流式细胞仪ProCOUNT法计数CD34 +细胞影响因素分析
CD34阳性细胞绝对计数的流式细胞术测定指南(完整版)
CD34阳性细胞绝对计数的流式细胞术测定指南（完整版）造血干细胞移植（HSCT）是治疗血液系统疾病、自身免疫性疾病、某些实体瘤和基因缺陷疾病的重要手段之一。
在HSCT的过程中，采集足够数量的造血干细胞（HSC）是HSCT成功的关键。
但至今为止，尚无一个与体内重建造血完全吻合的HSC体外检测法。
早期，人们通过有核细胞计数、集落形成单位（CFU）来计算移植物中HSC/造血祖细胞（HPC）数量，但前者与HSC数量一致性差，后者实验变异性大、耗时长，其临床实用性大大减弱。
20世纪80年代，CD34分子在造血祖细胞上表达的发现，为临床HSCT提供了可评估植入最低阈值的强有力工具。
尽管近年来体外研究表明，人类CD34阴性脐血组分也有造血活性，然而大量的临床研究证实用富含CD34+细胞组分移植可安全、持久地获得多系造血重建[1,2]。
因此，目前临床及实验室仍然是应用CD34+细胞进行HSCT、基因转染和HPC扩增，而流式细胞术计数CD34+细胞因具有快速、简便、可定量等特点，已广泛应用于移植物中HSC/HPC数量的检测及确定采集时机等[3,4,5]。
流式细胞术计数CD34+细胞经历了从单参数到多参数分析、从双平台到单平台计数、从各实验室自由抗体组合到商业化试剂盒应用等一系列的演变。
1995年血液病治疗与移植国际联合会（International Society of Hematotherapy and Graft Engineering，ISHAGE）成立了干细胞计数小组，致力于寻求一种快速、简便、敏感、对不同的流式细胞仪都有效的流式细胞术CD34+细胞计数方法。
1996年ISHAGE采纳了Sutherland等提出的CD45/CD34双色标记多参数累积设门的方法，被命名为ISHAGE方案[5]。
ISHAGE方案等双平台计数法先通过流式细胞术分析得出CD34+细胞百分比，再结合血细胞计数仪计数的白细胞数得出CD34+细胞绝对数。
流式细胞仪的简要介绍与注意事项
流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项)来源：评论：0我要评论[流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项)] 一、流式细胞仪的检测范围1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。
2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
[关键词:流式细胞仪注意事项]…••一、流式细胞仪的检测范围1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。
2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
二、流式细胞仪的临床应用1．流式细胞术在肿瘤学中的应用：流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡；2．流式细胞术在血液学中的应用：检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞（CD34+）计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测；3．流式细胞术在免疫学中的应用：可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。
三、流式细胞仪的科研应用主要有细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与分子生物学研究。
四、流式细胞术常规检测时的样品制备(一) 直接免疫荧光标记法取一定量细胞（约1×106细胞/ml），直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应（如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入），孵育20～60分钟后，用PBS（pH7.2 ～7.4）洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。
本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。
流式细胞仪结果分析
流式细胞仪结果分析一、获取数据在进行流式细胞仪结果分析之前，首先需要获取实验数据。
流式细胞仪会输出每个样本细胞的荧光强度、散射性质等参数。
这些参数可以代表细胞的表型特征或者亚细胞结构。
根据实验的需要，可以选择一种或多种指标进行数据分析。
二、数据清洗和预处理由于实验过程中可能会受到一些随机因素的干扰，比如机器灵敏度、噪声等，得到的数据可能存在一些异常值。
因此，在进行数据分析之前，首先需要对数据进行清洗和预处理，以减少这些异常值的干扰。
数据清洗可以通过以下几种方法进行：1.去除非细胞事件：流式细胞仪在采集数据时可能会采集到一些非细胞事件，比如细胞碎片、空白颗粒等，可以通过设置或者后续数据处理来去除这些非细胞事件。
2.去除离群值：根据实验的需要和数据的分布情况，可以使用统计学方法或者软件工具来判断和去除离群值。
3.数据归一化：如果实验中使用了多个荧光探针，不同探针之间的信号强度可能有差异。
可以通过归一化处理来消除这种差异，以确保数据的可比性。
三、统计分析数据清洗和预处理之后，可以进行统计分析来描述和解析数据。
流式细胞仪的数据通常是多维的，可以使用多种统计分析方法来从不同角度揭示数据的特点和规律。
1.基本统计分析：包括均值、标准差、中位数等指标，可以帮助了解数据的集中趋势和离散程度。
2.相关性分析：通过计算各个参数之间的相关系数，可以研究不同指标之间的关系。
例如，可以使用皮尔逊相关系数来衡量两个参数之间的线性相关性。
3.差异分析：比较不同样本或不同组的数据之间的差异。
常用的差异分析方法有t检验、方差分析等。
四、数据可视化为了更好地理解和传达数据的结果，可以使用数据可视化技术将数据以图表、图像等形式展示出来。
常用的数据可视化方法包括散点图、条形图、箱线图等。
通过数据可视化，可以帮助研究者直观地观察数据的分布情况、群体几何形状和特征变化趋势等。
五、结果解读在进行流式细胞仪结果分析时，需要根据实验目的和样本特性进行结果的解读。
浅议影响流式细胞术结果的几个环节
浅议影响流式细胞术结果的几个环节摘要】随着基础研究及医疗诊断技术的发展，流式细胞术已广泛应用于科研和临床研究。
在免疫学等基础学科的实验应用、疾病的诊治及监测中更是起到越来越重要的作用。
本文就流式细胞术在医学免疫学实验及教学中，有关样本制备和上机操作等环节中如何做好质量控制谈一些作者的体会。
【关键词】流式细胞术；样本制备；结果分析【中图分类号】R450 【文献标识码】B 【文章编号】1672-2523（2011）04-0026-02流式细胞术（flow cytometry,FCM）是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选的技术。
随着流式细胞技术水平的不断提高，其应用范围也日益广泛。
目前，流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学与基础医学研究领域。
流式细胞术作为一门新型的细胞分析技术，技术操作要求高，但很少被列入各高等医学院校的常规实验课的教学大纲中，所以许多从未接触过流式细胞术的初学者往往会感觉很抽象，不知从何下手[1]。
而影响流式细胞术结果的原因有很多，如样本与试剂准备、单克隆抗体、免疫荧光染色方法、对照设置、流式细胞仪校准、流式细胞数据的获取与分析等。
下面就样本准备、流式细胞仪的操作及结果分析等几个环节中应该注意的问题谈谈作者的体会。
1 样本准备样本制备好坏直接影响实验结果，而影响样本质量的首要因素是细胞悬液中细胞的活性，一般来说，活细胞比率应大于90%，流式细胞术的实验检测对象是单细胞悬液，因此需把样品制备成单细胞悬液，细胞悬液最终浓度在106～107/mL比较合适，同一批实验中每管细胞浓度相同以保证上样速度一致，可以获得高度和面积大致相同的信号峰。
实验中有的研究生实验上机检测后发现没有所需的细胞群，显微镜下观察几乎全是死细胞，显然这样的样本只能算是前功尽弃。
任何存在于悬液中的直径为0.2-100µm的粒子或细胞都适用于流式分析，如果是活体标本，则应尽快完成样本制备，保证各种液体和悬浮单细胞样本新鲜[2]。
流式细胞项目参考值和意义
【参考范围】CD34+细胞在正常外周血中占有核细胞的0.00001～0.0001(0.001％～0.01%），骨髓0.005～0.015(0.5％～1.5%)，脐血0.005～0.035(0.5%～3.5%）。
【影响因素】骨髓或外周血白细胞要用PBS稀释至1×10^6/ml后进行免疫标记，并注意设立相应的同型对照。
【临床意义】1．外周血造血干细胞（PBSC）采集前CD34阳性细胞动员有效性的监测可以指导临床制定采集计划。
一般来说，外周静脉血有核细胞中CD34+细胞达到0.001(0.10%）以上时，可以考虑行PBSC单采术。
否则，应继续动员。
2．各种造血干细胞移植物的CD34+细胞剂量控制BMT、PBSCT的CD34+细胞剂量＞2×10^6/kg，脐血干细胞移植时，CD34+细胞剂量可少至BMT成PBSC的1/10，即2×10^5/kg。
3．化疗强弱的掌握化疗后血象的恢复快慢取决于对造血干／祖细胞损伤的强度。
CD34+细胞的测定可以判断化疗的强度。
要求化疗强度控制在杀伤一定比例而非所有CD34+细胞为度。
4．贫血的鉴别（如再障、缺铁性贫血）如果再障的原因属于细胞受累，则CD34+细胞可以明显降低（<0.01)，缺铁性贫血时，CD34+细胞数量应在正常范围之内。
5．基因治疗CD34+的HSC作为缺陷基因的靶细胞有它独特的优点，因为HSC具有自我更新的能力，因此，缺陷基因导入此类细胞后能维持终身，从而彻底治愈疾病。
显然，CD34+HSC 的精确测定显得非常重要。
【参考范围】CD19+:0.10～0.15(10%～15%）。
【影响因素】1．标本最好用EDTA抗凝，其次用肝素。
2．标本要新鲜采集，不能发生凝血。
3．制备细胞悬液时，使用标准溶血剂以使红细胞充分溶解。
4．血液采集后，应尽快进行免疫荧光染色和固定，最迟不能超过6h。
5．标记后的细胞应尽快上机检测，最迟不能超过72h。
快速掌握使用流式细胞仪进行细胞分析的方法
快速掌握使用流式细胞仪进行细胞分析的方法细胞分析是生命科学中的重要研究手段之一，而流式细胞仪作为一种高效、准确的细胞分析工具，被广泛应用于细胞学、免疫学、生物医学等领域。
本文将介绍如何快速掌握使用流式细胞仪进行细胞分析的方法，以帮助读者更好地利用这一技术进行科研工作。
一、流式细胞仪的基本原理流式细胞仪是一种能够实现细胞的快速、高通量分析的仪器。
其基本原理是将细胞悬浮液通过细管引入流式细胞仪中，然后通过激光照射细胞，测量细胞在不同参数上的散射和荧光信号，从而获取细胞的相关信息。
二、准备实验样本在使用流式细胞仪进行细胞分析之前，首先需要准备好实验样本。
样本可以是细胞悬浮液，也可以是组织细胞的单细胞悬浮液。
为了保证实验的准确性，样本的制备应遵循一定的操作规范，如细胞的处理、染色等。
三、设置流式细胞仪参数在进行细胞分析之前，需要根据实验的需要设置流式细胞仪的参数。
主要包括激光的选择和功率、滤光片的选择、检测通道的设置等。
不同的实验目的和细胞类型可能需要不同的参数设置，因此在设置参数时应根据实际情况进行调整。
四、样本的注射和分析在样本准备和参数设置完成后，可以开始进行样本的注射和分析。
首先将样本注入流式细胞仪的样本室中，然后启动仪器进行分析。
在分析过程中，需要确保样本的流速适中，以避免细胞堵塞或过度稀释。
同时，还需要注意细胞在仪器中的稳定性，避免因仪器震动等原因导致数据的不准确。
五、数据分析与结果解读流式细胞仪在分析过程中会生成大量的数据，因此需要进行相应的数据分析与结果解读。
常见的数据分析方法包括细胞计数、细胞分类、细胞周期分析、蛋白质表达水平分析等。
通过对数据的分析与解读，可以得出相应的结论，并进一步指导后续的研究工作。
六、常见问题及解决方法在使用流式细胞仪进行细胞分析的过程中，可能会遇到一些常见问题，如细胞堵塞、信号干扰等。
针对这些问题，可以采取相应的解决方法，如调整样本的稀释倍数、优化参数设置等。
影响骨髓血CD34+细胞纯化数量的因素分析
细胞 纯化 时 ， 除 Ｒ Ｃ及 其 碎 片和 Ｐ Ｔ， 以提 高 Ｃ ４ 细 胞 纯 化 的数 量 。 去 Ｂ Ｌ 可 Ｄ３ ＋
关键词 ； 骨髓血 ； Ｄ３ ＋细胞 ； Ｃ ４ 纯化 中图分 类号 ： ４ ． １ 文献标 志码 ： Ｒ４ ６ １ ３ Ａ
文 章编号 ： ６ １７ １ （０ １ Ｏ —０ — ３ １ ７ —４ ４ ２ １ ） ５ １ ７０
干细胞 具有 良好 的增 殖能力 ， 可 向多 种组 织 且 细 胞分 化 ， 近年 来 随着 再生 医学 的发 展 ， 利用 它 的 这 种多 向分化能 力 ， 用纯 化 的 自体干 细胞对 多种疾 病进 行治疗 ， 越来 越受到 人们 的关 注 。 Ｃ ４ 细胞 具 备 有造 血 干 细胞 的标 志 Ｌ ， Ｄ３ ＋ １ 造 ］ 血 干细胞具 有 良好 的 自我 复制 和更新 的能 力 ， 国内 外 已有 将 Ｃ ４ 细胞 用 于临 床 治 疗 多 种 疾 病 的 Ｄ３ ＋ 复 治疗则 较少报 道 。提 高造血 干细胞 的数 量 ， 对其 （ ｇ ｅｉ ａｔ ｅ ｅｌ ｏｉｇ， ｍａ ｎ ｔ ｃｉ ｄｃｌ ｓｒ ＭＡＣ ） 以 明显 提 ｃ ｖ ｎ Ｓ可 高Ｃ ４ Ｄ３ ＋细 胞 的纯 度 ［ 。 自 ２ ０ ４ ］ ０ ８年 ４月 ～２ １ ００ 年 月 ， 实验 室对 ４ 本 ５例 患进 行 性肌 营养不 良患 纯化 ， 将结果报 告如 下 。 现
流式细胞仪的构造工作原理及数据分析
04
流式细胞仪的应用
在免疫学研究中的应用
免疫细胞分型
流式细胞仪可以对免疫细胞进行分型，了解不同类型免疫细胞的分布和比例，有助于研究免疫系统的功能和疾病 发生机制。
免疫细胞功能分析
通过流式细胞仪可以检测免疫细胞的活性和功能状态，例如检测T细胞和B细胞的增殖、细胞因子的分泌等，有助 于研究免疫细胞的应答机制。
光电转换和信号处理原理
光电转换
光电倍增管将荧光信号转换为电信号，以便进一步处理和分 析。
信号处理
信号处理系统对电信号进行放大、滤波和数字化处理，以便 在计算机上进行分析和显示。
03
流式细胞仪的数据分析
数据获取和预处理
数据获取
流式细胞仪通过激光照射细胞，产生 散射光和荧光信号，这些信号被光电 倍增管接收并转换为电信号，再通过 模数转换器转换为数字信号。
在肿瘤学研究中的应用
肿瘤细胞分型与鉴别
流式细胞仪可以对肿瘤细胞进行分型和鉴别，有助于肿瘤的诊断和分类。
肿瘤细胞耐药性分析
通过流式细胞仪可以检测肿瘤细胞对药物的敏感性和耐药性，有助于制定个性化的治疗方案。
在血液学研究中的应用
造血干细胞研究
流式细胞仪可以对造血干细胞进行分离 和鉴定，有助于研究造血干细胞的发育 和分化机制。Βιβλιοθήκη VS白血病分型与鉴别
流式细胞仪可以对白血病细胞进行分型和 鉴别，有助于白血病的诊断和治疗。
05
流式细胞仪的优缺点及展望
流式细胞仪的优点
高灵敏度与特异性
流式细胞仪能够检测单个细 胞，具有高灵敏度和特异性 ，可对细胞进行精确的定量 和定性分析。
快速检测
流式细胞仪采用液流式快速 检测，可以在短时间内处理 大量样本，适合高通量检测 。
流式细胞仪荧光结果分析中的常见问题及解决方法
流式细胞仪荧光结果分析中的常见问题及解决方法流式细胞仪是一种用于细胞分析的实验室仪器，它能够对单个细胞进行快速而精确的定量和质量分析。
它主要通过将细胞悬浮液注入到仪器中，利用激光器照射细胞并检测经过细胞的光线散射和荧光信号，从而获取大量有关细胞形态、大小、复杂度、表面标记以及内部分子的信息。
它可同时测量多个参数，并具备高通量性能，能够快速分析数以万计的细胞，并提供详细的统计学数据。
它广泛应用于免疫学、细胞生物学、药理学、肿瘤学等领域的研究和实验中。
然而，在分析流式细胞仪得到的荧光结果时，常常会遇到一些问题，如信号强度弱、背景高、细胞群分布异常等。
本文将介绍常见问题，并提供相应的解决方法。
一、信号强度弱1. 信号补偿不正确：检查流式细胞仪上的单色阳性对照是否设置正确，并确保门控和补偿设置正确。
2. 用于检测的抗体不足：增加抗体的量或浓度。
二、荧光强度高1. 抗体浓度过高：减少每个样本中添加的抗体量。
2. 过量抗体被捕获：洗涤步骤要充分，并在洗涤缓冲液中加入吐温或Triton，以保持细胞的透化作用。
3. 封闭不足：在抗体混合液中加入1%-3%的封闭剂，并增加封闭步骤。
三、背景高/阳性细胞百分比高1. 增益设置过高/补偿过低：使用阳性对照正确设置流式细胞仪，并使用补偿减少小颗粒背景信号和降低增益。
2. 抗体过量：降低抗体的浓度，并在洗涤缓冲液中加入去污剂，确保洗去过量的抗体。
四、在应该只有一个细胞群的情况下观察到两个或多个细胞群1. 表达靶蛋白的细胞群不止一个：检查样本中包含的细胞类型预期的蛋白表达水平，并确保细胞充分分离。
2. 出现细胞双峰：细胞双峰显示为第二大细胞群，其荧光强度大约是单细胞荧光强度的两倍。
在染色前用移液枪将细胞轻柔混匀，并在细胞仪中运行之前再次混匀。
五、侧向散射背景偏高（来自小颗粒）1. 细胞裂解：确保样本中的细胞没有裂解和破碎，样本应新鲜并正确制备，避免高速离心或激烈涡旋的操作。
流式细胞仪ProCOUNT法计数CD34+细胞影响因素分析
流式细胞仪ProCOUNT法计数CD34+细胞影响因素分析马莉;顾健;汪中强;吴蔚;王红【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2007(022)001【摘要】目前外周血干细胞移植（PBSCT）已成为治疗恶性血液病、实体瘤及自身免疫病的重要手段之一，并在各学科有着越来越广泛的应用。
对于有剂量要求的造血干细胞移植方案而言，精确的造血干细胞计数十分重要。
精确计数CD34＋的数量可判定动员方案是否成功。
何时开始何时终止采集，并可用于比较多个移植中心的疗效。
目前流式细胞术单平台法ProCOUNT计数CD34＋细胞以其快速定量、精密度高等优点成为最受欢迎的一种计数方法，但用流式细胞仪ProCOUNT软件计数CD34＋细胞时常会遇到各种问题，并可能影响检测结果。
本文对我院利用ProCOUNT法计数干细胞动员后外周血及采集物CD34＋细胞的实验过程中遇到的问题及处理方法进行总结，以不断提高检验技术水平。
【总页数】2页(P78-79)【作者】马莉;顾健;汪中强;吴蔚;王红【作者单位】江苏省苏北人民医院血液病实验室,扬州市血液学研究所,江苏扬州,225001;江苏省苏北人民医院血液病实验室,扬州市血液学研究所,江苏扬州,225001;江苏省苏北人民医院血液病实验室,扬州市血液学研究所,江苏扬州,225001;江苏省苏北人民医院血液病实验室,扬州市血液学研究所,江苏扬州,225001;江苏省苏北人民医院血液病实验室,扬州市血液学研究所,江苏扬州,225001【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.CyFlow Space流式细胞仪CD34+细胞绝对计数分析 [J], 杨玉琮;程小丽;陈葳;尤元义;李旭2.造血干细胞移植中单个核细胞计数与CD34+细胞计数的比较 [J], 沈亚文;王晓华;孙巍3.ProCOUNT与单平台ISHAGE方法检测外周血及采集物中CD34+细胞绝对计数的比较 [J], 万岁桂;苏力;孙雪静;冀冰心;刘聪艳;贺景娟;徐娟;田丁4.E6流式细胞仪检测CD34+细胞百分比和绝对计数方法的建立 [J], 付笑迎;张小玲;刘梦桐;余阅;陈诗杨;彭冬;邝雅贤;刘四喜;陈运生5.流式细胞仪ProCOUNT方法计数CD34^+细胞 [J], 陈军浩;欧阳建;张葵;夏永泉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
CD34阳性细胞绝对计数的流式细胞术测定指南(完整版)
CD34阳性细胞绝对计数的流式细胞术测定指南（主整版）造血干细胞移植（HSCT）是治疗血液系统疾病、自身免疫性疾病、某些实体瘤和基因缺陷疾病的重要手段之一。
在HSCT的过程中,采集足够数量的造血干细胞（HSC ）是HSCT成功的关键。
但至今为止，尚无一个与体内重建造血完全吻合的HSC体外检测法。
早期，人们通过有核细胞计数、集落形成单位（CFU ）来计算移植物中HSC/造血祖细胞（HPC ）数量，但前者与HSC数量一致性差,后者实验变异性大、耗时长，其临床实用性大大减弱。
20世纪80年代,CD34分子在造血祖细胞上表达的发现，为临床HSCT 提供了可评估植入最低阈值的强有力工具。
尽管近年来体外研究表明，人类CD34阴性脐血组分也有造血活性,然而大量的临床硏究证实用富含CD34+细胞组分移植可安全、持久地获得多系造血重建［1,2］。
因此，目前临床及实验室仍然是应用CD34+细胞进行HSCT、基因转染和HPC扩增，而流式细胞术计数CD34+细胞因具有快速、简便、可定量等特点，已广泛应用于移植物中HSC/HPC数量的检测及确定采集时机等［3,4,5］。
流式细胞术计数CD34+细胞经历了从单参数到多参数分析、从双平台到单平台计数、从各实验室自由抗体组合到商业化试剂盒应用等一系列的演变。
1995年血液病治疗与移植国际联合会（International Society of Hematotherapy and Graft Engineering , ISHAGE ）成立了干细胞计数小组，致力于寻求一种快速、简便、敏感、对不同的流式细胞仪都有效的流式细胞术CD34+细胞计数方法。
1996年ISHAGE采纳了Sutherland等提出的CD45/CD34双色标记多参数累积设门的方法,被命名为ISHAGE方案⑸。
ISHAGE方案等双平台计数法先通过流式细胞术分析得出CD34+细胞百分比,再结合血细胞计数仪计数的白细胞数得出CD34+细胞绝对数。
流式细胞仪计数造血干细胞的影响因素
流式细胞仪计数造血干细胞的影响因素
苏炳男;彭明婷
【期刊名称】《实验与检验医学》
【年(卷),期】2012(030)003
【摘要】造血干细胞计数对造血干细胞移植有重要意义.现临床上普遍使用流式细胞仪对送检标本中的造血干细胞进行计数,由于造血干细胞在标本中占单个核细胞的比例较低,流式细胞仪计数造血干细胞的影响因素较多,计数结果差异较大.为保证造血细胞计数的准确性和可比性,本文就影响因素做一综述,希望可以为实验室造血干细胞计数的质量保证工作提供帮助.
【总页数】4页(P213-215,218)
【作者】苏炳男;彭明婷
【作者单位】北京协和医学院研究生院卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;北京协和医学院研究生院卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730
【正文语种】中文
【中图分类】R816.3;R457.7;R318.06;R392.45
【相关文献】
1.Sysmex XE-2100血液分析仪外周血造血干细胞检测与CD34+流式细胞仪检测的相关性 [J], 王大光;杨晓枫
2.流式细胞仪ProCOUNT法计数CD34+细胞影响因素分析 [J], 马莉;顾健;汪中
强;吴蔚;王红
3.血细胞分析仪XE-5000与流式细胞仪FACSCali-bur在测定造血干细胞中的作用 [J], 罗俭权;李海洋;罗耀凌
4.流式细胞仪在造血干细胞生物学研究中的应用 [J], 梁昊岳;张森;任彦松;王艳生;于文颖;杨晚竹;陈婷;高瀛岱
5.流式细胞仪在小鼠造血干细胞基因转移效率测定中的应用 [J], 王存邦;达万明;钱其军;魏亚明;白海
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞术CD34+细胞计数中国医学科学院血液研究所
流式细胞术CD34+细胞计数万岁桂 MD首都医科大学宣武医院血液科HSCT 的临床应用HSCT恶性血液病 某些实体肿瘤免疫性疾病或 免疫缺陷病心肌 血管 胰岛细胞HSC 的数量成功的关键HSC 的检测•至今尚无一个与体内重建造血完全吻合的HSC 体外检测法 •有核细胞计数法 •集落培养法•流式细胞术CD34+细胞计数法有核细胞计数法与移植结果相关性差优点：干细胞计数结果与移植结果相吻合 缺点：很难标准化只代表晚期干/祖细胞培养时间长，不能当即判断采集的HSC 数量集落培养法优点：快速，简单，方便 2~5×106 CD34+细胞/kg 已取代了集落培养法流式细胞术CD34+细胞计数法最理想的造血干细胞移植物“CD34+细胞”•CD34+细胞为最早发现的干细胞标记，包含了从早期的到晚期的干/祖细胞•移植一定数量的CD34+细胞后能重建造血，输入CD34+细胞数量直接影响植入速度•临床实践证明移植物中CD34+细胞数量是一个判断移植是否成功的有效指标。
FCMCD34+细胞计数方法•Milan方案：单色双平台，溶血洗涤法•双平台ISHAGE方案：双色双平台，溶血洗涤法•ProCOUNT法：三色单平台，溶血免洗法•Stem-kit方法：三色单平台，溶血免洗法•单平台ISHAGE方案：三色单平台，溶血免洗法Milan法•1989年由Siena等提出，MNC，间接荧光标记，•1991年，全血，直接荧光标记，溶血、洗涤，双平台•设门：FSC/SSC，CD34/SSC+Isotype/SSC图1：设R1为有核细胞图2：设R1中CD34+细胞有核细胞为分母CD34+细胞数＝CD34+细胞％xWBC数•试剂：CD45-FITC,CD34-PE•全血，直接荧光标记，溶血、洗涤，双平台•设门：CD45/SSC，CD34/SSC，CD45/SSC，FSC/SSC ISHAGE法国际血液治疗与移植工程学会International Society of Hematotherapyand Graft Engineering图1：设CD45+细胞为R1图2：设R1中CD34+细胞为R2图3：设R2中CD45弱+细胞为R3图4：设R3中FSC大细胞为R4(HPC)图5：设CD45弱＋/CD34+象限图1：设R1中淋巴细胞为R5图6：设R5中R4为干细胞CD45+细胞为分母ProCOUNT法• nucleic acid dye/CD34 PE/CD45 PerCP • nucleic acid dye/γ1PE/CD45 PerCP• BD TruCount tubes全血，直接荧光标记，溶血、免洗涤，单平台设门：Dye/SSC，CD34/SSC，CD45/SSC，CD45/CD34，Dye/CD34CD34+细胞数Stem-kit法图1：设J中CD45+细胞为A图2：设AJ中CD34+细胞为B图3：设ABJ中CD45弱+细胞为C图4：设ABCJ中FSC大细胞为D图1：设J中淋巴细胞为E图5：设no Gate 中设CD45high/CD34high为H微球图6：EJ中FSC大细胞为F图7：设H中SSC low为单个微球图8：设no Gate 中7-AAD-细胞为J J AJ ABJABCJ No gate EJH No gate双平台计数法的缺点•CD34+细胞绝对数=CD34+细胞%x白细胞数；•血细胞计数仪的误差：不同的实验室间存在很大的变异性；•溶血洗涤法造成某些细胞成分的丢失：影响了实验结果的准确性。
流式细胞术分析冻存前后脐血CD34^+细胞的分布
流式细胞术分析冻存前后脐血CD34^+细胞的分布许遵鹏;廖灿;陈劲松;刘斌;吴韶清;辜少玲【期刊名称】《临床血液学杂志》【年(卷),期】2003(16)6【摘要】目的 :探讨低温冻存对脐血CD34+ 细胞的影响。
方法 :采用流式细胞仪分析冻存前后脐血CD34+细胞百分率、CD4 5 + 细胞和CD34+ 细胞的荧光强度变化及死细胞群的分布情况。
结果 :冻存后CD34+ 细胞占CD4 5 + 细胞的百分率[(0 .84± 0 .39) % ]明显高于冷冻前[(0 .5 1± 0 .2 4 ) % ](P <0 .0 1) ,冻存前后CD34+ 细胞绝对数无明显变化[(9.372± 6 .0 72 )× 10 6/L和(9.2 4 6±6 .132 )× 10 6/L](P >0 .0 5 ) ,冻存前后CD34+ 细胞百分率呈正直线相关 (r=0 .5 6 4 ,P <0 .0 1)。
冻存后CD4 5 + 细胞荧光强度减弱 (P <0 .0 1) ,CD34+ 细胞荧光强度无明显变化 (P >0 .0 5 ) ;中性粒细胞比例下降 ,淋巴细胞和单核细胞比例增高。
死细胞组分中以中性粒细胞为主 ,占 81.5 2 % ;活细胞组分中以淋巴细胞为主 ,占 5 9.4 4 %。
结论 :冻存后CD34+ 细胞占CD4 5 + 细胞的百分率增高 ,但低温冻存对CD34+ 细胞绝对数量影响不大。
死细胞主要为较成熟的粒细胞 ,冻存后CD34+ 细胞的分析需排除死细胞的干扰。
【总页数】3页(P257-259)【关键词】CD34+细胞;流式细胞术;脐血;低温冷冻【作者】许遵鹏;廖灿;陈劲松;刘斌;吴韶清;辜少玲【作者单位】广州市妇婴医院,广州脐血库,广州510180【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.2种细胞冻存液对脐血单个核细胞冻存质量的影响 [J], 黄馨萍;林科佳;魏宗科;魏志璋;罗晓玲;王宇环2.脐血抗—HPCA—2和Tuk3标记的CD34阳性细胞的流式细胞仪比较分析 [J], 蓝丰硕;丁训杰3.应用流式细胞仪检测脐血CD34^+细胞的绝对值计数 [J], 周沫;韩凤珍4.不同的冻存方法对脐血CD34^+细胞的影响 [J], 谢燕;敖述斌;夏虹;高清平;李秀珍5.脐血抗—HPCA—2和Tük3标记的CD34阳性细胞的流式细胞仪比较分析 [J], 蓝丰硕;丁训杰;谢毅;王益因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用流式细胞仪检测脐血CD34^+细胞的绝对值计数
应用流式细胞仪检测脐血CD34^+细胞的绝对值计数周沫;韩凤珍【期刊名称】《中山大学学报：医学科学版》【年(卷),期】2003(24)B03【摘要】【目的】应用流式细胞仪技术(FCM)精确测定 CD34^+细胞的绝对值计数,以指导脐血输注标本的选择,评价脐血的造血潜能。
【方法】收集脐血100份,应用 FCM 测定 CD34^+细胞的绝对值计数,统计分析其与脐血常规、分娩方式及新生儿体重的关系。
【结果】脐血 CD34^+细胞的绝对值均数为(48.5±27.9)/μL,与脐血白细胞有显著相关性,与红细胞、血小板无相关性。
与新生儿体重有显著相关性。
各分娩方式之间 CD34^+细胞的绝对值均散无差异。
【结论】选择脐血白细胞计数较高、高出生体重儿及 CD34^+细胞绝对值计数高(>100/μL)的脐血进行输注或移植将更有效。
【总页数】3页(P67-69)【关键词】流式细胞仪;脐血;CD34^+细胞;绝对值计数【作者】周沫;韩凤珍【作者单位】广东省人民医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R446.113【相关文献】1.应用流式细胞仪检测脐血CD34+细胞的绝对值计数 [J], 周沫;韩凤珍2.应用流式细胞仪检测脐血CD34＋细胞的绝对值计数 [J], 周沫;韩凤珍3.脐血抗—HPCA—2和Tuk3标记的CD34阳性细胞的流式细胞仪比较分析 [J], 蓝丰硕;丁训杰4.脐血抗—HPCA—2和Tük3标记的CD34阳性细胞的流式细胞仪比较分析 [J], 蓝丰硕;丁训杰;谢毅;王益5.不同标记方法及去红细胞法对检测微量脐血CD34^+细胞含量的影响 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞检测术分析胎肝CD_(34)^+细胞成分
流式细胞检测术分析胎肝CD_(34)^+细胞成分黄斌;黄宁;许关怡;王斌;朱玉香;潘欣【期刊名称】《中国输血杂志》【年(卷),期】2003(16)2【摘要】目的了解胎肝中CD3 4 + CD3 8+ 和CD3 4 + CD3 8-细胞数量组成。
方法从胎肝中分离细胞 ,制成细胞悬液 ;经淋巴细胞分离液密度梯度离心 ,收集单个核细胞 ;洗涤两次 ,制备细胞母液 ;取约1× 10 6细胞经CD3 4 CD3 8荧光抗体标记 ,流式细胞仪检测CD3 4 + CD3 8+ 和CD3 4 + CD3 8-细胞含量 ;用红细胞裂解液裂解残留在MNCs中的红细胞 ,统计肝细胞中MNCs的相对总数 ,最终统计出胎肝中CD3 4 + 和CD3 4 + CD3 8-细胞的相对数量。
结果 2 2～ 30W胎龄胎肝MNC中CD3 4 + 细胞平均为12 .0 2 %± 4 .0 0 % ,CD3 4 + CD3 8-细胞平均为6 .17%± 5 .0 8% ,CD3 4 + CD3 8-细胞在CD3 4 + 细胞中约占 5 1.00 %± 32 .5 6 % ;该期胎肝组织中CD3 4 + 细胞和CD3 4 + CD3 8-细胞相对总数和胎龄有一定的相关性 ,30W时明显高于 2 2W。
结论 2 2～ 30W胎龄胎肝中的CD3 4 + 细胞和CD3 4 + CD3 8-细胞相对百分率都高于胎儿脐血、新生儿脐血、成人骨髓和外周血的百分率 ;CD3 4 + CD3 8-细胞在CD3 4 +【总页数】3页(P90-92)【关键词】流式细胞检测术;胎肝;CD34^+细胞;CD34^+CD38^+细胞;CD34^+CD38^-细胞;单个核细胞【作者】黄斌;黄宁;许关怡;王斌;朱玉香;潘欣【作者单位】南京生物医学工程研究所;南京建邺医院;南京江浦人民医院;南京江宁人民医院【正文语种】中文【中图分类】R714.5【相关文献】1.Sysmex XE-2100血液分析仪外周血造血干细胞检测与CD34+流式细胞仪检测的相关性 [J], 王大光;杨晓枫2.三色荧光单抗CD_(45)在流式细胞术检测淋巴细胞亚型中的应用 [J], 黄健;沈永生;冯霞;王秀英3.流式细胞术检测直肠癌组织中CD_(44)V_6表达及其对肠管切除范围的评价 [J], 丁志杰;单吉贤;都姝妍4.流式细胞术分析多发性骨髓瘤患者外周血CD_（56）^+细胞 [J], 侯健;孔宪涛;王豫廉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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量要 求 的造 血 干细胞 移植 方案 而言 ， 精确 的造 血干 细胞 计 数 十 分 重要 。 确计 数 Ｃ ４ 精 Ｄ３ 的数 量 可 判 定 动员 方 案 是 否成 功 。 时开 始何 时 终 止 采集 ， 何 并 可用 于 比较多 个移植 中心 的疗效 ［ 。 １ 目前 流式 细胞 ］ 术 单 平 台 法 Ｐ ｏ ＯＵＮＴ计 数 Ｃ ４ 胞 以 其 快 ｒＣ Ｄ３ 细 速定 量 、 密度 高等 优点成 为最 受欢迎 的一 种计 数 精 方 法 ， 用 流 式 细 胞 仪 Ｐ ｏ ＯＵＮＴ 软 件 计 数 但 ｒＣ Ｃ ４ Ｄ３ 细胞 时常会 遇到 各种 问题 ， 可 能影 响检 测 并 结果 。 文对 我 院利 用 Ｐ ｏ ＯＵＮＴ 法 计 数干 细胞 本 ｒＣ
２ ３ 软 件 无 法 自动设 碎 片 区 解决 方 案 ： ． 在保 证 样本 正确 处理及 仪器正确 调试 下 ， 需排除 试剂 不 足
３０９ ４ ４ ８其 组 成 为 这 核 酸 染 料 ／ Ｄ３ Ｐ Ｃ ４ Ｅ／ Ｃ ５ ｅＣ 测 定 管 ）和 核 酸 染 料 ／ ｇ Ｐ Ｄ４ Ｐ ｒ Ｐ（ ＭＩＧ１Ｅ／ 准 荧光微 球 的绝对计 数 管 （ ｕ Ｏ ＴｒＣ ＵＮＴ管 ） 。
动员 后外 周 血及 采集 物 Ｃ ４ Ｄ３ 细胞 的实 验 过程 中
方案 ： 先 保证 仪 器及 补偿 的正 确 调试 ， 本处 理 首 样 过 程 正确 无 误 ， ｅｄ Ｂ ａ ｓ批 号数 量填 写 无 误 。 时 需 此 注 意 在 制 作 样 本 时 ， 轻 混 Ｂ ａｓ 勿 使 其 溅 出 要 ｅｄ ， ＴｒＣ ｕ ＯＵＮＴ 管 管底 的 金属 网至 管壁 上 。 另外 用 荧 光 校 准 微球 （ ａｉ Ｒ Ｔ ３ 和 自动校 准 软件 （ Ａ — Ｃ１ ＩＥ ） Ｂ Ｆ Ｃ Ｓｏ ） Ｃ ｍｐ 调整 仪器设 置后 ， 该条 件基本 可不 予改 变 。
维普资讯
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现代 检 验 医学 杂 志
２０ ０ ７年 １ 第 ２ 月 ２卷 第 ｌ期
ＪＭ ｏ ａ ｄ Ｊｎ ａｙ２ ０ ， ｏ． ２ Ｎ ． ｄＬ ｂＭｅ ，ａ ｕ ｒ ０ ７ Ｖ １２ ， ｏ １
流式 细 胞仪 Ｐ ｏ ＯＵＮＴ 法计 数 Ｃ ４ 细 胞影 响 因素 分析 ｒＣ Ｄ３ ＋
解 决 方 案 ： 先 排 除 不 是 同 一 样 本 ， 同批 号 的 首 不 ＴｕＯ ｒ Ｃ ＵＮＴ管 混用 等 简单 错 误 。 时该 种 情 况常 此 在测定 采集 物时 发生 ， 主要集 物 颠 倒 多次 混 匀 ， 数 计 样法 加人样本 。 向加样 法主要 控制 样本 因黏 滞性 反 过高 而产生 的加样 误差 。 另外需 注 意测定 管测定 完 后不 可随 意更改仪 器条件 。
马 莉 ， 顾 健 ， 中强 ， 汪 吴 蔚 ， 王 红 （ 江苏 省苏 北人 民 医院血 液病实 验室 ； 扬州 市血 液学研 究所 ， 江苏扬 州 ２ ５ ０ ） ２ ０ １
中 图分类 号 ： ４ ． １ 文献 标识 码 ： 文章 编号 ：６ １７ １ （ ０ ７ ０ —７ —２ Ｒ４ ６ ６ Ａ １ ７ — ４ ４ ２ ０ ） １０ ８０
若 仍 未 获 得 足 够 多 的 Ｂ ａ ｓ 则 尝 试 调 节 Ｆ Ｃ， ｅｄ ， Ｓ
Ｓ Ｃ， ｉ ， 使 Ｆ Ｃ淋 巴细胞在 ５ ～１ ０ （５ 分 Ｓ Ｇａｎ 并 Ｓ Ｏ ５道 ２ ６ 辨 率 ） 使 Ｓ Ｃ 单 核 细 胞 在 ５ ～ １ ０ （ ５ 分 辨 ， Ｓ Ｏ ５道 ２６ 率 ） 若 仍未 获 得足 够多 的 Ｂ ａ ｓ 可适 当调 节 Ｆ １ 。 ｅｄ ， Ｌ ｇｉ， Ｏ ａｎ 以１ 个单 位增 减后 看 Ｂ ａ ｓ的获 取 情 况较 为 ｅｄ 有效。 摸索 合适 的条件 需 要耐 心 和 技巧 。 般 若仪 一 器 和标本 无特殊 情况 ， 该用 上述 方法可 找 到合适 应 的条件 获取 足够 多 的 Ｂ ａ ｓ 如有 其 它特殊 情 况则 ｅｄ ， 尝试 使 用 Ｃ ｌ ｅｔ 件 分析 ， 绝对 计数 的准确 ｅｌ ｓ 软 Ｑｕ 但 性将 下 降 。
数情 况分析 。 鲜样本 ６ｈ之 内进 行样 本处理 。 新
１ ２ 仪 器 与 试 剂 美 国 Ｂ ｃｏ ｃ ｉｓ ｎ公 司 ． ｅｔｎ Ｄｉ ｎ ｏ ｋ
Ｆ ＳＣ ｌｕ ＡＣ ａｉ ｒ流 式 细 胞 仪 。 剂 为 美 国 Ｂ ｃｏ ｂ 试 ｅｔｎ
Ｄｉ ｉｓ ｎ公 司 Ｐ ｏ ＯＵＮＴ 试 剂 盒 。 ａａｏ ｃ ｎｏ ｋ ｒＣ Ｃ ｔｌｇ Ｎｏ
目前 外周 血 干 细胞移 植 （ Ｂ Ｃ 已成 为 治疗 Ｐ Ｓ Ｔ）
２ 实验 过程 中可能 影响检 验结果 的 常见 问题 与解
恶 性 血 液 病 、 体 瘤 及 自身 免 疫 病 的重 要 手 段 之 决 方案 实 并 在各 学 科 有 着越 来越 广 泛 的应 用 。 于有 剂 ２ １ 在 规 定 时间 内未获得 足 够 多的 Ｂ ａ ｓ 解决 对 ． ｅ ｄ
Ｃ ５ ｅＣ ｘ Ｎ 管） 色 试 剂 和含 有 已知数 量 标 并 按 一定 比例稀 释 ， Ｄ４ Ｐ ｒ Ｐ（Ｃ 三 然后 取混 匀的 稀释 液用 反 向加
１ ３ 实验 方 法 取 两 支 Ｔ ｕ Ｏ ． ｒ Ｃ ＵＮＴ 管 ， 别 标 分 记 为 测 定 管 和 对 照 管 ， 加 人 相 应 的 ２ １Ｐ ｏ 并 Ｏ ｒ—
２ ２ 样 本 测 定 管、 照 管细胞 数 误 差 超 过２ ． 对 １
遇到 的 问题 及 处理方 法进行 总结 ， 以不 断提 高检 验 技 术水 平 。 １ 材 料与 方法 １ １ 标 本采 集 Ｅ ＴＡ 真 空 采 血 管 （ 国 Ｂ ． Ｄ 美 Ｄ公
司产品） 采集 静 脉 血 ２ｍ１采 集 物 需 根据 ＭＮＣ计 ，