻轻混匀。
加4mL Saponin buffer，转移至FACS管内，遮光冰浴30min打孔，离心、弃上清，加Saponin buffer 100uL。
加抗体：（1:400—1:200）
遮光冰浴30min。
Saponin buffer洗2遍。
PBS洗1遍。
每管加0.5mL PBS，上机。