动物固体组织蛋白提取 Protocol
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤还在为蛋白质提取实验发愁吗？蛋白提取实验有诀窍，不同的提取实验操作步骤都给你总结好了，看完你就豁然开朗了，一起来瞅瞅吧。
培养的贴壁动物细胞的蛋白质抽提步骤1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。
2、预冷的 PBS 清洗贴壁的细胞 2 次,小心倾去 PBS。
3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml 抽提试剂中加入5 μl 蛋白酶抑制剂混合液,5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液)。
4、细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂(107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂;5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂),轻轻摇动 5 分钟。
5、用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来,转移细胞悬浮液到离心管中,冰浴下摇动 15 分钟进行裂解。
6、裂解液于预冷的离心机中 14,000xg 离心 15 分钟。
弃去沉淀,上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
培养的悬浮动物细胞的蛋白质抽提步骤1、2500xg 离心 10 分钟沉淀悬浮的细胞,弃去上清液2、预冷的 PBS 悬浮沉淀细胞,2500xg 离心 10 分钟沉淀细胞,去上清。
3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml 抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液,5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液)。
4、加入含抑制剂的预冷蛋白质抽提试剂(107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂;5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂)。
5、轻轻摇动混和 15 分钟进行裂解。
6、裂解液于预冷的离心机中 14,000xg 离心 15 分钟。
弃去沉淀,上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
哺乳动物组织的蛋白质抽提步骤1、组织称重,切小块放入管中。
2、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml 抽提试剂中加入5 μl 蛋白酶抑制剂混合液,5 μl PMSF 和 5ul 磷酸酶混合液)。
3、加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂(250mg 组织中加入 1ml 抽提试剂)。
Western blot 之蛋白提取
Western blot 之蛋白提取（protocol）一、蛋白提取准备：冰浴盒、冰、小烧杯、EP管（1.5ml）、小镊子、RIPA裂解液（4℃保存，试剂盒中含PMSF，-20℃保存）、蛋白酶抑制剂（protease inhibitor tablets）、磷酸酶抑制剂（phosphatase Inhibitor cocktail 3）、15ml离心管(裂解液)、移液器、超声粉碎机、低温高速离心机、BCA蛋白定量试剂盒、96孔板、酶标仪、4×蛋白上样缓冲液（分装1ml/管，-20℃保存）、二、蛋白提取操作：1. -80℃取出组织，冰上复温；由冻存管移入1.5mlEP管，并重新编号；（1、2、3、4、5、6分别为sham、3h、12h、24h、3d、7d）2. 加裂解液;a、裂解液配制：(10mlRIPA（4℃）+100ulPMSF（-20℃）+100ul蛋白酶抑制剂（4℃ 10×、1×）+1-2ul磷酸酶抑制剂)注：磷酸酶抑制剂作用是保护已磷酸化蛋白，避免其降解破坏，所以加之有益无害。
b、加入EP管，1mg：10-20ul；（400ul/EP管，不要求精确）3. 匀浆；机械（电动匀浆机）；超声粉碎机√附：超声粉碎机操作：a、打开电源；b、确认设置；（默认）c、蒸馏水清洗机头；（每次换样本均要清洗、避免污染、并擦干）d、匀浆；（电源键控制机头启停，装有标本的1.5mlEP管置入小烧杯冰浴中，匀浆过程反复上下活动，充分匀浆组织）4. 冰浴静置30分钟；（再加裂解液600ul至总量1000ul；）5. 预开机制冷，12000rpm，4℃，离心20分钟；离心结束后，取上清至新1.5mlEP管；附：低温高速离心机操作：a、开机；b、设置speed、time、temp，注意ROTOR内外对应；12154（1.5ml或2mlEP管）c、温度降至预设温度后，配平，开始；6. BCA试剂盒蛋白定量a．配制工作液；BCA试剂：CU试剂=50:1（5mlBCA+100ulCU）；（标准品数量+样品数量）×200ul；充分混匀，24小时室温稳定；b．各孔加BCA工作液200ul；c、稀释标准品；（0.5mlEP管）①90ulPBS稀释液+10ulBSA标准品（-20℃），至100ul，浓度0.5mg/ml；②加稀释后的标准品至96微孔板标准孔中：20、16、12、 8、 6、 4、 2、 0 ul加PBS补足至20ul：0、 4、 8、12、14、16、18、20 ul实际浓度：0.5、0.4、0.3、0.2、0.15、0.1、0.05、0mg/mld、样品稀释；（0.5mlEP管）（尽可能让样品点落在标准线1/2后）,样品量不能少于2ul，否则误差太大。
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤步骤一：收集和处理样品首先，需要收集要研究的动物细胞或组织样品。
样品可以是从细胞培养物中收集的细胞，也可以是从动物体内收集的组织。
在收集样品之前，可以用生理盐水冲洗样品，以去除与研究无关的物质。
步骤二：细胞破碎和组织研磨接下来，需要将细胞破碎或组织研磨，以释放细胞内或组织内的蛋白质。
对于细胞破碎，可以使用一些方法，如机械破碎、超声波破碎或冻融破碎等。
对于组织研磨，可以使用搅拌器或研磨器等工具进行研磨。
步骤三：离心步骤四：蛋白质提取将经过离心的上清液取出，即为蛋白质提取物。
蛋白质提取液可以选择不同的组成，以适应研究的目的。
一般来说，一个典型的蛋白质提取液可能包含以下成分：蛋白酶抑制剂（如PMSF）、还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）、溶解剂（如甲醇或异丙醇）、洗涤剂（如Triton X-100或Tween-20）以及缓冲液（如磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液）等。
这些成分对于蛋白质的稳定性、可溶性和抽提效果起着重要作用。
步骤五：蛋白质浓缩为了浓缩蛋白质，可以使用一些方法，如醋酸沉淀、有机溶剂沉淀或钙盐沉淀等。
这些方法可以使蛋白质从提取液中沉淀下来，以减少液体体积并提高蛋白质浓度。
步骤六：蛋白质分析最后，可以对蛋白质抽提物进行分析。
常用的蛋白质分析方法包括SDS-凝胶电泳、Western blotting、质谱分析等。
这些方法可以用于分析蛋白质的分子质量、浓度、结构和功能等。
总结起来，动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤包括：收集和处理样品、细胞破碎和组织研磨、离心、蛋白质提取、蛋白质浓缩和蛋白质分析。
这些步骤的选择和优化将根据具体的实验目的和要求进行调整。
蛋白抽提Protocol(全)lyz
Loading Buffer煮细胞抽提总蛋白Protocol1.细胞计数（约1×106的细胞），离心收集细胞（2000rpm×5min）；2.预冷1×PBS 500ul重悬洗一次，转至500ul EP管（2000rpm×5min）；3.去上清，后甩一次，将上清去尽；4.按每1×106的细胞加50ul loading buffer 加入2×loading；5.V ortex一下，煮10～15min一次×2～3次直至无粘丝；6.每次煮好将其放于冰上，静置约2min，V ortex一下，再甩一下；7.三次后用枪吸起，如没有粘丝，即可；8.每次上样约5ul（50ug/ul蛋白）RIPA裂解抽提总蛋白Protocol1.细胞计数（约1×107的细胞），离心收集细胞（2000rpm×5min）；2.预冷1×PBS 1ml重悬洗2次，转至1.5ml EP管（2000rpm×5min）；3.去上清，后甩一次，将上清去尽；4.按照如下比例加入裂解试剂：RIPA：300ul/1×107细胞PMSF：3ul(1:100)Cocktail ：0.3ul(1:1000)5.吹打均匀，冰上放置30-40min，中间每10分钟V ortex一次；6.4℃预冷离心：10000rpm ×10min；7.收集上清，转移至已预冷新EP管，即为总蛋白。
【为了浓缩蛋白，加RIPA的量改为200ul或者更低，可稍微延长冰上裂解时间，而RIPA（1）＋PMSF（1：100）＋Cocktail（1：1000）的比例不变】核，浆蛋白抽提Protocol一.收核-浆蛋白收浆蛋白1.细胞计数（约1.5×107的细胞），离心收集细胞（1100rpm×5min）；2.用4℃预冷的PBS重悬，转至1.5mL的EP管中，离心（4000rpm×5min，4℃）；3.去上清，加入A Buffer1mL/1×107 cell，重悬，4℃放置10min，离心（2500rpm×3min，4℃）；4.去上清，加入A’Buffer250uL/1.5×107cell，重悬，4℃放置3min，离心（5000rpm×1min，4℃），吸取上清（上清是浆蛋白）；收核蛋白5.再用A’ Buffer 500uL/1.5×107 cell，重悬，4℃放置3min，离心（5000rpm×1min，4℃），吸走上清，12000rpm×30sec，把上清完全吸干净；6.剩余沉淀中加入B’Buffer (或者RAPI)50uL，重悬（振荡），4℃放置40min（每隔10min振荡一次）；7.离心（12000×10min，4℃），取上清即为核蛋白，－80℃保存。
组织蛋白提取步骤
组织蛋白提取步骤概述组织蛋白提取是一种重要的实验操作，用于研究生物体中的蛋白质组成和功能。
在这篇文章中，我们将深入探讨组织蛋白提取的步骤和方法。
准备工作在进行组织蛋白提取之前，需要进行一些准备工作，以确保实验的顺利进行。
1. 选择合适的组织样本选择合适的组织样本非常重要。
样本的选择应基于研究的目的和问题。
常用的组织样本包括肝脏、肾脏、心脏等。
2. 通过冰冻保存样本在进行组织蛋白提取之前，将组织样本冰冻以保持其蛋白质的完整性和稳定性。
样本应在-80°C的低温下保存。
3. 研磨组织样本在进行提取之前，将组织样本研磨以释放蛋白质。
可以使用试管中的研磨棒、液氮或机械研磨仪等方法进行研磨。
组织蛋白提取步骤下面将详细介绍组织蛋白提取的具体步骤。
1. 组织样本溶解首先，将冷冻的组织样本迅速解冻放入冷蛋白提取缓冲液中。
缓冲液的选择应根据研究的目的而定。
可以选择含有各种缓冲剂（如Tris-HCl和EDTA）和蛋白酶抑制剂的缓冲液。
2. 组织样本裂解接下来，需要将组织样本裂解，以使细胞膜破裂并释放细胞内容物。
可以通过以下方法进行组织样本的裂解： - 超声波裂解：使用超声波处理器将样本暴露在高频超声波中，以破裂细胞膜。
- 高压裂解：使用高压细胞破碎机将样本加压，使其破裂。
- 液氮冻融：将样本在液氮中冷冻并迅速解冻，通过重复操作破裂细胞膜。
3. 蛋白质提取在组织样本裂解后，可以使用离心等方法将细胞碎片与蛋白质分离。
主要的提取方法包括： - 离心：将组织样本在高速离心中离心，并采集上清液中的蛋白质。
- 柱层析：利用蛋白质的性质，将蛋白质从样本中提取出来。
- 倒置电泳：利用电泳的原理，将蛋白质从样本中分离。
4. 蛋白质的定量和分析最后，对提取得到的蛋白质进行定量和分析。
常用的方法包括： - 低丰度蛋白质的富集：通过使用富集柱等方法将低丰度蛋白质从样本中提取出来。
- SDS-PAGE：使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，并通过染色等方法进行定性或定量分析。
蛋白裂解和提取的protocol
这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望对大家有所帮助。
10ml 三去污裂解液配方如下：50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)：0.07882g150 mmol/L NaCl：0.08775g0.2 g/L叠氮钠：0.002g1 g/LSDS 0.01g100 mg/L Aprotin 0.001g10 g/L NP-40 0.1g5 g/L去氧胆酸钠0.05g100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g总蛋白抽提程序：1.PBS洗细胞3 次2.加入裂解缓冲液（1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液），冰上放置20min3.收集裂解液4.离心，12000转，2~10min5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-80度备用裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。
化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。
这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。
机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。
机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。
一、机械裂解法主要有以下两中：1、热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。
原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。
2、超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。
但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。
动物组织蛋白提取
实验一动物组织蛋白质的提取【目的要求】1、掌握动物组织蛋白质的提取方法。
2、了解动物组织蛋白质提取的原理。
【实验原理】由于蛋白质种类很多，性质上的差异很大，即或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。
但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。
因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质。
蛋白质在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。
故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。
温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。
提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用，将细胞内蛋白质提取出来，并与其它不需要的物质分开。
但动物材料中的蛋白质有些以可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化液等）中，可以不必经过提取直接进行分离。
蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。
蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。
本实验采用CWBio公司的蛋白抽提试剂盒（该试剂盒带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。
）提取动物组织总蛋白。
【试剂器材】动物组织、蛋白提取试剂盒、1.5 ml离心管、-20℃储存的冰块【操作步骤】1、动物肝脏直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次。
2、称量约40mg研磨组织，加入200 ul预冷的组织蛋白抽提试剂，冰上孵育20分钟。
3、10,000×g 离心15分钟。
4、收集上清，进行下一步的实验。
【注意事项】在整个制备过程中使组织始终置于冰上，以防蛋白质的降解。
动物固体组织蛋白提取-.
动物固体组织蛋白提取-Protocol2017-07-18动物固体组织蛋白提取 Protocol1、前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、裂解液配制：RIPA：PMSF=100：1，现配现用。
（1000ulRIPA+10ulPMSF）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10ml管体系中加入：7-8粒磁珠、100mg组织、1mlRIPA+10ulPMSF、1 tablet Cocktail。
b、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c、将组织匀浆转入1.5ml的EP管中（eppendorf 管、离心管）。
12000r/min 4°C 离心15min。
d、离心后EP管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的EP管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a、配工作液：溶液A：溶液B=50：1（200ul：4ul）。
动物组织蛋白提取方法
动物组织蛋白提取方法一、准备工作1. 选取适当的动物组织：选择新鲜、无病变的动物组织，如肌肉、肝脏、肾脏等。
2. 清洗和切割组织：将选取的组织清洗干净，切成小块，便于提取。
二、提取步骤1. 浸泡：将切好的组织放入盛有清水的容器中，浸泡一段时间，以便于后续的提取操作。
2. 磨碎：将浸泡过的组织放入匀浆器中，进行充分磨碎，以便于蛋白的释放。
3. 提取：将磨碎的组织放入离心管中，加入适量的蛋白提取液，轻轻振荡离心管，使组织与提取液充分混合。
然后进行离心操作，将上清液去除，得到沉淀的蛋白。
4. 重复步骤3：为了得到更多的蛋白，可以重复步骤3，进行多次离心操作。
5. 保存和利用蛋白：将得到的蛋白保存好，可以用于后续的实验或生产用途。
三、注意事项1. 确保组织新鲜无病变，以避免提取过程中出现污染或无效提取。
2. 磨碎组织时要充分，以释放出更多的蛋白。
3. 提取液要适量，过多或过少都会影响蛋白的提取效果。
4. 离心时要确保离心速度和时间设置正确，以免影响蛋白提取的纯度和数量。
5. 保存蛋白时要确保环境适宜，避免蛋白变质或失效。
四、实验结果评估1. 观察沉淀物：通过观察沉淀物是否含有丰富的蛋白质，可以评估提取效果。
2. 测定蛋白质浓度：可以通过使用特定的蛋白质测定方法，如Bradford 方法等，来测定提取得到的蛋白质浓度。
3. 蛋白质性质分析：可以通过 SDS-PAGE、免疫印迹等方法，分析提取得到的蛋白质的性质和组成。
五、实验结论通过以上步骤，我们可以成功地从动物组织中提取出了蛋白。
这种提取方法简单易行，提取得到的蛋白可用于多种实验和生产用途。
需要注意的是，不同的动物组织和提取目的可能对提取方法有所影响，因此在实际操作中需要根据具体情况进行调整和优化。
六、拓展阅读建议1. 动物组织蛋白提取相关文献查阅：可以参考相关的科研论文和文献，了解更多关于动物组织蛋白提取的方法、影响因素和实验应用等方面的知识。
2. 实验室指南：可以参考实验室指南，了解更多关于实验室常用设备、试剂和实验方法等方面的信息。
动物固体组织蛋白提取_Protocol
动物固体组织蛋白提取 Protocol1、 前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、 裂解液配制：RIPA ：PMSF=100：1，现配现用。
（1000ulRIPA+10ulPMSF ）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a 、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10ml 管体系中加入：7-8粒磁珠、100mg 组织、1mlRIPA+10ulPMSF 、1 tablet Cocktail 。
b 、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min 上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c 、将组织匀浆转入1.5ml 的EP 管中（eppendorf 管、离心管）。
12000r/min 4°C 离心15min 。
d 、离心后EP 管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的EP 管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a 、配工作液：溶液A ：溶液B=50：1（200ul ：4ul ）。
动物组织蛋白提取实验报告
动物组织蛋白提取实验报告背景蛋白质是生命体内重要的组成部分，对于生物的结构和功能具有关键作用。
在研究动物组织的生物化学、分子生物学以及医学领域中，蛋白质提取实验是一项基础而重要的技术。
通过蛋白质提取实验，可以将动物组织中的目标蛋白质从其他成分中分离出来，并进一步进行纯化和分析。
本实验旨在从动物组织中提取目标蛋白质，并通过酸碱处理、超声波破碎等方法将其从细胞结构中释放出来。
随后，通过离心、过滤等步骤去除杂质，最终得到纯净的目标蛋白质样品。
分析实验设计1.准备工作：清洗实验器具，准备所需试剂和设备。
2.组织样品处理：将动物组织样品切碎，加入适量的缓冲液，并使用超声波破碎仪进行破碎处理。
3.细胞结构破坏：将样品经过酸碱处理，破坏细胞膜和核膜，使目标蛋白质从细胞结构中释放出来。
4.离心：通过离心将细胞碎片和大分子杂质沉淀下来。
5.过滤：使用微孔滤膜去除离心上清液中的小分子杂质。
6.浓缩：将过滤后的液体通过浓缩装置浓缩，得到较为纯净的目标蛋白质样品。
实验结果经过实验操作，我们成功从动物组织中提取到目标蛋白质。
通过酸碱处理和超声波破碎，可明显观察到组织样品的颜色变浑浊，并且在显微镜下可以看到细胞结构的破坏。
离心后，观察到底部沉淀物呈现白色，上清液呈现澄清状态。
经过过滤和浓缩处理后，得到了一定量的目标蛋白质样品。
结果分析通过本实验提取的动物组织蛋白质样品可以用于进一步的纯化和分析。
可以使用电泳技术对提取的蛋白质样品进行分子量分析，以确定目标蛋白质的大小。
此外，还可以使用Western blot等技术检测目标蛋白质在组织中的表达水平，从而研究其在生理或病理状态下的变化。
建议1.实验操作过程中要注意严格控制温度和时间，避免蛋白质降解。
2.在选择缓冲液和酸碱处理条件时，要根据目标蛋白质的特性进行优化，以提高提取效果。
3.在离心和过滤步骤中要注意操作技巧，避免杂质的混入。
4.可以尝试不同的浓缩方法和设备，以提高样品纯度和浓度。
动物组织蛋白提取实验报告分析
动物组织蛋白提取实验报告分析动物组织蛋白提取实验报告分析1. 引言1. 蛋白质是构成生物体的基本组成部分之一，对于生物的正常功能和生理过程至关重要。
2. 蛋白质的提取是研究生物组织功能和结构的重要方法之一。
3. 本实验旨在探究动物组织蛋白提取的方法以及对提取结果的分析。
2. 背景知识1. 细胞是生物体的基本组成单位，其中包含着各种类型的细胞器。
2. 细胞器中存在着许多重要的蛋白质，这些蛋白质参与了细胞的各种代谢和功能调控过程。
3. 实验目的1. 熟悉动物组织蛋白提取的方法和步骤。
2. 掌握对提取的蛋白质样品进行分析的技能。
3. 分析提取的蛋白质样品中的蛋白质含量和纯度。
4. 实验步骤1. 准备实验所需材料和设备。
2. 收集动物组织样品并加入细胞裂解缓冲液，使细胞破裂释放蛋白质。
3. 离心样品，分离出蛋白质上清液。
4. 通过比色法或其他方法测定蛋白质的含量。
5. 对蛋白质样品进行电泳分析，评估蛋白质的纯度。
6. 根据实验结果进行数据分析和讨论。
5. 结果与讨论1. 蛋白质的提取率和纯度受到多种因素的影响，如样品的保存方式、裂解缓冲液的成分和使用的提取方法等。
2. 在实验中，使用细胞裂解缓冲液破裂细胞，通过离心分离出蛋白质上清液，并通过比色法测定了蛋白质的含量。
3. 实验结果显示，从动物组织中提取的蛋白质含量较高，这表明提取方法相对较有效。
4. 电泳分析结果显示，提取得到的蛋白质样品具有较高的纯度，说明提取方法能够有效去除杂质。
5. 实验结果表明，该提取方法适用于获取高纯度的动物组织蛋白样品。
6. 总结与展望1. 通过这次实验，我们了解了动物组织蛋白提取的方法和步骤，并掌握了对提取的蛋白质样品进行分析的技能。
2. 实验结果显示，该提取方法能够有效提取动物组织中的蛋白质，并具有较高的纯度。
3. 在未来的研究中，可以进一步优化提取方法，提高蛋白质的提取率和纯度，并结合其他分析方法对提取得到的蛋白质样品进行更详细的研究。
动物组织蛋白提取实验报告
动物组织蛋白提取实验报告动物组织蛋白提取实验报告摘要：本实验旨在研究动物组织中蛋白质的提取方法，通过对比常用的三种提取方法，选择最适合的方法进行蛋白质提取。
结果表明，SDS-PAGE法是最适合的蛋白质提取方法。
关键词：动物组织；蛋白质提取；SDS-PAGE法一、引言在生物学研究中，蛋白质是非常重要的一种生物大分子。
因此，研究蛋白质的提取方法对于生物学研究具有重要意义。
本实验旨在比较常用的三种动物组织蛋白质提取方法，并选择最适合的方法进行蛋白质提取。
二、材料与方法1.材料（1）鼠肝、鸡肌、牛血清等组织样品；（2）Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）、PBS缓冲液（pH 7.4）、RIPA裂解液等；（3）BCA试剂盒、SDS-PAGE凝胶等。
2.方法（1）Tris-HCl缓冲液法：将样品加入Tris-HCl缓冲液中，用超声波裂解，离心去除细胞碎片，收集上清液。
（2）PBS缓冲液法：将样品加入PBS缓冲液中，用超声波裂解，离心去除细胞碎片，收集上清液。
（3）RIPA裂解液法：将样品加入RIPA裂解液中，用超声波裂解，离心去除细胞碎片，收集上清液。
（4）BCA测定法：将所得蛋白质溶液与BCA试剂混合，在560 nm 处测定吸光度值。
（5）SDS-PAGE法：将所得蛋白质溶液进行电泳分离，并进行银染色或Western blot检测。
三、结果与分析本实验选择了鼠肝、鸡肌、牛血清等组织样品进行蛋白质提取。
通过比较三种不同的提取方法，发现使用RIPA裂解液法所得的蛋白质含量最高。
但是，在使用BCA试剂盒对蛋白质含量进行测定时发现，使用PBS缓冲液法和Tris-HCl缓冲液法所得的蛋白质含量也较高。
进一步地，我们使用SDS-PAGE法对三种不同提取方法所得的蛋白质进行分离和检测。
结果表明，使用SDS-PAGE法所得的蛋白质条带清晰、分离度高、检测灵敏度高，并且能够同时检测多个蛋白质。
四、结论通过本实验的比较，我们发现RIPA裂解液法所得的蛋白质含量最高，但是使用SDS-PAGE法进行蛋白质检测时，发现Tris-HCl缓冲液法和PBS缓冲液法也能够提供较高含量的蛋白质。
动物固体组织蛋白提取Protocol.doc
的浓度。
蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。
由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。
常用抑制剂PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride（剧毒）1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保存一年; 2-8℃可以存放数月之久。
欲长期保存，可冻存在-20℃4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 储存液浓度为100或200mM5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。
EDTA1)抑制金属蛋白水解酶;2)0.5mol/L水溶液，pH8~9; 3)溶液在4℃稳定六个月以上;4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中;3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月; 4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。
亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B;2)lOmg/ml溶于水;3)储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度0.5mg/ml。
胰蛋白酶抑制剂(aprotinin)1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;2)lOmg/ml溶于水，pH7~83}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L); 5)避免反复冻融:6)在pH 12.8时失活。
动物固体组织蛋白提取Protocol
的浓度。
蛋口酶抑制剂破碎细胞提取蛋口质的同时可释放出蛋口酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种常用的蛋口酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋口质的敬感性各不相同，因此需要调整各种蛋口酶的浓度。
由于蛋口酶抑制剂在液体中的洛解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋口酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的口录上可查到更完整的蛋口酶和蛋口酶抑制剂表。
常用抑制剂PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride （剧毒）1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋口酶，凝血酶）和疏基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）;2）10mg/ml^于异丙醇中；3）在室温下可保存一年；2-8°C可以存放数月之久。
欲长期保存，可冻存在- 20°C 4）工作浓度:17~174ug/ml（0.1 -1 .Ommol/L）;储存液浓度为100 或200mM5）在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSFo EDTA1）抑制金属蛋口水解酶；2）0.5mol/L水溶液，pH8~9; 3）溶液在4°C稳定六个月以上；4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制剂(pepsta ntin)I)抑制酸性蛋白酶如胃蛋口酶，血管紧张肽原酶，组织蛋口酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中；3｝储存液在4 °C 一周内稳定，-20 °C稳定6个月；4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。
壳抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制丝氨酸和葢基蛋口酶，如木瓜蛋口酶，血浆酶和组织蛋口酶B;2)IOmg/ml 于水；3)储存液4°C稳定一周，-20°C稳定6个月；4)工作浓度0,5mg/mlo胰蛋白酶抑制剂(aprotinin)1)抑制丝氨酸蛋口酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋口酶和胰凝乳蛋口酶;2)IOmg/ml 溶于水，pH7~83｝储存液4 °C稳定一周，-20 °C稳定6个月；4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01 -0.3umol/L); 5)避免反复冻融：6)在pH 12.8时失活。
动物组织蛋白提取实验报告
动物组织蛋白提取实验报告蛋白质是生命体中最基本的分子之一，它们在细胞的结构和功能中起着重要的作用。
因此，研究蛋白质的结构和功能对于生命科学的发展至关重要。
本实验旨在提取动物组织中的蛋白质，为后续的蛋白质分析和研究打下基础。
实验步骤：1.准备样品：取新鲜的动物组织，如肝脏、肌肉等，用生理盐水清洗干净，切成小块备用。
2.制备提取液：将10mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）中加入1mM EDTA、1mM PMSF、1% Triton X-100等蛋白酶抑制剂和表面活性剂，制成提取液。
3.组织破碎：将组织块加入提取液中，用超声波或搅拌器等方法破碎组织细胞，使蛋白质释放到提取液中。
4.离心：将破碎后的混合液离心，分离出上清液和沉淀。
5.测定蛋白质浓度：用Bradford方法或Lowry方法等测定蛋白质浓度。
实验结果：经过提取和测定，我们成功地从动物组织中提取出了蛋白质。
通过测定蛋白质浓度，我们发现提取液中的蛋白质浓度较高，可以用于后续的蛋白质分析和研究。
实验总结：本实验通过提取动物组织中的蛋白质，为后续的蛋白质分析和研究打下了基础。
在实验过程中，我们需要注意以下几点：1.组织的选择和处理：不同的组织中含有不同种类和含量的蛋白质，因此在选择组织时需要考虑后续研究的需要。
同时，在处理组织时需要注意避免蛋白质的降解和氧化。
2.提取液的制备：提取液中的蛋白酶抑制剂和表面活性剂可以保护蛋白质不被降解和聚集，提高提取效率。
3.测定蛋白质浓度：蛋白质浓度的测定方法需要选择合适的试剂和标准曲线，同时需要注意样品的稀释和干扰物的去除。
本实验为我们提供了一种简单、快速、有效的动物组织蛋白提取方法，为后续的蛋白质研究提供了可靠的基础。
(完整版)动物固体组织蛋白提取-Protocol
动物固体组织蛋白提取Protocol1、前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、裂解液配制：RIPA：PMSF=100：1，现配现用。
（1000ulRIPA+10ulPMSF）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10ml管体系中加入：7-8粒磁珠、100mg组织、1mlRIPA+10ulPMSF、1 tablet Cocktail。
b、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c、将组织匀浆转入1.5ml的EP管中（eppendorf 管、离心管）。
12000r/min 4°C 离心15min。
d、离心后EP管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的EP管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a、配工作液：溶液A：溶液B=50：1（200ul：4ul）。
X+1+1）*200；B=2*（X+1+1）*4。
不同组织的蛋白提取方法
不同组织的蛋白提取方法•相关推荐不同组织的蛋白提取方法不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸—丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
动物蛋白是怎么提取的原理
动物蛋白是怎么提取的原理动物蛋白的提取主要是通过物理和化学方法。
以下是一种常见的提取方法的示例，以提取动物肌肉中的蛋白为例：1. 肌肉切碎：首先将动物肌肉切碎，细碎肌肉有利于蛋白质与提取溶剂的接触表面积增大，有利于蛋白质的提取。
2. 溶解：将肌肉碎片与一定比例的缓冲液混合，缓冲液可以根据需要的蛋白质组分而定。
缓冲液的作用是维持适宜的pH值和离子浓度，以满足蛋白质的稳定。
3. 细胞破碎：添加化学试剂或利用高压机械力将细胞破碎，使得蛋白质从细胞中释放出来。
常见的化学试剂可包括盐类、酸和碱等。
破碎过程中要注意避免过高的温度和较长时间的处理，以避免对蛋白质的损伤。
4. 澄清：通过离心等手段将细胞碎片和非溶性物质分离，去除杂质。
离心可根据需要选择不同的离心速度和时间。
5. 浓缩：将澄清液通过浓缩方法（如蒸发浓缩、超滤浓缩等）去除大部分水分，使得蛋白质浓度增加。
根据需要可进行多次浓缩。
6. 分离：使用一些特定的技术将混合蛋白质组分进行分离。
常用的方法包括电泳、层析等。
电泳可通过蛋白质在电场作用下的迁移速率差异实现分离。
层析则是利用某种材料对蛋白质的亲和性差异进行分离。
7. 纯化：通过进一步的层析和其他技术手段，去除杂质以提高蛋白质纯度。
纯化过程常常是多次重复的步骤。
8. 测定：对提取得到的蛋白质进行质量检测，如测定蛋白含量、酶活性和结构等参数，以确保所提取的蛋白质符合研究或应用的要求。
在动物蛋白提取过程中，需要根据不同蛋白质的特性和目的的不同来选择合适的提取方法。
该方法仅是一种常见的提取过程，实际操作中可能会有所变化。
同时，值得注意的是，提取过程中的温度、PH值、浓度、反应时间等因素都可能对蛋白质的提取产生影响，因此在具体操作时需要进行优化和调整。
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动物固体组织蛋白提取Protocol1、前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、裂解液配制：RIPA：PMSF=100：1，现配现用。
（1000ulRIPA+10ulPMSF）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10ml管体系中加入：7-8粒磁珠、100mg组织、1mlRIPA+10ulPMSF、1 tablet Cocktail。
b、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c、将组织匀浆转入1.5ml的EP管中（eppendorf 管、离心管）。
12000r/min 4°C 离心15min。
d、离心后EP管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的EP管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a、配工作液：溶液A：溶液B=50：1（200ul：4ul）。
）*200；B=2*（X+1+1）*4。
需测试复孔。
标本X，则需A量=2*（X+1+1c、复孔，取蛋白6ul加入0.6mlEP管，再加入54ulH2O，混匀。
即10倍稀释。
d、取20-25ul 10倍稀释蛋白样本加入96孔板平底板内，再加入200ulAB工作液，混匀振荡后，37℃incubate 30min。
注：应现加蛋白样本，再加工作液。
因为每次加蛋白后需换tip，再加入工作液即起反应，应缩短时间。
e、酶标仪检测562nm吸光度。
Programf、计算蛋白浓度。
根据标准曲线，如Y=1.2745X-0.1684 其中Y：蛋白浓度；X：吸光度。
最终蛋白浓度为：10*Y（ug/ul、mg/ml）g、蛋白样本放-80℃冻存。
大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。
在典型的蛋白测定中，化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化，这一变化可由分光光度计或酶标仪检测，并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。
博士德为大家提供两种蛋白测定手段，每种都有其独特的优点。
如果样品数量较多，可以同时使用两种测定用酶标仪自动检测。
当你选择一种蛋白测定方法时需要考虑两个因素：缓冲液的化学组成和检测的蛋白量。
Commassie法（Bradford法）：原理：在酸性条件，蛋白质与考马斯染料G-250结合，颜色从棕色变为蓝色，在595nm 处检测吸光值然后与标准曲线对比，即可计算出待测蛋白的浓度。
BCA法：原理：在碱性条件下，蛋白将Cu++还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫色络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
现对这两种方法进行比较：一、实验材料：细胞总蛋白提取试剂盒（AR0103）M231B CA蛋白定量试剂盒（AR0146）Commassie改良增强型蛋白质定量试剂盒（AR0145）二、操作步骤：Commassie法：1.将BSA冻干标准品（10mg/支）用生理盐水或PBS稀释成2000ug/ml，1000 ug/ml,500 ug/ml,250 ug/ml,125 ug/ml,62.5 ug/ml,31.25 ug/ml,15.625 ug/ml八个浓度的蛋白标准溶液。
2.M231用细胞总蛋白提取试剂提取总蛋白。
3.各取20ul蛋白标准品和待测M231样品至相应标记的微孔板中。
4.滴加200ul考马斯增强型试剂（溶液A）至每孔混匀并充分震荡30S5.停止震荡，在室温孵育样品10min6.在酶标仪中测量595nm时的吸光值。
7.绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度。
BCA法：1.按50体积BCA试剂A加入1倍体积BCA试剂B配置适量BCA工作液，充分混匀。
2.将BSA冻干标准品（10mg/支）用生理盐水或PBS稀释成2000ug/ml，1000ug/ml,500 ug/ml,250 ug/ml,125 ug/ml,62.5 ug/ml,31.25 ug/ml,15.625 ug/ml八个浓度的蛋白标准溶液。
3.M231用细胞总蛋白提取试剂提取总蛋白。
4.各取20ul蛋白标准品和待测M231样品至相应标记的微孔板中。
5.滴加200ulBCA工作液至每孔混匀并充分震荡30S6.停止震荡，在37度孵育样品30min7.在酶标仪中测量562nm时的吸光值。
8.绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度。
其中1到8为2000ug/ml，1000,500,250,125,62.5,31.25,15.625的标准浓度的BSA蛋白，9为空白孔，样品1为8倍稀释M231总蛋白，样品2为32倍稀释M231总蛋白Commassie法：为了测试准确，应在试剂加入后的5～20min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。
由标准曲线可以算出样品原始浓度为14.4mg/mlCommassie法优点是：1.灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1ug。
这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
2.测定快速、简便，只需加一种试剂。
完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。
由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。
3.干扰物质少。
如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
此法的缺点是：1.由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
2. 仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1M的NaOH。
（如同0.1M的酸干扰Lowary法一样）。
3. 标准曲线也有轻微的非线性，在0-1000ug/ml浓度范围内有较好线性。
因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。
BCA法：由标准曲线可以算出样品原始浓度为14.28mg/mlBCA法特点：1. 灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
2. 测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。
3. 在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
4. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
5. 受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响：EDTA小于10mM。
DTT小于1mM巯基乙醇低于1mMBCA法和Commassie法各有优势，在不知道蛋白样本缓冲液成分的情况下可以两种方法配合使用，以消除定量的误差。
（Radio Immunoprecipitation Assay）RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA使用方法对于培养细胞样品：1. 融解RIPA裂解液，混匀。
取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。
按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
再用手指轻弹以充分裂解细胞。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品：1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。
取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
)4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。
然后同样离心取上清，用于后续实验。
直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。
该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。
在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
如果检测一些常见的转录因子，例如NFκB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
各种RIPA的差别及用途蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全摘要：破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。